目的:探讨 miR-767-3p参与结直肠癌发病的确切机制。 方法:收集临床原发性结直肠癌患者的结直肠癌组织及其相应癌旁正常组织标本60对，采用miRNA-RTPCR检测 miR-767-3p在人结直肠癌组织和细胞系中的表达水平。采用MTT、克隆形成检测 miR-767-3p对细胞增殖的影响。通过transwell实验分析确定其迁移和侵袭能力。采用双荧光素酶报告基因实验验证 miR-767-3p与其靶基因的直接相互作用。采用qRT-PCR检测细胞中的相关分子。通过 χ2检验及SPSS 17.0软件分析 miR-767-3p与结直肠癌患者临床病理特征之间的关系。 结果:miR-767-3p在人结直肠癌组织中的表达明显低于癌旁组织，而且其在人结直肠癌细胞系中也是低表达。 miR-767-3p的表达与结直肠癌TNM分期( χ2＝6.07， P＝0.014)、肿瘤大小( χ2＝7.59， P＝0.006)及淋巴结转移( χ2＝6.49， P＝0.011)相关。在结直肠细胞系中(HCT116和SW480)过表达 miR-767-3p后，细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显降低。 UGT2B17在人结直肠癌组织及细胞系中高表达。 miR-767-3p能够靶向调控 UGT2B17的表达。在结直肠细胞系中(HCT116和SW480)低表达 UGT2B17后，细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显降低。在体内实验中，过表达 miR-767-3p能够抑制结直肠癌。 结论:miR-767-3p的过度表达可通过下调结直肠癌中 UGT2B17的表达来抑制细胞增殖、迁移和侵袭，提示其可能是结肠癌患者的潜在治疗靶点。

目的:研究Gilbert综合征(GS)是否合并病毒性肝炎时其基因突变情况及其与相关临床资料的关系。方法:回顾性分析2013年8月至2018年12月于河南省人民医院感染科收治的GS患者资料，包括合并病毒性肝炎的患者，分析其基因突变的模式与一般资料（年龄、性别等）、肝脏生物化学指标的关系，并分析是否合并病毒性肝炎情况下上述资料的差异。计量资料比较采用 t检验，分类资料比较采用χ 2检验，非正态分布的资料采用中位数和四分位间距表示集中和离散趋势。用秩和检验比较组间差异。 结果:共收集符合条件的107例GS患者资料，男女比例为4.94∶1（89∶18），发病年龄（36.36±12.51）岁。除丙氨酸转氨酶和总胆红素为正常或轻度升高外，天冬氨酸转氨酶、碱性磷酸酶、γ-谷氨酰转移酶均在正常值范围。合并病毒性肝炎组49例（36例合并HBV、13例合并HCV），单纯GS组58例。两组患者总胆红素水平单纯GS组高于合并病毒性肝炎组（ Z = 0.035， P < 0.05），在性别、年龄、丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶、碱性磷酸酶、γ-谷氨酰转移酶数据间差异均无统计学意义（ P值均> 0.05）。107例患者均进行了GS特异性编码的尿苷二磷酸葡糖苷酸转移酶UGT1A1基因检测，突变主要发生在启动子上游PBREM-3263（-3279）（86例）和启动子TATA盒TA插入突变（71例），以及编码区外显子EXON1上的GGA-AGA Gly71Arg（57例）突变，突变形式均可表现纯合及杂合异常。基因检测数据中发生的主要突变形式组合发生率依次为A2+B2+C2（17例，25.23%）、A1+B1（17例，15.89%）、A2（11例，10.28%）、C2（10例，9.34%）、A2+B2（7例，6.54%）、A1+B2（7例，6.54%）、C1（7例，6.54%），不同突变组合在是否合并肝炎患者间差异均无统计学意义（ P值均> 0.05）。总数据分析结果显示单一位点突变组总胆红素水平高于多点突变组（ Z = 2.019， P = 0.043），其他生物化学指标无影响（ P值均> 0.05，差异均无统计学意义）。进一步分析结果显示单纯GS组单一位点突变亚组总胆红素水平高于多点突变亚组（ Z = 1.999， P = 0.046），与合并病毒性肝炎组差异无统计学意义（ P > 0.05）。不同突变组合对生物化学指标无影响，且与是否合并肝炎无关（ P > 0.05）。 结论:病毒性肝炎患者合并GS常见，其基因突变位点发生率、突变形式、生物化学指标等方面与非肝炎组无显著差异。GS突变位点的数目的增加并不会加重因尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶含量下降和活性降低而导致胆红素水平等指标的恶化，且不同突变位点组合形式也不会影响各项生物化学指标的变化，同时与是否肝炎无关。

Cryptotanshinone (CT) is the main active component in the root of Salvia miltiorrhiza Bunge (SMB) that displays antibacterial,anti-inflammatory and anticancer activities.In this study,we characterized phase Ⅰ and phase Ⅱ metabolism of GT in human liver microsomes in vitro and identified the metabolic enzymes (GYPs and UGTs) involved.The metabolites of CT generated by GYPs were detected using LC-MS/MS and the GYP subtypes involved in the metabolic reactions were identified using chemical inhibitors of GYP enzymes and recombinant human GYP enzymes (CYP1A2,CYP2A6,CYP2C8,CYP2C9,CYP2C19,CYP2D6,and CYP3A4).Glucuronidation of CT was also examined,and the UGT subtypes involved in the metabolic reactions were identified using recombinant human UGT enzymes (1A1,1A3,1A4,1A5,1A6,1A7,1A8,1A9,1A10,2B4,2B7,2B15 and 2B17).After adding NADPH to the human liver microsomes incubation system,CT was transformed into 6 main dehydrogenation and hydroxylation metabolites.CYP2A6,CYP3A4 and CYP2C19 were the major contributors to the transformation of its hydroxylation metabolites.CYP2C19,CYP1A2 and CYP3A4 were the major contributors to the transformation of its hydrogenation metabolites in human liver microsomes.This study showed that the metabolites at mn/z of 473 were mediated by UGT1A9 and that the metabolites at m/z of 489 were mediated by UGT2B7 and UGT2B4.CT was extensively metabolized by UGTs following metabolism by GYPs in the liver.

Pharmacological activities and adverse side effects of ginkgolic acids (GAs),major components in extracts from the leaves and seed coats of Ginkgo biloba L,have been intensively studied.However,there are few reports on their hepatotoxicity.In the present study,the metabolism and hepatotoxicity of GA (17 ∶ 1),one of the most abundant components of GAs,were investigated.Kinetic analysis indicated that human and rat liver microsomes shared similar metabolic characteristics of GA (17 ∶ 1) in phase Ⅰ and Ⅱ metabolisms.The drug-metabolizing enzymes involved in GA (17 ∶ 1) metabolism were human CYP1A2,CYP3A4,UGT1A6,UGT1A9,and UGT2B15,which were confirmed with an inhibition study of human liver microsomes and recombinant enzymes.The MTT assays indicated that the cytotoxicity of GA (17 ∶ 1) in HepG2 cells occurred in a time-and dose-dependent manner.Further investigation showed that GA (17 ∶ 1) had less cytotoxicity in primary rat hepatocytes than in HepG2 cells and that the toxicity was enhanced through CYP1A-and CYP3A-mediated metabolism.

尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶(UDP-g1ucuronosyltransferase,UGT)是人体内重要的Ⅱ相代谢酶,UDP-尿苷二磷酸葡萄糖醛酸为其主要的糖基供体.UGT为多基因编码并且含有大量同工酶的超基因家族,包括UGT1和UGT2两个亚家族.UGT2B17是UGT2B家族的一员,越来越多的研究发现UGT2B17基因存在普遍遗传缺失现象,其造成的遗传差异对疾病的影响已引起了众多关注.UGT2B17基因拷贝数变异(Copy Number Variants,CNV)源自4号染色体上一段约120 kb的DNA序列缺失和插入,CNV发生频率高,种族差异明显,与器官移植、骨质疏松、肿瘤发生,乃至兴奋剂检测密切相关.UGT2B17的CNV研究及功能意义具有重大遗传药理学及药物基因组学意义.我们将从UGT2B17的基因拷贝数变异与种族差异、移植排斥反应与肿瘤发生发展等几个方面进行探讨.

目的 基于网络药理学研究人参对非酒精性脂肪肝病(NAFLD)的治疗靶点.方法 利用网络药理学分析平台BATMAN-TCM获取人参活性成分及其对应靶点,使用Cytoscape软件对功能组-靶点基因-人参药物成分网络进行构建.对靶基因通过STRING平台构建出靶点群蛋白互作网络(protein protein interaction network,PPI),通过在线工具metascape对靶基因进行通路富集分析.从高通量基因表达数据库(Gene Expression Omnibus,GEO)下载人NAFLD转录组表达数据GSE89632,表达量进行标准化处理,使用双侧非配对t检验来检测表达差异的显著性.结果 人参药物成分对脂肪代谢有显著影响,特别是脂肪酸降解.通过蛋白相互作用分析和通路富集分析,发现了31个人参药物成分的关键靶基因(ACADM、SCD、ACACA、ACSL1、NR1H3、 LEP、 PPARA、 ADIPOQ、 NR1H4、 CEBPA、 HMGCR、 SREBF1、 TNF、 SREBF2、ESR1、 ABCA1、 INS、 AKT1、 AVP、 RXRA、 HSD17B6、 SRD5A2、 UGT1A1、 CYP19A1、 PTGS2、 CYP2E1、 HTR2A、HSD17B1、EDN1、CCL5、AGTR1)和NAFLD发病过程紧密相关.其中胰岛素(insulin,INS)的节点数量远高于其他靶基因,INS的mRNA表达量在NAFLD组织中显著上调(P＜0.0001).结论 INS可能是人参治疗NAFLD的关键核心靶点之一.

目的 运用网络药理学探讨龟甲治疗骨质疏松(osteoporosis,OP)的作用机制.方法 通过中药系统药理学成分分析平台(BATMAN-TCM)数据库及文献获得龟甲活性化合物,再通过TTD、Drugbank、DisGeNET、OMIM数据库获取OP疾病相关靶点,取二者交集得到龟甲-OP疾病靶点.采用在线分析工具Metascape对龟甲治疗骨质疏松靶基因进行基因本体论(gene ontology,GO)及京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析.结果 获得龟甲成分共40个(氨基酸类、脂肪酸类、酯类、甾醇类、其他类),龟甲-OP疾病交集靶点15个(UGT2B17、PTGS2、SLC22A6、SLC22A10、PTGER2、SRC、COMT、TNF、ESR1、CYP19A1、ESR2、AR、PGR、ITGB3、FPDS).龟甲活性化合物关键靶点的KEGG富集分析表明其主要与神经活性配体-受体相互作用、氨酰-tRNA生物合成、谷氨酸能突触等信号通路相关.龟甲抗骨质疏松靶基因GO富集分析表明其主要与对类固醇激素的反应、上皮细胞增殖的调控、脂质定位的调节等相关,KEGG通路富集结果解释15个基因主要与类固醇激素生物合成、甲状腺素信号途径、癌症的途径信号通路相关.结论 龟甲治疗OP的作用机制呈多靶点、多途径的特性,不仅影响骨代谢相关途径,还可影响体内多种代谢途径.

目的 探讨双酚A和邻苯二甲酸二乙基己酯联合染毒对大鼠肝脏组织中葡萄糖醛酸转移酶部分亚型基因表达的影响.方法 将96只健康3周龄SPF级SD雄性大鼠按体重随机分为4组,分别为对照(玉米油)组、BPA(100 mg/kg)染毒组、DEHP(750 mg/kg)染毒组、BPA(100 mg/kg)+DEHP(750 mg/kg)染毒组,每组24只.通过灌胃方式进行染毒,染毒容量为5ml/kg,连续染毒6周,每天1次.分别于染毒第1、3、6周,采用Real-time PCR法检测肝组织中UGT1A6、UGT1A8和UGT2B17mRNA的表达水平.结果 第1、3、6周大鼠肝组织中UGT1A6mRNA表达水平依次为BPA染毒组＞对照组＞DEHP染毒组＞BPA+DEHP染毒组,除第1周BPA染毒组与对照组及第3周BPA+DEHP染毒组与DEHP染毒组外,差异均有统计学意义(P＜0.05).第1周大鼠肝组织中UGT1A8 mRNA表达水平依次为(D)EHP染毒组＞BPA组＞BPA+DEHP染毒组＞对照组;第3周依次为BPA染毒组＞对照组＞DEHP染毒组＞BPA+DEHP染毒组;第6周为BPA染毒组、DEHP染毒组、BPA+DEHP染毒组＜对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).第1周大鼠肝组织中UGT2B17mRNA表达水平为BPA染毒组、DEHP染毒组、对照组＞BPA+DEHP染毒组;第3、6周为DEHP染毒组、BPA+DEHP染毒组＜BPA染毒组、对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 BPA单独暴露可促进UGT1A6基因表达而对UGT2B17的基因表达无显著影响;而DEHP单独及BPA与DEHP联合染毒时,对UGT1A6和2B17的基因表达均呈现抑制作用;无论BPA及DEHP单独或联合染毒,对UGT1A8的基因表达均体现为短期暴露促进而长期暴露抑制的作用.此外,尽管BPA对UGT1A6亚型的基因表达体现为促进作用,但当BPA与DEHP联合暴露情况下,联合染毒组体现为抑制作用,并且抑制作用要比DEHP单独染毒情况下更明显.

目的:分析代谢相关基因在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)中的表达及预后价值,探索新的预后判断标志物及治疗靶点.方法:以84例B细胞型ALL患儿作为研究对象,对所有样本转录组(RNA-Seq)测序数据中的代谢相关基因进行差异表达分析,利用COX单因素回归及Lasso回归方法构建代谢相关基因预后积分系统,COX多因素回归分析评价积分系统的预后价值,采用GSEA软件进行基因富集分析.结果:从转录组测序结果中共提取933个代谢相关基因的表达量数据进行差异表达分析,31个基因被鉴定为差异表达基因,其中14个基因在复发组表达上调,17个基因在复发组表达下调.进一步筛选出12个基因纳入预后积分系统,其中8个为复发组上调的基因(ASS1、CKM、PTGES、ADCY5、HNMT、 PHGDH、CYP4F3、AADAT),4个为复发组下调的基因(GDA、DHRS9、ID02、UGT2B4).积分高风险组和低风险组的无复发生存率比较,差异具有统计学意义(P＜0.05).在纳入性别、年龄、初诊时白细胞计数、细胞及分子遗传学等临床特征后,该预后积分系统风险评分仍为疾病复发独立的危险因素(HR=8.906,95％CI:3.114-25.470).GSEA结果显示,氨基糖和核苷酸糖代谢、精氨酸和脯氨酸代谢、果糖和甘露糖代谢、乙醛酸和二羧酸代谢、嘧啶代谢、硒氨基酸代谢等通路在高风险组被显著富集.结论:代谢相关基因表达异常与儿童ALL预后相关,这些基因有望成为儿童ALL新的预后判断标志及治疗靶点.

基于血清代谢组学和网络毒理学研究有毒中药闹羊花的毒性作用机制.正常大鼠灌胃给予闹羊花药材粉末后,通过中毒症状、血清生化及病理组织学评价其毒性作用.利用血清代谢组学技术结合多元统计学分析,寻找内源性差异代谢物及相关代谢通路;采用网络毒理学技术挖掘闹羊花的毒性成分、靶点及信号通路,并进一步与血清代谢组学整合分析,筛选并构建关键"成分-靶点-代谢物-代谢通路".血清生化和病理组织结果表明闹羊花有明显神经、肝脏、心脏毒性.血清代谢组学发现了31个差异代谢物,获取10条主要代谢通路;网络毒理学挖掘出闹羊花中11个毒性成分相关的332个靶点和141条信号通路.进一步整合分析,筛选出闹羊花中木藜芦毒素Ⅲ、木藜芦毒素Ⅰ;闹羊花毒素Ⅱ、闹羊花毒素Ⅴ、闹羊花毒素Ⅵ、闹羊花毒素Ⅶ和kalmanol 7关键毒性成分,作用于AR、ALB、ESR2、SHBG、HSD17B11、ESR1、RXRG、LDHC、AKR1C3、ABCB1、UGT2B7、GLUL 12个靶点,干扰氨基丁酸、雌三醇、睾丸素、视黄酸、2-氧丁酸5种内源性代谢物,影响丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢,半胱氨酸和蛋氨酸、类固醇激素生物合成,视黄醇代谢4条代谢通路.可见,闹羊花毒性累及多器官系统,由多成分、多靶点、多途径所致,通过关键毒性成分、靶基因、代谢物及代谢通路,揭示了其潜在神经、心脏、肝脏毒性机制,为有毒中药基础研究提供了思路.