目的:探寻术中可用的周围神经功能束鉴别的方法.方法:分组制备SD大鼠双侧股神经主干、股神经肌支及隐神经Sunderland Ⅴ损伤模型,制备的Annexin Ⅴ-碳量子点(Carbon quantum dots,CDs)抗体复合物涂抹神经断端,在380 nm紫外灯激发光源照射下,5、10、15和20 min后在荧光显微镜下观察荧光显色.结果:SD大鼠双侧股神经主干、股神经肌支及隐神经Sunderland Ⅴ损伤断端染色5 min荧光强度不足以充分显示神经束;染色10～15 min强度明显增加,股神经主干的感觉束及隐神经在AnnexinⅤ-CDs抗体复合物染色下呈蓝色荧光,股神经主干的运动束及股神经肌支无荧光显示;染色20 min后荧光强度逐渐减弱.各分组组内样本染色5、10、15、20min的染色强度无明显差异.结论:Annexin Ⅴ-CDs抗体复合物能够实现术中SD大鼠周围神经功能束的鉴别.

目的:建立雪菊的质量检验方法,评价不同产地雪菊的抗氧化活性.方法:对12批雪菊进行性状及显微鉴别;参照2020年版《中华人民共和国药典》方法测定水分、总灰分、浸出物含量;紫外-可见分光光度法(UV-Vis)测定雪菊总黄酮含量;测定12批雪菊的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除率及对小鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)浓度的影响;采用层次分析-变异系数法结合优劣解距离法评价不同产地雪菊抗氧化活性.结果:12批雪菊性状稳定,水分、总灰分为(6.92±0.02)％～(9.71±0.12)％、(5.90±0.03)％～(7.46±0.21)％,水溶性和醇溶性浸出物分别为(38.63±0.30)％～(45.78±0.07)％、(40.77±0.14)％～(46.55±0.24)％,雪菊总黄酮含量为(168.44±1.27)～(289.42±0.25)mg/g;12批雪菊抗氧化活性排序为S1(新疆克里阳)＞S8(云南丽江)＞S6(青海都兰)＞S2(新疆库尔勒)＞S7(云南昆明)＞S12(西藏拉萨)＞S5(青海西宁)＞S9(云南丽江)＞S3(新疆克里阳)＞S4(青海西宁)＞S11(西藏林芝)＞S10(西藏林芝).结论:初步拟定雪菊中水分、总灰分不超过12％、8％,水溶性浸出物、醇溶性浸出物均不少于30％,雪菊总黄酮含量不低于160mg/g.S1(新疆克里阳)、S8(云南丽江)和S6(青海都兰)的雪菊抗氧化活性较好.

目的:基于激发态分子内质子转移(ESIPT)机制,研发一种用于酪胺检测的新型小分子荧光探针CPIM.方法:通过4-(9H-咔唑-9-基)苯胺和3,5-二碘水杨醛反应缩合得到咔唑类小分子荧光探针CPIM,采用核磁共振氢谱、红外光谱、高分辨质谱表征其结构.通过紫外光谱和荧光光谱等方法研究荧光探针对酪胺的检测性能.通过Job's曲线、红外光谱和核磁共振氢谱对检测机制进行研究.采用标准加入法验证荧光探针的实际应用性.结果:在365 nm紫外灯下,CPIM可以实现酪胺分子的可视化检测.CPIM对酪胺识别具有良好的选择性、灵敏性、抗干扰性、稳定性和重现性,在0～5.0 × 10-6mol/L浓度范围内,体系荧光强度与酪胺浓度呈良好的线性关系,其检测限为4.36×10-7 mol/L,与酪胺的结合常数为9.98×104 M-1.CPIM与酪胺以 1∶1结合脱水后形成复合物,进而抑制ESIPT过程,并生成大的p-π共轭体系导致荧光显著增强.此外,CPIM还可对实际样品中的酪胺进行检测.结论:CPIM具有良好的酪胺检测能力,具有选择性高、灵敏性好、检测限低、稳定性好的特点.

目的:本研究旨在制备生物合成纳米载体递送柚皮素(naringenin,Ng),并研究其对乳腺癌的体外抑瘤效果.方法:使用精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-前列腺素F2受体阴性调节因子-绿色荧光蛋白(Arg-Gly-Asp-prostaglandin F2 receptor negative regulator-green fluorescent protein,RGD-P-G)质粒进行转染,构建分泌 RGD-P-G 外泌体(RGD-P-G-Exosomes,RGD-P-G-Exo)的293F细胞.通过超速离心收集293F细胞上清液中的RGD-P-G-Exo,加入Ng,并通过水浴超声促使RGD-P-G-Exo包封Ng,形成RGD-P-G-Exo@Ng.使用荧光显微镜对转染RGD-P-G的293F细胞进行鉴定.通过透射电子显微镜、纳米颗粒跟踪分析技术、蛋白质免疫印迹等方法对RGD-P-G-Exo@Ng的形貌、粒径、标志物和绿色荧光蛋白(GFP)表达情况进行表征.采用紫外分光光度法评估包封率和载药量.通过细胞摄取实验评估纳米药物被吞噬摄取的效果.通过CCK-8法检测Exo@Ng和RGD-P-G-Exo@Ng对乳腺癌MDA-MB-231细胞的杀伤能力.结果:电镜结果显示RGD-P-G-Exo@Ng呈茶托状结构,纳米颗粒追踪分析技术显示RGD-P-G-Exo@Ng粒径主要分布在147.0 nm.蛋白免疫印迹结果表明RGD-P-G-Exo@Ng表达CD9、CD63等外泌体标志物和GFP,证明RGD-P-G-Exo的构建成功.RGD-P-G-Exo@Ng纳米药物的包封率为(28.1±0.6)％,载药量为(6.0±0.1)％.在高浓度下,Exo及RGD-P-G-Exo对MDA-MB-231细胞的存活率无显著影响,具有良好的生物相容性.在细胞摄取实验中,与Exo@Ng相比,RGD-P-G-Exo@Ng具有更强的细胞摄取效果(P＜0.05).药效实验中,Exo@Ng和RGD-P-G-Exo@Ng均表现出浓度依赖性的MDA-MB-231细胞毒性,其中RGD-P-G-Exo@Ng比相同浓度的Exo@Ng具有更强的细胞杀伤能力(P＜0.05).结论:本研究初步合成了一种用于靶向递送Ng的纳米药物,为开发生物纳米靶向肿瘤药物递送系统提供了新的策略.

目的 考察面膜中蓝铜肽的皮肤渗透性和对衰老皮肤的改善作用.方法 采用离体小鼠皮肤为皮肤模型材料,应用Franz扩散池法测定Ⅰ代和Ⅱ代面膜中蓝铜肽在皮肤真皮层中驻留量和经皮累计透过量;采用D-半乳糖联合紫外光照射连续60 d诱导小鼠皮肤衰老模型,测定贴敷面膜后小鼠皮肤的含水量、透明质酸、Ⅰ型胶原蛋白含量和血浆中MMP-1与MMP-2表达水平,以评估面膜中蓝铜肽对衰老皮肤的改善作用.结果 贴敷20 min后,Ⅱ代面膜中蓝铜肽在小鼠真皮层中驻留量和经皮累计透过量分别约是Ⅰ代面膜的5.8和4.6倍;与Ⅰ代面膜相比,Ⅱ代面膜能显著提高衰老小鼠皮肤中含水量、透明质酸、Ⅰ型胶原蛋白含量,显著降低小鼠血浆中MMP-1与MMP-2表达水平.结论 Ⅱ代面膜中蓝铜肽的皮肤渗透性更好,且具有较好地改善皮肤衰老的作用.

目的:观察口服小分子胶原蛋白肽，对面部皮肤年轻化的有效性及安全性。方法:2018年11月至2019年2月，北京友谊医院皮肤科门诊纳入66名女性健康志愿者，年龄35～50(42.89±4.44)岁，随机分为试验组和对照组，每组各33名。试验组口服素颜新季胶原蛋白肽；对照组口服肽多健胶原蛋白粉，两组均为每天5 g，共12周。于口服前，服用后1、2、4、12周用VISIA皮肤检测仪采集图像及CK多功能皮肤测试仪采集数据，同时记录志愿者整体满意度及不良反应。结果:61名志愿者完成本研究。口服胶原蛋白12周后，两组较口服前角质层含水量均有增加(65.41±10.60比59.82±9.26)，经皮失水量、皱纹、纹理、毛孔、红色区、紫质均有减少(19.19±4.24比21.50±5.10; 7.38±3.67比8.98±6.67; 5.55±3.07比6.60±4.84; 16.94±9.30比17.95±8.85; 21.92±4.60比22.11±5.34; 10.31±7.03比11.62±8.58)，口服前后7项观察指标比较，差异有统计学意义( P<0.05)。试验组与对照组相比，角质层含水量差异有统计学意义( t＝2.317， P＝0.024)，余6项指标组间差异虽无统计学意义，但试验组改善程度均优于对照组。斑点、紫外线色斑、棕色斑3项指标，两组口服前后比较，差异均无统计学意义。口服12周后试验组与对照组满意度分别为86.67%、61.29%，差异有统计学意义( χ2＝5.074， P＝0.024)。两组不良反应发生率比较，差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:口服小分子胶原蛋白肽效果优于胶原蛋白粉，可改善皮肤纹理，保湿，志愿者满意度高，是面部年轻化的手段之一。

目的:制备 131I、 99Tc m和 177Lu标记的表面修饰了声敏剂原卟啉(PpⅨ)的聚多巴胺(PDA),探讨这些新型化纳米探针在乳腺癌诊断与联合治疗中的价值。 方法:采用水相氧化法合成PDA颗粒，并在其表面分别修饰1层聚乙二醇(PEG)和PpⅨ，合成PDA-PEG-PpⅨ。然后分别进行 131I、 99Tc m和 177Lu标记，检测标记产率与稳定性。进行细胞毒性实验，比较 131I-PDA-PEG-PpⅨ组和游离 131I组小鼠乳腺癌细胞4T1的存活率差异；设PDA-PEG-PpⅨ、PDA-PEG-PpⅨ+光热治疗(PTT)或声动力治疗(SDT)、 131I-PDA-PEG-PpⅨ+PTT或SDT、 131I-PDA-PEG-PpⅨ+PTT+SDT(100 μg/ml PDA-PEG-PpⅨ，925 kBq/ml 131I)组和对照组(DMEM培养基)，比较各组4T1细胞的存活率。经荷4T1乳腺癌BALB/c小鼠尾静脉(29.6 MBq)或瘤内(14.8 MBq)注射 99Tc m-PDA-PEG-PpⅨ后，用γ相机观察肿瘤的显像剂摄取情况。采用两独立样本 t检验和单因素方差分析进行数据分析。 结果:PDA颗粒大小均一，粒径为(160.0±1.5) nm，具有良好的光热转换效果。PDA-PEG-PpⅨ紫外-可见吸收光谱中出现了与PpⅨ (400 nm)相一致的特征峰。在放射性浓度为1.850、3.700和7.400 MBq/ml时， 131I-PDA-PEG-PpⅨ组较游离 131I组细胞存活率降低[(72.18±6.57)%与(86.07±5.17)%、(59.31±9.06)%与(80.85±4.21)%、(42.90±1.30)%与(72.99±5.73)%； t值：3.71、4.82、11.46, P值：0.006、0.001、<0.001]。 131I-PDA-PEG-PpⅨ+PTT+SDT的三模态联合治疗对4T1肿瘤细胞的杀伤效果优于 131I-PDA-PEG-PpⅨ+PTT或SDT治疗[细胞存活率：(10.09±2.50)%、(16.04±2.63)%和(28.65±4.72)%； F＝351.66， P<0.001]。γ显像示， 99Tc m-PDA-PEG-PpⅨ在小鼠体内稳定且能够在肿瘤内有效富集。 结论:成功制备了以PDA为载体的多功能纳米探针。核素标记方法简单有效，稳定性好。 131I-PDA-PEG-PpⅨ对4T1细胞杀伤能力强。 99Tc m-PDA-PEG-PpⅨ在荷4T1乳腺癌小鼠模型内有明显的肿瘤浓聚效果。

目的:制备缓释万古霉素的多聚乳酸-聚乙二醇-多聚乳酸(PLGA-PEG-PLGA)温敏水凝胶，探讨其理化性能、生物学性能和抗菌性能。方法:PLGA(1 500~2 000)-PEG (1 000~1 500)-PLGA(1 500~2 000)多聚物溶液在4 ℃下孵育7 d，充分溶解后在37 ℃水浴中放置10 min成胶并负载万古霉素。冻干脱水48 h后利用扫描电镜观察其微观结构。在37 ℃、60 r/min条件下利用紫外-可见光谱分析绘制其体外降解曲线及药物释放曲线。以二甲基亚砜(DMSO)作为阳性对照，利用噻唑蓝(MTT)法检测本材料细胞相容性。在37 ℃、120 r/min条件下检测其抗菌效果。两组间比较采用独立样本 t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:抗菌水凝胶扫描电镜结果显示，PLGA-PEG-PLGA抗菌温敏水凝胶具有疏松多孔的微观结构，载药前[(53.77±31.20) μm、后孔隙尺寸[(50.42±27.60) μm]差异无统计学意义( t＝0.255， P>0.05)；体外降解时长30 d；空载水凝胶组[(96.41±2.41)%]、载药水凝胶组细胞活性[(96.98±2.26)%]，与DMSO组[(37.64±2.69)%]差异有统计学意义( F＝1 727.784， P<0.05)；药物释放实验证实万古霉素可以持续释放30 d；抗菌实验结果表明，载药水凝胶可以对金葡菌提供长达72 h的抗菌效果。 结论:PLGA-PEG-PLGA温敏型水凝胶是一种较理想的抗生素载体，无细胞毒性，能够长效缓释负载的抗生素，具有潜在的临床应用价值。

目的:构建裸鼠皮肤鳞状细胞癌（CSCC）移植瘤模型，探讨紫外线（UV）损伤及人乳头瘤病毒（HPV）感染诱导、促进CSCC的协同作用机制。方法:将人CSCC细胞A431分成3组，即用HPV16 E6腺病毒转染的HPV16 E6过表达组，空白腺病毒转染的空白载体组（简称空载组），未进行腺病毒转染的空白对照组。使用无血清DMEM培养基将空载组及HPV16 E6过表达组（LV-OE-HPV16 E6组）A431细胞制成单细胞悬液，分别接种于SKH-1裸鼠左侧臀部皮下作为空载组（ n = 16）和LV-OE-HPV16 E6组（ n = 16）。每3天观察并记录小鼠肿瘤生长情况，当瘤体达到150 mm 3时，视为建模成功。建模成功后，每组取8只小鼠进行UV照射，分为4组，即空载组、空载+ UV组、LV-OE-HPV16 E6组、LV-OE-HPV16 E6 + UV组，UV照射剂量为1 440 mJ/（cm 2·d），每次12 min，持续4周后处死裸鼠，测量瘤重及体积，绘制肿瘤生长曲线，免疫组化、Western印迹和qRT-PCR检测验证Wnt1、β联蛋白mRNA及蛋白在裸鼠CSCC中的表达。数据若符合正态分布，多组间比较采用方差分析，组间两两比较采用LSD- t检验；数据若不符合正态分布，采用秩和检验对数据进行统计分析。 结果:空载+ UV组瘤重为（2.90 ± 0.36）g，LV-OE-HPV16 E6组（3.19 ± 0.32）g，LV-OE-HPV16 E6 + UV组（4.41 ± 0.18）g，与空载组（2.20 ± 0.24）g比较，差异均有统计学意义（ t值分别为4.39、6.77、20.11，均 P<0.001）；空载+ UV组瘤体积为（1 033.12 ± 400.15）mm 3，LV-OE-HPV16 E6组（1 119.21 ± 447.57）mm 3，LV-OE-HPV16 E6 + UV组（1 464.29 ± 409.98）mm 3，与空载组（688.94 ± 319.31）mm 3比较差异均有统计学意义（ t值分别为1.90、2.21、4.22，均 P<0.001）。免疫组化显示，4组间Wnt1、β联蛋白表达水平差异无统计学意义（ F值分别为0.76、0.71，均 P > 0.05）；Western印迹显示，4组间Wnt1、β联蛋白水平差异有统计学意义（ F值分别为16.74、49.90，均 P<0.05），且LV-OE-HPV16 E6 + UV组Wnt1、β联蛋白水平高于空载组、空载+ UV组和LV-OE-HPV16 E6组（均 P<0.05）。mRNA水平分析显示，4组间组织中Wnt1、β联蛋白mRNA水平差异均有统计学意义（ F值分别为7.77、8.38，均 P<0.05），且LV-OE-HPV16 E6 + UV组Wnt1 mRNA水平高于空载组、空载+ UV组和LV-OE-HPV16 E6组（均 P<0.05）。 结论:UV和HPV感染在诱导、促进CSCC中具有协同作用。

Background::Atrial natriuretic peptide (ANP) and its natriuretic peptide receptors A (NPR-A) and C (NPR-C) are involved in the regulation of physiological and pathophysiological process of blood pressure. The present study aimed to determine the role of NPR-C in the development of salt-sensitive hypertension.Methods::The Dahl salt-sensitive (DS) and salt-resistant (DR) rats were used in this study. Animals were matched according to their age and weight, and then placed on either a high-salt (HS, 8%) or a normal-salt (NS, 0.4%) diet for 6 weeks randomly using random number table. The systolic blood pressure (SBP), plasmatic sodium concentration (PL Na), urinary sodium excretion (UV Na), and serum creatinine concentration (Scr) were measured. The concentration of ANP in blood and tissues (heart and kidney) was detected by enzyme-linked immunosorbent assay. The expression of ANP, NPR-A, and NPR-C in kidney was evaluated with western blot analysis. Regarding renal redox state, the concentration changes in malondialdehyde (MDA), lipofuscin, nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH) oxidase (Nox), and nitric oxide synthase (NOS) in kidney were detected by a spectrophotometric method. The kidney damage was evaluated using pathological techniques and the succinodehydrogenase (SDHase) examination. Furthermore, after an intra-peritoneal injection of C-atrial natriuretic peptide (ANP) 4-23 (C-ANP 4-23), an NPR-C receptor agonist, the SBP, biochemical values in blood and urine, and renal redox state were evaluated. The paired Student’s t test and analysis of variance followed by the Bonferroni test were performed for statistical analyses of the comparisons between two groups and multiple groups, respectively. Results::The baseline SBP in all groups was within the normal range. At the end of the 6-week experiment, HS diet significantly increased the SBP in DS rats from 116.63 ± 2.90 mmHg to 162.25 ± 2.15 mmHg ( t = -10.213, P < 0.001). The changes of SBP were not significant in DS rats on an NS diet and DR rats on an NS diet or on an HS diet (all P > 0.05). The significant increase of PL Na, UV Na, and Scr related to an HS diet was found in both DS and DR rats (all P < 0.05). However, significant changes in the concentration ( t= -21.915, P < 0.001) and expression of renal ANP ( t= -3.566, P = 0.016) and the expression of renal NPR-C ( t = 5.864, P = 0.002) were only observed in DS hypertensive rats. The significantly higher desmin immunochemical staining score ( t = -5.715, P = 0.005) and mitochondrial injury score ( t = -6.325, P = 0.003) accompanied by the lower SDHase concentration ( t= 3.972, P = 0.017) revealed mitochondrial pathologic abnormalities in podocytes in DS rats with an HS diet. The distinct increases of MDA ( t= -4.685, P= 0.009), lipofuscin ( t= -8.195, P= 0.001), and Nox ( t= -12.733, P < 0.001) but not NOS ( t = -0.328, P = 0.764) in kidneys were also found in DS hypertensive rats. C-ANP 4-23 treatment significantly decreased the SBP induced by HS in DS rats ( P < 0.05), which was still higher than NS groups with the vehicle or C-ANP 4-23 treatment ( P < 0.05). Moreover, the HS-induced increase of MDA, lipofuscin, Nox concentrations, and Nox4 expression in DS rats was significantly attenuated by C-ANP 4-23 treatment as compared with those with HS diet and vehicle injection (all P < 0.05). Conclusions::The results indicated that the renal NPR-C might be involved in the salt-sensitive hypertension through the damage of mitochondria in podocytes and the reduction of the anti-oxidative function. Hence, C-ANP 4-23 might serve as a therapeutic agent in treating salt-sensitive hypertension.