目的：:检测血管活性肠肽受体2（ Vipr2）敲除小鼠多巴胺（DA）等神经递质含量和视网膜电生理，明确 Vipr2敲除对视网膜功能的影响。 方法：:实验研究。利用RT-PCR检测血管活性肠肽（ Vip）、 Vipr2在4周龄雄性C57BL/6J小鼠眼球组织中的表达水平。通过CRISPR-Cas9基因编辑技术构建 Vipr2敲除（ Vipr2-KO）小鼠，然后在4周龄时检测 Vipr2-KO和 Vipr2野生型（ Vipr2-WT）小鼠视网膜中DA等神经递质含量及视网膜电生理功能。 Vipr2-KO小鼠与 Vipr2-WT小鼠DA等神经递质含量比较采用独立样本 t检验，而2种小鼠视网膜电生理数据比较采用双因素重复测量方差分析。 结果：:Vip和 Vipr2 mRNA在小鼠视网膜、脉络膜+视网膜色素细胞、角膜和巩膜中均有表达；在虹膜和晶状体中 Vipr2呈低表达，未检测到 Vip表达。与 Vipr2-WT小鼠相比， Vipr2-KO小鼠表现为近视（ t=2.51， P=0.017），视网膜DA、3, 4-二羟基苯乙酸（DOPAC）、高香草酸（HVA）含量均明显升高（ t=3.42， P=0.001； t=2.15， P=0.037； t=3.27， P=0.002），DOPAC/DA比值无变化；而玻璃体液中DA、DOPAC、DOPAC/DA、HVA、去甲肾上腺素含量差异均无统计学意义。视网膜和玻璃体液中天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、牛磺酸和γ氨基丁酸含量在 Vipr2-KO小鼠与 Vipr2-WT小鼠之间差异均无统计学意义。在暗适应不同光刺激强度下（-3.699、-2.201、-0.699、0.301、0.799 log cd·s/m 2）， Vipr2-KO小鼠相比 Vipr2-WT小鼠，b波振幅明显增加（ F=8.65， P=0.015）。 结论：:Vipr2敲除可引起4周龄小鼠屈光向近视发展，影响视网膜中DA、DOPAC、HVA合成代谢，并引起视网膜电生理功能异常。提示 Vipr2敲除可能通过影响视网膜功能参与近视形成，但具体作用机制有待进一步研究。

目的:对2019年广州本地登革热病例血清型分布和病毒全基因组进化特征进行分析，为登革热防治提供科学依据。方法:应用登革病毒血清型特异性荧光PCR试剂盒进行分型，操作步骤按照试剂盒说明书严格进行；分离培养的病毒采用Illumina平台进行全基因组序列测定；从ViPR网站下载部分代表性序列，用MEGA7.0软件进行病毒系统发育分析。结果:2019年广州本地登革热为3个血清型共流行，其中登革1型占比80.35%，2型占比12.97%，3型占比6.68%；3个血清型之间患者的性别、年龄分布和重症发生率差异均无统计学意义。病毒全基因组进化分析显示，登革1型分离株属于基因Ⅰ型，来源上有两个分支，与柬埔寨来源毒株亲缘关系近；登革2型分离株为Cosmopolitan型，与东南亚流行株亲缘关系近；登革3型分离株属于基因Ⅲ型，与印度病毒株在同一分支。结论:2019年广州登革病毒为1、2和3三个血清型共流行，每一个血清型病毒分属同一种基因型。

目的 观察四磨汤对肝脾气滞型功能性消化不良(FD)大鼠血管活性肠肽(VIP)及其受体2(VIPR2)表达的影响,探讨其调节胃肠动力的作用机制.方法 60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、莫沙必利组(0.305 mg/kg)和四磨汤高、中、低剂量组(5.62、2.81、1.40 g/kg),采用多因素造模法制备肝脾气滞型FD大鼠模型,各给药组分别予相应药物灌胃14 d.观察大鼠一般情况,测定体质量、胃排空率和小肠推进率,HE染色观察胃窦和十二指肠组织形态,免疫组化染色检测十二指肠组织VIP、VIPR2阳性表达,Western blot、RT-PCR分别检测十二指肠组织VIP、VIPR2蛋白和mRNA表达.结果 与空白组比较,模型组大鼠一般状况较差,体质量、胃排空率和小肠推进率均显著降低(P<0.01),十二指肠组织VIP、VIPR2蛋白和mRNA表达均显著升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,四磨汤高、中剂量组和莫沙必利组大鼠体质量、胃排空率和小肠推进率均显著升高(P<0.05,P<0.01),十二指肠组织VIP、VIPR2蛋白和mRNA表达均显著降低(P<0.05,P<0.01).HE染色显示,胃窦和十二指肠组织形态未发生明显改变.结论 四磨汤可能通过抑制肝脾气滞型FD大鼠十二指肠组织VIP、VIPR2表达促进胃肠动力,从而改善FD.

目的:探讨大黄素对洛哌丁胺(loperamide,Lop)所致小鼠便秘的治疗作用及其潜在机制.方法:采用Lop构建小鼠便秘模型,采用大黄素处理便秘小鼠.统计小鼠在 2 h观察期内的排便频率,收集粪便并检测粪便含水量;通过钡餐法检测肠通过时间;通过一氧化氮(nitric oxide,NO)检测试剂盒检测血清 NO含量;通过 HE染色观察小鼠结肠组织形态学改变;通过免疫组化检测小鼠结肠中血管活性肠肽受体 1(vasoactive intestinal peptide receptor 1,VIPR,1和 5-羟色胺(5-hydroxytryptarnine,5-HT)4型受体(5-HT4受体)的表达水平:通过 Western blot检测瞬时受体电位阳离子通道亚家族 V成员 1(transient receptor potential cation channel subfamily V member 1,TRPV1)、胶质细胞源性神经营养因子(glial cell-derived neurotrophic factor,GDNF)、脑源性神经营养因子(brain-de-rived neurotrophic factor,BDNF)、一氧化氮合酶(nitric oxide synthase.NOS)、c-Kit和干细胞因子(stem cell factor.SCF)的表达水平.结果:大黄素可显著增加便秘小鼠在观察期内的排便次数以及粪便含水量(P ＜0.05或P＜0.01),显著降低粪便的肠通过时间和血清 NO水平(P＜0.01).HE染色结果显示,大黄素可减轻Lop引起的结肠组织炎症渗透.免疫组化结果显示,大黄素显著降低便秘小鼠结肠组织中 VIPR1表达水平(P ＜ 0.01).显著增加5-HT4受体表达水平(P＜0.01).Western blot结果显示,大黄素可显著降低小鼠结肠组织中 TRPV1和 NOS的表达水平(P＜0.01),显著增加 GDNF,BDNF 、c-Kit和 SCF的表达水平(P ＜0.05或 P ＜0.01).结论:大黄素通过修复肠神经系统失调进而缓解Lop诱导的便秘.

目的 肿瘤微环境(tumor microenvironment,TME)在肿瘤的发生、发展乃至转移过程中起着不可或缺的作用,影响肿瘤的治疗效果.因此,必须寻找一系列与免疫相关的基因来评估TME的免疫状态,并具有判断肺腺癌(lung adenocarcinorma,LUAD)预后的能力.由于目前已有高通量表达数据,本研究利用全球基因表达数据分析免疫相关基因表达与LUAD患者临床结局的关系.方法 使用来自癌症基因组图谱(The cancer genomic maps,TCGA)的RNA测序(RNA sequencing,RNA seq)数据和微阵列数据研究由LUAD免疫相关基因组成的免疫相关风险信号.结果 单变量Cox回归分析结果显示,24个与生存相关转录因子(trans-acting factor,TFs)表达与10个免疫相关基因存在关联.在10个免疫相关基因中,有IGKV4-1、BTK、N RATC1、IL3RA、ADRB2和VIPR1 6个基因与高总生存率(overall survival,OS)相关,FU2N、FIRL1、GP1和BIRC5 4个基因与低OS相关.总生存分析结果显示,高危组比低危组存在更差的预后,P＜0.01.通过受试者工作特征(receiver operating characteristic curve,ROC)曲线发现,免疫相关基因模型可以作为LUAD发病的早期预测因子,ROC曲线下面积(area under curve,AUC)为0.711.Kaplan-Meier plotter结果发现,与临床因素相关免疫基因ANGPTL4(P=0.001)、CX3CR1 (P＜0.001)、INHA(P＜0.001)、S100A16 (P＜0.001)和VIPR1 (P=0.001)的表达在LUAD队列中与OS有关联.结论 LUAD组织存在免疫相关基因表达,免疫相关基因对预后有正/负相关影响,需要进一步甄别研究.

目的 观察人参皂苷Rh1对乳腺癌SKBR3细胞基因表达的影响,筛查人参皂苷Rh1干预下乳腺癌SKBR3细胞中差异表达的基因.方法 对乳腺癌SKBR3细胞进行样本准备,获得去rRNA链特异性转录组;测序获得原始图像文件经碱基识别后转化为原始序列文件;通过质量分析评估测序数据是否适合进行生物信息学分析,应用剪切转录产物比对软件(STAR)对测序数据与参考基因组进行比对;基于美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库,对人参皂苷Rh1干预下乳腺癌SKBR3细胞基因的表达及差异基因的表达进行分析.结果 高通量测序共筛查出基因26978个,其中根据NCBI数据库注释为mRNA的基因19229个,注释为lncRNA的基因4385个,高通量测序结果表明差异表达基因6580个,以Fold change>1为上调,<-1为下调,上调差异基因3403个,其中差异表达显著基因为小整合膜蛋白11A(SMIM11A)、嘌呤能受体P2X1(P2RX1)、碳酸酐酶9(CA9)、磷脂酰肌醇-3激酶催化亚基 δ 核糖核酸2(PIK3CD-AS2)、血管活性肠肽受体2(VIPR2)、非特征LOC100506314(LOC100506314)、长基因间非蛋白编码核糖核酸1389(LINC01389)、表皮生长因子受体激酶底物8-样蛋白3(EPS8L3)、视网膜筋膜基因2(FSCN2)、肠壁碱性磷酸酶(ALPI);下调差异表达基因3177个,其中差异表达显著基因为溶质载体家族1成员3(SLC1A3)、羟基类固醇17-β 脱氢酶1(HSD17B1)、碳水化合物磺基转移酶11(CHST11)、溶质载体家族25成员51(SLC25A51)、β-1,3-半乳糖基转移酶6(B3GALT6)、非特征LOC101929882(LOC101929882)、δ 连环蛋白家族成员(ARVCF)、蛋白磷酸酶2A催化亚基 α(PPP2CA)、星形胶质细胞上调基因-1(AEG1)、磷脂酰肌醇-4-激酶B(PI4KB).结论 应用高通量测序技术可筛查出人参皂苷Rh1对乳腺癌SKBR3细胞增殖相关的差异性表达基因,并对筛选出的重要基因进行总结和分类.

目的 研究黄连提取物在体内及体外对结核分枝杆菌的抑制作用及部分机理.方法 本实验用体外抑菌试验和体内造模实验检测黄连提取物抑制结核分枝杆菌(-H37Ra)的作用及机理.抑菌试验:将黄连提取物按不同浓度添加到分枝杆菌固体培养基中,在培养基表面滴加H37Ra菌液,设空白组、利福平组做为对照,37℃培养2个月,观察有无菌落生长.造模实验:用结核分枝杆菌减毒株H37Ra感染小鼠,分为未感染组(正常组)、感染未治疗组(模型组)、感染治疗组(黄连组、利福平组).做结核菌素试验验证造模阳性率,用ELISA实验检测小鼠血清IL-2的表达,使用RNA-seq检测小鼠肺的基因型改变.结果 体外抑菌试验结果显示除空白组外其他各组均未见菌落生长,证明黄连提取物对结核菌有抑制作用.造模实验的结核菌素试验阳性率63％,证明造模成功.小鼠血清IL-2的表达显示黄连组IL-2的表达升高.小鼠肺RNA-seq检测测得数百条有意义的差异基因,揭示了黄连提取物抑制结核杆菌的作用机制,如Vipr2提高小鼠的细胞免疫,H2-Ea增强小鼠抵抗肺纤维化等.结论 黄连提取物对结核分枝杆菌有抑制作用且抑制机理是多渠道、多靶点的.

目的 探讨血管活性肠肽受体1(VIPR1)在肝细胞癌(HCC)组织中低表达的转录调控机制和生物学功能.方法 肝癌细胞系Hep3B和Huh7常规培养,实验分为VIPR1启动子野生型组、启动子突变载体1组、启动子突变载体2组和启动子突变载体1+2组.双荧光素酶报告基因实验检测AP-2α表达对VIPR1启动子活性的影响;DNA甲基化转移酶抑制剂(DAC)处理肝癌细胞,焦磷酸测序法检测VIPR1启动子甲基化水平的变化;染色质免疫共沉淀检测AP-2α与VIPR1启动子的结合能力;Western blot检测AP-2α的敲减作用以及VIPR1的表达;Western blot检测两种细胞株中VIPR1的差异表达;qPCR和Western blot检测VIPR1过表达和敲减效果;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡;CCK8实验检测细胞增殖.建立裸鼠移植瘤模型,检测LV-NC组和LV-VIPR1组中肿瘤的体积和质量.结果 与VIPR1启动子野生型组相比,启动子突变载体1+2与AP-2α表达质粒共转染后,荧光素酶活性明显恢复(P<0.05);DAC处理后,VIPR1启动子甲基化水平降低,并且随着甲基化程度减弱,与VIPR1启动子结合的AP-2α显著减少(P<0.01);敲减AP-2α后,VIPR1表达上升;Huh7细胞株中VIPR1表达低于Hep3B细胞株,在两种细胞株中成功构建了VIPR1过表达和敲减模型,VIPR1过表达增加了G2/M期的细胞数量(P<0.01),凋亡细胞显著增加(P<0.001),细胞增殖受到抑制(P<0.001),而VIPR1敲低则相反.体内实验表明VIPR1过表达组的肿瘤体积减小(P<0.001),肿瘤量降低(P<0.05).结论 HCC中VIPR1的启动子甲基化促进了转录因子AP-2α的结合,并且抑制了VIPR1表达,而VIPR1过表达可使细胞周期阻滞在G2/M期,促进细胞凋亡,抑制细胞增殖和肿瘤生长.