目的:了解舟山海岛地区蜱类所携带的病原体多样性及其基因同源性。方法:2020年4—11月，采用布旗法收集舟山海岛地区发热伴血小板减少征病例居住地周围环境中的游离蜱，采用畜体检查法采集家畜身上的寄生蜱。蜱样本提取RNA或DNA进行荧光RT-PCR检测，以嗜吞噬细胞无形体、立克次体、查菲埃里克体、新型布尼亚病毒、汉坦病毒、汉城病毒、沃尔巴克体、山羊无形体为引物进行PCR扩增初筛。扩增序列测序后进行同源性分析，以邻接法构建系统进化树。结果:共采集蜱样本99只，其中游离蜱样本39只，寄生蜱样本60只。在蜱样本中检出嗜吞噬细胞无形体、立克次体、沃尔巴克体和山羊无形体核酸阳性。此次检出的沃尔巴克体与日本报道的沃尔巴克体（AB025965）同源性为98.70%；立克次体与中国云南立克次体03（KY433580）、日本立克次体LA16同源性为99.83%；嗜吞噬细胞无形体有2个进化分支：一个进化分支与安徽桐城（MK045683）及韩国济州岛（GU064903）的嗜吞噬细胞无形体同源性为100.00%，另一个进化分支与安徽金寨的嗜吞噬细胞无形体（MK045694）同源性为99.70%。结论:舟山海岛地区是嗜吞噬细胞无形体、山羊无形体和日本立克次体的自然疫源地，暴露居民存在感染风险。

新发微生物与感染杂志(Emerging Microbio and Infection)在国际上首次报道中国研究团队关于白蛉(Sandfly)微生物组(microbiome)的研究结果，题目为"感染组学研究揭示被忽视的吸血媒介白蛉所携带对人类具有致病性的病毒、细菌和真核微生物"。研究结果显示，我国山西省中部和南部地区自然界采集的白蛉标本中微生物组RNA占标本中总的非核糖体RNA的1.8%，共含有87种病原体，其中70种是新物种。RNA病毒在病原体中占比最多，其次是细菌、DNA病毒和真核微生物。RNA病毒包括15个超群(viral super-groups)，共78种，其中66种是RNA病毒中的新病毒种。在RNA病毒序列信息中包含大量已经在当地白蛉中分离到的白蛉病毒属(Genus Phlebovirus)的Wuxiang病毒(Wuxiang virus, WUXV)和Hedi病毒(Hedi virus, HEDV )两种新病毒的基因组信息。分析中发现2种DNA病毒(Adintovirida和细小病毒科病毒)。细菌基因组信息包括不动杆菌(Acinetobacter)、假单胞菌(Pseudomonas)、立克次体(Rickettsia)和沃尔巴克氏菌(Wolbachia)。在10批白蛉标本中至少5批标本存在利什曼原虫。此外还发现一种锥虫科(Trypanosomatidae)新成员。病毒基因组分子遗传进化分析结果显示，RNA病毒中存在黄病毒属(Flavivirus)病毒的新成员，该病毒与蚊虫相关病毒，如广平病毒(Quang binh virus)、细胞融合病毒(Cell fusing agent virus)和伊蚊黄病毒(Aedes flavivirus)等相聚类。综上结果提示自然界白蛉中不仅携带多种可以在组织培养细胞复制的病毒分离物，还携带病毒以外的多种细菌、立克次体和利什曼原虫等。这一研究首次报道自然界白蛉的微生物感染组学结果，对于了解白蛉携带和传播病原微生物及其所带来的公共卫生危害有了较深入的认识，同时这种应用还可以扩展到其他媒介物种，从而将更有效地发现和表征媒介中的潜在病原体。

为了分析番茄潜叶蛾Tuta absoluta(Meyrick)不同地理种群中肠内共生菌多样性及相对丰度,本研究通过16S rDNA高通量测序技术分析了番茄潜叶蛾中肠内共生菌多样性及相对丰度,并通过KEGG分析了内共生菌生物群落基因代谢途径差异.结果表明,酒泉种群的丰富度、多样性、均匀度和进化多样性等方面均相对高于张掖.两个地理种群丰度前20的中肠细菌分别隶属于放线菌门Acfinobacteria、拟杆菌门Bacteroidetes、厚壁菌门Firmicutes、变形菌门Proteobacteria和疣微菌门Verrucomicrobia,其中均以厚壁菌门和变形菌门细菌相对丰度较高.张掖地理种群相对丰度最高的为沃尔巴克菌属Wolbachia(16.06％),隶属于变形菌门;酒泉地理种群相对丰度最高的为乳杆菌属Lactobacillus(13.75％),隶属于厚壁菌门;两个地理种群相对丰度总和最高且差异最大的为沃尔巴克菌属,张掖地理种群的相对丰度为酒泉地理种群的18.89倍.另外,本研究对微生物群落的33种基因功能进行了预测,主要群落基因功能表现为代谢功能,其中碳水化合物代谢功能最强,且种群间没有显著差异;两个地理种群间代谢功能差异最显著的为异生物降解和代谢功能,以酒泉种群相对较强.总体而言,两个地理种群的中肠细菌多样性差异较小,其中寡养单胞菌属Stenotrophomonas细菌可能与害虫抗性密切相关,沃尔巴克菌属细菌可应用于害虫生物防治,前景良好.

DEAR EDITOR,Insertion sequences(ISs)are the simplest structural transposable elements(TEs)in prokaryotes,consisting only of a transposase coding sequence and its bilateral short terminal inverted repeats.Due to their gradually streamlined genomic construction,TEs rarely exist in the genomes of obligate endosymbionts.However,TE content,especially ISs,is abundant in the genome of Wolbachia bacteria,obligate endosymbionts widespread in arthropods and nematodes.

[目的]揭示光臀八齿小蠹Ips nitidus共生微生物群落组成和功能特征.[方法]对来自中国西北部青海省麦秀自然保护区的光臀八齿小蠹进行肠道和其他组织共生真菌和细菌宏基因组学和相关性网络分析,比较光臀八齿小蠹肠道和其他组织共生真菌及细菌群落组成,分析微生物群落间的相互关系,并采用非冗余蛋白序列比对方法注释共生微生物功能基因.[结果]共发现光臀八齿小蠹肠道和其他组织共生微生物3 520种,真菌和细菌的物种数最高,分别占全部物种数的23.21％和69.01％,平均相对丰度分别为9.69％和13.79％.其他组织中共生真菌白粉菌目(Erysiphales)相对丰度和物种多样性较肠道中的高,而其他组织中酵母目(Saccharomycetales)相对丰度和物种多样性较肠道中的低;其他组织中长喙壳类真菌(ophiostomatoid fungi)多样性(6属16种)较在肠道中的(5属13种)高,在其他组织和肠道中的平均相对丰度分别为0.016％和0.013％.其他组织中肠杆菌目(Enterobacterales)相对丰度和物种多样性高于肠道中的.肠杆菌属Enterobacter、白粉菌属Erysiphe、丛枝菌根属Rhizophagus和沃尔巴克氏菌属Wolbachia均为肠道和其他组织的核心菌属.真菌和细菌的某些群落在肠道和其他组织间表现出相反的相互关系,表明光臀八齿小蠹共生菌间可能存在复杂的相互作用.分别鉴定到共生真菌和细菌功能基因7 010和6 483个,细菌中异源性物质生物降解和代谢相关功能基因数量远高于真菌的;mRNA监测通路、丙酸代谢和泛素介导的蛋白质水解等11条通路在肠道中较在其他组织中具有更多的差异基因;对于柠檬烯降解和甾醇合成相关功能基因的注释结果表明,细菌对柠檬烯较真菌具有明显的降解能力,而真菌在甾醇生物合成中较细菌发挥更重要的促进作用;74个长喙壳类真菌功能基因主要参与到氧化磷酸化、代谢通路和氨基酸代谢,且长喙壳类真菌在其他组织中多样性更高,主要分布于Ophiostoma等.[结论]光臀八齿小蠹肠道和其他组织中共生微生物的群落组成和多样性以及功能上存在一定的差异性,肠杆菌属、白粉菌属、丛枝菌根属和沃尔巴克氏菌属是光臀八齿小蠹共生微生物群落中最重要的核心菌群,可能在群落构建中发挥着重要的作用.

目的 了解山东省沿海地区淡色库蚊种群中沃尔巴克氏体(Wolbachia)的感染情况及其分型,为蚊媒疾病防治提供新的研究方向和理论基础.方法 2022年6月-2023年8月,利用灯诱法采集山东省的烟台市莱州市、烟台市龙口市、青岛市黄岛区、青岛市崂山区、日照市五莲县、日照市东港区、东营市河口区及东营市东营区共8个采样点的蚊媒样本,采用形态学和分子学相结合的方法鉴定出淡色库蚊自然种群样本.然后利用沃尔巴克氏体的表面蛋白(Wol-bachia surface protein,wsp)基因序列建立的PCR检测方法,对上述8个采样点的淡色库蚊样本进行沃尔巴克氏体感染率的检测.同时,从GenBank数据库中下载沃尔巴克氏体的代表株系,利用Mega5.2软件对所获基因序列进行系统发育分析以分型.结果 山东省4个沿海城市均发现有沃尔巴克氏体的感染,平均感染率为80.8％(261/323);其中烟台市的感染率最高,为100％(46/46);日照市五莲县的感染率最低,为60.6％(20/33).共计发现12种wsp单倍型,其中Hap1的感染率为92.5％,Hap2的感染率为70.0％,而其他单倍型的感染率则较低.从单倍型来源来看,在8个采样点中均检测出单倍型Hap1,其他单倍型仅在部分采样点地理种群检测到.其中,东营市东营区检测出的单倍型多样性最高,为6种.经系统发育树分析得出结论,8个采样点感染的沃尔巴克氏体均属于B型.结论 山东省沿海地区的淡色库蚊种群以感染B型沃尔巴克氏体为主,但是不同地区感染的沃尔巴克氏体的单倍型存在差异,本调查可为这些地区特定蚊媒疾病的精准防控提供一定理论基础.

目的 了解沃尔巴克氏体介导的抗病原体特性能否干扰流行性乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)复制,探讨沃尔巴克氏体对库蚊传播的JEV复制的调控作用.方法 通过实时荧光定量PCR和RNA原位杂交检测Aa23白纹伊蚊细胞(天然感染沃尔巴克氏体)和阴性对照Aa23T白纹伊蚊细胞(以四环素处理清除沃尔巴克氏体感染),定量分析沃尔巴克氏体的生长浓度;通过病毒蚀斑滴定检测Aa23细胞(天然感染沃尔巴克氏体细胞系)和阴性对照Aa23T细胞(不含沃尔巴克氏体的细胞系)在感染JEV(P3株)后第1天至第8天的病毒复制滴度和细胞病变效应.结果 实时荧光定量PCR和RNA原位杂交分析结果表明,Aa23T细胞中沃尔巴克氏体感染呈阴性,Aa23细胞中沃尔巴克氏体的WSP基因拷贝数和靶向沃尔巴克氏体16SrDNA的荧光信号强度随细胞生长时间增长而增高;蚀斑滴定实验结果显示,携带沃尔巴克氏体的细胞系(Aa23)感染JEV后出现细胞病变的时间明显延迟,Aa23细胞中病毒复制滴度(106PFU/mL)与对照细胞病毒复制滴度(108 PFU/mL)相比明显降低.结论 沃尔巴克氏体明显延迟JEV对细胞的致病变作用,减少JEV复制.本研究证明了沃尔巴克氏体对以库蚊为主要传播媒介的JEV具有抑制作用,揭示了沃尔巴克氏体具有抗库蚊传播病毒的潜力,特别是对利用基于沃尔巴克氏体的蚊媒控制技术防控JEV的传播提供了重要的基础数据和理论依据.

Mosquito-borne diseases present a significant threat to human health,with the possibility of outbreaks of new mosquito-borne diseases always looming.Unfortunately,current measures to combat these diseases such as vaccines and drugs are often either unavailable or ineffective.However,recent studies on microbiomes may reveal promising strategies to fight these diseases.In this review,we examine recent advances in our understanding of the effects of both the mosquito and vertebrate microbiomes on mos-quito-borne diseases.We argue that the mosquito microbiome can have direct and indirect impacts on the transmission of these dis-eases,with mosquito symbiotic microorganisms,particularly Wolbachia bacteria,showing potential for controlling mosquito-borne diseases.Moreover,the skin microbiome of vertebrates plays a significant role in mosquito preferences,while the gut microbiome has an impact on the progression of mosquito-borne diseases in humans.As researchers continue to explore the role of microbiomes in mosquito-borne diseases,we highlight some promising future directions for this field.Ultimately,a better understanding of the interplay between mosquitoes,their hosts,pathogens,and the microbiomes of mosquitoes and hosts may hold the key to preventing and controlling mosquito-borne diseases.

Several herbivorous insects and plant-associated microorganisms control the phytohormonal balance,thus enabling them to successfully exploit the plant by inhibiting plant defenses and withdrawing plant resources for their own benefit.The leaf-mining moth Phyllonorycter blancardella modifies the cytokinin (CK) profile of mined leaf-tissues,and the insect symbiotic bacteria Wolbachia is involved in the plant manipulation to the benefit of the insect host.To gain a deeper understanding into the possible origin and dynamics of CKs,we conducted an extensive characterization of CKs in larvae and in infected apple leaves.Our results show the enhanced CK levels in mines,both on green and yellow leaves,allowing insects to control their nutritional supply under fluctuating environmental conditions.The spatial distribution of CKs within the mined leaves shows that hormone manipulation is strictly limited to the mine suggesting the absence of CK translocation from distant leaf areas toward the insect feeding site.Mass spectrometry analyses reveal that major CK types accumulating in mines and larvae are similar to what is observed for most gall-inducers,suggesting that strategies underlying the plant manipulation may be shared between herbivorous insects with distinct life histories.Results further show that CKs are detected in the highest levels in larvae,reinforcing our hypothesis that CKs accumulating in the mines originate from the insect itself.Presence of bacteriaspecific methylthio-CKs is consistent with previous results suggesting that insect bacterial symbionts contribute to the observed phenotype.Our study provides key findings toward the understanding of molecular mechanisms underlying this intricate plant-insect-microbe interaction.

[目的]DNA甲基化是基因修饰的一种重要方式,主要可以形成5-甲基胞嘧啶(5mC)和6-甲基腺嘌呤(6mA)等.目前关于5mC的研究比较多,而关于6mA在真核生物中的研究则较少.沃尔巴克氏体Wolbachia是昆虫中最常见的共生菌之一,可通过多种方式操纵宿主生殖,其中最常见的就是引起精卵细胞质不亲和(cytoplasmic incompatibility,CI),即感染Wolbachia的雄性与未感染的雌性宿主交配后,胚胎致死,但其机制还不清楚.本研究拟从6mA甲基化的角度,探讨Wolbachia影响果蝇生殖的分子机制.[方法]以模式生物黑腹果蝇Drosophila melanogaster为材料,通过实时荧光定量PCR方法,检测Wolbachia感染对果蝇精巢、卵巢以及3个交配组[TT(对照,父母本都未感染),TW(父本未感染,母本感染,胚胎感染,可发育)和WT(CI,致死)]早期胚胎中DNA 6mA去甲基化酶基因DMAD的表达变化.[结果]Wolbachia感染可显著上调1日龄果蝇精巢中DMAD的表达水平,而对卵巢中DMAD的表达没有显著影响.在产卵后0.5h(中囊胚过渡前)的胚胎中,CI胚胎的DMAD表达水平极显著高于可正常发育的胚胎(TT和TW);在3h的胚胎(中囊胚过渡期)中,TW和CI胚胎中DMAD的表达量都极显著高于对照组;在6h的胚胎(中囊胚过渡后)中,CI胚胎中DMAD的表达量相对最低.[结论]Wolbachia感染可能通过干扰宿主果蝇精巢中6mA甲基化水平对精子产生修饰,导致其与正常未感染的卵子受精后胚胎致死.