Parkinson's disease (PD) is the most common neurodegenerative movement disorder.Mutations in the DJ-1,including L166P,are responsible for recessive earlyonset PD.Many lines of evidence have shown that L166P is not only a loss-of-function mutant,but also a proapoptotic-like protein that results in mitochondrial dysfunction.L166P has been reported to be unstable and to mislocalize to mitochondria.However,the mechanisms underlying the instability of L166P compared to wild-type D J-1 remain largely unknown.Here,we showed that Omi/HtrA2,a mitochondrial serine protease that has also been linked to the pathogenesis of PD,contributed to L166P instability.Omi directly interacted with and cleaved L166P in mitochondria to decrease the L166P level.However,Omi did not bind and cleave wild-type DJ-1.Moreover,Omi cleaved L166P at both serine residues 3 and 121,while L 166P-induced cell death under H2O2 treatment was alleviated by over-expression of Omi.Our data reveal a bridge between DJ-1 and Omi,two PD-associated genetic factors,which contributes to our understanding of the pathogenesis of PD.

目的 探讨大鼠颅脑损伤后线粒体Omi/HtrA2信号通路在大鼠神经细胞凋亡中的作用.方法 90只大鼠按随机数字表法分成假手术组、颅脑损伤组和UCF-101干预组,每组30只,然后每组按照12、24、48 h三个时间点分成三个亚组,每个亚组10只.使用大鼠自由落体颅脑损伤动物模型,UCF-101干预组大鼠在模型形成前0.5 h按1.5μmol/kg的剂量腹腔注射UCF-101,其余两组大鼠腹腔注射1 mL的等渗NaCl溶液.按照12、24、48 h三个时间点每组分批断头处死10只大鼠,分离海马组织.采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)测定法检测各组大鼠海马组织神经细胞凋亡情况,Western-blotting检测Omi/HtrA2、X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)、pro-caspase-3、pro-caspase-9和剪切聚腺苷二磷酸-核糖多聚酶(PARP)蛋白表达,四肽荧光底物法检测caspase-3和caspase-9蛋白活性.结果 三组大鼠海马神经细胞凋亡比例,Omi/HtrA2、pro-caspase-3、pro-caspase-9、剪切PARP和XIAP蛋白表达以及caspase-3和caspase-9蛋白活性比较,差异均有统计学意义(F=217.742、107.139、145.748、133.970、103.029、65.112、142.772、96.187,P均<0.05).12、24、48 h时颅脑损伤组大鼠凋亡的海马神经细胞比例,Omi/HtrA2、pro-caspase-3、pro-caspase-9和剪切PARP蛋白表达以及caspase-3和caspase-9蛋白活性均较假手术组显著升高(P均<0.05);而UCF-101干预组大鼠凋亡的海马神经细胞比例,Omi/HtrA2、pro-caspase-3、pro-caspase-9和剪切PARP蛋白表达以及caspase-3和caspase-9蛋白活性均较颅脑损伤组显著下降(P均<0.05).各时间点颅脑损伤组大鼠海马组织XIAP蛋白表达均较假手术组显著下降(P均<0.05),而UCF-101干预组大鼠海马组织XIAP蛋白表达均较颅脑损伤组显著升高(P均<0.05).结论 Omi/HtrA2介导的线粒体途径可能参与大鼠颅脑损伤后神经细胞凋亡的发生过程,而UCF-101可有效抑制神经细胞凋亡.

目的 观察α-硫辛酸(alpha-lipoicacid,ALA)对6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导的PC12细胞帕金森病(PD)细胞模型的内质网应激及细胞凋亡相关因子表达的影响. 方法 使用传代的PC12细胞,CCK8法检测细胞活力,筛选6-OHDA和ALA的最佳给药浓度,将细胞随机分为对照组、6-OHDA(模型组)、6-OHDA+ ALA组、ALA组,使用Annexin V-PE/7AAD试剂盒和流式细胞术检测各组细胞的凋亡率,提取药物干预后各组细胞总蛋白,Western blot法检测Bip/Grp78、CHOP、Active caspase3、HtrA2、α-syn、XIAP的蛋白表达. 结果 帕金森病细胞模型中6-OHDA的造模浓度为60 μmol/L,ALA的最佳给药浓度为1μmol/L.各组细胞的凋亡率:对照组(3.50±0.97)％,6-OHDA组(24.66±3.54)％,ALA+6-OHDA组(15.59 ±2.97)％,ALA组(4.77±1.03)％,与对照组比较模型组的凋亡率明显升高(P＜0.05),与模型组比较,ALA+6-OHDA组细胞凋亡率降低(P＜0.05).与对照组比较,6-OHDA组Bip/Grp78、CHOP、Active caspase3、HtrA2、α-syn的蛋白表达增高,XIAP的表达降低(P＜0.05);与6-OHDA组比较,ALA+6-OHDA组Bip/Grp78、CHOP、Active caspase3、HtrA2、α-syn蛋白表达降低,XIAP的表达增高(P＜0.05). 结论 ALA可提高PD细胞模型的细胞活力,减低细胞的凋亡率;ALA可能通过减少PD模型细胞α-syn集聚,抑制内质网应激启动的细胞凋亡途径,以及下调Omi/HtrA2抑制线粒体caspase凋亡途径,对多巴胺神经元起到一定的保护作用.

目的 探讨Omi/HTRA2基因4-6号外显子与华中地区汉族人群帕金森病(Parkinson disease,PD)发病的相关性.方法 采用病例对照研究方法,收集208例散发性PD患者及298名性别、年龄、民族等相匹配的正常健康体检者的血样.提取外周血基因组DNA,采用PCR直接测序方法检测全部样本Omi/HTRA2基因4-6号外显子序列.根据Genbank上Omi/HTRA2基因序列,测序结果用DNAMAN7进行比对,寻找突变并计算突变率.结果 病例组和对照组Omi/HTRA2基因4-6号外显子区均未发现突变.结论 Omi/HTRA2基因突变可能并不是华中地区汉族PD患者发病的主要致病因素,两组间的确切关系需要进一步研究.

目的 使用银杏内酯B (ginkgolide B,GB)治疗大鼠颅脑损伤,揭示其对Omi/HtrA2介导的神经细胞凋亡线粒体途径的影响.方法 分设假手术组、脑外伤组和治疗组,30只大鼠随机分配,每组10只.脑外伤组和治疗组大鼠接受外力打击,假手术组大鼠不做外力打击.治疗组大鼠外伤后连续3天按照20mg/(kg·d)剂量腹腔注射GB,脑外伤组和假手术组大鼠连续@@3天腹腔注射1 ml 0.9％氯化钠溶液.外伤后第3天,检测海马组织凋亡神经细胞及Omi/HtrA2、X染色体连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)、pro-caspase-3、pro-caspase-9和剪切聚腺苷二磷酸-核糖多聚酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)蛋白表达和caspase-3和caspase-9蛋白活性.结果 与假手术组比较,脑外伤组海马凋亡神经元比例、Omi/HtrA2、pro-caspase-3、pro-caspase-9和剪切PARP蛋白表达及caspase-3和caspase-9蛋白活性均显著升高(P＜0.01),XIAP蛋白表达显著下降(P＜0.01);与脑外伤组相比,治疗组海马凋亡神经元比例、Omi/HtrA2、pro-caspase-3、pro-caspase-9和剪切PARP蛋白表达及caspase-3和caspase-9蛋白活性均显著下降(P＜0.01),XIAP蛋白表达显著升高(P＜0.01).结论 GB可能通过抑制Omi/HtrA2介导的线粒体途径从而降低颅脑损伤大鼠神经细胞凋亡.

目的 探讨载脂蛋白(ApoJ)修饰的骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对脑出血(ICH)大鼠凋亡可能的作用及其机制.方法 体外分离及培养大鼠BMSCs,通过脂质体介导重组绿色荧光蛋白质粒pEGFP-N1-ApoJ转染BMSCs.将108只雄性SD大鼠随机分为ApoJ/BMSCs组、BMSCs组和生理盐水(NS)组,通过“二次注血法”制备ICH模型,造模成功后分别移植等体积的转染细胞悬液、BMSCs悬液和生理盐水至出血部位.通过干湿重法测量脑组织含水量,利用改良神经功能评分(mNss)评估大鼠神经功能情况.并采用RT-PCR、Western blot检测血肿周围线粒体促凋亡因子(Omi/HtrA2)的表达情况.结果 3组大鼠移植后,ApoJ/BMSCs组在第1、3、5、7天脑组织含水量明显低于同时间点的BMSCs组和NS组,其中BMSCs组低于NS组(P＜0.05).3组在移植后第1天时mNss评分差异无统计学意义(P＞0.05),ApoJ/BMSCs组在移植后第3、5、7天的mNss评分明显低于BMSCs组和NS组,其中BMSCs组低于NS组(P＜0.05).RT-PCR结果显示,ApoJ/BMSCs组在第1、3、5、7天Omi mRNA的表达较BMSCs组和NS组显著下调,其中BM-SCs组低于NS组(P＜0.05).Western blot结果显示,ApoJ/BMSCs组在第1、3、5、7天Omi/HtrA2蛋白的表达较BMSCs组和NS组显著下调,其中BMSCs组又低于NS组(P＜0.05).结论 外源性ApoJ可能通过抑制Omi/HtrA2介导的细胞凋亡途径,减轻脑水肿,促进神经功能恢复,减轻ICH后继发性神经损伤.

目的 探讨HtrA2/Omi与Livin在乳腺浸润性导管癌(IDC)中的表达及临床意义.方法 选取北部战区总医院和平分院普外科乳腺病区自2016年2月至2017年7月收治的63例行根治性手术治疗的IDC患者的病理组织与癌旁正常乳腺组织为研究对象.采用免疫组化法检测HtrA2/Omi与Livin在63例IDC组织及癌旁正常乳腺组织中的表达情况,分析二者的表达情况与临床病理特征间的关系.结果 HtrA2/Omi与Livin在IDC组织中的阳性表达率均明显高于癌旁正常乳腺组织,差异均有统计学意义(P<0.05).HtrA2/Omi的表达与肿瘤脉管侵犯有相关性(P<0.05),与患者年龄、是否绝经、肿瘤大小、淋巴结转移、原发肿瘤淋巴结转移分期(TNM)、组织学分级、神经侵犯、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、人表皮生长因子受体2(C-erbB-2)、细胞核增殖抗原(Ki-67)、分子分型均无相关性(P>0.05).Livin蛋白的表达与肿瘤大小、TNM分期具有相关性(P<0.05),与患者年龄、是否绝经、淋巴结转移、组织学分级、神经侵犯、脉管侵犯、ER、PR、C-erbB-2、Ki-67、分子分型均无相关性(P>0.05).Spearman等级相关分析显示,IDC组织中HtrA2/Omi与Livin表达水平无明显相关性(P>0.05).结论 在IDC患者中,HtrA2/Omi及Livin的高表达与肿瘤的发生、发展相关,Livin可能与IDC细胞增殖相关,高表达提示预后不良.

目的 探讨XIAP与Omi/HtrA2在弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)组织中的表达及与其预后的相关性.方法 收集59例DLBCL患者和30例淋巴结反应增生(RHL)患者的石蜡病理切片,应用免疫组化法对XIAP和Omi/HtrA2进行染色,分析两种蛋白的表达与DLBCL的临床参数和预后的关系.结果 XIAP与Omi/HtrA2在DLBCL中均呈高表达,在RHL中呈低表达甚至未见表达.XIAP在DLBCL的平均阳性率为61.02％,在RHL平均阳性率为36.67％(P<0.05).Omi/HtrA2在DLBCL中平均阳性率为52.54％,RHL平均阳性率为30.00％(P<0.05).二者的阳性表达与DLBCL的临床分期、病理类型、乳酸脱氢酶(LDH)水平、淋巴瘤国际预后指数(IPI)评分相关(P<0.05),与性别、年龄、症状分组、结外受累无关(P>0.05).XIAP和Omi/HtrA2表达呈负相关(P<0.05).Kaplan-meier生存分析显示,XIAP的表达与DLBCL患者的预后相关(P<0.05).Omi/HtrA2与DLBCL预后不相关(P>0.05).结论 XIAP与Omi/HtrA2在DLBCL组织中均呈高表达,二者呈负相关,上调Omi/HtrA2抑制XIAP表达可为DLBCL靶向治疗提供依据,XIAP是DLBCL预后相关性因素,有望成为判断DLBCL预后的指标.

目的 探讨HtrA2/Omi对年轻细胞和衰老细胞应激下凋亡发生的作用.方法 建立氧化应激诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)衰老模型;构建可诱导过表达野生型(WT)和酶活性失活突变型HtrA2(S306A)/Omi的慢病毒Tet-On系统,用HUVECs建立稳转株;利用不同浓度的H2 O2处理上述细胞株;衰老相关β半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色检测细胞衰老,TUNEL检测细胞凋亡,蛋白免疫印迹及qRT-PCR检测HtrA2蛋白及mRNA水平.结果 利用100μmol/L H2O2处理细胞1 h成功建立氧化应激诱导的衰老模型;衰老细胞中HtrA2/Omi的蛋白及mRNA水平相对于年轻细胞升高;年轻细胞受氧化应激后,过表达野生型HtrA2/Omi的细胞凋亡数量少于对照组和过表达突变型HtrA2/Omi组;而衰老细胞受氧化应激后,过表达野生型HtrA2/Omi的细胞发生凋亡的数量多于对照组和过表达突变型HtrA2/Omi组.结论 年轻细胞中过表达HtrA2/Omi能够抑制凋亡,而在衰老细胞中过表达HtrA2/Omi则会诱导凋亡,因此HtrA2/Omi能够增强年轻细胞对氧化应激的抗性,在衰老细胞中则发挥相反的作用.

目的:观察线粒体蛋白酶Omi/HtrA2抑制剂UCF-101对阿霉素致小鼠心肌酶学、氧化应激水平变化和细胞凋亡的影响.方法:60只SPF级雄性C57BL/6小鼠,按照随机数字表法分成4组:空白对照组、UCF对照组、阿霉素模型组、阿霉素+UCF组,每组各15只.阿霉素组和阿霉素+UCF组均一次性腹腔注射15mg/kg阿霉素建立阿霉素致小鼠心脏毒性模型,余两组分别注射等量生理盐水.之后UCF对照组和阿霉素+UCF组小鼠分别腹腔注射1.5μmol/kg UCF-101,另两组注射等量生理盐水,1次/天,连续5天.实验第6天称取各组小鼠体重,检测心功能指标左室射血分数(EF)及左室短轴缩短率(FS);尾静脉采血后处死各组小鼠,摘取心脏称重,一部分进行组织匀浆,检测血清和心肌酶学指标乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)和心肌氧化应激指标丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)水平;其余心脏组织制成石蜡切片后,采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡率.结果:两对照组各项检查指标差异均无统计学意义(P>0.05).与两对照组相比,阿霉素模型组小鼠血清LDH和CK-MB水平以及心肌组织LDH、CK-MB、MDA、ROS水平和心肌细胞凋亡率均明显升高(P<0.01),体重、心重、EF、FS和心肌SOD水平明显降低(P<0.01);而阿霉素+UCF组较阿霉素模型组LDH、CK-MB、MDA、ROS水平和心肌细胞凋亡率显著降低(P<0.05),体重、心重、EF、FS和SOD水平显著升高(P<0.01).结论:U C F-101能有效缓解阿霉素毒性小鼠心肌病变和氧化应激,减少心肌细胞凋亡,发挥心脏保护作用.