目的:探讨16p12.2拷贝数变异的产前超声和遗传学诊断。方法:回顾性分析2017年1月至2021年12月在福建医科大学附属福州市第一医院行产前诊断的7例16p12.2微缺失/重复胎儿的产前诊断指征、产前超声表现、染色体核型、遗传学分析、变异溯源、妊娠结局及出生后随访情况等。对数据进行描述性统计分析。结果:3例为产前超声结构异常，包括多发畸形、室间隔缺损及唇腭裂各1例；其余4例为涉及心脏和肾脏的软指标异常。7例胎儿染色体核型分析均未见异常。单核苷酸多态性微阵列（single nucleotide polymorphism array，SNP array）检测结果显示，4例16p12.2（远端）微缺失病例缺失的片段大小为381.7～542.4 kb，均包含 OTOA、 METTL9和 IGSF6等3个在线人类孟德尔遗传数据库（Online Mendelian Inheritance in Man，OMIM）基因；另3例16p12.2（近端）微缺失/重复的片段大小为484.0～701.7 kb，均包含 UQCRC2、 CDR2、 EEF2K和 POLR3E等4个OMIM基因。7例16p12.2微缺失/重复病例中，5例（例1、2、4、5、6）变异遗传自表型正常的母亲/父亲，其中3例（例2、4、5）足月分娩，出生情况正常；2例（例3、7）拒绝行家系验证。例3足月分娩，3个月行室间隔缺损修补术，随访至18个月未见明显异常。 结论:16p12.2区域微缺失/重复胎儿产前缺乏特异性表型。 OTOA基因是16p12.2远端区域异常关键基因。家系比对有助于减少不必要的主动终止妊娠。

患儿,男,7月龄,表现为重度全面发育落后、难治性癫痫、肌张力降低、眼球震颤、眼距宽、鼻梁塌陷、上唇外翻、高腭弓和隐睾,基因检测发现EEF1A2基因存在c.364G>A(p.E122K)新生杂合错义变异,最终该患儿确诊为EEF1A2基因变异致常染色体显性遗传发育性癫痫性脑病33型.该病例报道提示,对不明原因婴儿期起病的重度-极重度全面发育落后/智力障碍、难治性癫痫患儿,尤其是存在肌张力低下、语言缺失、颅面部畸形者,应考虑EEF1A2基因变异可能,应尽早完善遗传学检测协助诊断.

真核延伸因子 2 激酶(eEF2K)是一种Ca2+/CaM依赖性蛋白激酶,通过磷酸化底物eEF2,从而抑制eEF2 的活性阻止蛋白质的合成,促进肿瘤细胞增殖、侵袭、转移并调节肿瘤微环境.该eEF2K属于非典型蛋白激酶家族的"α-激酶"成员,与典型的蛋白激酶在序列上同源性小,靶向eEF2K可以避免因对大多数激酶影响而产生的毒副作用,因此被认为是肿瘤靶向治疗的潜在分子靶标.

目的 研究胰淀素(islet amyloid polypeptide,IAPP)腹腔注射对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)小鼠和野生型(wild-type,WT)小鼠脑组织中环状 RNA(circular RNA,circRNA)和信使RNA(messenger RNA,mRNA)表达谱的影响.方法 选取10月龄20-30 g雄性APP/PS1转基因AD模型小鼠和C57 WT小鼠各6只,把6只AD小鼠和WT小鼠使用随机数字表法分成2组,每组3只.腹腔注射IAPP的AD小鼠(AD+IAPP)作为实验组,腹腔注射IAPP的WT小鼠(WT+IAPP)作为对照组,腹腔注射相同剂量的磷酸盐缓冲液(PBS)的AD小鼠(AD+pBS)和WT小鼠(WT+PBS)作为空白对照组.干预结束后,提取4组小鼠脑组织总RNA,进行基因芯片测序,筛选出AD+IAPP与WT+IApP相比差异表达的circRNA和mRNA,以及AD+PBS与WT+PBs相比差异表达的circRNA和mRNA.在AD+IAPP与WT+1APP相比筛选出来的差异circRNA中,选取6个差异表达的circRNA,进行实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)验证基因芯片结果的可靠性.对差异表达的mRNA进行基因本体论(gene ontology,GO)富集分析与京都基因和基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析.随后构建显著差异表达的circRNA_45921的ceRNA(competitive endogenous RNA)网络.结果 AD+IAPP与WT+IAPP比较,显著差异表达的circRNA共有237个,其中157个上调,80个下调;显著差异表达mRNA共有663个,其中348个上调,315个下调.qRT-PCR结果显示6个差异表达的circRNA与基因芯片结果一致,基因芯片测序结果可靠.GO富集分析显示差异表达上调的mRNA在核苷磷酸结合、细胞器、含磷酸盐化合物代谢过程等GO条目显著富集;差异表达下调的mRNA在跨膜信号受体活性、超分子纤维、组织发育等GO条目显著富集.KEGG富集分析显示差异表达上调的mRNA主要富集于胰岛素分泌、氧化磷酸化、帕金森病等信号通路;差异表达下调的mRNA主要富集于神经活性配体-受体相互作用、钙信号通路、酪氨酸代谢、苯丙氨酸代谢等信号通路.CeRNA网络显示circRNA_45921/miR-34e-5p/Eef2k调控网络可能在IAPP功能发挥中具有作用.结论 腹腔注射IAPP改变AD小鼠和WT小鼠脑组织中circRNA和mRNA的表达谱.差异表达的Paip2、Cdon、Ttr和circRNA 45921/miR-34c-5p/Eef2k调控网络可能在IAPP调节AD的发生发展中起作用.

目的 检测eEF-2K基因在肝细胞癌(HCC)组织内的表达并分析其表达水平对HCC细胞增殖、侵袭和凋亡的影响.方法 用RT-qPCR和Western Blot检测了64例肝癌组织及癌旁肝组织,5种HCC细胞系LM3、Hep3B、Huh7、97H、HepG2及人正常肝细胞系LO2中eEF-2K基因在mRNA及蛋白水平的表达.用eEF-2K特异性siRNA沉默LM3及Hep3B细胞性中eEF-2K基因后,经qPCR检测确认.随后用CCK-8、Transwell方法及流式细胞技术检测eEF-2K基因沉默对增殖、侵袭与凋亡的影响.结果 相较癌旁组织,HCC组织内eEF-2K mRNA与蛋白表达显著上调,差异有统计学意义(P＜0.05);与正常人肝细胞系LO2相比,肝癌细胞系LM3、Hep3B、97H、HepG2、Huh7中的eEF-2K mRNA和蛋白表达分别升高,差异有统计学意义(P＜0.05).在LM3及Hep3B细胞系中用特异性siRNA沉默eEF-2K后,与非特异性siRNA对照组相比,细胞增殖活性和侵袭能力显著降低(P＜0.05),凋亡率显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05).TCGA数据库分析结果表明eEF-2K高表达与肝癌预后不良相关,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 eEF-2K蛋白在肝癌组织和细胞中高表达且与预后不良相关;沉默eEF-2K后肝癌细胞增殖和侵袭能力降低并诱发凋亡,提示eEF-2K可用作HCC潜在的预后标志物和治疗靶点.

Recent evidence shows that raddeanin A (RA),an oleanane-type triterpenoid saponin extracted from Anemone raddeana Regel,exerts remarkable cytotoxicity against cancer cells in vitro and in vivo.In addition,RA has also been found to activate autophagy in human gastric cancer cells.In this study,we investigated the molecular mechanisms underlying RA-induced autophagy as well as the relationship between RA-induced autophagy and its cytotoxicity in human breast cancer cells in vitro.Treatment with RA (2-8μmol/L) dose-dependently enhanced autophagy,as evidenced by increased LC3 levels in breast cancer cell lines T47D,MCF-7 and MDA-MB-231.Furthermore,the Akt-mTOR-eEF-2K signaling pathway was demonstrated to be involved in RA-induced activation of autophagy in the 3 breast cancer cell lines.Treatment with RA (2-10 μmol/L) dose-dependently induced apoptosis in the 3 breast cancer cell lines.Pretreatment with the autophagy inhibitor chloroquine (CQ,20 μmol/L) significantly enhanced RA-caused cytotoxicity via promoting apoptosis.In conclusion,our results suggest that modulating autophagy can reinforce the cytotoxicity of RA against human breast cancer cells.

目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-22是否参与调控人动脉平滑肌细胞(ASMCs)功能及其机制.方法 实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和荧光原位杂交观察miR-22在动脉壁中的表达特点;细胞计数试剂盒(CCK-8)法、迁移小室(Transwell)及流式细胞实验分别检测miR-22对ASMCs增殖、迁移及凋亡的影响;双荧光素酶基因报告实验确定miR-22的靶基因;通过慢病毒过表达miR-22后,观察其对大鼠颈动脉球囊损伤后新生内膜的影响.结果 (1)miR-22在动脉硬化闭塞症(ASO)血管壁中表达(0.256±0.046)明显低于正常血管壁(0.946±0.081,P=0.000),且其主要定位于动脉中层;(2)与对照组比较,miR-22具有抑制ASMCs增殖(1.146±0.050比1.677±0.082,P=0.000)和迁移(16.50±1.38比37.83±2.54,P=0.000),促进凋亡的功能[(7.33±0.98)％比(3.95±0.89)％,P =0.000].(3)双荧光素酶基因报告实验证实真核生物延伸因子2激酶(eEF2K)是miR-22的靶基因,miR-22可在转录后水平负性调控eEF2K表达;(4)慢病毒(LV)-miR-22组(0.832±0.126)与对照组(1.579±0.215,P=0.000)比较,明显减少大鼠颈动脉新生内膜面积.结论 miR-22通过靶向结合eEF2K,抑制ASMCs增殖及迁移、促进凋亡,减少新生内膜增生.

目的 研究在不同培养条件下,真核延伸因子2激酶(eEF2K)对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的影响,并初步探讨其机制.方法 慢病毒感染构建eEF2K表达抑制的MDA-MB-231稳定细胞株以及对应的空载体对照细胞株.在完全、无糖和无血清的培养条件下,SRB法测定细胞增殖曲线,平板克隆实验评价细胞的克隆形成能力,Western blot检测增殖相关蛋白的表达和活性.结果 贫营养条件下,抑制MDA-MB-231细胞中eEF2K的表达能够促进细胞生长.而在完全培养条件下,抑制eEF2K表达则抑制细胞的增殖和克隆形成,并降低Akt和mTOR蛋白的活性,对其它增殖相关分子如PI3K、Src、ERK、JAK无明显影响.结论 不同培养条件下,eEF2K对MDA-MB-231细胞生长影响不同,其功能值得进一步研究.

真核延伸因子2 (eEF2)是一种GTP依赖的转位酶,可介导核糖体的移位,因此与蛋白质的延伸和翻译密切相关[1].eEF2主要受eEF2K(真核延伸因子2激酶)的调控,是蛋白质合成过程中的关键调控因子,在肿瘤的发生、发展中起到重要的作用[2-5].本研究以纯化的eEF2融合蛋白为抗原免疫Bal b/c小鼠,制备eEF2单克隆抗体,探究大肠癌组织中eEF2的表达情况,为进一步研究其对大肠癌生物学行为的影响奠定基础.

目的:探讨模拟高原训练和高住低练对大鼠骨骼肌蛋白质合成的影响和机制.方法:50只SD大鼠随机分成常氧对照组(NC,n=10)、低氧暴露组(HC,n=10)、常氧训练组(NE,n=10)、模拟高原训练组(HE,n=10)、高住低练组(HiLo,n=10).通过人工低氧和游泳训练模拟高原训练和高住低练,6周后测定大鼠腓肠肌中总蛋白(Pro)和肌球蛋白(Myo)含量,同时测定腓肠肌中PI3K、Akt蛋白含量以及mTOR、真核细胞延伸因子2(eEF2)和真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白1(4EBP-1)的mRNA表达.结果:(1)低氧暴露和大强度的运动训练均使Pro和Myo含量显著下降(P<0.05),低氧暴露与运动训练虽然对降低Pro含量无显著性交互作用,但对降低Myo含量有显著性的交互作用(P<0.05);HiLo组Pro和Myo含量显著低于NC组,而显著高于HE组(P<0.05).(2)低氧暴露显著降低PI3K(P<0.05)、Akt含量和mTOR mRNA表达(P<0.01)的同时,显著升高4E-BP1 mRNA表达量(P<0.05);运动训练能显著降低PI3K含量(P<0.05)、mTOR mRNA(P<0.01)和eEF2 mRNA表达(P<0.05),显著升高4E-BP1 mRNA表达(P<0.05);低氧暴露与运动训练对进一步降低mTOR和eEF2 mRNA表达具有显著性的交互作用(P<0.01,P<0.05);与NC组相比,HiLo组PI3K、Akt含量和mTOR mRNA表达无显著性变化,而4E-BP1mRNA的表达显著升高;与HE组相比,HiLo组PI3K含量、mTOR和eEF2的mRNA表达显著升高(P<0.01).结论:(1)低氧和大强度的运动训练能抑制骨骼肌PI3K/Akt/mTOR及其下游信号通路,导致骨骼肌蛋白质含量的降低.低氧联合大强度运动训练在一定程度上对骨骼肌PI3K/Akt/mTOR及其下游信号通路的抑制作用比单纯的低氧暴露或大强度运动训练更大.(2)高住低练能减轻骨骼肌中PI3K/Akt/mTOR及其下游信号通路的抑制程度,减轻抑制骨骼肌蛋白质合成的程度,对防止低氧引起的骨骼肌蛋白质的丢失具有重要作用.