目的:探究脑卒中后失语症(PSA)患者外周血单核细胞(PBMC)中失语相关基因前颗粒蛋白(GRN)的表达情况。方法:将对数生长期PC12细胞进行培养，细胞密度达到30%~50%时将其分为非特异性干扰组(基因对照组)和特异性干扰组(基因沉默组)。在PC12细胞中沉默GRN的表达后采用高通量转录组测序(RNA-seq)技术分析2组基因可变剪接事件发生情况。选取PSA患者10例(患者组)和健康受试者10例(对照组)，2组受试者均于入组当天进行首次采血，并于入组12 d经皮(患者组出院当天)进行第二次采血。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)测定2组受试者外周血单核细胞(PBMC)中GRN的mRNA表达量的变化和kappaB结合蛋白相关核因子(NFRKB)的可变剪接事件发生情况。患者组接受常规言语治疗，于首次采血和第二次采血后即刻采用汉语失语成套测试(ABC)对其言语功能进行评估，并采用Pearson法分析GRN表达量的变化与ABC各项评分变化的相关性。结果:PC12细胞沉默GRN后，基因沉默组GRN的表达量与基因对照组GRN的表达量相比，差异有统计学意义( P<0.01)。两个样本间，发生显著差异可变剪接的基因共有237个，其中5′端发生可变剪接事件的基因数量最多。基因沉默组NFRKB可变剪接事件的发生概率与基因对照组比较，差异有统计学意义( P<0.05)；基因沉默组NFRKB可变剪接事件的发生概率与基因对照组比较，差异有统计学意义( P<0.05)。PSA患者组首次采血血样PBMC中GRN的mRNA表达水平和健康组血样比较，差异有统计学意义( P<0.001)；患者组第二次采血血样PBMC中GRN的mRNA表达水平与其首次采血血样比较，差异有统计学意义( P<0.001)。患者组首次采血血样PBMC中NFRKB基因发生可变剪接事件的概率与健康组比较，差异有统计学意义( P<0.05)。患者组第二次采血血样PBMC中NFRKB基因发生可变剪接事件的概率与首次采血比较，差异有统计学意义( P<0.01)。PSA患者第二次评估时的ABC量表口语表达得分显著优于其首次评估，差异有统计学意义( P<0.05)，且在ABC量表的口语表达部分中，PSA患者第二次评估时复述评分，显著高于其首次评估，差异有统计学意义( P<0.05)。对患者组首次血样和第二次血样PBMC中GRN表达量的差异与PSA患者ABC量表口语表达评分的差异进行相关性分析，结果发现，GRN表达量的变化与口语表达能力的恢复呈正相关。 结论:GRN可通过调控NFRKB的可变剪接来促进PSA患者言语功能的恢复。

目的 探究苦豆碱(Alo)对香烟烟雾诱导的人支气管上皮细胞损伤的作用及其可能的作用机制.方法 16HBE人支气管上皮细胞经100mL/L香烟烟雾提取物(CSE)和(50、100、200)μmol/L Alo共处理后,CCK-8法检测细胞活力,试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)活性;原位末端转移酶标记技术(TUNEL)、Western blot法检测细胞凋亡,ELISA检测炎性因子水平;2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针和相关试剂盒检测氧化应激水平;Western blot法检测Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)/含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3)通路相关蛋白表达水平.16HBE细胞经100 mL/L CSE和200 μmol/L Alo共处理后,采用上述方法检测过表达TLR4对TLR4/NF-κB/NLRP3通路、细胞LDH活性、凋亡、炎症反应及氧化应激的影响.结果 CSE暴露可降低16HBE细胞活力,增加LDH释放和细胞凋亡,增强炎症反应和氧化应激水平,且激活TLR4/NF-κB/NLRP3通路;经Alo处理后,细胞活性升高,LDH释放减少、凋亡降低、炎症减轻、氧化应激水平下降,且TLR4/NF-κB/NLRP3通路失活;TLR4过表达可逆转Alo处理对CSE诱导的16HBE细胞损伤的保护作用.结论 Alo可通过抑制TLR4/NF-κB/NLRP3通路减轻CSE诱导的人支气管上皮细胞损伤.

目的 基于分子对接技术及网络药理学来分析益气疏风降肺方治疗咳嗽变异性哮喘(cough variant asthma,CVA)的主要成分、潜在靶点及作用通路.方法 通过中药系统药理学数据和分析平台(TCMSP)、HERB数据库(http://herb.ac.cn/Search/)筛选益气疏风降胃方的活性成分及潜在靶点,利用Genecards、Drugbank、MOIM、Disgenet数据库检索CVA的相关靶点,将二者的靶点取交集,运用Cytoscape 3.7.1及STRING平台构建活性成分-靶点、蛋白质互作(protein-protein interaction,PPI)网络.借助Metascape对共同靶点进行基因本体(gene ontology,GO)及京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)富集分析,最后由Autodeck Vina 1.1.2实现主要活性成分及核心靶点的分子对接.结果 发现益气疏风降肺方活性成分200个、潜在作用靶点619个,CVA相关靶点2236个,筛选两者共同靶点331个.331个候选治疗靶点共富集到182条KEGG通路(P<0.01)和3316个GO细胞生物学过程,涉及磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(phosphatidylinositol 3 kinase/protein kinase B,PI3K/AKT)信号通路、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)信号通路、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protien kinase,MAPK)信号通路等,与细胞的缺氧反应、炎症反应及凋亡等生物学过程有关.益气疏风降肺方中活性较强、利用度较高的关键分子包括槲皮素、鞣花酸等,分子对接显示主要活性成分与CVA潜在靶点具有较好的结合活性,表明本方可能通过作用于核转录因子κB(nuclear factor-kappaB,NF-κB)、信号转导和转录激活因子(signal transducer and activator of transcription,STAT)3等关键蛋白分子,影响PI3K-AKT、TNF、MAPK等信号通路,从而减少炎症因子的释放、减轻气道炎性渗出、阻止气道重塑,对CVA起到治疗作用.结论 本研究初步揭示了益气疏风降肺方的活性成分与CVA发病的关键蛋白之间存在一定关系,通过多成分-多靶点-多通路的综合调控网络发挥治疗CVA的作用.

目的 研究特异性核基质结合区结合蛋白1(SATB1)和核转录因子kappaB p65(NF-κB p65)蛋白的表达,探讨其表达与乳腺癌发生、发展的相关性.方法 应用免疫组织化学染色法检测80例乳腺癌组织样本中的蛋白SATB1和NF-κB p65的表达,分析其相互关系,并探讨其与乳腺癌临床特征之间的关系.结果 80例乳腺癌组织样本中SATB1和NF-κB p65的阳性表达率分别为70.00%和56.25%.SATB1和NF-κB p65的表达与肿瘤大小、组织学分级、ER受体状态和淋巴结转移有关,与年龄和TNM分期无关.SATB1和NF-κB p65在乳腺组织中的表达呈明显正相关.结论 SATB1和NF-κB p65在乳腺癌组织中协同高表达,与乳腺癌患者的临床特征存在密切联系.

应用生物信息学方法初步筛选缺血性脑卒中(ischemic stroke,IS)的关键基因并探索发病机制,进而预测治疗IS的潜在中药.基于美国国家生物技术信息中心(National Center of Biotechnology Information,NCBI)下的基因芯片原始数据集GSE22255,纳入对象为20例缺血性脑卒中患者及20例性别和年龄匹配的对照者.基于R语言软件筛选差异表达基因(dif-ferentially expressed genes,DEGs),应用DAVID工具和R语言软件进行基因本体论(gene ontology,GO)功能分析和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and gnomes,KEGG)通路分析,将DEGs导入STRING软件构建蛋白-蛋白互作网络,利用Cytoscape软件MCODE插件对关键功能模块进行可视化.通过将关键基因与医学本体信息检索平台(Coremine Medi-cal)相互映射,筛选治疗IS的中药,并构建药物-活性成分-作用靶点网络.与对照组相比,IS患者中筛选出14个DEGs,其中12个基因上调,2个基因下调.DEGs主要参与免疫反应、炎症过程、信号转导、细胞增殖调控等生物过程.KEGG通路分析显示 DEGs 主要富集于白细胞介素 17(interleukin-17,IL-17)、核因子 κB(nuclear factor kappaB,NF-κB)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)、核苷酸结合寡聚化结构域(nucleotide binding oligomerization domain,NOD)样受体等信号通路.DEGs 编码蛋白互作网络的关键模块主要集中于TNF、JUN、早期应答基因3(recombinant immediate early response 3,IER3)、早期生长应答因子 1(recombinant early growth response protein 1,EGR1)、前列腺素内过氧化物合酶2(prostaglandin-endoperoxide synthase 2,PTGS2)、趋化因子配体 8(C-X-C motif chemokine ligand 8,CXCL8)、趋化因子配体2(C-X-C motif chemokine ligand 2,CXCL2)7个基因,参与神经炎症、免疫反应等生物过程.其中TNF和JUN作为该模块下的关键节点,可能成为IS诊断和预后评估的潜在生物学标志物.筛选得到治疗IS的潜在中药为丹参、西红花、黄芩、火麻仁.IS的发生是多因素共同作用的结果,免疫和炎症相关基因和通路调控网络失衡可能是IS发生发展中的关键环节,该研究为进一步探索中药治疗IS的作用机制,寻找潜在药物靶标提供了研发方向和理论依据.

研究二精丸对D-半乳糖联合β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)致阿尔茨海默病(AD)大鼠神经炎症的改善作用及可能机制.SD大鼠随机分为假手术组、模型对照组、阳性药物组(多奈哌齐,1 mg·kg-1)、二精丸高剂量组(9 g·kg-1)、二精丸低剂量组(4.5 g·kg-1),每组14只.D-半乳糖腹腔注射2周后,连续灌胃给药5周;D-半乳糖腹腔注射3周后,大鼠双侧海马注射Aβ25-35.灌胃给药4周后,新物体识别实验检测大鼠学习记忆能力.末次给药24 h后,取组织,免疫荧光法检测大鼠脑组织小胶质细胞活化情况;免疫组化检测大鼠海马CA1区Aβ1-42和磷酸化Tau404蛋白(phosphory protein Tau404,p-Tau404)阳性表达;酶联免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测大鼠脑组织炎症因子白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor,TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平;Western blot法检测大鼠脑组织Toll样受体4(Toll-like receptor,TLR4)/核因子κB(nuclear factor kappaB,NF-κB)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(nucleotide-binding oligome-rization domain-like receptors 3,NLRP3)通路相关蛋白表达.结果显示,与假手术组比较,模型对照组大鼠新物体识别指数明显下降,海马区Aβ1-42沉积和p-Tau404阳性蛋白显著增多,脑组织齿状回处小胶质细胞活化水平显著增高,海马组织IL-1β、TNF-α、IL-6水平明显升高;海马TLR4、p-NF-κB P65/NF-κB P65、p-IκBα/IκBα、NLRP3蛋白表达水平显著升高.与模型对照组比较,二精丸可提高大鼠新物体识别指数,减少海马区Aβ1-42沉积和p-Tau404阳性蛋白表达,抑制脑组织齿状回小胶质细胞活化;降低海马组织IL-1β、TNF-α、IL-6炎症因子水平;下调TLR4、p-NF-κB P65/NF-κB P65、p-IκBα/IκBα、NLRP3蛋白的表达.综上所述,二精丸可能通过改善小胶质细胞活化,降低神经炎症因子IL-1β、TNF-α、IL-6表达水平,抑制TLR4/NF-κB/NLRP3神经炎症通路,减少海马Aβ沉积和p-Tau表达,恢复海马形态结构,改善AD模型大鼠的学习记忆能力.