IgA肾病是常见原发性肾小球疾病,自噬对维持内环境稳态起重要作用,细胞自噬功能障碍可影响IgA肾病发生发展.本文围绕自噬梳理中药调控肾脏固有细胞自噬的分子机制,发现中药提取物及中药复方主要通过PI3K/Akt/mTOR、TLR4/NF-κB、MAPK、Nrf2/HO-1、NLRP3等信号通路调节细胞自噬活性,进而干预肾纤维化、炎症、氧化应激等病理损害,延缓IgA肾病进展,为IgA肾病临床治疗及新药研发提供参考.

目的:探讨红景天苷(salidroside，SAL)是否通过介导Toll样受体4/核转录因子-κB/NOD样受体蛋白3(TLR4/NF-κB/NLRP3)信号通路改善重症肺炎(severe pneumonia，SP)大鼠肺组织损伤。方法:Wistar大鼠75只，随机选择15只作为假手术组，其余60只通过气管内滴注肺炎克雷伯菌( Klebsiella pneumoniae， Kp)悬液诱导构建SP大鼠模型。建模成功大鼠随机分为模型组、SAL低剂量组(30 mg/kg)、SAL高剂量组(60 mg/kg)和地塞米松(dexamethasone, DXMS)组(15 mg/kg)，每组15只，假手术组和模型组均灌服等量生理盐水，连续7 d。检测肺组织湿干重比(Wet/Dry，W/D)；HE和TUNEL染色观察各组大鼠肺脏组织形态及细胞凋亡情况；ELISA法检测支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid，BALF)中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18及IL-10水平；Western blot检测肺组织中TLR4、髓样分化因子(myeloid differentiation factor 88，MyD88)、NF-κBp65、磷酸化NF-κBp65(phosphorylated NF-κBp65，p-NF-κBp65)、NLRP3蛋白相对表达水平。 结果:经气管滴注 Kp悬液成功构建SP大鼠模型；与假手术组比较，模型组大鼠肺组织水肿严重，W/D值升高( P<0.05)，肺泡结构松散不完整，肺泡壁水肿增厚，大量炎性细胞浸润，细胞凋亡率升高，BALF中炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6及IL-18水平升高，IL-10水平降低，肺组织中TLR4、MyD88、NF-κBp65、p-NF-κBp65及NLRP3蛋白相对表达水平升高( P<0.05)；与模型组比较，SAL低、高剂量组及DXMS组大鼠肺组织病理损伤情况均逐渐改善，W/D值降低( P<0.05)，肺泡结构逐渐完整，肺泡壁水肿程度逐渐减轻，细胞凋亡率降低，BALF中炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6及IL-18水平降低，IL-10水平升高，肺组织中TLR4、MyD88、NF-κBp65、p-NF-κBp65及NLRP3蛋白相对表达水平降低( P<0.05)；低、高剂量SAL及DXMS改善SP大鼠肺组织损伤的作用效果表现为逐渐增强( P<0.05)。 结论:SAL可减少细胞凋亡，改善由 Kp诱导的大鼠肺组织病理损伤，其作用机制可能与阻断TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路激活，抑制炎性因子表达有关。

不同氧浓度条件下所致的氧化应激会对新生儿及早产儿的未成熟肠道造成损伤。新生儿尤其是早产儿肠道发育不全，免疫功能不成熟，对氧化应激的易感性增加，易发生肠道炎性疾病。缺氧或高氧均可能引发氧化应激，导致肠道损伤。组织学变化包括肠道屏障损伤、肠上皮细胞水样变性以及杯状细胞和绒毛减少，还会引起肠道菌群失调。缺氧诱导的肠道损伤受多种信号通路的影响，包括CRF-TLR4、Grx1-HIF-VEGF、NLRP3-Caspase-1信号通路、miRNA-SIRT轴。高氧引发的肠道损伤则与TLR4/NF-κB信号通路、Nrf2/IL-17D轴、ASK1-MAPK级联有很大关系。该文综述缺氧或高氧诱导肠道损伤的组织学变化和分子途径，以建立潜在干预的框架。

目的:评价冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)在心肌缺血再灌注小鼠急性肾损伤中的作用及其与NF-κB信号通路的关系。方法:SPF级健康雄性C57BL/6小鼠24只，6~8周龄，体质量24~28 g，采用随机数字表法分为3组( n＝8)：假手术组(Sham组)、心肌缺血再灌注组(I/R组)和心肌缺血再灌注+CIRP衍生肽C23组(I/R+C23组)。采用结扎左冠状动脉前降支30 min，再灌注120 min的方法制备心肌缺血再灌注小鼠急性肾损伤模型，I/R+C23组分别于心肌缺血前和再灌注前腹腔注射CIRP衍生肽C23 8 mg/kg，Sham组小鼠只穿线不结扎。于再灌注120 min时分离右侧颈内动脉取血样，采用ELISA法检测血清CK-MB、LDH、Cr和BUN水平；取部分肾组织，观察病理学结果，进行肾小管损伤评分；采用Western blot法检测NF-κB、p-NF-κB、NOD样受体蛋白3(NLRP3)、IL-1β和IL-18的表达；RT-PCR法检测Toll样受体4(TLR4)、NLRP3、IL-1β、TNF-α及IL-6的mRNA表达。 结果:与Sham组比较，I/R组血清CK-MB、LDH、Cr、BUN水平和肾小管损伤评分升高，p-NF-κB、NLRP3、IL-1β和IL-18表达上调，TLR4、NLRP3、IL-1β、TNF-α和IL-6的mRNA表达上调( P<0.05)，肾脏组织病理学损伤加重；与I/R组比较，I/R+C23组血清CK-MB、LDH、Cr、BUN水平和肾小管损伤评分降低，p-NF-κB、NLRP3、IL-1β和IL-18表达下调，TLR4、NLRP3、IL-1β、TNF-α和IL-6的mRNA表达下调( P<0.05)，肾脏组织病理学损伤减轻。 结论:CIRP参与了心肌缺血再灌注小鼠急性肾损伤的过程，与激活NF-κB信号通路，促进炎症反应有关。

目的:评价姜黄素对急性呼吸窘迫综合征（ARDS）大鼠肾组织线粒体氧化应激、核转录因子-κB/NOD样受体蛋白3（NF-κB/NLRP3）炎症小体信号通路及组织细胞损伤的影响。方法:将24只SPF级健康雄性SD大鼠按照随机数字表法分为对照组、ARDS模型组及姜黄素小剂量和大剂量组，每组6只。气管内给予脂多糖（LPS）4 mg/kg雾化吸入制备ARDS大鼠模型；对照组给予生理盐水2 mL/kg。姜黄素小剂量和大剂量组于制模后24 h分别灌胃姜黄素100 mg/kg或200 mg/kg，每日1次；对照组和ARDS模型组给予等量生理盐水。7 d后处死大鼠取下腔静脉血，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）水平。取肾组织，采用ELISA法检测活性氧（ROS）水平；采用黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶（SOD）活性；采用比色法检测丙二醛（MDA）水平；采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测低氧诱导因子-1α（HIF-1α）、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）、NF-κB p65、Toll样受体4（TLR4）的蛋白表达；采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测HIF-1α、NLRP3、白细胞介素-1β（IL-1β）的mRNA表达；采用原位末端缺刻标记法（TUNEL）检测肾组织细胞凋亡；透射电镜下观察肾小管上皮细胞及线粒体形态变化。结果:与对照组比较，ARDS模型组大鼠表现为肾脏氧化应激和炎症反应，肾损伤标志物NGAL血清含量明显升高，NF-κB/NLRP3炎症小体信号通路被激活，肾组织细胞凋亡率明显升高，且透射电镜下可见肾小管上皮细胞损伤，线粒体完整性破坏，提示模型成功诱发肾损伤。给予姜黄素干预后，大鼠肾小管上皮细胞及线粒体损伤均明显减轻，同时氧化应激明显减轻，NF-κB/NLRP3炎症小体信号通路被抑制，肾组织细胞凋亡率明显降低，并均呈一定剂量依赖性；与ARDS模型组比较，姜黄素大剂量组血清NGAL和肾组织MDA、ROS水平均明显降低〔NGAL（μg/L）：13.8±1.7比29.6±2.7，MDA（nmol/g）：115±18比300±47，ROS（kU/L）：75±19比260±15，均 P<0.05〕，肾组织HIF-1α、caspase-3、NF-κB p65、TLR4的蛋白表达明显下调〔HIF-1α蛋白（HIF-1α/β-actin）：0.515±0.064比0.888±0.055，caspase-3蛋白（caspase-3/β-actin）：0.549±0.105比0.958±0.054，NF-κB p65蛋白（NF-κB p65/β-actin）：0.428±0.166比0.900±0.059，TLR4蛋白（TLR4/β-actin）：0.683±0.048比1.093±0.097，均 P<0.05〕，HIF-1α、NLRP3、IL-1β的mRNA表达亦明显下调〔HIF-1α mRNA（2 -??Ct）：2.90±0.39比9.49±1.87，NLRP3 mRNA（2 -??Ct）：2.07±0.21比6.13±1.32，IL-1β mRNA（2 -??Ct）：1.43±0.24比3.95±0.51，均 P<0.05〕，肾组织细胞凋亡率明显下降〔（4.36±0.92）%比（27.75±8.31）%， P<0.05〕，SOD活性明显升高（kU/g：648±34比430±47， P<0.05）。 结论:姜黄素可缓解ARDS大鼠肾损伤，其机制可能与增加SOD活性，减轻氧化应激，抑制NF-κB/NLRP3炎症小体信号通路激活有关。

目的:探讨miRNA-20a在脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导的A549细胞焦亡与炎症反应中的作用与调控机制。方法:培养人肺泡上皮A549细胞，以LPS为刺激物建立细胞焦亡及炎症反应模型，给予LPS+三磷酸腺苷刺激为LPS组，未给予刺激为空白对照组，验证模型是否成功。将A549细胞根据转染物质分为miRNA-20a模拟物（mimics）组、mimics-阴性对照（negative control，NC）组、miRNA-20a抑制物（inhibitor）组和inhibitor-NC组，构建过表达及沉默miRNA-20a的A549细胞模型，各组细胞在转染24 h后给予LPS+三磷酸腺苷刺激。构建TLR4-3'UTR双荧光素酶报告基因载体质粒，包括野生型（WT）载体质粒TLR4-3'UTR-WT1、TLR4-3'UTR-WT2及相应的变异型（MUT）载体质粒TLR4-3'UTR-MUT1、TLR4-3'UTR-MUT2，用双荧光素酶报告基因实验验证miRNA-20a的靶基因。采用实时荧光定量聚合酶链反应、免疫印迹试验及酶联免疫吸附试验检测各组焦亡标志因子消皮素D（gsdermin D，GSDMD），炎症因子凋亡相关斑点样蛋白（apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD，ASC）、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3，NLRP3）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1（cysteinyl aspartate specific proteinase-1，Caspase-1）、白细胞介素1β（interleukin-1β，IL-1β），以及信号分子Toll样受体4（Toll-like receptor-4，TLR4）、核因子κB（nuclear factor-κB，NF-κB）mRNA及蛋白表达。免疫荧光检测各组细胞TLR4表达和NF-κB入核情况。结果:LPS组A549细胞GSDMD、ASC、NLRP3、Caspase-1、IL-1β mRNA和蛋白表达量均高于空白对照组（ P<0.05），模型建立成功。mimics组miRNA-20a表达量高于mimic-NC组（ P<0.05），inhibitor组miRNA-20a表达量低于inhibitor-NC组（ P<0.01）。双荧光素酶报告基因实验显示，TLR4-3'UTR-WT与miRNA-20a mimics共转染组的相对荧光值低于TLR4-3'UTR-WT与mimics-NC共转染组（ P<0.05）。mimics组LPS介导的A549细胞GSDMD、ASC、NLRP3、Caspase-1、IL-1β、TLR4、NF-κB mRNA和蛋白表达水平均低于mimics-NC 组（ P<0.05），inhibitor 组GSDMD、ASC、NLRP3、Caspase-1、IL-1β、TLR4、NF-κB mRNA和蛋白表达水平均高于inhibitor-NC 组（ P<0.05）。 结论:在LPS诱导的A549细胞焦亡及炎症反应中，miRNA-20a可能经TLR4/NF-κB 信号通路对细胞焦亡及炎症反应产生抑制作用。

目的 从肠道菌群探讨化痰活血通络方治疗动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的机制,为化痰活血通络方临床应用提供依据.方法 25只雄性ApoE-/-小鼠,高脂饲料喂养12周,制备AS模型;分为模型组、全方组、通络组、化痰组、他汀组各5只,另设C57BL/6J雄性小鼠5只作为正常组,各组相应药物灌胃治疗12周.采用16S rRNA扩增子测序检测肠道菌群;苏木素-伊红(HE)染色法观察小鼠主动脉及肠道的病理形态;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠血清中相关指标,Western blot法检测Toll样受体4(TLR4)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、核因子-κB(NF-κB)、白介素-6(IL-6)蛋白含量.结果 与正常组相比,模型组中物种丰富度及多样性下降明显,厚壁菌门(Fir-micutes)与拟杆菌门(Bacteroidetes)的比例(F/B)显著上升,血清中脂多糖(LPS)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),主动脉中TLR4、NLRP3、NF-κB、IL-6蛋白含量显著上升(P＜0.01),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量显著下降(P＜0.01),小鼠主动脉斑块面积显著增加(P＜0.01)并伴有大量泡沫细胞及炎性浸润,肠内有大片绒毛脱落与固有层裸露,与模型组相比全方组可显著增加物种丰富度及多样性,降低F/B的比例(P＜0.01),提高有益菌的相对丰度,降低有害菌的相对丰度,在全方组与阿托伐他汀组中LPS、TG、TC、LDL-C、TLR4、NLRP3、NF-κB、IL-6均显著下降(P＜0.01),HDL-C显著上升(P＜0.01),并且可明显缓解上述病理改变.结论 化痰活血通络方可改善肠道菌群的组成及脂代谢,减少LPS的产生,并通过TLR4/NF-KB/NLRP3信号通路下调主动脉中炎性因子的表达,减少脂质的积累来缓解ApoE-/-小鼠的动脉粥样硬化.

目的:观察达原饮对幽门螺杆菌(Hp)感染模型大鼠胃组织和口周皮肤Toll样受体4/核因子-κB/NOD样受体蛋白3(TLR4/NF-κB/NLRP3)信号通路,以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与白细胞介素-1β(IL-1β)等炎症因子的影响,探讨达原饮治疗Hp感染的机制.方法:选取44只雄性SD大鼠,随机分为空白组8只及造模组36只,造模组予以Hp菌液灌胃造模,造模成功后,将造模组随机分为模型组、达原饮高剂量组、达原饮低剂量组、西药组,每组各8只,分别予以相应药物灌胃,空白组、模型组予以等量生理盐水灌胃,灌胃2周.观察大鼠造模前后一般情况改变,苏木精-伊红(HE)染色观察口周皮肤和胃组织病理学变化,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠口周皮肤和胃组织TLR4、NF-κB、NLRP3表达以及血清中TNF-α、IL-1β表达水平.结果:给药干预后,与模型组相比,西药组、达原饮高剂量组、达原饮低剂量组大鼠皮毛柔顺光泽,饮食水量增加,大便逐渐成型,胃黏膜上皮细胞层次基本分明,排列较整齐,炎症细胞浸润减少,口周皮肤角化过度、棘层增厚、毛囊周围轻度炎症细胞浸润等情况均有不同程度改善.与模型组相比,西药组、达原饮高剂量组、达原饮低剂量组大鼠胃组织和口周皮肤TLR4、NF-κB、NLRP3蛋白表达水平均有不同程度的下调(P＜0.05或P＜0.01),血清炎症因子TNF-α、IL-1β表达明显下降(P＜0.01).结论:达原饮可能通过干预TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路,抑制TLR4、NF-κB、NLRP3及下游炎症因子的表达,减轻Hp感染模型大鼠胃组织和口周皮肤炎症损伤.

目的 探讨白芍总苷对自身免疫性甲状腺炎(AIT)大鼠炎症损伤及TLR4/NF-κB/NLRP3通路的影响.方法 实验分为对照组(Control)、模型组(Model)、白芍总苷组(TGP)、TLR4 抑制剂组(TLR4 inhibitor)和 TGP+TLR4 激动剂组(TGP+TLR4 agonist),每组各10只.除Control组外,其余各组大鼠采用皮下注射甲状腺球蛋白与弗氏佐剂诱导AIT大鼠模型.给药6周后,苏木精-伊红(HE)染色观察甲状腺组织病理学变化;酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清TPOAb、TgAb、TSH、T3、T4、TNF-α、INF-γ、IL-1 β、IL-18 水平;RT-qPCR 和 Western blot 检测甲状腺组织 TLR4/NF-KB/NL-RP3信号通路mRNA和蛋白表达.结果 与Control组相比,Model组大鼠甲状腺滤泡上皮明显受损,TPOAb、TgAb、TSH、T3、T4、TNF-α、INF-γ、IL-1 β、IL-18 水平升高(P＜0.01),TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路mRNA和蛋白表达升高(P＜0.01).与 Model 组相比,TGP 组、TLR4 inhibitor 组大鼠甲状腺滤泡上皮损伤减轻,TPOAb、TgAb、TSH、T3、T4、TNF-α、INF-γ、IL-1 β、IL-18 水平降低(P＜0.01),TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路mRNA和蛋白表达降低(P＜0.01).与TGP组相比,TGP+TLR4 agonist组大鼠甲状腺滤泡上皮损伤加重,TPOAb、TgAb、TSH、T3、T4、TNF-α、INF-γ、IL-1 β、IL-18 水平升高(P＜0.05 或 P＜0.01),TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路mRNA和蛋白表达增加(P＜0.05或P＜0.01).结论 TGP通过抑制TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路,改善甲状腺组织炎症损伤发挥甲状腺保护作用.

目的 探讨STING在肾缺血再灌注损伤(IRI)中的表达水平以及相关作用机制.方法 在体内水平,将24只C57BL/6小鼠分为假手术组(Sham)、IRI组、IRI+药物溶剂组(IRI+DMSO)、IRI+SN-011组,6只/组.通过肾动脉夹闭方法建立IRI模型,通过血清肌酐和尿素氮检测、PAS染色检测肾组织损伤变化,采用RT-qPCR、ELISA、Western blotting和IHC法检测肾组织中STING、KIM-1、Bcl-2、Bax、caspase-3、TLR4、P65、NLRP3、caspase-1、CD68、MPO、IL-1β、IL-6、TNF-α的水平.在体外水平,将HK-2细胞分为对照组、缺氧复氧(H/R)组、H/R+药物溶剂组(H/R+DMSO)、H/R+SN-011组,用厌氧包模拟缺氧环境,RT-qPCR和Western blotting法检测STING表达水平,流式细胞术检测各组细胞凋亡率.结果 在体内水平,与Sham组相比,IRI组的PAS染色显示组织损伤增加(P<0.05),小鼠血清肌酐、尿素氮含量以及组织KIM-1、STING、TLR4、P65、NLRP3、caspase-1、caspase-3、Bax、CD68、MPO、IL-1β、IL-6、TNF-α表达水平升高(P<0.05),Bcl-2水平降低(P<0.05),SN-011抑制STING表达后,逆转了上述结果(P<0.05).在体外水平,与对照组相比,H/R组STING的mRNA与蛋白水平升高(P<0.05),流式细胞仪检测显示细胞凋亡率上升(P<0.05),SN-011抑制STING表达,细胞凋亡率下降(P<0.05).结论 STING在肾脏IRI中表达水平上升,且可通过作用于TLR4/NF-κB/NLRP3通路以及影响炎症与凋亡水平促进肾损伤.