目的 探讨CD4+T淋巴细胞穿孔素基因启动子甲基化水平与戒烟后大鼠肺气肿持续进展的关系及S-腺苷甲硫氨酸(SAM)的干预效果.方法 将20只SD大鼠随机分为4组:正常对照组、模型组、戒烟4周组、戒烟后SAM干预4周组,各5只,后3组香烟烟雾暴露法建立大鼠肺气肿模型并采取相应措施.各组取右下肺组织行苏木精-伊红(HE)染色观察病理学改变,测量平均内衬间隔(MLI)和平均肺泡数(MAN).用免疫磁珠法从各组大鼠的脾脏中分选出CD4+T淋巴细胞,提取其DNA,检测CD4+T淋巴细胞穿孔素基因启动子区域的甲基化水平.结果 模型组、戒烟4周组、戒烟后SAM干预4周组MLI均较正常对照组增加(均P＜0.05),其中戒烟4周组较模型组、戒烟后SAM干预4周组增加(均P＜0.05).模型组、戒烟4周组、戒烟后SAM干预4周组MAN均较正常对照组减小(均P＜0.05),其中戒烟4周组较模型组减小(P＜0.05).模型组和戒烟4周组CD4+T淋巴细胞穿孔素基因启动子甲基化水平均低于正常对照组和戒烟后 SAM 干预4 周组[(93.9±3.1)％、(93.1±1.8)％比(97.1±1.1)％、(96.4±1.5)％](均P＜0.05).结论 CD4+T淋巴细胞穿孔素基因启动子低甲基化水平在大鼠戒烟后仍持续存在,可能是戒烟后大鼠肺气肿不断恶化的原因之一;而给予SAM干预后,戒烟大鼠的肺气肿恶化可好转.

目的:探讨电子烟IQOS气溶胶对小鼠肺功能的影响。方法:将24只C57BL/6 J雄性小鼠随机分为对照组、香烟组和IQOS组，每组8只。对照组小鼠给予呼吸新鲜空气，IQOS组及香烟组小鼠置于自制染毒箱中，IQOS气溶胶或烟雾暴露1 h/d，5 d/周，共处理24周。观察每组小鼠一般情况及体质量变化，测量其肺功能；取各组小鼠肺组织制备切片，HE染色观察病理形态变化及测量平均肺泡直径。结果:实验结束后对照组小鼠活动正常，精神好，食欲佳，体质量呈上升趋势；IQOS组及香烟组小鼠出现精神萎靡、食欲降低，体质量较同时间点正常组均降低( P值均<0.05)，IQOS组与香烟组小鼠体质量差异无统计学意义( t＝0.537， P>0.05)。IQOS组和香烟组小鼠第50毫秒用力呼吸容积(FEV0.05)/用力肺活量(FVC)、组织阻尼、组织弹性均低于对照组，差异均有统计学意义( P值均<0.05)；IQOS组及香烟组小鼠FVC和气道阻力均比对照组显著增加，差异均有统计学意义( P值均<0.05)。IQOS组小鼠的FEV0.05/FVC、组织阻尼、组织弹性、FVC及气道阻力与香烟组小鼠比较差异均无统计学意义( P值均>0.05)。肺组织病理形态学显示，对照组小鼠肺泡结构完整；IQOS组及香烟组小鼠肺泡腔扩大，部分肺泡间隔断裂，肺泡腔融合，肺气肿形成；IQOS组及香烟组肺泡平均线性截距均大于对照组，差异均有统计学意义( P值均<0.05)，IQOS组与香烟组肺泡平均线性截距差异无统计学意义( t＝1.217， P>0.05)。 结论:长期电子烟IQOS气溶胶暴露会影响小鼠肺功能，它可能不是传统香烟的很好替代品。

目的:观察烟雾暴露大鼠肺小动脉病理形态学变化、超微结构改变及右心室收缩压变化。方法:40只雄性SD大鼠随机分为4组：正常对照(C)组、烟雾暴露1个月(S1m)组、烟雾暴露2个月(S2m)组、烟雾暴露3个月(S3m)组，检测各组大鼠动脉血氧分压(PaO 2)、平均右心室收缩压(mRVSP)，透射电镜观察肺小动脉的超微结构，HE染色观察肺动脉组织学改变并测量肺小动脉管壁面积/管总面积(WA%)，免疫组织化学染色法观察肺动脉平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。 结果:(1)C组、S1m、S2m及S3m组PaO 2 值分别为(96.2±4.3) mmHg(1 mmHg＝0.133 kPa)、(92.1±5.2) mmHg、(90.5±4.1) mmHg及(89.6±4.8) mmHg，各组间比较，差异均无统计学意义 ( P值均>0.05)。(2)S3m组mRVSP值为(65.63±5.6) mmHg与C组[(14.07±4.18) mmHg]及S1m组[(16.85±1.26) mmHg]比较，差异均有统计学意义( P值均<0.01)。(3)肺小动脉超微结构观察：C组内皮细胞形态正常，胞外未见胶原纤维增生，平滑肌细胞未见增生。S1m组肺小动脉内皮细胞形状不规则，内膜增厚，细胞内可见线粒体肿胀，平滑肌细胞轻度增生。S2m组内弹力膜厚薄不均，平滑肌走向不规则，胶原纤维增生。S3m组肺小动脉结构层次紊乱，内皮细胞变形严重，胶原纤维大量增生。(4)C组、S1m、S2m及S3m组WA%分别为(31.29±1.95)%、(42.68±2.24)%、(51.84±2.38)%、(62.11±1.39)%，烟雾暴露各组与C组比较，差异均有统计学意义( P值均<0.01)。(5)C组、S1m、S2m及S3m组肺动脉α-SMA表达量分别为(37.5±7.5)、(52.6±14.3)、(72.2±13.6)、(98.1±15.6)，烟雾暴露各组与C组比较，差异均有统计学意义( P值均<0.01)。(6)WA%与α-SMA呈正相关( r＝0.703， P<0.05)。 结论:烟雾暴露可使肺血管形态发生明显改变，肺小动脉超微结构异常，导致肺血管重塑，肺血流阻力增加，右心室收缩压升高。

目的:探讨香烟烟雾提取物(CSE)对肺泡巨噬细胞(AMs)Dectin-1受体表达及对烟曲霉感染应答能力的影响。方法:实验研究。大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383加入CSE后再使用烟曲霉静止期孢子(RC)刺激以建立烟曲霉体外感染细胞模型，流式细胞仪、激光共聚焦显微镜、蛋白质印迹检测Dectin-1表达；siRNA沉默和慢病毒载体过表达Dectin-1后通过吞噬实验检测AMs对RC吞噬能力，定量实时聚合酶链反应、酶联免疫吸附试验检测相关细胞因子表达。结果:激光共聚焦显微镜(15.29±2.88比24.56±4.01， t＝11.75， P<0.05)及流式细胞仪(17.73±4.95比25.94±7.12， t＝17.27， P<0.05)均显示CSE降低AMs表面Dectin-1受体的表达。RC体外刺激后Dectin-1 mRNA的表达出现时间依赖性增加，对照组在所有时间点都较CSE组显著增加( P值均<0.05)；蛋白表达结果类似：对照组明显高于CSE组(18 h：0.755±0.035比0.360±0.047；24 h：0.968±0.035比0.552±0.049， P值均<0.05)。CSE降低AMs对RC吞噬能力(吞噬率：53.33%±9.95%比75.17%±8.66%；吞噬指数：2.17±0.58比7.67±1.53， P值均<0.05)。siRNA下调Dectin-1表达联合CSE可以进一步降低NR8383细胞对RC的吞噬力( P<0.05)，但单纯下调Dectin-1表达对RC的吞噬能力差异无统计学意义( P>0.05)。Dectin-1介导细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和IL-4的产生：TNF-α、IL-1β在对照组增加尤为明显，感染6 h后达峰值，每个时间点比较差异均有统计学意义( P值均<0.05)。与之相反，IL-4在CSE组升高更为显著，每个时间点比较差异均有统计学意义( P值均<0.05)。IL-10表达也增加，但2组间比较差异无统计学意义( P>0.05)。使用siRNA抑制/慢病毒过表达Dectin-1对4种细胞因子mRNA和蛋白产生同向作用。 结论:CSE可引起AMs Dectin-1受体低表达和功能障碍，导致烟曲霉感染后吞噬能力降低和细胞因子异常表达。CSE引起的AMs抗曲霉防御能力下降部分是通过Dectin-1介导的。

目的:通过筛选香烟烟雾提取物（CSE）刺激下大鼠肺泡巨噬细胞存活率高、胞葬功能弱的时间点，建立肺泡巨噬细胞胞葬功能障碍体外模型，用于研究以慢性炎症反应为主要病理变化的慢性呼吸系统疾病。方法:①时间点筛选实验：体外培养大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383，取对数生长期细胞分为空白对照组（100 μL完全培养基）和5% CSE组（90 μL完全培养基+10 μL 100% CSE）；采用阿尔玛蓝法检测5% CSE作用6、12、24、48 h对NR8383细胞活性的影响。②诱导凋亡实验：体外培养大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞株RLE-6TN作为NR8383细胞的吞噬靶细胞，取对数生长期细胞分为空白对照组及紫外线暴露后10、30、60 min组（以30 000 μJ/cm 2紫外线强度照射15 min诱导凋亡）；采用流式细胞仪检测RLE-6TN细胞在紫外线暴露结束后10、30、60 min的凋亡率。③胞葬实验：另取对数生长期NR8383细胞分为空白对照组和5% CSE组。于CSE刺激NR8383细胞达到6、12、24 h前2 h，将RLE-6TN细胞进行紫外线暴露诱导凋亡；将RLE-6TN细胞悬液加入NR8383细胞（RLE-6TN细胞与NR8383细胞比例为5∶1）。采用流式细胞仪检测5% CSE作用不同时间点NR8383细胞对RLE-6TN细胞的胞葬率。 结果:①与空白对照组相比，5% CSE作用48 h后NR8383细胞活性明显降低〔细胞还原率：（68.5±4.1）%比（73.6±2.3）%， P<0.05〕；而5% CSE作用6、12、24 h对NR8383细胞活性的影响与空白对照组比较差异均无统计学意义，故选择这3个时间点用于后续建立肺泡巨噬细胞胞葬功能障碍体外模型实验。②与空白对照组相比，紫外线暴露后10、30、60 min时RLE-6TN细胞凋亡率均显著升高〔（66.87±8.63）%、（85.51±2.39）%、（96.13±2.74）%比（9.13±3.17）%，均 P<0.01〕，并且呈一定时间依赖性。考虑在胞葬实验中PKH26膜标记探针标记RLE-6TN细胞大约需50 min，因此，选择在紫外线暴露后10 min进行RLE-6TN细胞标记。③与空白对照组相比，5% CSE作用12 h时NR8383细胞的胞葬功能明显降低〔细胞胞葬率：（33.64±1.30）%比（44.02±2.71）%， P<0.01〕，而作用6 h、24 h时对NR8383细胞的胞葬功能无明显影响。 结论:CSE可诱导肺泡巨噬细胞胞葬功能障碍，基于5% CSE对NR8383细胞活性、胞葬功能影响的检测结果，可选择NR8383细胞存活率高、胞葬作用弱的12 h作为肺泡巨噬细胞胞葬功能障碍体外模型条件。

目的:评价补肺益肾组分方Ⅲ（ECC-BYFⅢ）阻抑慢性阻塞性肺疾病（COPD）黏液高分泌的配伍特点。方法:将ECC-BYFⅢ组分按原方药物功效分成补气（人参皂苷Rh1+黄芪甲苷）、补肾（淫羊藿苷）、化痰（川陈皮素）、活血（丹皮酚）4组，按数学排列组合的方法将其分为不同组分配伍组（14组）。①按随机数字表法将大鼠分为对照组、模型组、ECC-BYFⅢ及不同组分配伍组，共17组。采用香烟烟雾暴露联合反复细菌感染的方法复制COPD稳定期大鼠模型。于制模第9周开始给予相应的药物灌胃，16周结束后取材。用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清及支气管肺泡灌洗液（BALF）中基质金属蛋白酶9（MMP-9）、基质金属蛋白酶抑制剂1（TIMP-1）水平，以及肺组织和BALF中黏蛋白（MUC）5AC水平。②将人肺上皮细胞BEAS-2B分为空白组、模型组、ECC-BYFⅢ及不同组分配伍组。于相应药物预处理后4 h建立缺氧诱导的BEAS-2B细胞黏液高分泌模型。采用定量聚合酶链反应（PCR）检测MUC5AC、MUC5B、MUC1的mRNA表达。采用Region（R）值综合评价法评价大鼠及BEAS-2B细胞黏液分泌指标。结果:①与对照组比较，模型组大鼠血清及BALF中MMP-9显著升高，TIMP-1水平显著降低；肺组织及BALF中MUC5AC显著升高。R值综合评价结果显示，除补气组和补肾组外，ECC-BYFⅢ及其组分配伍均能显著纠正COPD大鼠黏液高分泌，以ECC-BYFⅢ、补肾祛邪、扶正化痰、祛邪组分配伍效果较优（R值分别为2.15±0.42、2.11±0.23、2.16±0.23、2.16±0.55），与模型组（R值：3.00±0.00）比较差异均有统计学意义（均 P<0.05）。②与空白组比较，模型组细胞MUC5AC、MUC5B、MUC1的mRNA表达均升高；但不同组分配伍对BEAS-2B细胞黏液分泌没有明显的作用特点。③综合体内外实验，R值综合评价结果显示，ECC-BYFⅢ及其活血、祛邪、补肾活血、扶正化痰、补气祛邪组分配伍可显著纠正COPD黏液高分泌状态（R值分别为2.30±0.43、2.33±0.44、2.12±0.68、2.27±0.64、2.24±0.27、2.29±0.47），与模型组（R值：3.00±0.00）比较差异均有统计学意义（均 P<0.01）；其作用强度为：祛邪>扶正化痰>补肾活血>补气祛邪>ECC-BYFⅢ>活血。 结论:ECC-BYFⅢ组分配伍对COPD黏液分泌相关指标效应不同，含化痰（川陈皮素）或活血（丹皮酚）的组分配伍抑制黏液分泌效果较好。

目的:探讨空气颗粒物(PM)及香烟烟雾提取物(CSE)对人肺泡上皮细胞(A549细胞)和单核细胞(THP-1细胞)源性巨噬细胞功能的影响。方法:采用不同浓度的PM与CSE单独或叠加体外刺激A549细胞和THP-1细胞，应用CCK-8法检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞凋亡，酶联免疫吸附试验检测炎症因子表达，实时聚合酶链式反应检测巨噬细胞极化标志物，免疫蛋白质印迹法检测紧密连接蛋白ZO-1、occludin、claudin的表达。结果:与空白对照组比较，0.5% CSE、50 mg/LPM单独刺激即可抑制A549细胞增殖；二者叠加刺激后，较CSE单独刺激组能够进一步抑制该细胞增殖活性，促进细胞凋亡；同时，在CSE存在时，PM可进一步促进A549细胞和THP-1细胞产生的炎症因子白细胞介素6及白细胞介素1β。PM单独或与CSE叠加均可降低A549细胞表达occludin。实时聚合酶链式反应结果显示，CSE与PM叠加进一步促进THP-1细胞表达CD80 mRNA。结论:PM能够进一步加重CSE暴露所导致的气道上皮抑制增殖、促进凋亡、炎症及巨噬细胞向M1型极化。

慢性阻塞性肺疾病(慢阻肺，COPD)是一种常见的由有毒颗粒或气体导致的气道和(或)肺泡异常引起的以持续性呼吸道症状和气流受限为特征的可以预防和治疗的疾病。除了香烟烟雾这一常见危险因素导致的吸烟慢阻肺外，非吸烟慢阻肺表型至少占四分之一以上。非吸烟慢阻肺尤其是在发展中国家占据较大比例，非吸烟慢阻肺与吸烟慢阻肺应受到同等重视，未来可能需要对非吸烟慢阻肺的预后开展更加深入的研究。

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一种异质性肺部状态，以慢性呼吸道症状(呼吸困难、咳嗽、咳痰、急性加重)为特征，是由气道(支气管炎、细支气管炎)和(或)肺泡(肺气肿)异常所导致的持续性、进行性气流阻塞。当前，COPD的全球发病率和病死率仍居高不下，且认为COPD的发病率与吸烟呈正相关，这可能由于香烟烟雾所引起的气道炎症及异常激活哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)，导致气道上皮细胞生长、增殖、凋亡、自噬，继而促进气道重塑等一系列病理生理特征。目前，吸烟所致的COPD患者仍缺乏有效的治疗方法，探究新的药物靶点开发新药具有重要的临床意义。mTOR是否参与吸烟者COPD的发生和发展，通过何种机制参与，都值得进一步探讨。本文就mTOR在吸烟所致的COPD发病机制中的作用作一综述。

目的:探究间歇性缺氧(IH)是否通过NF-κB/NLRP3炎症小体信号通路促进香烟烟雾提取物(CSE)诱导的人支气管上皮细胞炎症因子分泌。方法:本研究为实验研究。采用CSE刺激BEAS-2B细胞24 h，并将细胞暴露于IH环境6、12、24 h后，ELISA检测细胞上清IL-6、IL-8的表达水平，CCK8检测细胞活性，western blot检测p-P65、P65、NLRP3、cleaved-caspase 1、cleaved-IL-1β的表达；向BEAS-2B细胞转染NLRP3 siRNA 24 h后，使细胞接受CSE和IH联合刺激24 h，western blot检测NLRP3、cleaved-caspase 1、cleaved-IL-1β的表达，ELISA检测IL-6、IL-8的分泌水平；CSE和IH联合刺激BEAS-2B细胞24 h，使用NF-κB信号通路抑制剂BAY 11-7082预处理后，western blot检测p-P65、P65、NLRP3、cleaved-caspase 1的表达，ELISA检测IL-6、IL-8的分泌水平。结果:CSE+IH(24 h)组的IL-6[(287.13±31.74)ng/L比(179.53±21.71)ng/L]、IL-8[(786.77±66.46)ng/L比(450.80±24.89)ng/L]的分泌水平均高于CSE组( F值分别为36.30、57.95， P值均<0.001)，且细胞活性低于CSE组( F＝42.16， P<0.001)。CSE+IH组的NLRP3的mRNA表达以及p-P65/P65、NLRP3、cleaved-caspase 1、cleaved-IL-1β的蛋白表达均高于CSE组( F值分别为129.60、36.30、55.83、26.97、72.83， P值均<0.01)。CSE+IH+si-NLRP3组的NLRP3、cleaved-caspase 1、cleaved-IL-1β的蛋白表达均低于CSE+IH+si-NC组( F值分别为20.58、43.76、48.66， P值均<0.01)。CSE+IH+si-NLRP3组的IL-6、IL-8的分泌水平均低于CSE+IH+si-NC组( F值分别为38.23、24.73， P值均<0.01)。CSE+IH+BAY组的p-P65/P65、NLRP3、cleaved-caspase 1的蛋白表达均低于CSE+IH组( F值分别为42.17、54.70、40.18， P值均<0.001)。CSE+IH+BAY组的IL-6、IL-8的分泌水平均低于CSE+IH组( F值分别为48.63、60.38， P值均<0.001)。 结论:IH通过NF-κB/NLRP3炎症小体信号通路促进CSE诱导的人支气管上皮细胞炎症因子分泌。