目的 研究桃红四物汤(Taohong Siwu Decoction,THSWD)对缺血性脑卒中的微小RNA(microRNA,miR-NA)表达谱的影响,探讨THSWD治疗缺血性脑卒中的分子机制.方法 建立大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)诱导的局灶性脑缺血大鼠模型,采用单细胞RNA测序技术检测THSWD治疗后MCAO大鼠miRNA表达谱.采用GO和KEGG富集分析方法分析miRNA作用于靶基因的功能.对表达差异显著的miRNA进行RT-qPCR实验验证.结果 THSWD干预后,MCAO大鼠脑梗死区有13个miRNA表达发生变化,其中6个miRNA表达上调,7个miRNA表达下调.利用miRanda进行预测,确定了这13个miRNA的靶基因,构建了miRNA-mRNA网络,通过RT-qPCR验证了其中6个差异表达的miRNA(rno-miR-653-5 p、rno-miR-216 b-5 p、rno-miR-3547、rno-miR-217-5p、rno-miR-758-3p和rno-miR-223-3p).结论 THSWD可以通过逆转某些miRNA的异常表达来治疗缺血性脑卒中.

目的:探讨miRNAs介导的胶质瘤肿瘤微环境(TME)中巨噬细胞(Mφ)的恶性转化及其机制。方法:应用集落刺激因子诱导表达绿色荧光蛋白(GFP)的小鼠骨髓来源细胞(BMDCs)分化，获得Mφ-GFP。将胶质瘤干细胞(GSCs)与Mφ-GFP体外共培养，筛选具备无限增殖潜能的Mφ-GFP，即恶变巨噬细胞(t-Mφ)。通过miRNAs芯片分析获取t-Mφ与正常Mφ的miRNAs差异表达谱。分别比较目标miRNA在中国脑胶质瘤基因组图谱计划(CGGA)不同世界卫生组织(WHO)分级胶质瘤组织、来源于手术切除的10例胶质瘤组织与瘤旁组织、t-Mφ与正常Mφ中的表达水平，并分析目标miRNA表达水平与患者生存期的相关性。采用流式细胞术、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白质免疫印迹法(WB)及荧光素酶活性实验探讨目标miRNA调控TME中Mφ恶变的分子机制。结果:通过建立双色荧光示踪共培养体系，成功获得具备无限增殖潜能的单克隆GFP +细胞，并表达Mφ标志物F4/80和CD11b。miRNAs芯片差异表达谱和qRT-PCR结果证实，与正常Mφ相比，miR-223-3p在t-Mφ中的表达显著升高。临床分析中，胶质瘤组织样本中miR-223-3p的表达水平显著高于配对的瘤旁组织( P<0.01)。对CGGA的分析结果发现，胶质母细胞瘤中的miR-223-3p表达水平显著高于低级别胶质瘤(WHO 2/3级)( P<0.001)。生存分析结果提示，低表达miR-223-3p胶质瘤患者的总体生存期显著优于高表达组( P<0.01)。下调miR-223-3p可促进t-Mφ的凋亡( P<0.01)。生物信息学分析显示，受体相互作用蛋白激酶(RIPK3)基因3′-UTR区存在miR-223-3p潜在的结合位点。荧光素酶活性实验结果显示，与共转染miR-223-3p模拟物对照和RIPK3-WT的细胞相比，共转染miR-223-3p模拟物和RIPK3-WT的t-Mφ细胞荧光强度显著降低( P<0.01)。qRT-PCR和WB实验结果证实，miR-223-3p下调的t-Mφ中RIPK3的表达水平显著高于对照组( P<0.01)，而miR-223-3p过表达的t-Mφ中RIPK3的表达水平显著低于对照组( P<0.05)。此外，miR-223-3p抑制剂/RIPK3抑制剂组t-Mφ的凋亡细胞比例显著低于miR-223-3p抑制剂组( P<0.01)。 结论:GSCs可诱导TME中Mφ的恶性转化，而miR-223-3p可靶向抑制t-Mφ中RIPK3的表达，进而抑制t-Mφ的细胞凋亡。

目的:探讨circDDX17通过靶向miR-223-3p/RIP3分子轴调控非小细胞肺癌细胞增殖及凋亡的分子机制。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测人正常肺上皮细胞株BEAS-2B和非小细胞肺癌H1299、A549、H446细胞中circDDX17、miR-223-3p、受体相互作用蛋白3（RIP3）的表达水平。分别将pcDNA、pcDNA-circDDX17、anti-miR-con、anti-miR-223-3p、pcDNA-circDDX17与miR-con、pcDNA-circDDX17与miR-223-3p mimics转染至H1299细胞。采用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖情况，流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况，平板克隆实验检测细胞增殖能力，双荧光素酶报告实验验证circDDX17与miR-223-3p、miR-223-3p与RIP3的靶向关系，Western blot法检测CyclinD1、CDK2、Cleaved caspase-3、Bax蛋白的表达水平。结果:与BEAS-2B比较，H1299、A549、H446细胞中circDDX17 mRNA表达水平降低，miR-223-3p mRNA表达水平升高，RIP3 mRNA的表达水平降低（均 P＜0.05）。pcDNA-circDDX17组细胞活力［（69.46±4.68）%］、细胞克隆数［（83.49±7.86）个］、S期细胞比例［（22.52±1.41）%］、CyclinD1、CDK2蛋白表达水平均低于pcDNA组［分别为（97.54±7.72）%、（205.03±13.37）个、（28.69±1.49）%，均 P＜0.05］，pcDNA-circDDX17组细胞G 0/G 1期细胞比例［（64.45±3.56）%］、细胞凋亡率［（18.36±1.63）%］、Cleaved caspase-3、Bax蛋白表达水平均高于pcDNA组［分别为（51.33±2.76）%和（5.21±0.54）%，均 P＜0.05］；anti-miR-223-3p组细胞活力［（72.64±5.44）%］、细胞克隆数［（78.16±8.23）个］、S期细胞比例［（21.34±1.59）%］、CyclinD1、CDK2蛋白表达水平均低于anti-miR-con组［分别为103.47±6.25、（169.32±14.53）个、（28.43±1.26）%，均 P＜0.05］，anti-miR-223-3p组细胞G 0/G 1期细胞比例［（62.86±3.28）%］、细胞凋亡率［（14.64±1.67）%］、Cleaved caspase-3、Bax蛋白表达水平均高于anti-miR-con组［分别为（51.33±2.71）%和（4.83±0.39）%，均 P＜0.05］。circDDX17与miR-223-3p存在结合位点，miR-223-3p与RIP3存在结合位点。pcDNA-circDDX17+miR-223-3p组细胞活力［（135.45±9.28）%］、细胞克隆数［（174.64±10.68）个］、S期细胞比例［（26.39±2.25）%］、CyclinD1、CDK2蛋白表达水平均高于pcDNA-circDDX17+miR-con组［分别为（101.56±6.68）%、（107.65±7.62）个、（21.64±1.72）%，均 P＜0.05］，pcDNA-circDDX17+miR-223-3p组细胞G 0/G 1期细胞比例［（56.64±2.76）%］、细胞凋亡率［（8.34±0.76）%］、Cleaved caspase-3、Bax蛋白表达水平均低于pcDNA-circDDX17+miR-con组［分别为（64.03±3.48）%和（15.21±1.18）%，均 P＜0.05］。 结论:circDDX17可靶向调控miR-223-3p/RIP3分子轴从而抑制非小细胞肺癌细胞增殖及诱导细胞凋亡。

目的:观察微小RNA(miRNA，miR)-223-3p靶向叉头框转录因子1(FoxO1)对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响并探讨其分子机制。方法:采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析正常乳腺细胞HBL-100(购自中国医学科学院细胞库)和乳腺癌细胞MCF-7(购自中国科学院细胞库)细胞中miR-223-3p的表达；采用脂质体转染miR-223-3p模拟物、抑制剂和对照质粒于MCF-7细胞。采用荧光定量PCR检测转染miR-223-3p模拟物、抑制剂和对照质粒的细胞中miR-223-3p表达水平。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)测定细胞细胞增殖。采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)法检测不同处理的细胞凋亡率。生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-223-3p的靶基因。采用蛋白质印迹法(Western blot)分析miR-223-3p靶基因蛋白质表达。组间数据比较采用 t检验。 结果:与正常乳腺细胞miR-223-3p表达水平(1.09±0.14)比较，乳腺癌MCF-7细胞mRNA-223-3p表达水平(2.37±0.19)显著增加，差异有统计学意义( t＝3.281， P<0.05)。转染72 h，转染miR-223-3p模拟物的细胞miR-223-3p表达水平(2.89±0.20)较转染对照质粒的细胞(0.97±0.19)显著增加，差异有统计学意义( t＝2.619， P<0.05)。转染miR-223-3p抑制剂的细胞miR-223-3p表达水平(0.33±0.12)较转染对照质粒的细胞(0.97±0.19)显著下降，差异有统计学意义( t＝3.111， P<0.05)。转染miR-223-3p抑制剂的细胞增殖能力(1.09±0.20)较转染对照质粒的细胞增殖能力(1.94±0.27)明显下降，差异有统计学意义( t＝2.891， P<0.05)。转染miR-223-3p抑制剂的细胞凋亡率[(32.69±5.81)%]较转染对照质粒的细胞凋亡率[(5.04±1.47)%]明显增加，差异有统计学意义( t＝3.001， P<0.05)。FoxO1是miR-223-3p的靶基因。转染miR-223-3p抑制剂的细胞FoxO1蛋白表达水平(2.60±0.22)较转染对照质粒的细胞(0.58±0.19)明显升高，差异有统计学意义( t＝3.185， P<0.05)。 结论:miR-223通过靶向FoxO1蛋白调控着乳腺癌细胞的增殖和凋亡。

microRNA（miRNA）是一类转录后调控基因表达的非编码RNA分子，参与皮肤各种病理生理过程。近年来，miRNA表达谱的变化已被报道与部分炎症性皮肤病相关，例如miR-203、miR-146a、miR-21在银屑病皮损中表达上调；miR-155、miR-146a在特应性皮炎皮损中表达上调；miR-21、miR-223、miR-142-3p、miR142-5p在过敏性接触性皮炎皮损表达上调；而miR-146a、miR-155在系统性红斑狼疮患者外周血表达下调；miR-223在皮肌炎皮损中表达下调等。本文综述miRNA与部分炎症性皮肤病发生、发展之间的联系。

目的:发现和探讨miR-223-3p可能通过调控FOXO3a介导自噬在肝缺血再灌注损伤中发挥作用。方法:采用C57/BL6小鼠建立小鼠缺血再灌注(IR)模型，根据再灌注时间不同分为2 h组、6 h组、12 h组和24 h组，假手术组不进行钳夹肝蒂操作。培养小鼠肝AML12细胞，用miR-223-3p mimics、miR-223-3p inhibitor以及FOXO3a的干扰RNA处理细胞，并建立缺氧1 h复氧6 h的模型，分为miRNA对照组、miR-223-3p模拟物组、miR-223-3p抑制剂组以及siRNA对照组、FOXO3a siRNA组。HE染色、TUNEL检测不同时间点肝脏的损伤及细胞凋亡状况。免疫组化检测肝细胞内增殖细胞核抗原(PCNA)和Caspase-3的变化。RT-PCR和Western blot检测肝组织以及肝细胞内miR-223-3p、FOXO3a、LC3、p62和Caspase-3的表达变化。结果:HE染色、TUNEL结果显示12 h肝组织再灌注损伤以及细胞凋亡最严重。在肝组织IR模型中，RT-PCR结果显示IR各组miR-223-3p、FOXO3a的表达均高于假手术组(1.00±0)，miR-223-3p在12 h时(9.13±2.12)达最高，FOXO3a在6 h时(5.23±0.90)达最高( P<0.05)。Western blot结果显示再灌注6 h时FOXO3a表达水平最高，12 h时LC3和Caspase-3表达水平最高( P<0.05)。在细胞缺氧复氧模型中，RT-PCR结果显示miRNA对照组(1.00±0)FOXO3a mRNA的表达较miR-223-3p模拟物组(0.45±0.21)降低，反之在miR-223-3p抑制剂组(2.73±0.53)升高( P<0.05)。Western blot检测显示FOXO3a蛋白表达在miR-223-3p抑制剂组最高，miR-223-3p模拟物组最低，反之LC3和Caspase-3均在miR-223-3p模拟物组表达最高( P<0.05)。siRNA对照组中FOXO3a表达较FOXO3a siRNA组高，同时FOXO3a siRNA组中Caspase-3和LC3表达更高。 结论:研究表明FOXO3a对肝缺血再灌注损伤具有保护作用，可能与其抑制细胞自噬以及凋亡有关，而miR-223-3p通过下调FOXO3a介导自噬促进损伤，提示miR-223-3p和FOXO3a成负相关且可能是肝脏损伤的潜在基因治疗靶点。

目的:探索多囊卵巢综合征(PCOS)患者痰湿证的特征性生物标志物，为中医证候诊断的标准化提供理论依据。方法:采用队列研究的方法，收集2018年1月至2019年1月期间在山东中医药大学附属医院行体外受精（IVF）助孕治疗，年龄在20~37岁之间的不孕症患者。将患者分为对照组（A组，20例）、PCOS痰湿组（B组，20例）、PCOS非痰湿组（C组，20例）。采用qRT-PCR法检测3组患者血清、卵泡液、颗粒细胞中miR-183/200/223的表达水平，并用相关性分析评价其与痰湿证的关系。结果:血清中miR-223-3p在B组的相对表达量高于A组和C组，差异均有统计学意义（ P均<0.001），并与胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)呈正相关（ r=0.595, P=0.04）。卵泡液中miR-223-3p在B组的相对表达量高于A组（ P<0.001）及C组（ P=0.002），差异均有统计学意义。颗粒细胞中miR-183-5p在B组的相对表达量均高于A组（ P=0.004）和C组（ P=0.012），差异均有统计学意义，并与HOMA-IR呈正相关（ r=0.732， P=0.007）；miR-200c-3p在B组的相对表达高于A组（ P=0.002）和C组（ P=0.001），差异均有统计学意义，并与HOMA-IR呈正相关（ r=0.704， P=0.016）；miR-223-3p在B组的相对表达量高于A组（ P<0.001），在C组的相对表达量也高于A组（ P=0.005），差异均有统计学意义，且在B组的相对表达量与HOMA-IR呈正相关（ r=0.547， P=0.042）； miR-223-5p在B组的相对表达量明显低于A组（ P=0.001），在C组的相对表达量也低于A组（ P<0.001），差异均有统计学意义，且B组的相对表达量与HOMA-IR呈负相关（ r=-0.671， P=0.024）。 结论:PCOS痰湿证有明显的胰岛素抵抗特征，microRNA在PCOS痰湿证患者体内表达存在显著性差异。miR-183-5p、miR-200c-3p与miR-223-5p可能成为诊断PCOS痰湿证卵巢局部的特异性生物标志物。

目的:探讨通腑泄热法中药通过线粒体DNA(mtDNA)/Toll样受体9(TLR9)/微小RNA(miR)-223通路抑制肝脏缺血再灌注损伤(HIRI)的作用。方法:随机数字法将80只健康无特定病原体(SPF)级SD大鼠分成通路正常组(NP组)、通路激活组(AP组)、通路正常中药组(NPT组)、通路激活中药组(APT组)4组，"通路激活"指在大鼠HIRI建模麻醉后采用TLR9激活剂50 μg/只腹腔注射激活mtDNA/TLR9/miR-223通路，"通路正常"则腹腔注射对应剂量生理盐水；"中药"指手术处理前3 d以通腑泄热法中药按照5 ml/只/次剂量，每日2次给大鼠灌胃。每组20只，均建立肝脏HIRI模型，以分组要求施加不同干预后分别于再灌注后24、48 h两个时间点采集血清及肝组织标本，并进行相关生化指标、病理、蛋白质印迹法(Western blot)及聚合酶链反应(PCR)检测。采用多因素方差分析。结果:"通路激活"及"中药干预"均是术后血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)变化的影响因素。通路激活可促进术后血清中ALT、AST、LDH升高，AP组大鼠术后24 h血清ALT、AST、LDH高于NP组[ALT：(962.34±42.35) U/L比(747.33±40.04) U/L， F＝11.446， P<0.05；AST：(1 421.58±93.25) U/L比(1 041.87±48.60) U/L， F＝5.893， P<0.05；LDH：(2 312.99±95.77) U/L比(1 974.23±75.80) U/L， F＝5.019， P<0.05]；而中药干预可抑制术后血清中ALT、AST、LDH升高，NPT组大鼠术后24 h血清ALT、AST、LDH低于NP组[ALT：(561.31±40.49) U/L比(747.33±40.04) U/L， F＝688.807， P<0.05；AST：(792.38±44.03) U/L比(1 041.87±48.60) U/L， F＝838.255， P<0.05；LDH：(1 702.75±62.32) U/L比(1 974.23±75.80) U/L， F＝514.608， P<0.05]；通路激活及中药干预的交互作用呈现出抑制作用，APT组大鼠术后24 h血清ALT、AST、LDH低于NP组[ALT：(437.88±47.88) U/L比(747.33±40.04) U/L， F＝156.296， P<0.05；AST：(510.02±55.54) U/L比(1 041.87±48.60) U/L， F＝272.576， P<0.05；LDH：(1 473.69±71.94) U/L比(1 974.23±75.80) U/L， F＝134.480， P<0.05]；且术后48 h，NP组、AP组、NPT组、APT组4组大鼠血清ALT、AST、LDH均较术后24 h降低。术后24 h 4组大鼠肝细胞病理均呈现出不同程度坏死，以AP组坏死最严重，且术后48 h各组肝细胞坏死程度较术后24 h轻。术后24 h，各组大鼠肝组织中核因子-κB(NF-κB)及ICAM1的表达以NP组表达最高，APT组最低，而术后48 h各组NF-κB及ICAM1表达趋势同术后24 h，且各自较术后24 h表达有所下降。术后24 h，相对于NP组，AP组及APT组中miR-223、TLR9的表达明显升高，NPT组的表达明显降低；而NPT组、AP组及APT组中mtDNA的表达均明显降低，以APT组降低最显著，术后48 h各组三者表达量均较术后24 h降低，以APT组降低最显著。 结论:通腑泻热法中药可以通过mtDNA/TLR9/miR-223通路改善肝脏缺血再灌注损伤。

目的:探讨可靶向miR-223的3个长链非编码RNA（lncRNA）NR_002578、NR_038264和NR_046252在原发性痛风性关节炎（GA）入组患者PBMCs中的表达及可能的临床意义。方法:收集满足研究条件痛风患者60例[包括急性期痛风（AG）30例和间歇期痛风（IG）30例]和50名健康体检者（健康对照组）周围静脉血标本、临床资料及实验室指标；用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）方法检测3个lncRNAs在GA与健康对照组PBMCs表达水平，比较3个lncRNAs表达量在不同组别的差异并与临床指标间做相关性分析，构建受试者工作特征曲线（ROC）评估lncRNAs在痛风诊断中的可能潜能。计量资料符合正态分布使用 t检验或方差分析，非正态分布用Mann-Whitney U检验或Kruskal-Wallis H检验，3组间比较采用SNK。 结果:①NR_002578在GA组的表达低于健康对照组[60.2（16.8，100.1）×10 -3与149.5（92.6，221.8）×10 -3； Z=-5.75， P<0.001]，亚组分析发现其在AG组低于IG和健康对照组[34.3（8.6，72.8）×10 -3与88.3（47.7，109.6）×10 -3与149.5（92.6，221.8）×10 -3， H=40.12， P<0.001]，且在IG组低于健康对照组（ P<0.001）；NR_046252在GA组的表达则高于健康对照组[6.5（2.1，21.5）×10 -3与2.1（1.2，3.5）×10 -3； Z=-4.21， P<0.001]，AG与IG组均高于健康对照组[6.3（2.0，12.0）×10 -3与7.2（2.4，30.6）×10 -3与2.1（1.2，3.5）×10 -3； H=21.33， P<0.001]，但AG与IG之间差异无统计学意义（ P>0.05）。② Spearman相关性分析发现痛风患者中NR_002578的表达量与ESR（ r=-0.29， P=0.024）、hsCRP（ r=-0.35， P=0.006）呈负相关。③ NR_002578和NR_046252用于诊断痛风ROC曲线下面积分别为0.819和0.750。 结论:NR_002578和NR_046252在痛风患者的异常表达提示其可能参与痛风发病。

目的:探讨巨噬细胞外泌体源miR-223对胃癌细胞转移能力的影响及作用机制。方法:选择巨噬细胞及其外泌体分别与胃癌细胞共培养（未加为对照组），检测miR-223表达量并观察其对胃癌细胞转移能力的影响。荧光显微镜观察巨噬细胞是否通过外泌体传递miR-223至胃癌细胞。巨噬细胞转染miR-223拮抗剂，分离外泌体与胃癌细胞共培养，transwell、划痕实验观察其对胃癌细胞转移的影响，逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）及Western印迹检测蛋白酪氨酸磷酸酶（PTEN）及转移相关蛋白表达。结果:巨噬细胞及其外泌体与胃癌细胞共培养后，胃癌细胞迁移及侵袭能力增强[253.2±6.3（对照组）、451.8±12.8、453.4±14.4，与对照组比较均 P<0.01；98.4±5.1（对照组）、276.5±10.3、257.3±8.5，与对照组比较均 P<0.01]，miR-223（1.00±0.00、8.83±0.91、9.57±1.03）相对表达量差异有统计学意义（均 P<0.05）。荧光显微镜观察显示巨噬细胞通过外泌体传递miR-223至胃癌细胞。阻断巨噬细胞miR-223表达后，其来源外泌体促进胃癌细胞迁移和侵袭的能力明显降低（215.6±9.2、402.5±11.6、253.7±10.4，均 P<0.01；91.5±8.2、263.4±9.3、105.8±9.3，均 P<0.01）。胃癌细胞与巨噬细胞来源外泌体共培养后PTEN mRNA表达下降（1.00±0.00比0.26±0.03），相对表达量差异有统计学意义（ P<0.05）；PI3K/AKT通路激活，细胞骨架重塑。阻断miR-223传递后这一激活作用减弱。 结论:巨噬细胞通过外泌体传递miR-223至胃癌细胞，靶向PTEN并激活PI3K/AKT信号通路从而促进胃癌细胞的转移。