目的:分析组织微小RNA(miR)-3653与肺腺癌(lung adenocarcinoma, LUAD)中高危型人乳头瘤病毒感染(high-risk human papillomavirus, HR-HPV)的关系，以及miR-3653对LUAD诊断和预后的临床意义。方法:选择2020年4月至2021年3月我院收治的102例LUAD患者，收集肿瘤组织和癌旁非癌组织。采用实时荧光定量PCR检测miR-3653。采用流式荧光液相芯片技术测定组织HR-HPV分型。通过受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic, ROC)分析miR-3653判断HPV阳性(HPV＋)和HPV阴性(HPV－)LUAD及LUAD癌旁组织。采用Kaplan-Meier曲线分析miR-3653与LUAD无病生存期(disease-free survival, DFS)和总生存期(overall survival, OS)的相关性。结果:LUAD组织中miR-3653表达1.33(0.76，2.63)较癌旁组织3.39(1.71，7.09)降低(Z＝－6.617，P<0.001); LUAD组织miR-3653低表达(<1.33)者淋巴结转移数量多(P<0.05)。LUAD中HR-HPV感染29例(28.43%)高于癌旁组织的8例(7.84%)(χ2＝14.560，P<0.001)。LUAD与HR-HPV－[0.94(0.69，2.19)]、LUAD与HR-HPV＋[2.20(1.49，3.68)]、癌旁组织HR-HPV－[2.96(1.67，6.63)]、癌旁组织HR-HPV＋[8.95(8.16，11.52)]中miR-3653逐渐升高(H＝60.818，P<0.001)。ROC曲线显示组织miR-3653诊断LUAD的AUC为0.768(0.704～0.832)、HR-HPV感染AUC0.616(0.528～0.703)、诊断LUAD中HR-HPV感染AUC 0.766(0.673～0.859)。中位DFS为12.25个月，病情进展36例(35.29%)；中位OS为18.50个月，全因死亡21例(20.59%)，HR-HPV感染且miR-3653高表达者中DFS和OS较HR-HPV感染、miR-3653高表达者长。结论:miR-3653与LUAD发生、预后和HR-HPV感染有关，可诊断HR-HPV感染阳性LUAD，对预后风险分层有意义。

目的:探讨miRNA-3653-3p（miR-3653-3p）对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭能力的影响及其相关机制。方法:从OncoLnc数据库中下载356例子宫内膜癌患者资料，数据更新时间为2020年；采用Kaplan-Meier法分析miR-3653-3p表达水平与子宫内膜癌患者总生存的关系；采用miRGator数据库预测与miR-3653-3p存在结合位点的靶基因。选择人子宫内膜癌细胞株AN3CA、HEC-1A、HEC-1B、Ishikawa和人正常子宫内膜上皮细胞株ESC，采用实时荧光聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR-3653-3p相对表达量。选取miR-3653-3p表达最低的细胞株为研究对象，分为阴性对照组和miR-3653-3p组，分别转染对照空载质粒和miR-3653-3p过表达质粒。采用CCK-8法检测细胞的增殖能力，Transwell法检测细胞的侵袭能力；qRT-PCR和蛋白质印迹法检测miR-3653-3p靶基因的表达。蛋白质印迹法检测miR-3653-3p对Wnt-β-catenin信号通路相关蛋白表达的影响。结果:OncoLnc数据库中数据分析显示，与miR-3653-3p低表达的子宫内膜癌患者相比，miR-3653-3p高表达的患者总生存较好（ P<0.01）。与人正常子宫内膜上皮细胞ESC相比，子宫内膜癌细胞株AN3CA、HEC-1A、HEC-1B、Ishikawa中miR-3653-3p表达水平均降低（均 P<0.05），并且HEC-1A细胞中miR-3653-3p的相对表达量最低，选择HEC-1A细胞进行后续实验。CCK-8实验结果显示，与阴性对照组相比，第2、3、4、5天miR-3653-3p组HEC-1A细胞能力均降低（均 P<0.05）。Transwell小室侵袭实验结果显示，培养26 h时，阴性对照组和miR-3653-3p组HEC-1A细胞侵袭数分别为（80±11）个和（21±4）个，差异有统计学意义（ t＝5.18， P<0.01）；与阴性对照组比较，miR-3653-3p组细胞侵袭数降低。采用miRGator数据库预测miR-3653-3p的靶基因可能是胎盘特异蛋白8（PLAC8）。阴性对照组和miR-3653-3p组HEC-1A细胞中PLAC8 mRNA的相对表达量分别为6.26±0.83和0.97±0.31，差异有统计学意义（ t＝6.00， P<0.01），miR-3653-3p组PLAC8 mRNA的相对表达量低于阴性对照组。与阴性对照组相比，miR-3653-3p组HEC-1A细胞PLAC8蛋白降低，Wnt-β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin、转化生长因子β（TGF-β）、GSK-3β、Rac1表达均降低。 结论:miR-3653-3p可能通过调节PLAC8-Wnt-β-catenin信号通路抑制子宫内膜癌细胞的增殖、侵袭。

Background::Metastasis is the main cause of tumor-associated death and mainly responsible for treatment failure of breast cancer. Autophagy accelerates tumor metastasis. In our work, we aimed to investigate the possibility of microRNAs (miRNAs) which participate in the regulation of autophagy to inhibit tumor metastasis.Methods::MiRNA array and comprehensive analysis were performed to identify miRNAs which participated in the regulation of autophagy to inhibit tumor metastasis. The expression levels of miR-3653 in breast cancer tissues and cells were detected by quantitative real-time polymerase chain reaction. In vivo and in vitro assays were conducted to determine the function of miR-3653. The target genes of miR-3653 were detected by a dual luciferase reporter activity assay and Western blot. The relationship between miR-3653 and epithelial-mesenchymal transition (EMT) was assessed by Western blot. Student’s t-test was used to analyze the difference between any two groups, and the difference among multiple groups was analyzed with one-way analysis of variance and a Bonferroni post hoc test. Results::miR-3653 was downregulated in breast cancer cells with high metastatic ability, and high expression of miR-3653 blocked autophagic flux in breast cancer cells. Clinically, low expression of miR-3653 in breast cancer tissues (0.054 ± 0.013 vs. 0.131 ± 0.028, t = 2.475, P = 0.014) was positively correlated with lymph node metastasis (0.015 ± 0.004 vs. 0.078 ± 0.020, t = 2.319, P = 0.023) and poor prognosis ( P < 0.001). miR-3653 ameliorated the malignant phenotypes of breast cancer cells, including proliferation, migration (MDA-MB-231: 0.353 ± 0.013 vs. 1.000 ± 0.038, t= 16.290, P < 0.001; MDA-MB-468: 0.200 ± 0.014 vs. 1.000 ± 0.043, t = 17.530, P < 0.001), invasion (MDA-MB-231: 0.723 ± 0.056 vs. 1.000 ± 0.035, t = 4.223, P= 0.013; MDA-MB-468: 0.222 ± 0.016 vs. 1.000 ± 0.019, t= 31.050, P < 0.001), and colony formation (MDA-MB-231: 0.472 ± 0.022 vs. 1.000 ± 0.022, t= 16.620, P < 0.001; MDA-MB-468: 0.650 ± 0.040 vs. 1.000 ± 0.098, t= 3.297, P = 0.030). The autophagy-associated genes autophagy-related gene 12 ( ATG12) and activating molecule in beclin 1-regulated autophagy protein 1 ( AMBRA1) are target genes of miR-3653. Further studies showed that miR-3653 inhibited EMT by targeting ATG12 and AMBRA1. Conclusions::Our findings suggested that miR-3653 inhibits the autophagy process by targeting ATG12 and AMBRA1, thereby inhibiting EMT, and provided a new idea and target for the metastasis of breast cancer.

目的:分析胶质瘤组织中miR-195、miR-3653表达及其与胶质瘤临床病理特征及预后的关系.方法:于2016年1月至2019年6月采集广西医科大学第七附属医院经手术切除的42例胶质瘤患者的癌组织石蜡标本作为胶质瘤组,另选取同期行手术治疗的颅脑损伤患者30例,将术中切除的额叶或颞叶组织石蜡标本作为对照组.应用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测胶质瘤组和对照组中miR-195、miR-3653相对表达量,并分析miR-195、miR-3653表达与胶质瘤临床病理特征的关系.Kaplan-Meier生存曲线分析miR-195、miR-3653表达与胶质瘤患者预后的关系,多因素Cox回归分析影响胶质瘤患者预后的因素.结果:胶质瘤组miR-195、miR-3653表达水平低于对照组(P＜0.001).不同胶质瘤病理分级、是否发生远处转移患者miR-195表达差异具有统计学意义(P＜0.001),不同肿瘤直径、病理分级、是否发生远处转移的患者miR-3653表达差异具有统计学意义(P＜0.001).Kaplan-Meier 生存曲线显示:miR-195、miR-3653 低表达组 3 年生存率低于 miR-195、miR-3653 高表达组(P＜0.05).多因素Cox回归分析显示远处转移、病理分级Ⅲ～Ⅳ级、低miR-195表达、低miR-3653表达是胶质瘤患者预后的危险因素(P＜0.05).结论:胶质瘤患者miR-195、miR-3653低表达,与胶质瘤远处转移、病理分级Ⅲ～Ⅳ级以及低生存率有关,miR-195、miR-3653可能成为胶质瘤预后评估指标以及治疗靶点.

目的 探讨舌鳞癌细胞线粒体微小RNA(mitochondrial microRNAs,mitomiRs)的表达,筛选出与化疗耐药相关的mitomiRs.方法 提取舌鳞癌细胞系CAL-27及其顺铂耐药细胞株CAL-27-re的线粒体、细胞质、总细胞RNA,采用高通量miRNA芯片筛选出耐药和亲本细胞中差异表达的mitomiRs,应用qRT-PCR验证在CAL-27和CAL-27-re中表达上调的mitomiRs,并在化疗耐药及敏感的舌鳞癌患者样本中验证表达上调的mit-omiRs.结果 芯片结果显示,在CAL-27和CAL-27-re的线粒体、细胞质和总细胞RNA共6个组分中共检测到263个miRNA,其中共有57个mitomiRs和134个细胞质微小RNA(cytoplasmic microRNAs,cytomiRs);与总miR-NA相比,CAL-27-re细胞中有35个mitomiRs表达上调,CAL-27细胞中有31个mitomiRs表达上调(≥1.5倍).进一步比较分析亲本和耐药细胞中差异表达的mitomiRs,在CAL-27-re细胞中有miR-2392、miR-4462、miR-1290、miR-4449、miR-1268a、miR-1246、miR-371a-5p、miR-3934-5p、miR-4271、miR-513p、miR-664b-3p共11个mi-tomiRs表达上调;而5个表达下调的mitomiRs则分别是miR-188-5p、miR-1973、miR-3653、miR-4499、miR-5787;其他41个mitomiRs在两种细胞株中的表达水平几乎相同.qRT-PCR与miRNAs芯片结果相符合,并且在CAL-27和CAL-27-re中得到验证的11个表达上调的mitomiRs中,有miR-1268a、miR-2392、miR-4462、miR-1290、miR-4449共5个mitomiRs在化疗耐药舌鳞癌临床样本中也同样表达上调.结论 顺铂化疗耐药和敏感的舌鳞癌细胞中存在差异表达的mitomiRs,特异高表达的mitomiRs:miR-1268a、miR-2392、miR-4462、miR-1290、miR-4449可能在舌鳞癌化疗耐药中具有重要作用.

目的 探讨胶质瘤组织miR-3653表达变化及miR-3653对人胶质瘤TG905细胞侵袭和迁移的影响及其分子机制.方法 收集2017年1月至2019年3月手术切除胶质瘤组织和瘤旁脑组织各25例.体外培养TG905细胞,过表达组转染MiR-3653 mimic质粒,过表达对照组转染NC-MiR-3653 mimic质粒,抑制对照组转染NC-MiR-3653 inhibitor质粒,抑制组转染MiR-3653 inhibitor质粒,miR-3653+ZEB2过表达组同时转染miR-3653 mimic和ZEB2 mimic质粒.利用qRT-PCR及免疫印迹法检测mRNA和蛋白表达;应用Transwell实验和划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力.结果 与瘤旁脑组织相比,胶质瘤组织miR-3653表达水平明显降低(P＜0.05).低表达miR-3653显著促进胶质瘤TG905细胞的侵袭及迁移(P＜0.05).过表达miR-3653显著抑制胶质瘤TG905细胞的侵袭及迁移(P＜0.05),明显抑制TG905细胞上皮-间质转化分子和ZEB2的表达(P＜0.05);过表达ZEB2,可有效抑制miR-3653过表达的作用(P＜0.05).结论 胶质瘤组织miR-3653呈低表达,通过靶向上调ZEB2,促进细胞上皮-间质转化及细胞侵袭、迁移能力.

目的 观察血清miR-3653-3p和miR-330-3p表达水平对食管癌诊断和预后预测的临床价值.方法 选取2015年1月至2017年6月在该院行手术治疗的食管癌患者109例作为食管癌组,同期在该院行手术治疗的食管良性病变患者(65例)和体检健康者(30例)分别作为食管良性病变组和对照组.采用实时荧光定量PCR检测血清miR-3653-3p和miR-330-3p水平,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-3653-3p和miR-330-3p水平对食管癌的诊断效能和预后预测价值.结果 食管癌组患者血清miR-3653-3p水平低于食管良性病变组和对照组(P<0.01),食管良性病变组血清miR-3653-3p水平低于对照组(P<0.01);食管癌组患者血清miR-330-3p水平高于食管良性病变组和对照组(P<0.01),食管良性病变组miR-330-3p水平高于对照组(P<0.01).ROC曲线分析显示,血清miR-3653-3p和miR-330-3p水平对食管癌有较高的诊断效能,联合检测的曲线下面积(AUC)高于miR-365403-13p、miR-330-3p单独检测.3年随访存活组血清miR-3653-3p水平明显高于死亡组(P<0.01),而血清miR-330-3p水平明显低于死亡组(P<0.01).血清miR-3653-3p和miR-330-3p水平对食管癌患者3年内出现死亡具有较高的预测价值,且联合检测的AUC高于miR-3653-3p、miR-330-3p单独检测.结论 miR-3653-3p和miR-330-3p在食管癌中的作用类似抑癌基因和促癌基因,血清miR-3653-3p和miR-330-3p联合检测在食管癌诊断和预测3年内死亡方面有重要价值.