目的:观察微小RNA(miR)-411-3p在分泌性中耳炎表达并探讨其炎症的调控机制。方法:选取2019年7月到2021年7月黄淮学院附属驻马店市中心医院收治的74例中耳炎患者和74例健康体检者的血液样本作为研究对象，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析两组血清中miR-411表达水平，采用酶联免疫吸附实验(ELISA)分析两组血清炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的表达水平。生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-411-3p靶基因。蛋白质免疫印迹分析靶基因的表达水平。培养人中耳上皮细胞系(HMEEC)，采用100 nmol/L脂多糖处理24 h，采用荧光定量PCR分析miR-411-3p和炎性因子水平。组间数据比较采用 t检验。 结果:对照组血清miR-411-3p表达水平(1.03±0.14)明显高于中耳炎组患者血清miR-411-3p表达水平(0.64±0.12)，差异有统计学意义( t＝17.250， P<0.05)。对照组血清TNF-α、IL-1β和IL-6水平[(27.19±6.25)、(29.84±7.07)、(23.67±5.62) pg/ml]明显高于中耳炎组患者血清TNF-α、IL-1β和IL-6水平[(101.69±11.03)、(95.68±5.86)、(67.80±11.91) pg/ml]，差异有统计学意义( t＝18.570、22.660、10.600， P<0.05)。中耳炎患者血清miR-411-3p表达水平与血清TNF-α、IL-1β和IL-6水平呈负相关( r＝－0.677、－0.812、－0.612， P<0.05)。低氧诱导因子-1α(HIF-1α)是miR-411-3p的靶基因。miR-NC组细胞HIF-1α表达水平(1.21±0.21)明显高于miR-411-3p组细胞HIF-1α表达水平(0.48±0.11)，差异有统计学意义( t＝6.931， P<0.05)。脂多糖(LPS)处理的人中耳上皮细胞miR-411-3p表达水平(0.76±0.12)明显低于未处理细胞(1.07±0.09)，差异有统计学意义( t＝5.027， P<0.05)。LPS处理的人中耳上皮细胞HIF-1α表达水平(1.67±0.18)明显高于未处理细胞(0.97±0.15)，差异有统计学意义( t＝7.262， P<0.05)。 结论:miR-411-3p在分泌性中耳炎患者中表达显著下调，通过介导HIF-1α促进炎性因子释放，进而促进中耳炎的发生。

目的:探讨黑色素瘤中长链非编码RNA（lncRNA）MTATP6P1的表达及其靶向miRNA-411-5p（miR-411-5p）对黑色素瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:从肿瘤相关lncRNA数据库（TANRIC数据库，更新时间2021年7月）中收集461例黑色素瘤组织和癌旁组织（距肿瘤边缘2 cm以上）样本，比较两组MTATP6P1的表达。采用生物信息学软件lncRNA Disease v2.0预测MTATP6P1可能存在结合位点的微RNA（miRNA）。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测黑色素瘤细胞A-375、WM266-4、VMM5A、A2058和正常人表皮黑色素细胞PIG1中MTATP6P1的相对表达量，将MTATP6P1相对表达量最低的细胞分为MTATP6P1组（转染MTATP6P1过表达质粒）和NC组（转染空白质粒），进行后续实验。采用CCK-8法检测细胞增殖能力；划痕实验检测细胞迁移能力；Transwell实验检测细胞侵袭能力；双荧光素酶报告基因实验检测MTATP6P1和miR-411-5p的靶向关系；蛋白质印迹法检测细胞内ERK信号通路相关蛋白的表达。结果:黑色素瘤组织和癌旁组织中MTATP6P1相对表达量分别为9.82±0.58和11.56±0.16，黑色素瘤组织中MTATP6P1表达水平低于癌旁组织（ t＝9.56， P＝0.009）。正常人表皮黑色素细胞PIG1以及黑色素瘤细胞A-375、WM266-4、VMM5A、A2058中MTATP6P1相对表达量分别为1.01±0.13、0.12±0.02、0.66±0.04、0.39±0.07、0.49±0.05，黑色素瘤细胞中MTATP6P1相对表达量均低于PIG1细胞（均 P<0.05），取相对表达量最低的A-375细胞进行后续实验。MTATP6P1组和NC组A-375细胞MTATP6P1相对表达量分别为14.83±1.67和1.02±0.30（ t＝8.13， P<0.001）。培养16、24、32、40 h后，MTATP6P1组细胞增殖能力均低于NC组（均 P<0.05）。MTATP6P1组和NC组A-375细胞划痕愈合率分别为（26±7）%和（55±4）%，MTATP6P1组划痕愈合率低于NC组（ t＝3.48， P＝0.009）。MTATP6P1组和NC组A-375侵袭细胞数分别为（32±12）个和（116±17）个，MTATP6P1组侵袭细胞数低于NC组（ t＝4.11， P＝0.006）。双荧光素酶报告基因实验结果显示，MTATP6P1与miR-411-5p存在靶向关系。MTATP6P1组和NC组A-375细胞中miR-411-5p相对表达量分别为1.04±0.16和5.37±0.68，MTATP6P1组miR-411-5p表达水平低于NC组（ t＝6.20， P<0.001）。MTATP6P1组A-375细胞中ERK信号通路蛋白p-Ras、p-Raf、p-MEK1、p-RSK、AP-1表达均低于NC组。 结论:MTATP6P1可通过靶向miR-411-5p抑制黑色素瘤A-375细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

目的:探讨长链非编码RNA（lncRNA）DHRS4-AS1与骨肉瘤患者无病生存的关系及其体外对骨肉瘤细胞增殖和迁移影响的机制。方法:收集GEPIA数据库建库以来骨肉瘤患者DHRS4-AS1转录组水平和生存情况数据，依据DHRS4-AS1转录组中位水平将患者分为DHRS4-AS1高表达组和低表达组，各59例，采用Kaplan-Meier法分析两组无病生存情况。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测DHRS4-AS1在骨肉瘤细胞株MG-63、HOS、143B、U-2OS、Saos2及正常成骨细胞株hFOB1.19中的表达，选择DHRS4-AS1表达水平最低的骨肉瘤细胞株进行后续实验。将载有DHRS4-AS1序列的质粒和载有阴性对照序列的质粒分别转染至选取的骨肉瘤细胞中，分别为DHRS4-AS1组和对照组。CCK-8法检测各组细胞增殖情况，以吸光度值为细胞增殖能力；细胞划痕实验检测各组细胞迁移情况。采用生物信息学网站starBase V2.0预测DHRS4-AS1的靶基因，双荧光素酶报告基因法验证DHRS4-AS1与靶基因的靶向关系。采用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测对照组和DHRS4-AS1组骨肉瘤细胞靶基因及下游基因表达水平。结果:生存分析显示，GEPIA数据库中DHRS4-AS1高表达组骨肉瘤患者无病生存优于DHRS4-AS1低表达组（ P<0.001）。与正常成骨细胞hFOB1.19细胞相比，各骨肉瘤细胞中DHRS4-AS1的表达水平均低（均 P<0.01），其中U-2OS细胞中DHRS4-AS1的表达水平最低（ P<0.001）。DHRS4-AS1组U-2OS细胞培养1、2、3、4 d后细胞增殖能力均较对照组降低（均 P<0.05）。DHRS4-AS1组U-2OS细胞迁移率低于对照组[（31±6）%比（63±4）%， t=4.38， P=0.005]。starBase V2.0网站预测DHRS4-AS1与miRNA-411-3p（miR-411-3p）互补结合；双荧光素酶报告基因实验显示，miR-411-3p过表达降低了野生型DHRS4-AS1报告基因的荧光素酶活性（ P<0.001），但对突变型DHRS4-AS1报告基因荧光素酶活性无影响（ P>0.05）。qRT-PCR检测显示，与对照组相比，DHRS4-AS1组U-2OS细胞miR-411-3p相对表达量低（0.22±0.06比1.06±0.23， t=3.55， P=0.012），转移抑制因子MTSS1 mRNA相对表达量高（5.58±1.03比1.06±0.22， t=4.28， P=0.005）；蛋白质印迹法检测显示，MTSS1表达升高，细胞增殖表型蛋白CDK3、cyclin C和细胞迁移表型蛋白ZEB2、KLF8表达水平均低。 结论:lncRNA DHRS4-AS1高表达骨肉瘤患者无病生存较好，其在骨肉瘤细胞株中低表达。DHRS4-AS1可能通过靶向下调骨肉瘤细胞miR-411-3p的表达，促进MTSS1基因表达，抑制细胞增殖和迁移。

目的 分析子痫前期(preeclampsia,PE)孕妇血清微小核糖核酸-411-5p(miR-411-5p)和微小核糖核酸-485-5p(miR-485-5p)水平检测联合超声血流指标对围生儿结局的预测价值研究.方法 选择2020年1月～2021年12月在北京核工业医院产科建卡并行剖宫产术的88例PE孕妇为研究对象(PE组),另选取同期因其它各种原因剖宫产分娩的正常孕妇90例作为对照组,比较两组间超声血流指标搏动指数(pulsitility index,PI)、阻力指数(resistance index,RI)差异,实时荧光定量 PCR(real time fluorescent quantitative PCR,qRT-PCR)法检测两组间血清 miR-411-5p 和 miR-485-5p水平并比较,根据PE患者围生儿结局的不同分为结局良好组与结局不良组,比较组间PI,RI,miR-411-5p和miR-485-5p 的差异,采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线法分析 PI,RI,miR-411-5p,miR-485-5p以及联合检测对PE患者围生儿不良结局的预测作用.结果 PE组孕妇RI(0.79±0.08),PI值(1.82±0.08)高于对照组(0.66±0.06,1.38±0.15),血清 miR-411-5p(0.32±0.09),miR-485-5p(0.26±0.03)水平低于对照组(1.01±0.08,1.02±0.09),差异具有统计学意义(t=12.283,24.339,54.091,75.231,均 P＜0.001);结局不良组 PE 患者 RI(0.83±0.08),PI(1.86±0.09)值高于结局良好组(0.70±0.07,1.71±0.07),血清 miR-411-5p(0.27±0.02),miR-485-5p(0.24±0.02)水平低于结局良好组(0.45±0.04,0.31±0.04),差异具有统计学意义(t=11.545,12.428,37.840,14.716,均P＜0.001).超声血流指标RI,PI预测PE患者围生儿不良结局的曲线下面积为0.838(敏感度为90.8％,特异度为65.2％)、0.758(敏感度为50.8％,特异度为91.3％);血清miR-411-5p,miR-485-5p预测PE患者围生儿不良结局的曲线下面积为0.830(敏感度为90.8％,特异度为73.9％)、0.769(敏感度为95.4％,特异度为61.9％),四者联合检测预测PE患者围生儿不良结局的曲线下面积为0.976(敏感度为98.5％,特异度为91.3％).结论 PE孕妇血清miR-411-5p和miR-485-5p水平降低,血清miR-411-5p和miR-485-5p水平联合超声血流指标PI,RI对PE孕妇围生期胎儿结局具有预测作用.

目的:研究miR-155的表达与FLT3-ITD+急性髓系白血病细胞系药物敏感性的关系及潜在的调控机制.方法:通过CRISPR/Cas9基因编辑工具在FLT3-ITD+AML细胞系MV411中实现miR-155编码基因敲除,筛选单克隆细胞,PCR及Sanger测序鉴定单克隆细胞的基因型,实时荧光定量逆转录PCR鉴定成熟miRNA的表达水平.MTT法计算半数抑制率,比较MV411细胞对多柔比星、奎扎替尼以及米哚妥林的药物敏感性.转录组测序分析miR-155敲除后MV411细胞mRNA水平的变化,基因集富集分析获得miR-155敲除后的信号通路的变化水平,Western blot验证信号通路关键分子的表达.结果:通过PCR初筛和Sanger测序获得了4个基因敲除的杂合子和1个基因插入的杂合子.实时荧光定量逆转录PCR结果显示,这些单克隆细胞中成熟miR-155的表达显著低于野生型克隆.MTT结果显示,与野生型相比,miR-155基因敲除后MV411细胞对多种抗FLT3-ITD+AML的药物敏感性有了显著增加.RNA测序显示miR-155敲除后mTOR信号通路和Wnt信号通路受到抑制.Western blot结果显示,信号通路关键分子p-mTOR、Wnt5α、β-catenin的表达下调.结论:miR-155敲除后能显著提升MV411细胞对多柔比星、奎扎替尼和米哚妥林的药物敏感性,这与包括mTOR及Wnt信号通路在内的多条信号通路的抑制有关.

目的 探讨微小RNA-411(miR-411)对滋养层细胞增殖、迁移及侵袭的影响及机制.方法 选取2019年2月-2021年4月于上海市闵行区中心医院诊治的34例子痫前期患者为研究对象,另选取同时期住院正常的22例孕妇为对照组.实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测22例正常孕妇胎盘组织和34例子痫前期患者胎盘组织中miR-411和围脂滴蛋白2(PLIN2)基因mRNA表达水平.转染miR-411抑制剂或PLIN2过表达载体至人绒毛膜滋养层细胞(HTR-8/SVneo),构建miR-411表达抑制或过表达PLIN2的HTR-8/SVneo细胞.四甲基噻唑蓝染色法(MTT)、克隆形成实验、Transwell及蛋白印迹法分别检测抑制miR-411表达或过表达PLIN2对HTR-8/SVneo细胞存活率、克隆形成、迁移和侵袭及P21、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、E-钙粘附素(E-cadherin)及PLIN2蛋白表达的影响.双荧光素酶报告基因实验验证miR-411与PLIN2调控关系.结果 子痫前期患者胎盘组织中miR-411(0.32±0.03)表达显著低于正常孕妇胎盘组织(1.01±0.10),而PLIN2基因mRNA(2.15± 0.20 vs.0.93±0.09)表达显著升高,差异均有统计学意义(1=37.850、26.841,均P＜0.05).抑制miR-411表达或过表达PLIN2后,HTR-8/SVneo细胞存活率、克隆形成数、迁移和侵袭细胞数及MMP-2蛋白表达降低(均P＜0.05),PLIN2、P21和E-cadherin蛋白表达升高(均P＜0.05).miR-411在HTR-8/SVneo细胞中负调控PLIN2表达.抑制PLIN2表达降低了抑制miR-411表达对HTR-8/SVneo细胞增殖、迁移及侵袭的影响.结论 抑制miR-411表达可能通过靶向上调PLIN2表达抑制滋养层细胞的增殖、迁移及侵袭.

目的 探究微RNA 21(miR-21)联合糖类抗原19-9(CA19-9)检测诊断胰腺癌的临床价值.方法 回顾性选择2013年2月至2017年10月间于宜兴市人民医院和中国人民解放军第四一一医院确诊的胰腺癌患者66例(胰腺癌组),并选择同时期、同年龄段的良性胰腺疾病患者66例(良性疾病组)以及健康体检者66例(对照组).比较三组患者miR-21和CA19-9的水平差异,并以临床诊断作为金标准,绘制受试者工作曲线(ROC)并评价miR-21和CA19-9单独和联合诊断胰腺癌的诊断效能(包括诊断准确率、敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值等).结果 三组患者的miR-21和CA19-9水平间有显著的统计学差异(P <0.05);其中,胰腺癌组患者的miR-21和CA19-9水平均显著高于对照组和良性疾病组,差异均有统计学意义(P <0.05).ROC曲线显示,miR-21和CA19-9联合诊断胰腺癌的曲线下面积(AUC)显著高于miR-21和CA19-9,其中,miR-21的最佳截点为5.78×105拷贝/μl,CA19-9的最佳截点为46.85 U/L.应用上述最佳截点,miR-21和CA19-9联合诊断胰腺癌的敏感度和阳性预测值均明显高于miR-21和CA19-9单独诊断(P <0.05).结论 miR-21联合CA19-9检测诊断胰腺癌具有较高价值,其中miR-21≥5.78×105拷贝/μl和/或CA19-9≥46.85 U/L可以作为胰腺癌筛查的最佳截点.

目的 探讨绝经后骨质疏松症(postmenopausal osteoporosis ,PMOP)肾阴虚证miRNA的表达谱特征,及对差异表达的miRNA进行生物信息学分析.方法 随机选择绝经后骨质疏松症受试者,中医辨证,分为3组:PMOP肾阴虚组3例,PMOP肾阳虚组3例,健康绝经后妇女3例作为对照组.采用人miRNA芯片检测外周血单个核细胞miRNA的表达水平.肾阴虚证组分别与其他两组比较,筛选共同的差异表达基因,实时荧光定量PCR验证芯片结果,并对差异表达的miRNA进行pathway分析及靶基因预测.结果 肾阴虚证组与对照组、肾阳虚证组两组比较,筛选出20条共同差异表达miRNA;实时定量PCR验证hsa-miR-411-5p、hsa-miR-143-3p、 hsa-miR-95-3p表达的结果与芯片结果相符;pathway分析结果显示,这些差异miRNA主要参与代谢通路、癌症通路、Rap1信号通路、粘着斑信号通路、PI3K-Akt、MAPK信号通路、钙离子信号通路、内质网蛋白加工、cGMP-PKG信号通路、Ras信号通路、Wnt信号通路的调控;结合多个数据库对差异表达的miRNA进行靶基因预测,最终筛选出9个靶基因(RC3H1、SOX11、FUT4、GABRA4、NUFIP2、ONECUT2、PHF20、PURB、ZNF148).结论 建立了PMOP肾阴虚证的miRNA基因表达谱,且这20个差异表达的miRNA可能通过调控PI3K-Akt、MAPK、Wnt等与骨代谢相关信号通路参与PMOP肾阴虚证的发生发展过程.

目的 检测肝癌患者血清中miRNA的表达水平.方法 提取肝癌患者血清中的miRNA进行芯片杂交测序,并用qRT-PCR的方法比较确定患者miRNA与健康对照的表达水平变化,检测手术前手术后肝癌患者血清中相关miRNA的表达水平变化.结果 与健康对照组相比,肝癌患者血清中hsa-miR-206、hsa-miR-20a-3p、hsa-miR-411-5p、hsa-miR-122和has-miR-423水平明显升高,术后hsa-miR-206、hsa-miR-411-5p、hsa-miR-122和has-miR-423水平显著降低;hsa-miR-26a-5p、hsa-miR-455-5p、hsa-miR-30e-3p、hsa-let-7f-5p和hsa-miR-6852水平显著降低,术后hsa-miR-26a-5p和hsa-miR-455-5p水平显著回升.结论 血清miRNA可作为肝癌诊断的依据,并能反映疾病发展过程.

目的 探讨血清miR-411-5p在乳腺癌骨转移患者中的表达,并进一步研究其诊断作用.方法 收集广东省东莞市塘厦医院和南方医科大学第三附属医院在2015年7月至2017年6月收治的60例乳腺癌骨转移患者和60例乳腺癌非骨转移患者的血清样本,实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测血清miR-411-5p在乳腺癌患者中的表达,分析其与乳腺癌骨转移患者骨转移程度和骨痛程度的关系,受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)分析血清miR-411-5p表达在乳腺癌骨转移患者中的诊断作用.结果 乳腺癌骨转移患者血清中miR-411-5p的表达显著低于乳腺癌非骨转移患者(P<0.001);血清中miR-411-5p的表达水平越低,乳腺癌患者骨转移程度及骨痛程度越高;ROC曲线结果显示血清中miR-411-5p的表达诊断乳腺癌骨转移的曲线下面积(AUC)为0.941(95％CI:0.891～0.991),当血清中miR-411-5p相对表达水平为1.84时,其敏感度和特异性分别为87.5％和91.7％.结论 血清中miR-411-5p在乳腺癌骨转移患者中的表达水平降低,能够作为乳腺癌患者骨转移潜在的诊断标志物.