目的:探讨miRNA-188-5p（miR-188-5p）在皮肤鳞状细胞癌（鳞癌）组织和细胞中的表达，分析其表达下调对皮肤鳞癌细胞增殖和侵袭能力的影响。方法:2012年11月至2018年10月在河南省新乡医学院第一附属医院收集50例手术切除的皮肤鳞癌组织及50例癌旁正常皮肤组织。实时荧光定量PCR（qPCR）检测皮肤鳞癌组织、癌旁正常皮肤组织、皮肤鳞癌细胞系SCL-1、A431、HSC-5和人永生化角质形成细胞株HaCaT细胞中miR-188-5p的表达。培养的A431和HSC-5细胞分别分为2组：miR-188-5p抑制剂组和阴性对照组，对转染miR-188-5p抑制剂的细胞和阴性对照组细胞，通过qPCR检测miR-188-5p的相对表达（2 -△△Ct），并以CCK8法和Transwell小室分别检测各组细胞的增殖活性和侵袭能力。双荧光素酶报告实验检测miR-188-5p和PTEN的相互作用，Western印迹法检测PTEN、总Akt（t-Akt）和磷酸化Akt（p-Akt）的表达。两独立样本比较采用 t检验。 结果:皮肤鳞癌组织中miR-188-5p的相对表达（5.213 ± 3.138）显著高于癌旁正常皮肤组织（1.010 ± 0.364， t = 9.187， P < 0.001）。SCL-1、A431和HSC-5细胞中miR-188-5p的表达（3.858 ± 0.163、7.068 ± 0.262和4.572 ± 0.413）均显著高于HaCaT细胞（1.079 ± 0.300， t = 17.890、21.110和8.737，均 P < 0.05）。与阴性对照组相比，miR-188-5p抑制剂组A431和HSC-5细胞miR-188-5p表达显著下调（均 P < 0.01），细胞增殖和侵袭能力下降（均 P < 0.05）。双荧光素酶报告实验显示，miR-188-5p表达下调显著上调A431和HSC-5细胞中PTEN的表达，但抑制p-Akt的表达。 结论:miR-188-5p在皮肤鳞癌组织和细胞中高表达，且miR-188-5p表达下调可能通过调控PTEN/Akt途径，抑制皮肤鳞癌细胞增殖活性和侵袭能力。

目的:观察微小RNA(miRNA，miR)-149靶向P-糖蛋白(P-gp)对皮肤基底细胞癌阿霉素耐药的影响。方法:选取2014年8月到2018年8月河南省人民医院皮肤科收治的74例皮肤基底细胞癌患者作为研究对象。根据患者对顺铂化疗的敏感性程度，分为敏感组和耐药组。采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析两组肿瘤组织中miR-149表达水平。采用脂质体法转染miR-149模拟物和对照miRNA至皮肤基底细胞株癌细胞株A431，分别作为miR-149组和对照组。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色分析顺铂对两组细胞增殖能力的影响。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-149的靶基因；采用蛋白质印迹法(Western blot)分析肿瘤组织中靶基因的表达和miR-149对靶基因表达的影响。组间数据比较采用 t检验。 结果:耐药组患者肿瘤组织miR-149表达水平(0.48±0.18)较敏感组miR-149表达水平(1.21±0.23)显著下降，差异有统计学意义( t＝3.126， P<0.05)。CCK-8和EdU染色结果显示，经顺铂处理后，miR-149组细胞增殖能力(0.59±0.17)较对照组细胞(1.27±0.21)明显下降，差异有统计学意义( t＝3.010， P<0.05)。miR-149组细胞EdU染色阳性率[(35.56±6.90)%]较对照组细胞[(79.32±8.01)%]明显下降，差异有统计学意义( t＝3.399， P<0.05)。生物信息学和双荧光素酶报告基因显示P-gp是miR-149靶基因。耐药组肿瘤组织中P-gp蛋白表达水平(1.24±0.19)明显高于敏感组肿瘤组织(0.61±0.18)，差异有统计学意义( t＝2.091， P<0.05)。miR-149组细胞P-gp蛋白表达水平(0.57±0.18)较对照组细胞(1.97±0.32)明显增加，差异有统计学意义( t＝2.581， P<0.05)。 结论:miR-149通过调节P-gp蛋白的表达，介导了皮肤基底细胞癌顺铂化疗耐药。

目的:研究长链非编码生长停滞特异性蛋白6反义RNA1（lncRNA DLX6-AS1）对皮肤鳞状细胞癌细胞A431增殖、迁移和侵袭的影响及潜在机制。方法:以双荧光素酶报告系统实验验证lncRNA DLX6-AS1与miR-16-5p、miR-16-5p与核酪蛋白激酶和细胞周期蛋白依赖性激酶底物1（NUCKS1）mRNA的靶向结合。通过单独或联合转染lncRNA DLX6-AS1抑制物（si-DLX6-AS1）、miR-16-5p抑制物（anti-miR-16-5p）、NUCKS1抑制物（si-NUCKS1）和相应对照（DLX6-AS1-NC、anti-miR-NC、NUCKS1-NC）调控A431细胞目的基因的表达，采用qRT-PCR检测A431细胞lncRNA DLX6-AS1、miR-16-5p、NUCKS1 mRNA的表达；Western印迹检测NUCKS1、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）抗体、基质金属蛋白酶（MMP）2和MMP9蛋白水平；CCK8实验检测细胞存活率；Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。两组间比较采用独立样本 t检验。 结果:双荧光素酶报告系统实验显示，lncRNA DLX6-AS1靶向结合miR-16-5p，miR-16-5p靶向结合NUCKS1。si-DLX6-AS1组A431细胞miR-16-5p表达水平（3.01 ± 0.31）高于DLX6-AS1-NC组（1.02 ± 0.10， t = 18.33， P < 0.001）；NUCKS1、Cyclin D1、MMP2和MMP9蛋白相对水平均低于DLX6-AS1-NC组（均 P < 0.05），细胞存活率、迁移和侵袭细胞数亦低于DLX6-AS1-NC组（均 P < 0.05）。si-NUCKS1组A431细胞NUCKS1、Cyclin D1、MMP2和MMP9蛋白相对水平均低于NUCKS1-NC组（均 P < 0.05），细胞存活率、迁移和侵袭细胞数亦低于NUCKS1-NC组（均 P < 0.05）。低表达lncRNA DLX6-AS1后，anti-miR-16-5p组A431细胞miR-16-5p表达（0.34 ± 0.04）低于anti-miR-NC组（1.00 ± 0.12， t = 15.65， P < 0.05），Cyclin D1、MMP2和MMP9相对表达水平均高于anti-miR-NC组（均 P < 0.05），细胞存活率、迁移和侵袭细胞数均高于anti-miR-NC组（均 P < 0.05）。低表达lncRNA DLX6-AS1、敲减miR-16-5p后，si-NUCKS1组A431细胞NUCKS1、Cyclin D1、MMP2和MMP9蛋白相对水平均低于NUCKS1-NC组（ P < 0.05），细胞存活率、迁移和侵袭细胞数均低于NUCKS1-NC组（ P < 0.05）。 结论:lncRNA DLX6-AS1可通过靶向miR-16-5p/NUCKS1调控A431细胞增殖、迁移和侵袭，lncRNA DLX6-AS1可能是治疗皮肤鳞状细胞癌的潜在分子靶点。

目的:探讨长链非编码RNA肿瘤蛋白53靶基因1(lncRNA TP53TG1)在人皮肤基底癌细胞中的表达及其与增殖的关系。方法:人正常皮肤细胞(HaCaT)和人皮肤基底细胞癌TE 354.T和A431细胞系采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术分析lncRNA TP53TG1表达水平。选取高表达的皮肤基底细胞癌TE 354.T细胞作为研究对象，采用慢病毒感染TE 354.T细胞，建立lncRNA TP53TG1过表达细胞系和对照细胞，分别命名为对照组和TP53TG1组。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和克隆形成实验分析对照组和TP53TG1组细胞的增殖能力；采用蛋白质免疫印迹分析两组细胞增殖指标细胞核增殖抗原(Ki-67)和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达水平；采用7-氨基放线菌素D(7-AAD)试剂盒测定两组细胞的增殖活性；在裸鼠建立体外移植瘤模型，分析两组细胞形成肿瘤的体积和重量；采用实时荧光定量PCR分析lncRNA TP53TG1下游与细胞增殖相关的基因水平。组间计量数据比较采用 t检验。 结果:人正常皮肤细胞(HaCaT) lncRNA TP53TG1表达水平(0.83±0.34)明显低于人皮肤基底细胞癌TE 354.T和A431细胞系表达水平(1.65±0.20、1.58±0.13)，差异统计学意义( t＝5.579、5.503， P<0.05)。TP53TG1组细胞24 h吸光度值(2.06±0.12)明显高于对照组细胞(1.50±0.08)，差异有统计学意义( t＝10.070， P<0.05)。TP53TG1组细胞14 d克隆形成率[(81.86±8.71)%]明显高于对照组细胞[(54.85±6.79)%]，差异有统计学意义( t＝6.469， P<0.05)。TP53TG1组细胞7-AAD阳性率[(65.57±5.62)%]明显高于对照组细胞[(37.43±4.50)%]，差异有统计学意义( t＝10.340， P<0.05)。TP53TG1组细胞Ki-67和PCNA蛋白表达水平(1.31±0.14、1.38±0.15)明显高于对照组细胞(0.70±0.08、0.72±0.08)，差异有统计学意义( t＝10.240、10.150， P<0.05)。TP53TG1组细胞小鼠皮下形成肿瘤的体积和质量[(986.71±81.64) mm 3、(3.45±0.36) g]明显高于对照组细胞[(699.29±53.62) mm 3、(2.15±0.26) g]，差异有统计学意义( t＝7.786、7.709， P<0.05)。TP53TG1组细胞微小RNA(miR)-33a-5p和miR-33b(0.72±0.10、0.65±0.06)明显高于对照组细胞(0.99±0.30、1.03±0.12)，差异有统计学意义( t＝2.227、7.589， P<0.05)。 结论:lncRNA TP53TG1在人皮肤基底癌细胞中的表达显著下降。过表达lncRNA TP53TG1可显著抑制人皮肤基质癌细胞的增殖，可能与miR-33a-5p和miR-33b表达有关。

目的:探索晚期膀胱癌发展过程中与差预后相关的RNA，构建一个长链非编码RNA-微小RNA-mRNA(lncRNA-miRNA-mRNA)网络并加以实验验证，以研究其在晚期膀胱癌发展中的分子调控作用。方法:收集肿瘤基因组图谱(TCGA)和NCBI-GEO数据库431例和492例膀胱癌患者组织样本，Ⅲ、Ⅳ期、高级别、高级别≥病理亚分期2期(pT2期)为晚期膀胱癌，Ⅱ、Ⅰ期、低级别为早期膀胱癌；进行差异表达分析、权重基因共表达网络分析、功能富集分析、生存分析、miRNA靶向预测和Pearson相关分析。利用可视化软件构建网络。统计学方法使用 t检验、Fisher精确检验、Pearson相关分析、Log-Rank检验比较组间差异，BH法计算错误发现率校正 P值，以FDR<0.05、 P<0.05为差异统计学意义。随后，收集22例膀胱癌患者组织样本，高级别肌层浸润性≥T2期、高级别或浸润性TaT1期为晚期膀胱癌，低级别非浸润性TaT1为早期膀胱癌；进行实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)、免疫印迹法和免疫组织化学实验。组间比较采用 t检验。 结果:获得相似表达模式的8个长链非编码RNA、28个mRNA和8个微小RNA，并以此构建出核心lncRNA-miRNA-mRNA调控网络，该网络与晚期膀胱癌的侵袭、进展、转移及差预后相关。晚期膀胱癌组织Ⅵ型胶原α1(COL6A1)、Ⅱ型钙粘附蛋白(CDH11)、金属蛋白酶和血小板反应蛋白模体Ⅰ型(ADAMTS12)、长链非编码RNA-01705(LINC01705)、长链非编码RNA-01929(LINC01929 RNA)相对内参表达倍数值高于早期膀胱癌组织(-1.213比-4.212， t＝4.170， P<0.01；-10.75比-14.64， t＝4.602， P<0.01；-7.594比-11.93， t＝5.152， P<0.01；-10.18比16.55， t＝4.493， P<0.01；-11.62比-15.08， t＝2.869， P<0.05)，差异均有统计学意义。晚期膀胱癌组织COL6A1、CDH11、ADAMTS12蛋白平均吸光度值高于早期膀胱癌组织(0.213 8比0.090 9， t＝2.302， P<0.05；0.183 9比0.078 9， t＝5.992， P<0.01；0.279 1比0.147 8， t＝4.527， P<0.01)，差异均有统计学意义。膀胱癌组织人-微小RNA-6875-5p(hsa-miR-6875-5p)、人-微小RNA-6784-5p(hsa-miR-6784-5p)、人-微小RNA-128-2(hsa-miR-128-2) RNA相对内参表达倍数值低于正常组织(-15.78比-12.41， t＝4.995， P<0.01；-15.53比-12.68， t＝3.226， P<0.05；-13.79比-11.43， t＝3.400， P<0.01)，差异均有统计学意义。膀胱癌细胞系T24中COL6A1蛋白相对内参灰度比值低于正常膀胱上皮细胞系SV-HUV-1(0.677比1.000， t＝7.584， P<0.01)，差异有统计学意义；膀胱癌细胞系T24、EJ CDH11蛋白相对内参灰度比值低于正常膀胱上皮细胞系SV-HUV-1(0.656比1.000， t＝6.056， P<0.01)，差异有统计学意义。 结论:LncRNA-miRNA-mRNA网络在晚期膀胱癌的发展中起关键作用。

目的:探讨原苏木素A调控结直肠癌细胞生物学行为及机制。方法:结直肠癌SW480细胞分别用不同浓度(0、80、160、320、640和1 280 μmol/L)原苏木素A处理筛选有效抑制浓度。SW480细胞根据转染载体分成原苏木素A+Anti-miR-NC组(转染inhibitor control后1 280 μmol/L的原苏木素A处理)、原苏木素A+Anti-miR-431组(转染miR-431 inhibitor后1 280 μmol/L的原苏木素A处理)，细胞计数试剂-8法检测细胞增殖，克隆形成实验检测细胞克隆形成能力，Transwell小室检测细胞迁移和侵袭，流式细胞术检测细胞凋亡差异，免疫印迹法检测细胞中E-钙粘蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)蛋白表达，实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测微小核糖核酸-431(miR-431)表达。两组间比较行 t检验，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD- t检验。 结果:320、640和1 280 μmol/L原苏木素A处理后SW480细胞吸光度( A)值显著低于0、80、160 μmol/L(0.50±0.04、0.37±0.03、0.28±0.02、0.65±0.06、0.63±0.04和0.62±0.05， F＝120.991， P<0.01)。320、640和1 280 μmol/L原苏木素A处理后SW480细胞 A值显著降低。320、640、1 280 μmol/L原苏木素A处理后的SW480细胞克隆形成数目(65.01±5.17、49.18±4.69、33.05±4.56比78.62±4.11， F＝161.813， P<0.01)及bcl-2蛋白表达(0.41±0.04、0.29±0.02、0.20±0.03比0.59±0.05， F＝189.500， P<0.01)显著低于0 μmol/L原苏木素A处理组，细胞凋亡率[(8.62±0.52)%、(14.78±1.25)%、(21.08±1.73)%比(4.15±0.16)%， F＝403.486， P<0.01]和bax蛋白表达(0.28±0.03、0.37±0.02、0.48±0.05比0.18±0.03， F＝125.298， P<0.01)显著高于0 μmol/L原苏木素A处理组。320、640、1 280 μmol/L原苏木素A处理后的SW480细胞迁移数目(172.42±14.97、130.89±12.08、105.50±10.82比224.56±31.58， F＝65.715， P<0.01)、侵袭数目(150.43±12.94、114.98±11.33、82.02±9.98比182.34±15.76， F＝105.513， P<0.01)和Vimentin蛋白表达(0.42±0.04、0.30±0.03、0.21±0.03比0.65±0.05， F＝221.479， P<0.01)显著低于0 μmol/L原苏木素A处理组。320、640、1280 μmol/L原苏木素A处理后的SW480细胞miR-431水平高于0 μmol/L原苏木素A处理组(1.56±0.10、1.92±0.12、2.45±0.18、1.00±0.12， F＝188.136， P<0.01)。原苏木素A+Anti-miR-431组SW480细胞 A值(0.45±0.04比0.29±0.03)、克隆形成数目(47.04±4.11比34.25±2.78)、bcl-2蛋白表达(0.45±0.05比0.19±0.02)、细胞迁移(165.24±13.06比104.23±9.84)、侵袭数目(147.20±13.94比81.96±8.54)和Vimentin表达(0.38±0.03比0.20±0.02)高于原苏木素A+Anti-miR-NC组，细胞凋亡率[(12.05±1.23)%比(21.84±1.66)%]、细胞中E-cadherin(0.32±0.04比0.56±0.05)和bax蛋白表达(0.24±0.05比0.46±0.04)低于原苏木素A+Anti-miR-NC组，差异有统计学意义( t＝9.600、7.733、14.216、14.484、10.307、11.193、11.972、11.245、14.977， P<0.01)。 结论:原苏木素A可能通过上调miR-431调控SW480细胞生物学行为。

Pathological myocardial hypertrophy is a common early clinical manifestation of heart failure,with noncoding RNAs exerting regulatory influence.However,the molecular function of circular RNAs(circRNAs)in the progression from cardiac hypertrophy to heart failure remains unclear.To uncover functional circRNAs and identify the core circRNA signaling pathway in heart failure,we construct a global triple network(microRNA,circRNA,and mRNA)based on the competitive endogenous RNA(ceRNA)theory.We observe that cardiac hypertrophy-related circRNA(circRNA CHRC),within the ceRNA network,is down-regulated in both transverse aortic constriction mice and Ang-Ⅱ-treated primary mouse cardiomyocytes.Silencing circRNA CHRC increases cross-sectional cell area,atrial natriuretic peptide,and β-myosin heavy chain levels in primary mouse cardiomyocytes.Further screening shows that circRNA CHRC targets the miR-431-5p/KLF15 axis implicated in heart failure progression in vivo and in vitro.Immunoprecipitation with anti-Ago2-RNA confirms the interaction between circRNA CHRC and miR-431-5p,while miR-431-5p mimics reverse Klf15 activation caused by circRNA CHRC over-expression.In summary,circRNA CHRC attenuates cardiac hypertrophy via sponging miR-431-5p to maintain the normal level of Klf15 expression.

目的:探讨miR-27a对皮肤鳞状细胞癌(CSCC)细胞增殖、侵袭、迁移的影响及其与叉头框Gl(FOXG1)的靶向关系.方法:收集 30 例 CSCC 组织及 30 例正常皮肤组织.培养 A431 细胞,将 miR-NC、miR-27a mimics、si-NC、si-miR-27a、Scramble、si-FOXG1、Vector、OE-FOXG1 质粒分别转染至细胞,记为 miR-NC 组、miR-27a 组、si-NC 组、si-miR-27a 组、Scramble 组、si-FOXG1 组、Vector 组及 FOXG1 组;将 si-FOXG1、Scramble 质粒分别转染至 miR-27a 组细胞,记为 miR-27a+Scramble 组、miR-27a+si-FOXG1组.四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞侵袭、迁移能力,荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞、组织中FOXG1基因mRNA及miR-27a表达水平,Western blot检测细胞或组织FOXG1蛋白表达水平,TargetScan在线网站预测miR-27a与FOXG1结合位点,双荧光素酶报告基因实验验证miR-27a与FOXG1的靶向关系.结果:CSCC组织FOXG1基因mRNA、miR-27a表达水平高于正常皮肤组织(P＜0.05),CSCC组织FOXG1基因mRNA、miR-27a表达水平呈正相关(r=0.801,P=0.000).上调miR-27a、FOXG1可促进细胞的增殖、侵袭、迁移,沉默miR-27a、FOXG1可抑制细胞的增殖、侵袭、迁移及EMT.下调FOXG1逆转了过表达miR-27a对细胞的增殖、侵袭、迁移的促进作用.miR-27a可正性调控FOXG1表达.结论:miR-27a、FOXG1在CSCC组织中高表达,miR-27a正性调控FOXG1促进CSCC细胞的增殖、侵袭、迁移.

目的:观察结核丸联合常规西药治疗耐阴虚火旺型耐药结核病的临床疗效及对微小核糖核酸-30a-5p(miR-30a-5p)、微小核糖核酸-431(miR-431)表达的影响.方法:采用随机数字表法将98例阴虚火旺型耐药结核病患者分为治疗组、对照组各49例.对照组予以常规西药治疗,治疗组予以结核丸联合常规西药治疗,2组均治疗6个月.比较2组治疗前后中医证候积分、T细胞亚群、炎症因子[白细胞介素-4(IL-4)、C-反应蛋白(CRP)、干扰素-γ(INF-γ)]、miR-30a-5p、miR-431水平,评估2组临床疗效及不良反应发生情况.结果:治疗后,治疗组总有效率97.96%,对照组总有效率85.71%,2组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).治疗后,2组miR-30a-5p、CD3+、CD4+、INF-γ水平及CD4+/CD8+较治疗前升高(P＜0.05),中医证候积分及CD8+、miR-431、IL-4、CRP水平降低(P＜0.05);治疗组治疗后miR-30a-5p、CD3+、CD4+、INF-γ水平及CD4+/CD8+高于对照组(P＜0.05),中医证候积分及CD8+、miR-431、IL-4、CRP水平低于对照组(P＜0.05).2组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:结核丸联合常规西药治疗阴虚火旺型耐药结核病疗效显著,能调节患者miR-30a-5p、miR-431水平,提高免疫功能,减轻炎症反应,安全性较高.

Oral cancer(OC)is the most common form of head and neck cancer.Despite the high incidence and unfavourable patient outcomes,currently,there are no biomarkers for the early detection of OC.This study aims to discover,develop,and validate a novel saliva-based microRNA signature for early diagnosis and prediction of OC risk in oral potentially malignant disorders(OPMD).The Cancer Genome Atlas(TCGA)miRNA sequencing data and small RNA sequencing data of saliva samples were used to discover differentially expressed miRNAs.Identified miRNAs were validated in saliva samples of OC(n=50),OPMD(n=52),and controls(n=60)using quantitative real-time PCR.Eight differentially expressed miRNAs(miR-7-5p,miR-10b-5p,miR-182-5p,miR-215-5p,miR-431-5p,miR-486-3p,miR-3614-5p,and miR-4707-3p)were identified in the discovery phase and were validated.The efficiency of our eight-miRNA signature to discriminate OC and controls was:area under curve(AUC):0.954,sensitivity:86%,specificity:90%,positive predictive value(PPV):87.8%and negative predictive value(NPV):88.5%whereas between OC and OPMD was:AUC:0.911,sensitivity:90%,specificity:82.7%,PPV:74.2%and NPV:89.6%.We have developed a risk probability score to predict the presence or risk of OC in OPMD patients.We established a salivary miRNA signature that can aid in diagnosing and predicting OC,revolutionising the management of patients with OPMD.Together,our results shed new light on the management of OC by salivary miRNAs to the clinical utility of using miRNAs derived from saliva samples.