甲状腺癌是最常见的头颈部恶性肿瘤，发病率呈逐年上升趋势。因此探究甲状腺癌的发生、发展机制，开发甲状腺癌诊断标志物和治疗靶点，对提高甲状腺癌的疗效、延长患者生存时间具有重要意义。前期研究中发现长链非编码RNA（lncRNA）DANCR在甲状腺癌中异常高表达，可通过影响miRNA-185-5p及转录因子SMARCB1来促进富含亮氨酸重复序列激酶2（LRRK2）的表达，间接参与细胞自噬而调控甲状腺癌的发展，有望成为甲状腺癌诊断及治疗的新靶点。文章就lncRNA DANCR在甲状腺癌中的调控机制进行介绍，为甲状腺癌的基础研究和临床诊疗提供新思路。

目的:探讨长链非编码RNA (lncRNA)-抗分化非编码RNA(DANCR)对人脂肪来源间充质干细胞(hASCs)成脂、成骨分化能力的影响。方法:收集中国医学科学院整形外科医院的3例女性患者腹部脂肪抽吸术后废弃的脂肪组织(年龄25～35岁)，分离培养hASCs。构建DANCR敲减与过表达质粒，利用慢病毒感染的方式在hASCs中敲减或过表达DANCR，将实验分为5组：敲减DANCR的实验组(shDANCR1、shDANCR2)、敲减对照组(shScrmble)、过表达DANCR的实验组(pCDH-DANCR)、过表达对照组(pCDH-GFP)，每组样本量为3例。RT-PCR检测上述5组细胞中DANCR的表达量。将上述5组慢病毒感染成功后的hASCs进行成脂或成骨诱导，成脂诱导7 d进行油红O染色鉴定成脂效果，成骨诱导14 d进行茜素红染色鉴定成骨效果，并应用RT-PCR检测成脂分化关键转录因子 PPAR-γ、 C/EBPα、 FABP4、 Adiponectin和脂类合成酶基因 LPL、 GPDH、 FASN、 ACC1和 HSL，以及成骨分化关键转录因子 RUNX2、 OCN、 OPN、 BMP2及 ALP的表达。实验数据均采用均值±标准差表示，2组间数据采用 t检验(Student’s t-test)进行比较， P < 0.05为差异具有统计学意义。 结果:设计的2条shRNA敲减序列均可使hASCs中DANCR的表达显著减少，与对照组比较，DANCR表达量分别下降了86%和74%，差异具有统计学意义( t＝84.07、 P <0.001， t＝75.52、 P <0.001)。构建的DANCR过表达质粒可以有效增加hASCs中DANCR表达量，与对照组相比，增加了(15.067±1.986)倍，差异具有统计学意义( t＝12.24, P<0.001 )。成脂、成骨诱导实验显示，敲减DANCR会引起hASCs成脂诱导后脂滴数量显著多于对照组，2组敲减组与对照组相比，差异均具有统计学意义( t＝17.24、 P <0.001， t＝ 30.68、 P <0.001)，成脂分化关键转录因子 PPAR-γ、 C/EBPα、 FABP4、 Adiponectin以及脂类合成酶的关键基因 LPL、 GPDH、 FASN、 ACC1、 HSL的表达都显著高于对照组；而过表达DANCR后会抑制脂滴的形成及上述基因的表达。同样在成骨诱导中，敲减DANCR后hASCs成骨诱导14 d钙结节形成量显著多于对照组，差异具有统计学意义( t＝15.25、 P <0.001， t＝24.61， P <0.001)，成骨分化关键基因 RUNX2、 OCN、 OPN、 BMP2及 ALP的表达也显著高于对照组，而过表达DANCR后成骨诱导14 d钙结节形成量较对照组显著减少( t＝40.81、 P<0.001)，成骨分化关键转录因子表达水平也会降低。 结论:lncRNA-DANCR能够抑制hASCs的成脂、成骨分化，DANCR表达量的变化影响hASCs的成脂、成骨分化效果，可以作为调控hASCs成脂、成骨定向分化的潜在靶点。

目的 探讨长链非编码(Lnc)RNA分化拮抗非蛋白编码RNA(DANCR)通过调控miR-758-3p对口腔鳞癌(OSCC)细胞增殖、侵袭能力的影响.方法 以实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测体外培养的人口腔上皮细胞和人OSCC 细胞 CAL27、Tca8113、SCC9 细胞中 LncRNA DANCR 与 miR-758-3p 表达.将体外培养的 CAL27 细胞给予 LncRNA DAN-CR 敲低质粒、miR-758-3p mimics、miR-758-3p inhibitor及相应的阴性对照转染后,检测LncRNA DANCR与miR-758-3p表达、细胞增殖活力、凋亡与侵袭能力及相关蛋白表达.于裸鼠背部右腋下皮下接种各组细胞构建OSCC移植瘤模型,饲养3 w后测量各组移植瘤裸鼠肿瘤体积与重量.以双荧光素酶报告基因实验检测CAL27细胞LncRNA DANCR对miR-758-3p的靶向调控.结果 相比人口腔上皮细胞,CAL27、Tca8113、SCC9中LncRNA DANCR表达显著升高,miR-758-3p表达显著降低(P＜0.05).敲低LncRNA DANCR或过表达miR-758-3p可明显降低CAL27细胞增殖活力、侵袭数、波形蛋白(Vimentin)和N-钙黏蛋白(cadherin)表达及移植瘤裸鼠肿瘤体积与重量,明显升高凋亡率、E-cadherin蛋白表达(P＜0.05);下调miR-758-3p表达可明显减弱LncRNA DANCR敲低对CAL27细胞恶性行为的抑制作用(P＜0.05).CAL27细胞中LncRNA DANCR靶向下调miR-758-3p.结论 敲低LncRNA DANCR可通过上调miR-758-3p抑制OSCC细胞增殖、侵袭,并诱导其凋亡.

目的 探讨妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)患者血清长链非编码核糖核酸分化拮抗非蛋白编码 RNA(long noncoding RNA differentiation antagonizing nonprotein coding RNA,LncRNA DANCR)、微小 RNA-33a-5p(miR-33a-5p)水平表达对妊娠结局的预测价值.方法 选取2021年8月～2023年2月于衡水市第四人民医院产检和分娩的154例GDM患者为GDM组,并根据妊娠结局分为良好结局组(n=115)和不良结局组(n=39);同期收集24周葡萄糖耐量试验正常的149例健康孕产妇作为对照组.采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测血清LncRNA DANCR 和 miR-33a-5p 水平;采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析血清 LncRNA DANCR和miR-33a-5p预测GDM患者不良妊娠结局的价值;采用Pearson相关性分析GDM不良妊娠结局患者血清LncRNA DANCR,miR-33a-5p与空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、稳态模式评估法计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)的相关性;Logistic回归分析GDM患者不良妊娠结局的影响因素.结果 GDM组血清LncRNA DANCR水平(0.69±0.15)显著低于对照组(1.01±0.22),miR-33a-5p(1.59±0.40)及不良妊娠结局总发生率(25.34％)显著高于对照组(1.02±0.23,5.36％),差异具有统计学意义(t/x2=14.835,15.140,23.011,均P＜0.05).不良妊娠结局组血清 LncRNADANCR 水平(0.50±0.14)显著低于良好结局组(0.75±0.18),miR-33a-5p(2.00±0.58),FBG(8.97±0.66mmol/L),FINS(18.63±1.31pmol/ml)和 HOMAIR(7.42±0.98)显著高于良好结局组(1.45±0.26,8.01±0.59mmol/L,14.32±1.29pmol/ml,5.10±0.86),差异具有统计学意义(t=7.895～17.961,均P＜0.05).LncRNA DANCR,miR-33a-5p单独及二者联合预测GDM患者不良妊娠结局的曲线下面积(area under curve,AUC)分别为0.820,0.819和0.897.GDM不良妊娠结局患者血清LncRNA DANCR与FBG,FINS,HOMA-IR呈负相关(r=-0.498,-0.513,-0.509,均P＜0.05),miR-33a-5p 与 FBG,FINS,HOMA-IR 呈正相关(r=0.517,0.494,0.507,均 P＜0.05).LncRNA DANCR 是影响 GDM 患者不良妊娠结局的保护因素(OR=0.804,95％CI:0.693～0.933,P=0.004),miR-33a-5p是影响GDM患者不良妊娠结局的危险因素(OR=2.747,95％CI:1.444～5.225,P=0.002).结论 GDM不良妊娠结局患者LncRNADANCR降低,miR-33a-5p升高,二者均是不良妊娠结局的影响因素.

目的 探究急性髓系白血病(AML)患者血清长链非编码RNA抗分化非编码RNA(lncRNA DANCR)、长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因7(lncRNA SNHG7)表达及与病理特征、预后的关系.方法 选取2017年10月至2018年10月期间在本院就诊后出院的120例AML患者记为AML组,另选取120例在本院体检的志愿者记为对照组.观察并记录所有参与者年龄、性别、AML形态学分型等临床指标.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测lncRNA DANCR、lncRNA SNHG7表达量;t检验方法分析lncRNA DANCR、lncRNA SNHG7表达差异及其与病理特征的关系;Pearson相关性分析二者表达水平的相关性;根据二者表达水平均值将AML患者分为lncRNA DANCR高表达组(n=65)和lncRNA DANCR低表达组(n=55)及lncRNA SNHG7高表达组(n=74)和lncRNA SNHG7低表达组(n=46);Kaplan-Meier法进行生存分析.结果 AML患者lncRNA DANCR、1ncRNA SNHG7水平显著高于对照组(P＜0.05),且二者具有正相关性(r=0.414,P＜0.001);LncRNA DANCR、lncRNA SNHG7表达水平与危险度分层、白细胞(WBC)、血红蛋白(Hb)及血小板计数(PLT)相关(P＜0.05);高表达 lncRNA DANCR、lncRNA SNHG7 的 AML 患者 5 年生存率分别为 30.77％、31.08％,低表达 lncRNA DANCR、lncRNA SNHG7 的 AML 患者 5 年生存率分别为 50.91％、54.35％(P＜0.05),低表达 lncRNA DANCR、lncRNA SNHG7 的 AML 患者生存率显著更高(P＜0.05).结论 LncRNA DANCR、lncRNA SNHG7 在 AML患者血清中表达水平较高,两者具有的正相关性,可作为AML患者预后不良的重要指标.

[目的]探讨DANCR在人胚胎干细胞(hESC)向内胚层(DE)分化中的作用.[方法]建立体外诱导hESC向DE分化的体系,检测DANCR的表达水平与DE分化的相关性;利用慢病毒体系敲低hESC的DANCR表达水平,将敲低DANCR的hESC进行DE分化;用qPCR和Western blot方法检测DE分子标志物SOX17和FOXA2,以及原条分子标志物Brachyury(T),EOMES,MIXL1和GSC的表达水平;用Dual luciferase reporter assay和qPCR证明在DE分化过程中DANCR与WNT通路的相互作用.[结果]体外诱导hESC向DE分化的体系能够有效模拟体内DE分化,DANCR的表达水平随DE分化进程逐渐下降.建立敲低DANCR的hESC细胞株,DANCR表达水平相比对照组显著降低(P＜0.001).干扰DANCR表达使分化早期的原条分子标志物Brachyury(T),EOMES,MIXL1和GSC,以及分化后期的DE分子标志物 SOX17和FOXA2 的mRNA表达水平相比对照组显著降低(全部P＜0.05).并且,在DE分化过程中,敲低DANCR组的WNT通路的转录活性相比对照组显著降低(P＜0.05),表现为WNT通路下游基因FZD5,FZD8,SFRP1,FRZB和ANKRD6 mRNA表达水平明显减少(P＜0.05).然而,敲低DANCR对TGFβ通路的SMAD2/3和p-SMAD2 蛋白表达水平没有显著影响(P＞0.05).人为激活细胞内β-CATENIN蛋白活性,能够有效回补由于敲低DANCR导致的DE分化缺陷.[结论]DANCR在DE分化过程中逐渐下调并促进DE分化发生,DAN-CR可能通过与WNT通路相互作用参与调控hESC向DE分化.

目的 运用多重基因表达遗传分析系统(genomelab gene expression profiler,GeXP),创建一种能同时检测肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织长链非编码RNA(long non-codingRNA,LncRNA)表达的一种多重逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测方法,为HCC的诊断及预后提供一定的方法学基础.方法 检索并筛选Pubmed数据库中近10年发表的与HCC有关报道的8种LncRNAs,并分别设计特异性引物.首先验证引物及多重反应体系的特异性及灵敏性,经过系统优化后建立一种多重RT-PCR检测方法.另检测23对HCC肿瘤组织和癌旁非肿瘤组织标本,并用实时定量PCR技术(quantitative real-time PCR,qPCR)来验证检测体系并进行结果统计. 结果 优化后的GeXP多重检测体系,特异性及灵敏性良好.另在23对HCC肿瘤组织及癌旁组织中检测到了这8种LncRNAs的差异表达:与癌旁组织相比,HCC组织中LncRNA NEAT1、H19、MALAT1、HOTAIR、DANCR、UCA1、BCAR4的表达显著下降(P均＜0.05);肝癌组织中LncRNA GAS5的表达显著上升(P＜0.05).qPCR方法验证与GeXP方法结果一致.结论 应用GeXP多重分析技术成功建立了一种于单管中同时检测HCC组织8种LncRNAs表达的检测方法,该方法有效、快捷、灵敏、特异,对HCC的诊断及预后具有启示作用并奠定了一定的方法学基础.

长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是非编码RNA家族中的重要成员,研究发现lncRNA的异常表达在机体的诸多病理生理过程中起着重要的调控作用.长链非编码 RNA DANCR(differentiation antagonizing non-coding RNA)被发现能够调控关节软骨修复、成骨分化、牙髓细胞分化等过程,并且在人体多种恶性肿瘤中均呈现异常上调表达,通过多种调控机制来促进肿瘤细胞的增殖、侵袭、转移、抗凋亡、上皮间质化等恶性生物学行为,同时还可以作为肿瘤患者诊治及预后评估的生物学标志物.因此,有必要就恶性肿瘤发生发展过程中lncRNA DANCR的调控作用进行综述.

目的 研究长链非编码RNA(lncRNA)Dancr在肝脏中的时空表达规律,探索其与糖异生的可能调控关系与分子机制.方法 建立小鼠饥饿-再喂养模型、高脂饮食诱导的肥胖(high-fat diet,HFD)模型,并以磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶、葡萄糖-6-磷酸酶为阳性对照,检测Dancr在两组模型小鼠肝脏中的表达;分离小鼠主要脏器组织,检测不同组织中Dancr的表达量;运用NCBI、UCSC、RegRNA、TargetScan等数据库,分析Dancr的序列特征,预测与其相互作用的miRNA,并对miRNA下游靶基因进行基因本体和京都基因与基因组百科全书分析.采用Student-t检验分析各组之间差异的显著性,采用单因素方差分析比较多组间差异.结果 Dancr的表达量随饥饿进程持续升高,并在16 h达到最高,再进食后迅速恢复正常水平(4.20±0.27比1.00±0.23,t=22.10,P<0.01).在HFD小鼠肝脏中Dancr表达量同样显著升高(1.69±0.30比1.00±0.25,t=4.33,P<0.01).Dancr在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、骨骼肌、小肠、胃、白色脂肪组织、棕色脂肪组织和脑组织中表达差异有统计学意义(F=180.32,均P<0.01),Dancr在肝脏中的表达量显著高于除脾、肺外的其余组织(t=6.03～36.19,均P<0.01).在线分析Dancr位于chr5:74,093,083-74,090,355,全长1060 bp,由2个外显子构成,可能存在9个与之相互作用的miRNAs(mmu-let-7i-5p、mmu-miR-134-5p、mmu-miR-326-5p、mmu-miR-433-5p、mmu-miR-497-5p、mmu-miR-504-3p、mmu-miR-1906、mmu-miR-432、mmu-miR-5620-5p),调节下游2124个靶基因,其中多条基因与糖异生调控相关.结论 Dancr的表达受生理及病理性糖异生信号影响,可能介导肝脏糖异生的调控,且生物信息学分析为后续实验提供了一定的数据支持,有助于我们进一步了解Dancr在糖异生调控中的分子机制.

目的:探讨在子宫内膜癌和子宫内膜非典型增生及正常子宫内膜组织中DANCR的表达及意义.方法:收集2016年手术切除的子宫内膜癌组织55例、正常子宫内膜标本30例以及子宫内膜非典型增生组织7例,运用实时PCR技术分别检测DANCR在不同子宫内膜病变组织中的表达情况,并分析其与临床病理参数以及预后的关系.结果:子宫内膜癌组织中DANCR的表达水平高于子宫内膜非典型增生及正常子宫内膜组织,3组间差异有统计学意义(P＜0.05),并且在正常子宫内膜组织、子宫内膜非典型增生以及子宫内膜癌中呈逐渐上升趋势;DANCR在Ⅰ型子宫内膜癌中的表达高于Ⅱ型子宫内膜癌,差异具有统计学意义(P＜0.05);结论:DANCR在子宫内膜癌中显著性高表达,可能与子宫内膜癌的发展有关;DANCR可能对子宫内膜癌病理分型有标志性的意义.