[背景]由鲤疱疹病毒Ⅱ型(cyprinid herpesvirus-2,CyHV-2)引起的疱疹病毒性造血坏死病在鲫和金鱼中的暴发给水产养殖业造成了巨大的经济损失.[目的]开发一种快速、现场检测鲫是否感染过CyHV-2 和监测鲫CyHV-2 IgM抗体水平的胶体金检测试纸条.[方法]将CyHV-2 与胶体金结合作为金标抗原、Protein A作为检测线、兔源rORF66 多克隆抗体进行划线作为质控线,分析胶体金试纸条最佳制备及组装条件,确定胶体金标记最适pH、金标抗原最适浓度,以及检测线(test line,T线)、质控线(control line,C线)最适划线浓度等.[结果]本研究制备的CyHV-2 抗体胶体金试纸条可以使用全血测试,与常见的其他鱼类抗体血清无交叉反应,如草鱼呼肠孤病毒抗体阳性血清、鳜虹彩病毒抗体阳性血清等.试纸条最低限度可以检测到 1:100 稀释的阳性血清抗体,由试纸条检测线的深浅可以初步判断鱼体中抗体水平.试纸条通过对 10 条鲫鱼血清样品检测并和金鱼造血器官坏死病毒检测方法(GB/T 36194-2018)进行Kappa分析,Kappa值为 0.80,表明二者有较高的符合率.[结论]本研究制备的试纸条具有较高的灵敏度和特异性,具有操作简单和成本较低的特点,对鱼类检疫、鱼体抗体水平评价等具有实际应用价值.

为研究谷氨酸(Glu)、谷氨酰胺(Gln)和谷氨酸钠(MSG)对鳜(Siniperca chuatsi)摄食、生长及胃肠功能的影响,以鳜基础饲料为对照组(CON),分别添加0.2％和0.4％的Glu、Gln和MSG,命名为Glu-0.2、Glu-0.4、Gln-0.2、Gln-0.4、MSG-0.2和MSG-0.4六个处理组,饲喂初始体质量为(17.60±0.53)g的鳜56d.同CON相比,结果显示:(1)三种添加剂均显著提高摄食量,其中MSG组最明显;(2)Glu-0.2和Gln-0.2的增重率、饲料转化率显著提高;(3)各添加组的胃蛋白酶活力和Glu-0.2、Glu-0.4、Gln-0.2的胃H+-K+-ATPase活力显著增强;(4)肠道中的胰蛋白酶活力在Glu-0.2显著提高,Na+-K+-ATPase活力在Gln-0.4无促进作用,其他组均显著增强;(5)Glu组、MSG组血浆中D-乳酸、内毒素含量和二胺氧化酶活性均显著降低;(6)Gln组血浆AST和ALT显著升高,且肝细胞肿胀、空泡化明显增多;(7)Glu组和MSG组血浆抗氧化能力显著升高,Gln组显著降低;(8)肠道微生物组成Glu-0.2的门水平软壁菌门(Tenericutes)、属水平索氏鲸杆菌属(Cetobacterium)丰度显著高于CON组.综上,Glu具有促进鳜胃酸分泌和胃肠消化吸收能力,增强肠道物理屏障,改善肠道菌群,促进生长;Gln能提升鳜胃肠功能,而机体抗氧化力、肝功能下降;MSG促进摄食和生长效果最佳,但对饲料转化无改善.

为探究谷氨酸(Glu)和α-酮戊二酸(AKG)对鳜(Siniperca chuatsi)摄食和氨排泄的影响,实验以鳜[初始体重(26.28±0.99)g]为研究材料,将Glu和AKG分别添加到鳜的基础日粮中(添加量2％),进行了60d的养殖实验,前40d等量投喂,后20d饱食投喂.通过设置对照组、Glu组和AKG组,比较了3种不同饲料饲喂下鳜的摄食与氨排泄差异情况.实验结果表明,在等量饲喂期间添加Glu、AKG显著提高鳜生长和降低饵料系数,且在一定程度上降低鳜的体外氨排泄量.在饱食投喂阶段,Glu、AKG组的血液中的葡萄糖含量增加,肝糖原、肌糖原含量降低.两个投喂阶段结果都表明,饲料中添加谷氨酸和α-酮戊二酸能显著促进鳜脑中npy表达并抑制poinc表达,显著提高蛋白质效率比和特定生长率,增加鱼体体重,促进鱼体生长且降低饲料系数.同时,肝脏中gdh表达及肌肉ampd表达均提高,脱氨代谢供能水平升高,最终导致其氨排泄量升高.此外,饲料中添加Glu和AKG可促进肝脏pepck、g6pase、pk和gk基因表达量增加,糖代谢增强,减少蛋白质的分解供能.综上所述,在饲料中添加谷氨酸和α-酮戊二酸均能促进鳜的摄食并降低氨的排泄.研究结果将应用于鳜的低氨排放养殖,并推进谷氨酸和α-酮戊二酸在鳜饲料中的应用.

为探究鳜(Siniperca chuatsi)黑素皮质素1受体基因mc1r在不同养殖背景下的组织表达差异及转录调控机制,研究以在黑白养殖背景下产生的深、浅色体表鳜为研究对象,通过实时荧光定量PCR测定mc1r基因的组织表达差异;其次以鳜基因组DNA为模板,通过PCR扩增mc1r基因5'侧翼区不同长度的缺失片段并克隆至pGL3-Basic载体,之后将重组质粒转染到HEK 293T细胞,检测双荧光素酶的相对活性并预测其存在潜在的转录因子.结果显示,黑色背景养殖所产生的深色体表鳜与野生型更为相似;RT-qPCR检测显示深色体表鳜mc1r在背部皮肤和腹部皮肤表达量最高,而浅色体表鳜脑中表达量最高;双荧光素酶活性检测发现,构建的5个缺失片段启动子活性之间存在显著差异,且-159∽-+292启动子活性最高,推测其为mc1r核心启动子区域,并且通过在线软件预测出存在MITF、SP1等转录因子.研究克隆了鳜mc1r基因启动子区域并进行了转录活性分析,并且对潜在的转录因子进行了预测,为鱼类mc1r基因分子机制表达调控及表皮颜色可控性研究提供了理论依据.

研究从鳜(Siniperca chuatsi)基因组中获得Shh(Sonic hedgehog)基因序列,对该基因编码的蛋白质和同源进化特征进行了分析.鳜Shh基因的开放阅读框(ORF)为1242 bp,编码413个氨基酸,分子量为46.01 kD,等电点(pI)为6.57,脂溶系数为82.83,亲水性平均系数为-0.292,拥有一个跨膜区,被推定为亲水性膜结合蛋白.Shh蛋白具有两个结构域,即Hh-N和Hh-C结构域.鳜Shh蛋白与自身所属的鲈形目鱼类Shh蛋白同源性较高.通过实时荧光定量PCR技术检测了鳜Shh基因的时空表达水平.结果显示:Shh的表达量在神经胚期表达显著上调,并在胚胎发育中后阶段保持较高水平.Shh在鳜不同组织中存在一定的表达差异,在脑、肠道中表达量较高,而在红肌、白肌等组织中表达量相对较低.通过环巴胺(Cyclopamine)处理鳜胚胎来抑制Shh信号通路的实验表明,Shh信号通路被抑制后,Pax3、Pax7、Myomaker、生肌调节因子及肌球蛋白重、轻链等基因的表达均显著降低,推测Shh参与调控鳜肌细胞的早期分化和发育过程.研究将有助于从分子水平了解Shh信号调控鱼类发育的分子机理,为鱼类发育生物学以及健康养殖提供参考依据.

以初始体重(6.77±0.64)g的鳜(Siniperca chuatsi)为实验对象,从消化道肠肽酶活力和小肽转运吸收方面比较研究鳜对活饵与饲料消化吸收能力的差异.实验采用3种分组投食策略,将鳜分活饵组(仅投喂活饵鱼)、饲料组(仅投喂饲料)、复投活饵组(以下简称复投组,先投喂饲料后活饵鱼).活饵组、饲料组分别饲养22d,复投组经5d驯饲、15d饲料和2d活饵喂养.饲养结束时在各组进食0.5h、1h、2h、3h、6h、12h、16h时分别取样肠和幽门盲囊,测定氨肽酶和羧肽酶含量与活力,小肽转运载体基因Pept1a、Pept1b和Pept2 mRNA表达水平,及进食12h后肠内容物及粪便中残余小肽含量.结果表明:各组羧肽酶、氨肽酶含量变化无显著性规律,酶活力总体呈先升后降趋势;活饵组肽酶活力峰值显著高于复投组高于饲料组(P＜0.01),复投组由饲料转喂活饵后,肠道肠肽酶活力显著上升;各组前肠、中肠及幽门盲囊Pept1a、Pept1b mRNA表达显著高于后肠(P＜0.01),后肠则以Pept2mRNA高表达(P＜0.01).在复投组摄食活饵后,小肽转运载体基因表达水平较饲料组迅速回升(P＜0.01);摄食12h,复投组肠内容物小肽含量显著高于活饵组和饲料组,小肽吸收效率随消化时间延长而上升.饲料组粪便中小肽含量显著高于活饵组与复投组,未转运的小肽中含必需氨基酸居高.综上所述,投喂鳜配合饲料,对肠肽酶活力、小肽转运载体基因表达和小肽吸收速率均产生不利影响,鳜对饲料蛋白的分解和小肽转运吸收效率显著低于活饵鱼.

为调查山谷型水库的鱼类群落营养结构及其食物资源利用情况,基于碳(δ13C)、氮(δ15N)稳定同位素技术研究了湖北省洈水水库2020年夏季与秋季鱼类群落结构特征,并运用贝叶斯混合模型评价4种潜在碳源(颗粒有机物、陆生植物、周丛藻类和有机碎屑)对不同食性鱼类的贡献.结果表明:洈水水库鱼类群落的营养结构存在季节差异,鱼类群落的营养层次(NR)、基础食物来源(CR)、生态位总空间(TA)、群落的整体密度(NND)、聚集均匀程度(SDNND)和核心生态位空间(SEAc)等参数为夏季高于秋季,表明夏季食物源多样性高、营养冗余程度低、食物网结构更加复杂而稳定.洈水水库夏季和秋季鱼类均依赖外源性碳源,但两个季节的利用方式存在显著差异(P＜0.05).整体上,陆生植物在两个季节对洈水水库鱼类的碳源贡献最大,但夏季周丛藻类为次重要碳源,秋季有机碎屑为次重要碳源,颗粒有机物(POM)在两个季节均不重要.夏季和秋季对外源碳的依赖程度最高的鱼类均为黄尾鲴(碎屑食性鱼类),对外源碳的依赖程度最低的鱼类为鳙(滤食性鱼类)和团头鲂(植食性鱼类).在夏季和秋季共有的9种鱼类中,肉食性鱼类(鳜、蒙古鲌)、杂食性鱼类(鲤、鲫)与碎屑食性鱼类(黄尾鲴)营养级变化显著.夏季鱼类营养级范围为2.5-3.5,平均3.01,而秋季鱼类营养级范围为2.9-3.8,平均3.32.基于稳定同位素技术分析不同食性鱼类的营养级发现,秋季鱼类的营养级普遍高于夏季(P＜0.05).研究揭示洈水水库鱼类夏季和秋季的碳源利用存在显著差别,鱼类的营养级秋季普遍高于夏季,这主要是由于洈水水库秋季的低水位不利于陆生植物进入水生食物网,鱼类食物资源竞争加剧、捕食作用加强所致.基于贝叶斯混合模型分析鱼类食物资源的利用情况表明:植食性鱼类和杂食性鱼类的鱼苗投放时间应选在早春(2-3月),碎屑食性鱼类鱼苗的投放时间在秋、冬季更加合适,这将为研究山谷型水库鱼类群落的营养结构及渔业结构调整方案提供科学依据.

目的 研究miR-25 在鳜的时空表达特征,预测其靶向核心生物钟基因,对其可能存在的生物学意义进行探讨.方法 采用实时荧光定量PCR分析miR-25 在鳜各组织以及不同阶段胚胎中的表达特征,并利用TargetScan对其靶向核心生物钟基因进行预测分析.结果 miR-25 在鳜红肌和心肌中的表达量较高(P<0.05),而在鳜脾、肾、肠以及肝中的表达量较低,且这 4 个组织中的表达量,差异无统计学意义(P>0.05);miR-25 在鳜胚胎的 2 细胞期表达量较高(P<0.05),随着胚胎发育,其表达水平逐渐降低.靶基因预测结果显示,节律基因Arntl2、Nr1d2b mRNA的 3'UTR区域存在miR-25 的靶位点.结论 miR-25 在胚胎发育过程中呈母源性表达,并且可能在鳜红肌和心肌中具有重要的调控意义,此外miR-25 可能通过靶向调节Arntl2、Nr1d2b的表达来调控鳜生物节律,为后续研究miR-25 的生理作用以及调控昼夜节律从而预防相关疾病提供参考依据.

为研究低水温下鳜饥饿状态下的生理动态变化过程,选取体重(84.13±0.14)g的鳜270尾,随机分成6组,每组3个重复,每个重复15尾鱼,于低水温(13±1)℃下分别饥饿0、3d、6d、9d、12d和15d,每隔3d分别测定相关生理生化指标.结果显示:(1)随着饥饿时间延长,鳜体质量、肥满度、肝体比、脏体比、肌肉的蛋白和脂肪含量都呈逐渐下降趋势,其中体质量下降幅度较大,饥饿3d、6d、9d、12d、15d分别下降了3.03％、3.82％、5.55％、7.68％和8.39％.(2)鳜血液中谷丙转氨酶和谷草转氨酶活性随饥饿时间延长呈现先下降后上升趋势,饥饿3d时达到最小值.血糖含量在饥饿6d时显著上升(P＜0.05),随后维持在一定的水平范围.碱性磷酸酶活性、甘油三酯、总胆固醇、高、低密度脂蛋白胆固醇含量呈整体下降趋势.(3)鳜胃蛋白酶、胃H+-K+-ATP酶及肠道和幽门盲囊的胰蛋白酶、脂肪酶活性随饥饿时间的延长呈总体下降趋势,且均在饥饿15d时达到最小值,其中胃H+-K+-ATP酶活性下降幅度最为显著;而淀粉酶活性在饥饿前期稳定,后期下降.(4)鳜肝脏抗氧化能力随饥饿时间延长先上升后下降,并在饥饿15d时下降到最低值.研究表明:在低水温下,鳜短期饥饿出现体质量负增长、体型变瘦和肝脏相对变小现象;饥饿前3d优先利用肌肉脂肪供能,后期优先利用肌肉蛋白质供能;饥饿6d时鳜肝脏抗氧化能力有改善,但饥饿时间过长鳜的消化和抗氧化机能明显下降,并反馈性抑制胃酸的分泌,可能与胃黏膜的保护相关.

目的:克隆鳜鱼MDA5基因cDNA序列,研究聚肌苷酸胞苷酸[Poly(I:C)]感染过程中MDA5的表达规律.方法:利用RT-PCR和RACE技术克隆鳜鱼MDA5全长序列,构建Poly(I:C)感染模型,分析MDA5在鳜鱼脾脏和鳃组织中的表达规律.结果:鳜鱼MDA5 cDNA全长3556 bp,包括142 bp 5'UTR、438 bp 3'UTR和2976 bp开放读框,共编码991个氨基酸残基.MDA5蛋白具有RLR家族的典型特征,即N端含有2个CARD结构域,C端含有DEXDc、解旋酶和RD结构域,序列分析发现鳜鱼的MDA5与横斑石鲷、大黄鱼的同源性较高,分别达85.4％、79.8％.组织表达谱分析显示,鳜鱼MDA5基因在不同组织中普遍表达,用Poly(I:C)抗原刺激后,MDA5 mRNA表达显著上调,其中脾脏组织在诱导8h后达到峰值,而在鳃组织中表达持续显著上调.结论:MDA5在鳜鱼免疫应答中起重要作用.