目的:探讨下调miR-488靶向Jag1对缺氧复氧心肌H9c2细胞损伤的影响。方法:构建缺氧复氧心肌H9c2细胞损伤模型，转染miR-488 inhibitor。分别用CCK-8法和流式细胞术检测各组细胞的增殖的凋亡，分别用试剂盒检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、丙二醛(malonaldehyde，MDA)和过氧化氢酶(catalase，CAT)的水平，用Western印迹检测Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein，Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/lewkmia-2，Bcl-2)蛋白表达的差异。预测miR-488的靶基因，并用荧光素酶报告系统鉴定二者的靶向关系。在心肌H9c2细胞中共转染miR-488 inhibitor、Jag1 siRNA，给予缺氧复氧处理，检测细胞增殖、凋亡和LDH、SOD、MDA、CAT水平以及Bax、Bcl-2蛋白表达。结果:缺氧复氧心肌H9c2细胞中miR-488表达升高，细胞增殖活性降低，凋亡增多，Bax蛋白表达升高，Bcl-2表达降低，MDA水平升高，CAT、SOD水平降低，细胞培养液上清中LDH升高。转染miR-488 inhibitor使经缺氧复氧处理的心肌H9c2细胞中miR-488表达降低，细胞增殖活性升高，凋亡减少，Bax蛋白表达降低，Bcl-2蛋白表达升高，MDA水平降低，CAT、SOD水平升高，培养液上清中LDH水平降低。下调miR-488靶向负调控Jag1表达。Jag1 siRNA可逆转miR-488 inhibitor对缺氧复氧心肌H9c2细胞增殖、凋亡和LDH、SOD、MDA、CAT水平以及Bax、Bcl-2蛋白表达作用。结论:下调miR-488靶向Jag1可减轻缺氧复氧心肌H9c2细胞的损伤。

目的:探讨肿瘤相关钙信号传感器2在结直肠癌组织的表达变化及其上游微小RNA(miRNA，miR)对其表达水平的调控。方法:选取2020年1月至2023年1月新乡医学院第一附属医院收治的58例结直肠癌临床标本和癌旁组织作为研究对象，采用双向电泳技术分析结直肠癌和癌旁组织差异表达的蛋白，选取肿瘤相关钙信号传感器2作为研究对象，采用蛋白质印迹法(Western blot)分析癌旁组织和结直肠癌组织肿瘤相关钙信号传感器2表达水平。免疫组织化学分析两组组织细胞增殖抗原(PCNA)的阳性率；相关性分析肿瘤相关钙信号传感器2与细胞增殖的关系。转录组学分析癌旁组织和结肠癌组织miRNA，筛选差异靶向肿瘤相关钙信号传感器2的miRNA，并采用双荧光素酶报告基因验证分析miRNA的靶向性。组间计量数据比较采用 t检验。 结果:双向电泳筛选10个差异的蛋白质，本研究选择差异显著的蛋白肿瘤相关钙信号传感器2作为研究对象。癌旁组织中肿瘤相关钙信号传感器2蛋白表达水平(0.92±0.14)明显低于结直肠癌组织(1.62±0.20)，差异有统计学意义( t＝14.320， P<0.05)。PCNA表达阴性患者肿瘤相关钙信号传感器2蛋白表达水平(1.33±0.13)明显低于结直肠癌组织(1.69±0.16)，差异有统计学意义( t＝6.092， P<0.05)。癌旁组织和结直肠癌组织总计差异miRNA共1 218个，其中上调表达732个，下调486个。发现5个与肿瘤相关钙信号传感器2存在互补的miRNA，分别为miR-488-3p、miR-625-5p、miR-3650、miR-518a-5p和miR-204-3p。癌旁组织中miR-488-3p、miR-625-5p、miR-3650、miR-518a-5p和miR-204-3p表达水平(1.07±0.08、1.07±0.09、1.11±0.15、1.01±0.10、1.15±0.15)明显高于结直肠癌组织(0.28±0.05、0.30±0.07、0.45±0.08、0.54±0.09、0.69±0.12)，差异有统计学意义( t＝21.050、26.350、14.850、12.600、9.165， P<0.05)。miRNA对照和荧光素酶报告基因共转染细胞荧光素酶活性(0.96±0.07、0.94±0.03、0.92±0.06、0.91±0.08、0.95±0.05)明显高于miR-488-3p、miR-625-5p、miR-3650、miR-518a-5p和miR-204-3p模拟物和荧光素酶报告基因共转染细胞荧光素酶活性(0.22±0.06、0.24±0.07、0.34±0.09、0.45±0.08、0.60±0.12)，差异有统计学意义( t＝23.541、23.102、18.208、14.231、12.514， P<0.05)。 结论:肿瘤相关钙信号传感器2在结直肠组织中表达显著上调，受miR-488-3p、miR-625-5p、miR-3650、miR-518a-5p和miR-204-3p等miRNA调控。

背景:环状RNA(circular RNA,circRNA)在多种疾病或肿瘤中发挥着重要作用,近年研究结果发现,膝骨关节炎中circRNA失常表达,并可通过调控微小RNA(miRNA)/mRNA参与疾病进展.目的:探究circ-BRWD1/miR-488-3p/DNMT3A对膝骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡的影响.方法:实时荧光定量PCR检测膝骨关节炎软骨细胞miR-488-3p、circ-BRWD1、DNMT3A表达.将细胞分为si-NC组、si-circ-BRWD1组、si-circ-BRWD1+ anti-miR-NC组、si-circ-BRWD1+anti-miR-488-3p组、vector组、circ-BRWD1组、miR-NC组、miR-488-3p组、miR-488-3p+vector组、miR-488-3p+ DNMT3A组、anti-miR-NC组、anti-miR-488-3p组;实时荧光定量PCR检测circ-BRWD1、miR-488-3p、DNMT3A表达,MTT、流式细胞术检测增殖和凋亡,Western blot检测DNMT3A、增殖、凋亡相关蛋白表达;双荧光素酶报告实验检测circ-BRWD1与miR-488-3p、miR-488-3p与DNMT3A的靶向关系.结果与结论:①与正常软骨细胞相比,circ-BRWD1、DNMT3A在膝骨关节炎软骨细胞中高表达,miR-488-3p低表达;②敲低circ-BRWD1或过表达miR-488-3p可抑制膝骨关节炎软骨细胞增殖并诱导凋亡;③circ-BRWD1靶向负调控miR-488-3p,抑制miR-488-3p可逆转敲低circ-BRWD1对膝骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡的影响;④miR-488-3p靶向负调控DNMT3A,上调DNMT3A可逆转过表达miR-488-3p对膝骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡的影响;⑤circ-BRWD1可通过调控miR-488-3p进而调控DNMT3A的表达;⑥结果表明,敲低circ-BRWD1可抑制膝骨关节炎软骨细胞增殖并诱导凋亡,其作用机制可能与调控miR-488-3p/DNMT3A轴有关.

目的 考察环状RNA(circRNA)circPRKCI是否靶向miR-448 调节高脂高糖诱导的胰岛β细胞损伤.方法 胰岛β细胞被分为Con组(正常对照,11.1 mmol/L葡萄糖)、Model组(高脂高糖模型,33.3 mmol/L 葡萄糖+ 0.25 mmol/L棕榈酸)、Model+pcDNA组(高脂高糖模型+转染pcDNA)、Model+pcDNA-circPRKCI组(高脂高糖模型+转染pcDNA-circPRKCI)、Model+anti-miR-NC组(高脂高糖模型+转染anti-miR-NC)、Model+anti-miR-488 组(高脂高糖模型+转染anti-miR-488)、Model+pcDNA-circPRKCI+miR-NC组(高脂高糖模型+转染 pcDNA-circPRKCI+miR-NC)、Model+pcDNA-circPRKCI+miR-448 组(高脂高糖模型+转染 pcDNA-circPRKCI+miR-448).采用 qRT-PCR 检测circPRKCI、miR-448、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA和白细胞介素-1β(IL-1β)mRNA表达,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测活化-含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cleaved-cysteinyl aspartate specific proteinase,cleaved-caspase)3 和cleaved-caspase9 蛋白表达.运用荧光素酶报告分析circPRKCI与miR-448 的靶向结合.结果 与Con组比较,Model组胰岛β细胞中circPRKCI表达量减少,miR-488 表达量、凋亡率、cleaved-caspase3、cleaved-caspase9 蛋白表达量、TNF-α mRNA和IL-1β mRNA表达量增加(P＜0.05).与Model+pcDNA组比较,Model+pcDNA-circPRKCI组胰岛β细胞中circPRKCI表达量增加,凋亡率、cleaved-caspase3、cleaved-caspase9 蛋白表达量、TNF-α mRNA和IL-1β mRNA表达量减少(P＜0.05).circPRKCI靶向调控miR-448 的表达.抑制miR-448 表达后,Model+anti-miR-488 组胰岛β细胞的miR-488 表达量、凋亡率、cleaved-caspase3、cleaved-caspase9 蛋白、TNF-α mRNA和IL-1β mRNA表达量均比Model+anti-miR-NC组降低(P＜0.05).上调miR-448 表达后,Model+pcDNA-circPRKCI+miR-448 组胰岛β细胞的miR-488 表达量、凋亡率、cleaved-caspase3、cleaved-caspase9 蛋白、TNF-α mRNA 和 IL-1β mRNA 表达量均比 Model+ pcDNA-circPRKCI+miR-NC组提升(P＜0.05).结论 circPRKCI通过靶向miR-448,减少细胞凋亡和炎性因子表达,从而保护高脂高糖诱导的胰岛β细胞损伤.

目的 分析头颈部鳞癌(含皮肤鳞癌)中基质金属蛋白酶1(MMP1)和微RNA(miRNA)表达水平并筛选目标miRNA.方法 下载GEO相关数据,比较头颈部鳞癌MMP1表达水平.利用miRanda、TargetScan7.2和miRDB软件在线预测miRNA,进一步与miRTarBase结果做比对,获得目标miRNA并进行验证.分析目标miRNA与MMP1的相互关系.结果 与正常组织或不典型增生病变相比,MMP1在头颈部鳞癌(含皮肤鳞癌)组织中高表达,MMP1可参与癌变整个发展过程,并促进HNSCC转移;在线预测共获得3个目标miRNAs:miR-202、miR-326和miR-488,其中miR-202 mirSVR评分最高.相反,与正常组织相比,miR-202头颈部鳞癌(含皮肤鳞癌)中,miR-202表达水平明显低于正常组织,从正常皮肤-KIN1/2-KIN3-cSCC,miR-202可参与疾病整个发展过程.相关分析显示miR-202表达与MMP1呈负相关(r=-0.14,P＜0.05).结论 MMP1在头颈部鳞癌(含皮肤鳞癌)组织中高表达,miR-202低表达,miR-202可能是调节MMP1的真实miRNA,二者呈负相关.

目的 筛选乳腺癌放射治疗(放疗)抵抗相关微小RNA(miRNAs),为乳腺癌患者放疗抵抗的基础研究与临床应用研究提供实验基础.方法 从基因表达综合数据库(GEO)中下载乳腺癌放疗患者相关miRNAs微阵列数据集GSE 107743,利用GEO2R分析工具筛选放疗后局部复发患者的差异表达miRNAs,mirDIP数据库预测差异表达miRNAs的靶基因,DAVID数据库对靶基因分别进行基因本体论(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析.最后采用实时荧光定量PCR在人乳腺癌细胞MCF-7中进行差异表达验证.结果 采用GEO2R分析工具筛选出9种与放疗抵抗相关的差异表达miRNAs,其中3种miRNAs(hsa-miR-600、hsa-miR-525-3p、hsa-miR-591)表达上调,6种miRNAs(hsa-miR-488-5p、hsa-miR-582-3p、hsa-miR-520h、hsa-miR-488-3p、hsa-miR-744-3p、hsa-miR-103b)表达下调.靶基因预测结果显示,9种差异表达miRNAs的潜在靶基因共134个.靶基因显著富集在细胞周期、细胞凋亡、干细胞分化等相关生物学过程(均P＜0.05)以及转化生长因子-β、磷脂酰肌醇3-激酶\蛋白激酶B信号通路等信号通路中(均P＜0.05).实时荧光定量PCR检测结果表明,6种miRNAs (hsa-miR-600、hsa-miR-525-3p、hsa-miR-591、hsa-miR488-5p、hsa-miR-582-3p、hsa-miR-520h)在经5 Gy 137Csγ射线辐照后的MCF-7细胞中表达差异改变与GEO2R分析结果完全一致.结论 利用生物信息学从乳腺癌放疗患者局部复发临床样本中筛选出的差异表达miRNAs可能与乳腺癌患者的放疗抵抗密切相关,有望成为放疗抵抗治疗的新靶点.

目的 探讨慢病毒介导miR-34a表达对视网膜母细胞瘤自噬的影响并对其机制进行研究.方法 取对数生长期的Y79细胞,将转染miR-34a的慢病毒载体、转染高迁移率族蛋白1(high mobility group protein 1,HMGB1)载体、共转染miR-34a+HMGB1的慢病毒载体及培养液接种至Y79细胞构建转染miR-34a细胞系.按照接种载体分组,将Y79细胞株分为4组,分别为转染miR-34a组、转染HMGB1组、共转染miR-34a+HMGB1组及阴性对照组.用qRT-PCR检测miR-34a的表达,采用Capase3检测试剂盒检测Caspase3活性.采用流式细胞仪及单丹磺酰尸胺(monodansyl cadaverin,MDC)试剂盒在488 nm荧光下检测MDC荧光率,利用透射电子显微镜观察自噬超微结构.结果 miR-34a转染结果显示,转染miR-34a组miR-34a的相对表达量(2.04 ± 0.46)显著高于阴性对照组(1.03 ± 0.21)(P＜0.05),共转染miR-34a+HMGB1组的HMGB1的相对表达量(0.42 ± 0.08)显著低于转染HMGB1组(1.08 ± 0.16),差异有统计学意义(P＜0.05).Caspase3活性测试显示,转染miR-34a组Caspase3活性(10.75 ± 2.87)明显高于阴性对照组(3.48 ± 0.74),转染HMGB1组Caspase3活性(2.46 ± 0.94)低于共转染miR-34a+HMGB1组(6.21 ± 1.74),差异有统计学意义(P＜0.05).流式细胞仪检测结果显示,转染miR-34a组MDC阳性率(56.94%)明显高于阴性对照组(2.15%), 共转染miR-34a+HMGB1组的MDC阳性率(43.11%)明显高于转染HMGB1组(10.32%)(P＜0.05).透射电子显微镜观察自噬超微结构显示,阴性对照组无明显改变,共转染miR-34a+HMGB1组可见Y79细胞双层膜结构,转染miR-34a组可见自噬溶酶体结构.结论 miR-34a促进视网膜母细胞瘤的自噬凋亡,其机制可能为抑制HMGB1的表达.

目的:探讨miR-488-5p在宫颈癌组织中的表达及对宫颈癌C33A细胞增殖和迁移能力的影响.方法:收集2017年3月至2017年9月郑州大学附属洛阳中心医院妇科全子宫切除术12例宫颈癌组织及相应的癌旁组织,qRT-PCR检测癌组织中miR-488-5p的表达.利用Lipofectamine 3000转染miR-488-5p和miR-NC至宫颈癌C33A细胞,分为实验组和对照组.流式细胞术检测两组细胞周期分布,CCK-8法检测两组细胞增殖能力,Transwell检测两组细胞迁移能力.生物信息学软件预测miR-488-5p可能的靶基因,荧光素酶活性实验验证miR-488-5p与靶基因的结合作用.qRT-PCR和Western blotting检测两组细胞中肿瘤内皮标志物8(tumor endothelial marker 8,TEM8)及下游EGFR信号通路相关蛋白的表达水平.结果:宫颈癌组织中miR-488-5p相对表达量明显低于癌旁组织(1.33±0.20 vs 3.68±0.45,P＜0.01),实验组细胞中miR-488-5p相对表达量明显高于对照组(25.23±3.11 vs 1.02±0.10,P＜0.01),实验组C33A细胞在G0/G1期的细胞比例明显高于对照组(P＜0.01);当C33A细胞生长至96和120h,实验组细胞增殖水平明显低于对照组(P＜0.05).同时实验组的细胞迁移细胞数明显低于对照组(P＜0.01).miR-488-5p可直接结合TEM8 mRNA并抑制其表达(P＜0.01).实验组细胞中TEM8 mRNA相对表达量明显低于对照组(0.42±0.06 vs 1.00±0.06,P＜0.01).C33A细胞转染miR-488-5p 48 h后,TEM8、p-EGFR、p-ERK、p-AKT蛋白表达明显低于对照组(P＜0.01).结论:宫颈癌组织中miR-488-5p的表达量下降,过表达miR-488-5p能够抑制宫颈癌细胞周期的进展,降低宫颈癌细胞的增殖和迁移能力,其机制可能与靶向干扰TEM8基因的表达有关.

目的:探索长链非编码RNA XIST对宫颈鳞状细胞癌细胞顺铂耐药性的作用及机制.方法:建立宫颈鳞状细胞癌细胞顺铂耐药系CASKI/cDDP;构建沉默XIST的慢病毒载体(si-XIST)及miR-488-3p沉默载体miR-inhibitor;将si-ⅪST单独稳定转入CASKI/cDDP细胞或将si-XIST与miR-inhibitor共转入CASKI/cDDP细胞,qRT-PCR检测XIST、miR-488-3p水平变化;MTT法检测细胞存活率变化,蛋白质印迹法检测多药耐药基因1(MDR1)表达变化,RNA拉下实验确定miR-488-3p与XIST的结合关系.结果:与CASKI相比,CASKL/cDDP中XIST表达升高(P＜0.05);si-XIST转染CASKI/cDDP细胞48 h后,ⅪST的水平显著下调(P＜0.05)、细胞的存活率下降(P＜0.05)、MDR1表达水平下降(P＜0.05).CASKI/cDDP细胞XIST沉默可增加miR-488-3p水平(P＜0.05);生物信息学预测宫颈癌关键标志物microRNA-488-3p与XIST结合;RNA拉下实验确认XIST直接结合miR-488-3p.CASKI/cDDP细胞共转染si-XIST与miR-488-3p-inhibitor;miR-488-3p-inhibitor部分逆转si-XIST的功能,提高CASKI/cDDP在顺铂处理下的细胞活性(P＜0.05).结论:沉默XIST通过上调miR-488-3p抑制宫颈鳞状细胞癌细胞的顺铂耐药性.

目的 探讨miR-129-5p靶向抑制高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对甲状腺髓样细胞MZ-CRC-1放射敏感性的影响机制.方法 建立抗辐射细胞株MZ-CRC-1/R;克隆形成实验分析细胞存活分数;qRT-qPCR检测miR-129-5p在MZ-CRC-1和MZ-CRC-1/R细胞中的表达;噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光酶报告基因实验验证miR-129-5p与高迁移率族蛋白B1(HMGB1)之间的靶向关系;Western blot检测HMGB1和p-AKt的蛋白表达.结果与MZ-CRC-1细胞相比,MZ-CRC-1/R细胞的细胞存活分数显著提高(t=3.038、4.330、4.885、4.568,P<0.05);细胞活力增加(t=3.637、7.734、11.896、14.522,P<0.05);与MZ-CRC-1细胞(1.00±0.06)相比,miR-129-5p在MZ-CRC-1/R细胞中的表达(0.26±0.03)显著降低(t=19.107,P<0.05);与miR-NC-inhibitor组细胞相比,miR-129-5p-inhibitor组细胞的细胞活力显著增加(t=5.156、6.005、9.649,P<0.05),细胞凋亡率降低(t=8.659,P<0.05).与miR-NC组细胞相比,miR-129-5p mimic组细胞的细胞活力显著降低(t=3.118、5.034、6.005、7.488,P<0.05),细胞凋亡率升高(t=6.362,P<0.05);过表达miR-129-5p可抑制HMGB1及p-AKt信号通路的表达(t=9.325、10.614,P<0.05);与miR-129-5p inhibitor组细胞相比,miR-129-5p inhibitor+si-HMGB1组细胞的细胞凋亡率显著升高(t=6.700,P<0.05);与miR-129-5p mimic组细胞相比,miR-129-5p mimic+si-HMGB1组细胞的细胞凋亡率显著降低(t=7.073,P<0.05).结论 miR-129-5p可靶向抑制HMGB1增加甲状腺髓样细胞 MZ-CRC-1的放射敏感性.