目的:探讨胃癌细胞微小RNA-448(miR-448)对沉默维甲酸诱导蛋白14(RAI14)的靶向调控作用及对细胞增殖侵袭迁移的影响。方法:用miR-448转染人胃癌细胞株和胃正常上皮细胞GES-1，利用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)和双荧光素酶报告实验确认miR-448是否对RAI14具调控作用。利用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测和Transwell实验进一步确证所筛选miR-448对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响，两组比较采用 t检验。 结果:与GES-1比较，miR-448在SGC790细胞株中表达最低(2.22±0.18比8.11±0.26， t＝7.67， P<0.01)；miR-448可结合到RAI14 mRNA的3’UTR区降低荧光素酶活性至62%；增殖实验中，与mimic NC组比较，miR-448可显著抑制SGC790增殖率(0.71±0.07比1.38±0.04， t＝2.96， P<0.01)；在侵袭和迁移实验中，与阴性对照组比较，miR-448可显著抑制SGC790侵袭[(60.33±1.52)/视野比(137.66±3.21)/视野， t＝3.79， P<0.01]和迁移[(50.0±2.0)/视野比(92.67±2.08)/视野， t＝2.49， P<0.01]。 结论:miR-448可能通过靶向于RAI14 mRNA进而抑制其蛋白表达，最终负调控胃癌细胞的增殖迁移和侵袭。

目的 探讨结肠癌病人血清微小RNA-448(miR-448)和微小RNA-153(miR-153)表达对肠道菌群及免疫功能的影响.方法 2020年2月～2023年2月期间收治的127例结肠癌病人作为研究组,89例结肠良性病变病人作为结肠良性病变组,同期本院体检的127例健康者作为对照组.以血清miR-448(1.12)和miR-153(0.98)表达水平的中位数为临界值将研究组病人分为miR-448高表达组(63例)、miR-448低表达组(64例),miR-153高表达组(64例)、miR-153低表达组(63例).Pearson法分析血清miR-448和miR-153表达水平与结肠癌病人肠道菌群、免疫功能指标的相关性;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-448和miR-153对结肠癌的诊断价值.结果 研究组、结肠良性病变组、对照组大肠杆菌、双歧杆菌、双歧杆菌/大肠杆菌比值以及免疫球蛋白IgG、IgM、IgA比较,差异有统计学意义(P＜0.05);研究组血清miR-448表达水平为(1.25± 0.22),高于对照组的(1.09±0.03)和结肠良性病变组的(1.18±0.15),血清miR-153表达水平为(0.89±0.12)低于对照组的(1.03±0.17)和结肠良性病变组的(0.96±0.16);血清miR-448、miR-153 高表达和低表达组大肠杆菌、双歧杆菌、双歧杆菌/大肠杆菌比值、IgG、IgM、IgA表达水平比较,差异有统计学意义(P＜0.05);血清miR-448、miR-153与大肠杆菌、双歧杆菌、双歧杆菌/大肠杆菌比值有相关性(r=0.657,-0.742,-0.753;r=-0.711,0.813,0.771,P＜0.05);IgG、IgM、IgA 与血清 miR-448 呈正相关(r=0.686,0.709,0.744),与 miR-153 呈负相关(r=-0.690,-0.841,-0.769,P＜0.05);血清miR-448和miR-153联合检测诊断结肠癌的AUC为0.845,优于各自单独检测(Z二者联合-miR-448=4.561、Z二者联合-miR-153=2.426,P=0.000、0.015).结论 结肠癌病人血清 miR-448 和 miR-153表达水平与肠道菌群及免疫功能有相关性,二者联合对结肠癌具有较高的诊断价值.

目的 探讨微小RNA(miRNA)在右归丸对激素型肾阳虚证肾组织与正常肾组织中的表达差异,并用生物信息学方法分析其意义,为右归丸干预肾阳虚证的进一步机制研究奠定基础.方法 15只SD大鼠随机分为正常组(5只)和造模组(10只),正常组注射2 mL生理盐水,造模组后肢肌注氢化可的松注射液.成模后将造模组随机分为模型组和右归丸组,每组5只.右归丸组给予右归丸汤剂灌胃,模型组和正常组给予生理盐水灌胃.麻醉处死后使用TRIzol法提取肾组织中RNA,使用NanoDrop ND-1000对总RNA进行质量检测,用标记后的RNA与Agilent Rat 8 ×60k miRNA芯片进行杂交.收集原始数据进行标准化处理,进行聚类分析和火山图分析.利用生物信息学方法,预测差异miRNA富集的基因本体论(GO)功能和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路.结果 筛选出右归丸干预肾阳虚证相关差异表达miRNA 18 条(|log2FC|≥ 1.5,P≤0.05),其中包括 5 条上调 miRNA,分别是 rno-miR-149-3p、rno-miR-188-5p、rno-miR-221-5p、rno-miR-762、rno-miR-877;13 条下调 miRNA,分别是 rno-miR-101b-5p、rno-miR-125a-3p、rno-miR-125b-2-3p、rno-miR-3085、rno-miR-344a-5p、rno-miR-347、rno-miR-34b-3p、rno-miR-351-3p、rno-miR-3573-3、rno-miR-370-3p、rno-miR-409a-3p、rno-miR-448-3p、rno-miR-503-3p.GO分析显示差异表达miRNA主要参与DNA、RNA转录的正调控进程且与ATP的结合显著相关.KEGG分析显示差异表达miRNA显著富集于cAMP通路和FoxO信号通路,这两条通路与线粒体功能密切相关.结论 右归丸通过干预miRNA的表达,改善肾阳虚证大鼠线粒体功能,调节能量代谢异常,进一步为右归丸干预肾阳虚证的机制研究提供理论依据.

目的 考察环状RNA(circRNA)circPRKCI是否靶向miR-448 调节高脂高糖诱导的胰岛β细胞损伤.方法 胰岛β细胞被分为Con组(正常对照,11.1 mmol/L葡萄糖)、Model组(高脂高糖模型,33.3 mmol/L 葡萄糖+ 0.25 mmol/L棕榈酸)、Model+pcDNA组(高脂高糖模型+转染pcDNA)、Model+pcDNA-circPRKCI组(高脂高糖模型+转染pcDNA-circPRKCI)、Model+anti-miR-NC组(高脂高糖模型+转染anti-miR-NC)、Model+anti-miR-488 组(高脂高糖模型+转染anti-miR-488)、Model+pcDNA-circPRKCI+miR-NC组(高脂高糖模型+转染 pcDNA-circPRKCI+miR-NC)、Model+pcDNA-circPRKCI+miR-448 组(高脂高糖模型+转染 pcDNA-circPRKCI+miR-448).采用 qRT-PCR 检测circPRKCI、miR-448、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA和白细胞介素-1β(IL-1β)mRNA表达,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测活化-含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cleaved-cysteinyl aspartate specific proteinase,cleaved-caspase)3 和cleaved-caspase9 蛋白表达.运用荧光素酶报告分析circPRKCI与miR-448 的靶向结合.结果 与Con组比较,Model组胰岛β细胞中circPRKCI表达量减少,miR-488 表达量、凋亡率、cleaved-caspase3、cleaved-caspase9 蛋白表达量、TNF-α mRNA和IL-1β mRNA表达量增加(P＜0.05).与Model+pcDNA组比较,Model+pcDNA-circPRKCI组胰岛β细胞中circPRKCI表达量增加,凋亡率、cleaved-caspase3、cleaved-caspase9 蛋白表达量、TNF-α mRNA和IL-1β mRNA表达量减少(P＜0.05).circPRKCI靶向调控miR-448 的表达.抑制miR-448 表达后,Model+anti-miR-488 组胰岛β细胞的miR-488 表达量、凋亡率、cleaved-caspase3、cleaved-caspase9 蛋白、TNF-α mRNA和IL-1β mRNA表达量均比Model+anti-miR-NC组降低(P＜0.05).上调miR-448 表达后,Model+pcDNA-circPRKCI+miR-448 组胰岛β细胞的miR-488 表达量、凋亡率、cleaved-caspase3、cleaved-caspase9 蛋白、TNF-α mRNA 和 IL-1β mRNA 表达量均比 Model+ pcDNA-circPRKCI+miR-NC组提升(P＜0.05).结论 circPRKCI通过靶向miR-448,减少细胞凋亡和炎性因子表达,从而保护高脂高糖诱导的胰岛β细胞损伤.

目的 探讨结肠癌细胞对 5-氟尿嘧啶(5-Fu)的抵抗及潜在机制.方法 使用 5-Fu筛选出HCT116 和HT29 5-Fu 抗性细胞系(HCT116/FR和HT29/FR细胞).通过高通量测序和siRNA功能筛选鉴定5-Fu处理后HCT116/FR细胞中影响细胞凋亡水平的关键基因.过表达该基因(RTN4)后检测HCT116/FR和HT29/FR细胞的凋亡水平和细胞活力水平.过表达或敲低此miRNA(miR-448)后检测HCT116、HT29、HCT116/FR和HT29/FR细胞的细胞活力、细胞凋亡水平和RTN4 的表达水平.26 例结肠癌患者,按照化疗效果分为对化疗敏感型结肠癌患者(Sensitive)与化疗抵抗型结肠癌患者(Resistant),并采用免疫组织化学染色方法检测RTN4 在患者中的表达水平.结果 当敲低RTN4 时,HCT116/FR细胞的凋亡水平下降(P＜0.05).5-Fu处理HCT116/FR细胞和HT29/FR细胞后,RTN4 的mRNA水平均下调(P＜0.05).敲低RTN4 后并用5-Fu处理,HCT116 和HT29 显示出对5-Fu抑制增殖的抵抗(P＜0.05).过表达RTN4后,HCT116/FR和HT29/FR细胞的凋亡水平上升(P＜0.05).5-Fu处理后,HT29/FR和HCT116/FR细胞中miR-448 的表达水平上升(P＜0.05).5-Fu处理后并过表达miR-448 后,HCT116 和HT29 细胞的凋亡水平下降(P＜0.05).在HCT116/FR细胞中,过表达miR-448 后,RTN4 的表达水平下降;敲低miR-448 后,RTN4 的表达水平上升(P＜0.05).在HT29/FR细胞中,过表达miR-448 后,RTN4 的表达水平下降;敲低miR-448 后,RTN4 的表达水平上升(P＜0.05).免疫组织化学分析发现对化疗敏感的结肠癌患者癌组织中RTN4 表达水平较高(P＜0.05).结论 当结肠癌细胞HCT116和HT29 遇到5-Fu后,细胞中miR-448 的表达水平上升,miR-448 靶向RTN4 mRNA的3 端非编码区并降解了RTN4 mR-NA,减少了RTN4 的蛋白表达,最终提升了结肠癌细胞HCT116 和HT29 对5-Fu的抗性.

目的 探讨老年慢性阻塞性肺疾病(COPD)急性加重期患者血清同源异形盒基因 1(Six1)、微小RNA-448-5p(miR-448-5p)表达水平及其临床意义.方法 将 2021 年 3 月到 2022 年 3 月本院住院部收治的老年COPD急性加重期患者 110 例(COPD急性加重组)、COPD稳定期患者 60 例(COPD稳定组)纳入研究.另外,选取同期于该院体检的健康者 60 例作为对照组.收集受试者基本资料.COPD 急性加重期患者血清Six1、miR-448-5p 水平与临床指标间的相关性采用Pearson法分析;多因素 Logistic回归分析影响 COPD患者急性加重的可能因素;miR-448-5p、Six1 表达与生存资料采用Kaplan-Meier生存曲线进行分析;多因素 Cox回归分析影响COPD急性加重患者预后的因素.结果 COPD急性加重组、稳定组及对照组 Six1 水平依次降低(P<0.05),miR-448-5p 水平依次显著升高(P<0.05);相关性分析显示,COPD 急性加重期患者血清 miR-448-5p、Six1 水平均与氧分压(PaO2)、第 1 秒用力呼气容积与用力肺活量的比值(FEV1/FVC)、第 1 秒用力呼气容积占预计值百分比(FEV1%pred)、年龄、二氧化碳分压(PaCO2)呈显著相关(P<0.05);多因素 Logistic回归分析显示,miR-448-5p、年龄、Six1 是 COPD发生急性加重的影响因素(P<0.05);死亡组 miR-448-5p 水平显著低于存活组,Six1 水平显著高于存活组(P<0.05);Kaplan-Meier 结果显示 miR-448-5p 高表达患者 30 d生存率(80.00%)高于 miR-582-5p 低表达患者(56.36%),Six1 高表达患者 30 d 生存率(47.27%)低于 Six1低表达患者(89.09%);miR-448-5p、Six1 是 COPD 急性加重患者死亡的影响因素(P<0.05).结论 miR-448-5p 水平在老年COPD急性加重期患者血清中显著下调、Six1 在老年COPD急性加重期患者血清中显著上调,检测血清 miR-448-5p、Six1 的表达有利于对老年COPD患者病情的评估.

目的:研究miR143的表达水平与甲状腺乳头状瘤患者(PTC)预后、细胞生物学特性之间的关系,并对相应机制进行探讨.方法:首先使用QPCR检测30例PTC患者癌组织、癌旁组织中miR143的表达水平,并同时调取TCGA数据库中PTC患者生存信息,并检测miR143对生存率与转移率的影响.PTC细胞系IHH-4随后分别转染CON与pGenesil1-miR143载体,48 h后QPCR检测miR143的变化水平,CCK8法检测细胞增殖、Annexin V/PI法检测细胞凋亡、Transwell法检测细胞迁移.随后检测2013年4月至2016年12月之间收治的200名甲状腺乳头状癌患者血清中miR143、IL-10、IFN-γ,并计算皮尔森积矩系数,最后,将患者分为miR143高表达与低表达组,并计算IL-10、IFN-γ的表达量.结果:miR143在癌旁组织与癌组织中的相对表达量分别为(1.0±0.15)vs(0.12±0.06),miR143的表达同时与患者生存率、转移率密切相关(P<0.001).IHH-4 pGenesil1-miR143与CON组的miR143表达水平分别为8.63±0.71 vs 1.0±0.06,在48 h时,pGenesil1-miR143组增殖指数显著低于CON(P<0.01),pGenesil1-miR143组与CON组Annexin V+阳性细胞比例分别为(40±7.2)vs(2±0.38),迁移细胞数的比值分别为(40±7.2)vs(2±0.38),以上P值均小于0.001.在PTC患者中,IL-10、IFN-γ中,r2分别为-0.4,0.62(P<0.001),miR143低表达组与高表达组IFN-γ的表达量分别为(8±0.23)vs(11.2±0.12),IL-10(12±3.1)vs(8.43±0.44)(P<0.05).结论:miR143在PTC患者中低表达,且与患者预后、生存相关.miR143的高表达使得IHH-4细胞系增殖减弱、凋亡增加、迁移降低,同时miR143的表达与患者的免疫功能相关.

目的 观察特异性微小RNA-448抑制剂对前列腺癌细胞增殖和迁移的影响及其分子机制.方法 qRT-PCR检测正常前列腺上皮细胞(RWPE-1)和癌细胞株(DU-145、PC-3、C4-2B和LNCaP)中miR-448的表达,选取表达量的最高的癌细胞株进行后续实验.利用脂质体转染试剂将miR-448抑制剂或miR-NC转入前列腺癌细胞中,qRT-PCR检测miR-448及人趋化素样因子超家族成员3(CMTM3) mRNA的表达水平,Western blot检测细胞相关蛋白表达. MTT法检测细胞的增殖活性,Transwell实验检测细胞的迁移能力.结果 RWPE-1细胞中miR-448的表达显著低于癌细胞(P＜0. 01),DU-145细胞中的表达最高(P＜0. 01). miR-448抑制剂转染48 h 后,DU-145 细胞 miR-448 表达下调(P ＜0. 01),CMTM3 mRNA 表达上调(P ＜0. 01), CMTM3、E-cadherin和β-catenin蛋白表达上调,N-cadherin和Snail蛋白表达下调;细胞增殖活性降低(P＜0. 05);细胞迁移能力降低(P＜0. 01).结论 miR-448在前列腺癌细胞中明显高表达,miR-448抑制剂可下调DU-145细胞中miR-448表达,上调CMTM3蛋白的表达,抑制前列腺癌细胞的增殖和迁移,在前列腺癌的分子治疗中具有潜在功能.

目的:探讨微小RNA-448 (miR-448)对口腔鳞癌细胞增殖调控作用,筛选并验证相关靶基因.方法:RT-qPCR检测miR-448在人口腔鳞癌临床标本中表达;miR-448抑制物转染口腔鳞癌细胞系Cal-27细胞,MTT实验研究miR-448抑制物对细胞增殖能力的影响;细胞划痕实验检测miR-448抑制物对细胞迁移能力的影响.3种基因预测软件筛选出miR-448的可能下游靶基因,实验验证miR-448对靶基因的调控作用.结果:RT-qPCR分析发现miR-448在15对OSCC组织内表达显著升高.与对照组相比,转染miR-448抑制物后,Cal-27细胞增殖及迁移能力明显下降;Western blot、RT-qPCR结果显示SPARCL1基因的表达量升高;荧光素酶报告基因实验确定miR-448与SPARCL1基因在3'UTR区存在位点结合.结论:miR-448在人口腔鳞癌临床标本中呈高表达.miR-448与SPARCLl-3'UTR的结合,下调SPARCL1的表达,在口腔鳞癌细胞中发挥癌基因的作用,促进肿瘤细胞的增殖与迁移.

目的 观察微小RNA-205(miR-205)-3p及miR-205-5p对头颈部鳞状细胞癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响.方法 下载癌症基因组图集中头颈鳞状细胞癌miRNA表达数据,分析miR-205在头颈鳞状细胞癌组织及癌旁组织中的表达.实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-205-3p、miR-205-5p在头颈鳞状细胞癌细胞株5-8F、6-10B、CNE2、Tu686和鼻咽部黏膜组织中的表达水平;miR-205-3p、miR-205-5p抑制物及阴性对照分别转染头颈鳞状细胞癌细胞Tu686,qRT-PCR检测miR-205-3p、miR-205-5p沉默效率,后续实验分为miR-205-3p沉默组及阴性对照组、miR-205-5p沉默组及阴性对照组;CCK-8、Transwell迁移及侵袭实验检测4组细胞的增殖、迁移及侵袭能力.结果 miR-205在头颈鳞状细胞癌组织中的表达显著高于癌旁组织,其中位数(四分位数间距)分别为61 012(51448)、28 579(35959),差异有统计学意义(Z=-6.420,P＜0.001).头颈鳞状细胞癌细胞株5-8F、6-10B、CNE2、Tu686和鼻咽部黏膜组织中miR-205-3p表达量分别为0.36±0.07、0.20±0.06、0.15±0.04、0.25±0.04和1.00±0.00,差异有统计学意义(F=162.71,P＜0.001).5-8F、6-10B、CNE2、Tu686和鼻咽部黏膜组织中miR-205-5p表达量分别为0.20±0.01、0.21±0.01、1.06±0.18、23.61±2.07和1.00±0.00,差异有统计学意义(F=371.81,P＜0.001).与5-8F、6-10B、CNE2细胞相比,Tu686细胞中miR-205-3p的表达量高于6-10B、CNE2细胞(P=0.195;P=0.020),低于5-8F细胞(P =0.023);Tu686细胞中miR-2056p的表达量最高(P＜0.001;P ＜0.001;P ＜0.001).转染抑制物后Tu686细胞中miR-205-3p、miR-205-5p表达量均显著下调,沉默效率分别为87％、83％.沉默miR-205-3p组细胞在培养第1、2、3、4、5天的A值分别为0.26±0.06、0.55±0.11、1.52±0.13、1.91±0.07、2.14±0.24,对照组分别为0.29±0.07、0.78±0.11、1.59±0.15、1.95±0.08、2.02±0.12,两组比较差异均无统计学意义(t =0.506,P=0.639;t =2.459,P=0.070;t =0.573,P=0.597;t =0.655,P=0.548;t=-0.759,P=0.490);沉默miR-205-5p组细胞在培养第1、2、3、4、5天的A值分别为0.30±0.08、0.61±0.08、0.85±0.08、1.08 ±0.12、1.16±0.18,对照组分别为0.41±0.10、0.78±0.14、1.33±0.28、1.87±0.09、2.08±0.19,沉默组细胞在培养第3、4、5天的增殖能力均明显低于对照组,差异均有统计学意义(t=3.665,P=0.017;t=12.223,P＜0.001;t=7.825,P＜0.001).迁移实验表明,miR-205-3p表达下调后,头颈鳞状细胞癌细胞Tu686的迁移能力无明显变化,沉默组与对照组细胞穿膜数分别为(192.00±28.49)、(188.40±22.52)个,两组比较差异无统计学意义(t=-0.160,P=0.877);miR-205-5p表达下调后,头颈鳞状细胞癌细胞Tu686的迁移能力明显减弱,沉默组与对照组细胞穿膜数分别为(109.40±27.63)、(183.60±31.63)个,两组比较差异有统计学意义(t=3.951,P=0.004).侵袭实验表明,miR-205-3p沉默组细胞穿膜数为(93.40±10.24)个,对照组细胞穿膜数为(96.20±16.56)个,两组比较差异无统计学意义(t=0.322,P=0.756);miR-205-5p沉默组细胞穿膜数为(53.00±17.80)个,对照组细胞穿膜数为(94.40±14.38)个,两组差异有统计学意义(t=4.045,P=0.004).结论 沉默miR-205-5p可抑制头颈鳞状细胞癌细胞Tu686的增殖、迁移及侵袭能力;沉默miR-205-3p对Tu686细胞增殖、迁移及侵袭能力无明显影响.