目的:探讨微小RNA(miR)-451在胆管癌组织中表达水平及其与临床病理特征和预后的关系。方法:选取福建医科大学附属闽东医院2016年1月至2020年7月收集的179例胆管癌及其癌旁组织作为研究对象，采用转录组学分析食管癌和癌旁组织中差异表达miRNA，选择差异最为显著miR-451作为研究对象，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术分析癌旁组织和胆管癌组织中miR-451表达水平。回顾患者临床病理特征并分组，分析不同病理特征患者胆管癌组织miR-451表达水平。以miR-451平均数作为阈值，将胆管癌患者分为低表达组和高表达组，分析两组患者中位生存时间和生存率。采用免疫组织化学分析增殖细胞核抗原(PCNA)表达水平，并分析miR-451与PCNA表达水平的关系。计量数据比较采用 t检验，相关性采用Pearson法。 结果:转录组学和荧光定量PCR分析显示癌旁组织中miR-451表达水平(4.18±0.21)明显低于胆管癌组织中miR-451表达水平(1.32±0.16)，差异有统计学意义( t＝3.011， P<0.05)。Ⅰ~Ⅱ期患者胆囊组织miR-451表达水平(1.37±0.20)明显高于Ⅲ~Ⅳ期患者(0.73±0.15)，差异有统计学意义( t＝2.801， P<0.05)。中高分化患者胆管癌组织miR-451表达水平(1.57±0.18)明显高于低分化患者(0.85±0.19)，差异有统计学意义( t＝2.981， P<0.05)。淋巴结未转移患者胆管癌组织miR-451表达水平(1.38±0.22)明显高于淋巴结转移患者(0.71±0.20)，差异有统计学意义( t＝4.006， P<0.05)。miR-451高表达患者生存时间(35个月)明显高于miR-451高表达患者(14个月)，差异有统计学意义(Log-Rank＝4.409， P<0.05)。miR-451高表达患者术后3年生存率[59.21%(45/76)]高于低表达组患者术后3年生存率[24.27%(25/103)]，差异有统计学意义(Log-Rank＝5.619， P<0.05)。miR-451高表达患者胆管癌组织中PCNA阳性率[(61.48±7.18)%]明显低于miR-451低表达患者[(89.43±10.21)%]，差异有统计学意义( t＝4.019， P<0.05)。Logistic回归分析显示，miR-451是影响胆管癌患者预后的独立因素[比值比( OR)＝1.309， P<0.05]。 结论:miR-451在胆管癌组织中呈低表达，与患者临床病理特征和预后明显相关。

目的:探讨全反式维甲酸（ATRA）对骨肉瘤143B细胞增殖和侵袭的影响及其可能的调控机制。方法:采用不同浓度ATRA处理人骨肉瘤143B细胞，选取影响细胞增殖的最佳浓度和处理时间。分别采用MTS法、Transwell迁移和侵袭实验检测ATRA处理后143B细胞增殖、迁移和侵袭能力变化。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）和蛋白质印迹法检测ATRA处理后骨肉瘤143B细胞中miRNA-34a（miR-34a）、E2F1和Eag1的表达变化。干扰miR-34a和过表达E2F1，检测143B细胞增殖、侵袭和迁移能力以及miR-34a、E2F1和Eag1表达的变化。结果:ATRA浓度为10 μmol/L、处理72 h对143B细胞增殖的抑制作用最明显。10 μmol/L ATRA作用72 h的迁移细胞数、侵袭细胞数均低于阴性对照组[（73±3）个比（182±5）个， t=21.46， P<0.01；（94±3）个比（203±7）个， t=13.70， P<0.01]。10 μmol/L ATRA可促进143B细胞中miR-34a的表达，抑制Eag1和E2F1的表达（均 P<0.01）。与ATRA组比较，处理72 h后ATRA+miR-34a干扰组可恢复细胞的增殖能力[细胞存活率（41.0±2.2）%比（25.0±3.6）%， t=108.68， P<0.01]。与ATRA组比较，ATRA+miR-34a干扰组可恢复细胞的迁移和侵袭能力[（122±14）个比（64±10）个， t=21.06， P<0.01；（103±10）个比（59±8）个， t=24.27， P<0.01]，并可促进细胞中Eag1和E2F1的mRNA和蛋白表达（均 P<0.01）。与ATRA组相比，ATRA+E2F1过表达组可恢复细胞的增殖能力[细胞存活率（40.0±3.4）%比（24.0±3.1）%， t=108.74， P<0.01]，可恢复细胞迁移和侵袭能力[（78±12）个比（29±8）个， t=13.52， P<0.01；（75±12）个比（49±10）个， t=6.28， P<0.01）]，并促进细胞中Eag1和E2F1的mRNA和蛋白表达（均 P<0.01）。 结论:ATRA通过调控miRNA-34a-E2F1-Eag1信号通路抑制骨肉瘤细胞增殖和侵袭，其可能成为骨肉瘤有效的治疗药物之一。

目的:探讨血清中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)、血小板反应蛋白1(TSP-1)、miR-210与系统性红斑狼疮疾病活动指数(SLEDAI)的相关性及联合预测预后的价值。方法:回顾性分析2018年2月至2020年2月海口市人民医院(中南大学湘雅医学院附属海口医院)126例系统性红斑狼疮(SLE)患者的病历资料，依据治疗后6个月预后复发情况分为复发组( n＝23)、未复发组( n＝103)。比较两组一般资料、治疗前后血清NLR、TSP-1、miR-210水平、SLEDAI评分，分析治疗前后血清各指标水平与SLE患者SLEDAI评分、预后复发的关系，探讨血清各指标单一、联合预测预后的效能。 结果:复发组治疗前后血清NLR、TSP-1、miR-210水平、SLEDAI评分均高于未复发组(均 P<0.05)；两组治疗后血清NLR、TSP-1、miR-210水平和SLEDAI评分均较本组治疗前降低(均 P<0.05)。Pearson相关性分析可知，SLE患者血清NLR、TSP-1、miR-210水平与SLEDAI评分均呈正相关(均 P<0.05)；COX回归分析显示，将补体C3、补体C4水平、治疗前后SLEDAI评分等其他因素调整后，治疗前后血清NLR、TSP-1、miR-210仍与患者预后复发风险相关(均 P<0.05)；受试者工作特征(ROC)曲线显示，血清NLR、TSP-1、miR-210联合预测预后复发的AUC为0.907(95% CI：0.842~0.951)，灵敏度为86.96%，特异度为83.50%，较各指标单独预测价值明显提高。 结论:SLE患者血清NLR、TSP-1、miR-210水平与SLEDAI评分呈正相关，且各指标联合检测对患者预后具有较高预测价值，可为SLE诊治提供参考。

目的 探讨与神经保护相关的基因Rab10在抑郁症体内外模型中发挥的功能和作用机制.方法 选取36只大鼠作为慢性应激模型组(CUMS组),每只大鼠单笼饲养,进行6周慢性不可预测温和应激,另选取12只作为对照组.CUMS组大鼠完成6周CUMS刺激后,根据旷场实验数据和体质量分成3组(12只/组):CUMS+生理盐水组、CUMS+AAV载体组和CUMS+AAV过表达Rab10组,CUMS+saline组大鼠侧脑室注射生理盐水;CUMS+AAV组大鼠侧脑室注射AAV空病毒载体;CUMS+AAV-oe-Rab10组大鼠侧脑室注射AAV过表达Rab10载体实现Rab10基因过表达,CUMS刺激在整个实验期间持续进行.对照组大鼠始终不进行任何刺激.利用大鼠行为学指标的变化评价大鼠抑郁状态.构建CORT诱导的PC12细胞模型,CCK-8法检测细胞活力.通过TargetScan数据库预测与Rab10相互作用的miRNA及miRNA结合位点,并结合双荧光素酶和RIP实验探究miRNA-103-3p与Rab10的相互作用.在CORT刺激的PC12细胞中过表达Rab10,或在转染miRNA-103-3p inhibitor基础上沉默Rab10,qRT-PCR法检测miRNA-103-3p和Rab10的表达水平;Western blotting检测细胞中Rab10、BDNF、CREB、p62、Beclin-1、Wnt3a、Gsk3β、磷酸化(p)-Gsk3β和β-catenin的蛋白含量.结果 病毒过表达Rab10后明显改善CUMS大鼠行为学指标(P<0.05).qRT-PCR和Western blotting证实Rab10基因在CUMS大鼠海马与CORT诱导的PC12细胞中表达下调(P<0.05).生物信息学结合双荧光素酶和RIP实验证实miRNA-103-3p靶向Rab10(P<0.05).过表达Rab10或沉默miRNA-103-3p激活了Wnt/β-catenin信号通路,上调BDNF、CREB和Beclin-1的含量,下调p62蛋白的表达(P<0.05);下调miRNA-103-3p的基础上沉默Rab10逆转了miRNA-103-3p的作用(P<0.05).结论 miRNA103-3p靶向Rab10激活Wnt/β-catenin信号通路,改善神经细胞的可塑性,促进细胞自噬,从而对抗CORT诱导的PC12细胞损伤.

目的 研究血清hsa-miR3173-5p和hsa-miR-4297与心源性脑卒中的关联性,及其作为诊断标志物的可行性.方法 GEO数据库整合分析筛选出可能的心源性脑卒中特异性miRNA(hsa-miR3173-5p和hsa-miR-4297),通过孟德尔随机化与共定位分析验证两个miRNA对心源性脑卒中发病的危险作用,并对它们在miRNA-mRNA调控网络中的靶基因进行富集分析来寻找相关通路.纳入2022年3月-2023年1月于成都市第三人民医院急诊科诊断新发缺血性脑卒中的患者共103例,其中心源性脑卒中22例(病例组),非心源性脑卒中81例(对照组).采用实时荧光定量聚合酶链反应检测血清hsa-miR3173-5p和hsa-miR-4297的表达水平,多因素逻辑回归分析其与心源性脑卒中的相关性,采用ROC曲线评估预测价值.结果 孟德尔随机化分析提示遗传预测的循环血液中hsa-miR3173-5p和hsa-miR-4297表达增高分别使心源性脑卒中的发病风险增加46％和70％.共定位分析提示循环血液中hsa-miR3173-5p和hsa-miR-4297的表达与心源性脑卒中存在共享遗传变异的概率分别为95％和86％.病例组血清hsa-miR3173-5p和hsa-miR-4297 表达水平显著高于对照组(P＜0.05),hsa-miR3173-5p(OR=6.30,95％CI 1.79～22.14,P=0.004)和 hsa-miR-4297(OR=12.38,95％CI 1.97～77.72,P=0.007)与心源性脑卒中有显著关联.hsa-miR3173-5p 和 hsa-miR-4297 的 ROC 曲线下面积(AUC)分别为0.705和0.624,将hsa-miR3173-5p和hsa-miR-4297联合心房颤动共同进行分析,其AUC为0.842.结论 hsa-miR3173-5p和hsa-miR-4297的表达水平与心源性脑卒中具有密切关联,有望作为心源性脑卒中的诊断标志物.

目的 探讨动脉粥样硬化性心血管疾病(atherosclerosis cardiovascular disease,ASCVD)患者血清miR-103b的表达水平变化及其临床应用价值.方法 选取 2021 年 1 月至 2022 年 11 月在东部战区总医院心血管内科确诊的ASCVD患者以及同期体检的健康人对照血清标本各 80 例.采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组血清miR-103b的表达水平;运用ROC曲线、Spearman相关性分析血清 miR-103b 对 ASCVD 的预测及评估价值.结果 qRT-PCR 结果显示,与健康人对照组[0.000 2(0.000 08,0.000 4)]相比,ASCVD患者血清miR-103b的表达水平[0.000 9(0.000 5,0.003 3)]显著升高,差异有统计学意义(U=1 069,P＜0.001).Spearman相关分析显示,血清miR-103b与心肌肌钙蛋白I(r=0.322,P＜0.05)、心肌肌钙蛋白T(r=0.298,P＜0.05)、肌酸激酶MB同工酶(r=0.393,P＜0.05)、总胆固醇(r=0.290,P＜0.001)、低密度脂蛋白胆固醇(r=0.268,P＜0.001)均呈正相关,而与高密度脂蛋白胆固醇(r=-0.313,P＜0.001)呈负相关.ROC曲线分析结果显示,血清miR-103b水平区分ASCVD患者及健康人对照者的ROC曲线下面积(AUCROC)为 0.854(95%CI:0.791～0.917),敏感性为 73.26%,特异性为 83.92%.结论 ASCVD患者血清miR-103b的表达水平上调,可作为ASCVD潜在的辅助诊断生物学标志物.

目的 探讨微小RNA(miR)-103a-3p调控细胞肿瘤蛋白 53 调控凋亡抑制剂 1(TRIAP1)对成骨细胞分化以及去卵巢小鼠骨量的影响.方法 MC3T3-E1 细胞分为正常对照(NC)组、miR-103a-3p-NC组、miR-103a-3p模拟(mimc)组、miR-103a-3p mimic+TRIAP1-NC组、miR-103a-3p mimic+TRIAP1 mimic组.Real-time PCR检测细胞miR-103a-3p、TRIAP1、P53 的mRNA表达,MTT法和流式细胞术检测细胞增殖及凋亡,免疫荧光染色和茜红素染色检测细胞骨架F-actin表达和矿化情况,ELISA检测细胞碱性磷酸酶(ALP)活性.24 只雌性小鼠设为sham组、骨质疏松症(OP)组、miR-103a-3p antagonist-NC组和miR-103a-3p antagonist组,每组 6 只摘取双侧卵巢制备OP模型,sham组仅分离卵巢组织周围脂肪.测定骨组织miR-103a-3p、TRIAP1、P53、ALP、骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)的mRNA表达,microCT测定骨密度(BMD)、骨矿物质含量(BMC),HE染色观察骨组织病理改变.结果 细胞转染miR-103a-3p mimic后,miR-103a-3p及P53 表达升高、TRIAP1 表达降低,细胞增殖降低、凋亡增加,F-actin表达减弱,钙结节数量减少,ALP活性降低(P<0.01);而在增加转染TRIAP1 mimic后,以上miR-103a-3p mimics导致的结果均得到显著逆转(P<0.01).OP组小鼠骨组织miR-103a-3p、P53 表达升高,TRIAP1、ALP、OCN、OPN基因表达降低,BMD、BMC降低,骨组织结构破坏(P<0.05);miR-103a-3p antagonist组小鼠骨组织miR-103a-3p及P53 表达降低,TRIAP1、ALP、OCN、OPN基因表达升高,BMD、BMC升高,骨组织结构改善(P<0.05).结论 MiR-103a-3p可介导TRIAP1/P53 抑制成骨细胞增殖及矿化,而miR-103a-3p拮抗治疗可减少OP小鼠骨量丢失.

目的 探讨环状RNA (circRNA)在胸膜转移性肺癌和胸膜结核表达谱中的差异.方法 利用circRNA芯片技术检测3例胸膜转移性肺癌和胸膜结核患者的表达谱,经过对原始数据进行预处理,均一化后,找出差异表达的circRNA,经qRT-PCR进行验证.根据表达差异倍数较高和样本间一致性较好的原则筛选circRNA,借助生物信息学软件预测可能受其调控的miRNA,结合文献检索初步确定可能在胸膜转移性肺癌中具有重要作用的circRNA.结果 与胸膜结核比较,胸膜转移性肺癌中1.5倍以上变化,并且差异有统计学意义的circRNA定义为差异表达的circRNA.胸膜转移性肺癌中,1.5倍以上变化且P≤0.05的circRNA共3条,其中上调2条,下调1条.分别为在胸膜转移性肺癌中明显上调的hsa-circ-103212(1.671倍,P=0.0245)、hsa-circ-104822(1.514倍,P=0.0478)和明显下调的hsa-circ-100548(1.808倍,P=0.0287).生物信息学分析和文献检索显示,hsa-miR-613和hsa-miR-24-3p可能受hsa-circRNA-104822的调控而影响肺癌的发生、发展和转移.结论 与胸膜结核比较,胸膜转移性肺癌circRNA表达谱发生了显著变化;hsa-circRNA-104822可能在肺癌、发展和转移中起重要作用.

目的 分析环状RNA(circular RNA,circRNA)在口腔鳞状细胞癌组织及癌旁组织中表达谱的差异及临床意义.方法 利用高通量芯片技术检测3例口腔鳞状细胞癌患者癌组织和配对癌旁组织中的差异表达circRNA,采用实时定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)方法验证所筛选的部分circRNA分子在45对口腔鳞状细胞癌组织与癌旁组织中的表达情况.分析上调明显的circRNA表达水平与口腔鳞状细胞癌临床病理特征的关系,采用Arraystar公司circRNA靶基因分析软件,预测可能与上调明显的circRNA相互作用的靶miRNA分子.结果 口腔鳞状细胞癌患者癌组织与癌旁组织样本间差异表达的circRNA共155个,其中上调45个,下调110个.所挑选的在口腔鳞状细胞癌组织上调或下调差异表达最显著的3条circRNA中RT-qPCR验证结果显示,与癌旁组织相比,口腔鳞癌癌组织中hsa_circ_0001874、hsa_circ_0001971、has_circ_0067934表达上调,hsa_circ_0000520、hsa_circ_0023944、hsa_circ_0000140表达下调,与芯片检测结果一致.在上述芯片筛选的口腔鳞状细胞癌组织特征circRNA表达谱中,hsa_circ_0001874上调表达最明显,hsa_circ_0001874的表达在不同临床分期及细胞分化程度存在显著差异;circRNA靶基因分析软件预测结果提示,miR-103a-3p、miR-107、miR-593-5p、miR-661和miR-662可能是hsa_circ_0001874的潜在靶基因.结论 多种circRNA在口腔鳞状细胞癌组织中呈异常表达,这些表达差异的circRNA及其潜在的靶基因可能与口腔鳞状细胞癌的发生、发展密切相关.

目的:探讨2型糖尿病前期患者循环血清中微小RNA(miR)-103b的表达变化与临床意义,并分析其靶基因生物信息学功能.方法:收集糖尿病前期患者(n=48)、糖尿病无并发症患者(n=47)及正常健康人群(n=50)的血清标本,用real-time PCR检测各血清样本中miR-103b的表达水平,并比较3组miR-103b表达水平的差异与临床病理特征之间的相关性,运用受试者工作特征(ROC)曲线评估诊断效率及特异性.利用生物信息学技术,对hsa-miR-103b的特征、进化保守性、靶基因功能以及GO信号通路等进行深入分析.结果:Real-time PCR结果显示,与健康人群相比,循环血清中miR-103b在糖尿病前期及糖尿病无并发症患者的表达显著降低(P<0.05).ROC曲线分析结果显示,糖尿病前期患者血清中miR-103b的ROC曲线下面积(AUC)达到0.877,提示miR-103b是糖尿病前期具有较高灵敏性和特异性的临床诊断标志物.生物信息学分析结果表明,hsa-miR-103b定位于人染色体5q34,并在10个物种间具有高度的保守性.靶基因预测共获得53个潜在的功能性靶向基因.进一步应用DAVID数据库和GO数据库进行靶基因功能富集分类,结果显示miR-103b靶基因功能主要涉及蛋白质氨基酸的磷酸化、RNA聚合酶II启动子转录调控和DNA依赖的转录调节,参与细胞周期、细胞生长增殖和细胞凋亡,调节功能蛋白结合并与PIP3结合激活下游信号通路.这些功能因子主要富集于MAPK、Wnt、胰岛素和Ras等信号通路,少量因子参与调节细胞周期和脂肪酸代谢等生理过程.结论:2型糖尿病前期患者血清中低水平miR-103b可能是潜在的2型糖尿病早期超前诊断标志物和治疗靶点.