目的:筛选非小细胞肺癌(NSCLC)顺铂耐药相关微小RNA(miRNA，miR)并分析其生物学功能。方法:从高通量基因表达数据库(GEO)中搜索并下载与非小细胞肺癌顺铂耐药相关的miRNA芯片数据，并通过Targetscan和miRanda预测miRNA的靶基因，对靶基因行基因本体(GO)生物学进程分析，京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路分析，并构建蛋白与蛋白相互作用网络图(PPI)；进一步对KEGG通路行网路分析，并结合与顺铂耐药存在显著相关性的miRNA，构建miR-KEGG网路。组间数据比较采用 t检验。 结果:共筛选到GSE84200、GSE43249和GSE56036 3个数据库，总计23个与顺铂耐药相关的miRNA。Targetscan和miRanda共同预测的靶基因共计914个。GO功能富集分析表明这些基因主要以蛋白结合，信号传导和正性调节基因转录等生物学过程相关。KEGG通路分析显示这些基因主要参与丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)等信号通路。PPI网路分析结合关键基因分析显示p53为关键基因。miR-KEGG网络分析显示miR-195-5p和miR-424-5p在顺铂耐药中发挥重要作用。结论:miR-195-5p和miR-424-5p可能在顺铂耐药中发挥重要作用，生物学分析预测有助于进一步认识miRNA在非小细胞肺癌顺铂耐药中的功能。

目的:观察氧诱导视网膜病变（OIR）小鼠视网膜组织中miRNA的表达，筛选与p21及视网膜新生血管（RNV）形成相关的miRNA。方法:实验研究。40只健康7日龄C57BL/6J小鼠随机分为正常组和OIR组，每组20只。OIR组构建氧诱导RNV模型，正常组不做任何处理。小鼠17日龄时，处死小鼠，视网膜荧光铺片观察小鼠RNV发生情况；光学显微镜下计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核。取视网膜组织行miRNA芯片分析，检测正常组与OIR组之间差异表达的miRNA。所得差异miRNA靶基因分别进行基于基因注释（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）的富集分析；通过Targetscan、MiRanda、MicroT-CDS数据库比对筛选可能与p21有关的miRNA及通路。组间两两比较采用独立样本 t检验。 结果:与正常组比较，OIR组小鼠视网膜无灌注区面积、RNV及突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数量增加，差异均有统计学意义（ t=18.800、9.025， P<0.05）。与正常组比较，OIR组有统计学差异表达的miRNA 54个，其中，上调、下调者分别为47、7个。从3个数据库与所得差异miRNA的比对结果中共筛选到与p21相关miRNA 13个，按差异倍数从高到低分别为miR-7218-5p、miR-322-5p、miR-224-5p、miR-335-5p、miR-329-3p、miR-362-3p、miR-532-5p、miR-20b-5p、miR-20a-5p、miR-195a-5p、miR-423-5p、miR-497a-5p、miR-129-5p。差异miRNA靶基因富集分析，得到1 112个GO条目及50条KEGG通路，其中50个GO条目和13条KEGG通路与p21相关。 结论:在OIR模型中共筛选出13个与P21相关的miRNA。

背景与目的:长链非编码RNA PCAT19(lncRNA PCAT19,简称PCAT19)在多种肿瘤中表达上调,且与恶性进展和不良预后密切相关.然而,PCAT19在胰腺癌中的表达、功能及作用机制尚无研究报道.笔者前期通过starBase数据库预测PCAT19可与miR-195-5p互补结合,因此,本研究探讨PCAT19在胰腺癌细胞中的表达与作用,及其与靶基因和相应miRNA的调控关系.方法:用qRT-PCR检测人胰腺导管上皮细胞系(HPNE)和胰腺癌细胞系(PANC-1、SW1990、HS766T、CFPAC-1)中PCAT19 及miR-195-5p的表达.用双萤光素酶报告基因分析PCAT19 与miR-195-5p的靶向结合作用.将PANC-1 细胞分别转染PCAT19 沉默序列si-PCAT19(si-PCAT19 组)、阴性对照序列(si-NC组)、miR-195-5p抑制序列+si-PCAT19(共转染组)后,用MTT测定细胞增殖能力,Transwell测定细胞侵袭能力,Western blot检测Wnt/β-Catenin信号通路相关蛋白的表达.结果:各胰腺癌细胞系中PCAT19表达水平均明显高于HPNE细胞,而miR-195-5p的表达水平均明显低于HPNE细胞(均P<0.05).双萤光素酶实验显示miR-195-5p是PCAT19的靶miRNA.与si-NC组PANC-1细胞比较,si-PCAT19组PANC-1中miR-195-5p表达水平明显升高,细胞增殖能力与侵袭能力明显降低,β-catenin、c-Myc和cyclin D1表达水平明显下调(均P<0.05),而共转染组以上各项指标与si-NC组差异均无统计学意义(均P>0.05).结论:PCAT19在胰腺癌细胞中表达升高,其可促进胰腺癌细胞增殖和侵袭,机制可能与调控miR-195-5p并影响Wnt/β-Catenin信号通路有关.

目的 生物信息学分析miR-16-5p在乳腺癌(BC)中的作用并进行临床验证.方法 BC的队列数据集来自高通量基因表达数据库(GEO)和癌症基因组图谱(TCGA),并通过生物信息学工具进行分析.在临床验证中,前瞻性纳入2018 年 1 月至 2022 年 2 月接受手术的BC患者(BC组),获取 BC组织和对应的癌旁正常组织.另纳入同期 150 例体检健康女性作为对照组,获取其血清样本,采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测组织及血清miR-16-5p表达.所有BC患者至少随访3 年.结果 共鉴定出 195 个差异表达基因(DEG),根据logFC≥1.5 或logFC≤-1.5 阈值,miR-16-5p表达显著下调,其受试者工作特征(ROC)曲线和Kaplan-Meier曲线分析显示,miR-16-5p区分BC组织及正常乳腺组织的曲线下面积(AUC)为 0.73(95%CI:0.68～0.79),且miR-16-5p低表达的患者预后较差(P=0.013),因此miR-16-5p可作为候选miRNA.在临床验证集中,BC组织miR-16-5p相对表达量明显低于癌旁正常组织[0.46(0.29,0.66)vs.0.82(0.56,1.08),P＜0.001].且BC患者血清miR-16-5p相对表达量也显著低于对照组[0.34(0.15,0.50)vs.0.99(0.70,1.20),P＜0.001].ROC曲线显示,当血清miR-16-5p相对表达量≤0.520 时可良好地诊断BC患者,AUC值为0.897(95%CI:0.863～0.932).BC患者血清样本和BC组织样本中miR-16-5p相对表达量呈正相关(rs= 0.373,P＜0.001).血清 miR-16-5p 表达与 T 分期、N 分期、TNM 分期有关(P＜0.05).血清miR-16-5p低表达组是影响BC患者患者 3 年内发生局部复发/远处转移及死亡的独立预测生物标志物(P＜0.05).结论 血清miR-16-5p表达对BC有诊断效能,低血清miR-16-5p表达预示着BC患者更差的疾病进展情况和 3 年内预后不良.

目的 探索阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)患者血清差异表达的miRNAs及其与认知功能的关系.方法 采用lllumina/Solexa高通量测序技术分析AD患者和健康体检老年人两组(各30例)血清miRNA表达谱;构建miRNA慢病毒质粒,注射至造模成功的AD大鼠静脉内,采用水迷宫实验分析大鼠的认知功能;合成miRNA模拟剂(mimics)、抑制剂(inhibitor),转染至SH-SY5Y细胞系中,采用Western blot法检测细胞中β-淀粉样前体蛋白裂解酶1(BACE1)的表达.结果 与正常对照组(control)相比,AD组血清中miR-146a-5p(log2 AD/Control=2.3)、miR-195-5p(log2 AD/Control=10.2)、miR-20b-5p(log2AD/Control=15.1)表达上调,miR-19b-3p(log2AD/Control =-8.0)、miR-125b-3p(log2AD/Control=-15.3)表达下调,差异有统计学意义(P＜ 0.05);与AD组[(26.50±3.12)s]相比,AD+miR-19b-3p组[(15.33± 2.78)s]的大鼠逃避潜伏期明显缩短,差异具有统计学意义(P＜0.05);与正常对照相比,miR-19b-3p模拟剂组BACE1蛋白表达减少,抑制剂组BACE1蛋白表达增加.结论 miR-19b-3p可能通过调节BACE1的表达改善AD患者的认知功能.

目的 探讨冠状动脉严重狭窄患者血浆miRNA-195表达及其与侧支循环形成的关系.方法 选取2016年3月至2017年5月期间190例接受选择性冠状动脉造影检查的患者作为研究对象,根据Rentrop分级将患者分为侧支循环不良组(90例)与侧支循环良好组(100例),比较两组患者的血浆miRNA-195和VEGF水平,分析所有入选者血浆miRNA-195和VEGF水平的相关性以及血浆miRNA-195和Gensini积分的相关性.结果(1)侧支循环良好组的血浆miRNA-195和VEGF水平均明显高于侧支循环不良组,差异具有统计学意义(P<0.05);(2)冠心病患者血浆miRNA-195与VEGF水平呈正相关性(r=0.628,P=0.022);(3)冠心病患者血浆miRNA-195与Gensini积分呈正相关性(r=0.765,P=0.013).结论 冠状动脉严重狭窄患者侧支循环的形成过程中,miRNA-195可能是通过调控VEGF参与了新生血管的生成,可以尝试将其作为预测侧支循环形成的生物标记物供临床参考.

目的 血管新生在肿瘤、糖尿病等血管异常增生性疾病和冠心病、心肌梗死、脑梗死等缺血性心脑血管病的发生、发展及治疗中具有重要作用.微小RNA(miRNAs)与血管新生之间联系紧密,miRNAs对血管新生的作用包括促进血管新生和抑制血管新生两个方面,促进血管新生的miRNAs包括miR-126、miR-378、miR-132、miR-146a、miRNA-31、miR-425-5p、let-7f等,抑制血管新生的miRNAs包括miR-195、miR-140-5p、miR-150、miR-497、miR-214、miR-221/miR-222、miR-29b、miR-29c等.miRNAs在血管新生信号通路上具有同时调控多个基因的潜力,并且体积小、物种间序列保守性强、相对稳定,可作为一种很有前景的调控血管新生的治疗靶点.

目的 筛选低硒大鼠心肌组织中差异表达的微小RNA(miRNA),为克山病的发病机制研究提供参考.方法 采用随机数字表法将30只清洁级SD大鼠分为对照组、低硒组、补硒组,每组10只.对照组大鼠给予AIN-93标准饲料喂养,低硒组及补硒组大鼠均给予AIN-93 M(低硒)饲料喂养;3组大鼠均喂养14周.之后补硒组大鼠给予亚硒酸钠溶液灌胃,对照组和低硒组大鼠则给予相同剂量蒸馏水灌胃;3组大鼠均连续灌胃3周.入组17周后留取3组大鼠外周血检测血清硒及血浆脑钠肽(BNP)水平;采用基因芯片测序筛选差异表达的miRNA,并行聚类分析及靶基因功能显著性分析;采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测差异表达显著的miRNA表达情况.结果 (1)低硒组和补硒组大鼠血清硒水平低于对照组,血浆BNP水平高于对照组(P<0.05);低硒组大鼠血清硒水平低于补硒组,血浆BNP水平高于补硒组(P<0.05).(2)基因芯片测序结果显示,有40个miRNA为硒敏感性miRNA.(3)基因本体(GO)功能富集分析结果显示,上述40个差异表达miRNA靶基因功能主要富集于脂代谢、心脏发育、细胞黏附、血管发育、轴突导向、细胞迁移调控、输尿管芽发育、跨膜受体蛋白酪氨酸激酶信号通路、细胞分化、有机氮化物反应、棕色脂肪分化、髓系祖细胞分化、细胞-基质黏附、细胞增殖调控、生物钟节律.靶基因投射的13条信号转导通路为肾细胞癌、转录调节、多巴胺能突触、焦点黏附、Rap信号通路、脂代谢、PPAR信号通路、Ras信号通路、Oxytocin信号通路、长期抑制、PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路、HTLV-1感染.(4)以表达最显著的8种miRNA作为验证基因,以对照组心肌组织miRNA为参照,补硒组大鼠心肌组织miRNA-374、miRNA-16、miRNA-199a-5p、miRNA-195、miRNA-30e*相对表达量低于低硒组,心肌组织miRNA-3571、miRNA-675、miRNA-450a*相对表达量高于低硒组(P<0.05).结论 低硒会导致大鼠心功能损伤,低硒大鼠心肌组织中存在多个差异表达的miRNA,主要涉及15种生物学功能和13条信号转导通路,这些差异表达的miRNA可能参与克山病的发生发展.

目的:探讨Drosha对胃癌MGC-803和SGC-7901细胞迁移和侵袭能力的影响及其可能的作用机制.方法:将携带有Drosha-shRNA的重组慢病毒感染胃癌MGC-803和SGC-7901细胞,以感染携带有阴性对照(negative control,NC)-shRNA的重组慢病毒作为对照.采用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测转入Drosha-shRNA后对MGC-803和SGC-7901细胞中Drosha mRNA和蛋白表达的影响,Transwell小室迁移和侵袭实验分别检测Drosha下调对MGC-803和SGC-7901细胞迁移和侵袭能力的影响;实时荧光定量PCR检测Drosha下调的MGC-803和SGC-7901细胞中微RNA-195-5P(microRNA-195-5P,miR-195-5P)的表达水平.在Drosha下调的胃癌细胞中采用脂质体法同时转入miR-195-5P-inhibitor,实时荧光定量PCR检测miR-195-5P的下调效果,Transwell小室迁移和侵袭实验分别检测下调miR-195-5P表达对细胞迁移和侵袭能力的影响.采用脂质体法将miR-195-5P-mimics转染MGC-803和SGC-7901细胞,实时荧光定量PCR检测miR-195-5P过表达的效果,Transwell小室迁移和侵袭实验分别检测miR-195-5P过表达对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响.结果:感染Drosha-shRNA重组慢病毒后,MGC-803和SGC-7901细胞中Drosha mRNA和蛋白表达水平均较对照组明显下调(P值均＜0.01),细胞的迁移和侵袭能力均明显被抑制(P值均＜ 0.05),miR-195-5P的表达水平明显上调(P值均＜ 0.001).成功在Drosha下调的胃癌MGC-803和SGC-7901细胞中下调miR-195-5P的表达水平(P值均＜0.05),miR-195-5P表达下调可以恢复Drosha下调对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响(P值均＜0.05).成功将miR-195-5P-mimics瞬时转入MGC-803和SGC-7901细胞,MGC-803和SGC-7901细胞中miRNA-195-5P的表达水平明显上调(P值均＜ 0.01),细胞的迁移和侵袭能力均明显降低(P值均＜0.01).结论:Drosha可促进胃癌细胞的迁移和侵袭能力.Drosha与miR-195-5P的表达呈负相关性,Drosha通过调控miR-195-5P的表达促进胃癌细胞的迁移和侵袭.

急性淋巴细胞白血病(acute lymphocytic leukemia,ALL)是儿童时期最常见的血液系统恶性肿瘤,随着治疗技术的不断改进,疗效已经取得明显的进展,但仍有20％左右的病例复发难治,发生机制尚未完全阐明.微小RNA (miRNA)是一类通过抑制或降解mRNA的含有18～24个核苷酸的非编码小RNA分子,参与生物体生长、发育和疾病发生过程中相关基因表达.至今为止已经发现了3000多个miRNA,其中大部分在动物体内起着关键性的调控作用.研究人员对发现的microRNA制定了以下命名规则:(1) miRNA简写成miR,再根据其被克隆的先后顺序加上阿拉伯数字,如miR-21;(2)高度同源的miRNA在数字后加上英文小写字母(a、b、c),如miR-181a和miR-34b;(3)由不同染色体上的DNA序列转录加工而成的具有相同成熟体序列的miRNA,则在后面加上阿拉伯数字以区分,如miR-199a-1和miR-199a-2;(4)如果一个前体的2个臂分别加工产生miRNA,在表达水平较低的miRNA后面加“*”,如miR-199a和miR-199a*,或进行如下命名,miR-142-5p(也可命名为miR-142-s,表示从5端的臂加工而来)和miR-142-3p(也可命名为miR-142-as,表示从3端的臂加工而来);(5)将物种缩写置于miRNA之前,如hsa-miR-195;(6)确定命名规则之前发现的miRNA,如let-7,则保留原来名字.