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miRNA-21对肺癌细胞增殖和侵袭能力的影响及作用机制的研究
编辑人员丨6天前
目的:探讨微小RNA-21(miR-21)对肺癌细胞A549增殖、迁移和侵袭能力的影响,并对相应的机制进行探究。方法:构建空白组、miR-21高表达质粒空载对照组、miR-21高表达组、miR-21敲减质粒空载对照组、miR-21敲减组。采用荧光定量qRT-PCR检测细胞中miR-21 mRNA表达情况,蛋白质印迹法分析相关通路蛋白表达水平,确定miR-21转染效率。CCK-8试剂盒检测细胞增殖和生长能力。采用Transwell小室模型检测miR-21上调和下调以对A549细胞迁移和侵袭能力的影响。流式细胞仪检测细胞周期变化和细胞凋亡情况。结果:荧光定量qRT-PCR提示,miR-21高表达组miR-21表达水平显著高于空白组和miR-21高表达质粒空载对照组( t=48.56、45.25, P值均<0.01)。CCK-8检测显示miR-21转染48 h及72 h,miR-21高表达组细胞增殖均较其他组强( F=43.061、74.862, P值均<0.01)。Transwell迁移和侵袭实验提示,miR-21高表达组细胞迁移和侯袭能力均较空白组和miR-21高表达质粒空载对照组强( P值均<0.05)。 结论:miRNA-21促进肺癌细胞增殖并抑制肺癌细胞凋亡。miRNA-21对人肺癌细胞株的增殖、侵袭、转移能力的影响与AKT/P-AKT/Cleaved-Caspsae 3/MMP-2/MMP-9细胞信号通路有关。
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编辑人员丨6天前
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长链非编码RNA CDKN2BAS靶向微小RNA-98-5p调控骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的分子机制
编辑人员丨6天前
目的:探讨长链非编码RNA CDKN2BAS(lncRNA CDKN2BAS)是否通过靶向微小RNA(miRNA,miR)-98-5p影响骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭。方法:实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测成骨细胞hFOB1.19(购自上海通派生物科技有限公司)与骨肉瘤细胞U2-OS、SOSP-9607、Saos-2、SJSA-1(购自美国典型菌种保藏中心)中CDKN2BAS、miR-98-5p的表达水平;按照随机数字表法随机分组为si-con组、si-CDKN2BAS组、miR-con组、miR-98-5p组、si-CDKN2BAS+anti-miR-con组、si-CDKN2BAS +anti-miR-98-5p组,噻唑蓝(MTT)法检测CDKN2BAS与miR-98-5p表达对骨肉瘤细胞增殖活力的影响;流式细胞术检测CDKN2BAS与miR-98-5p表达对骨肉瘤细胞凋亡能力的影响;Transwell小室实验检测CDKN2BAS与miR-98-5p表达对骨肉瘤细胞迁移及侵袭能力的影响;双荧光素酶报告实验检测CDKN2BAS是否靶向miR-98-5p;蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞核增殖抗原(Ki-67)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、p21、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved Caspase)-3、Cleaved Caspase-9、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、磷酸化-丝裂原活化蛋白激酶p38(p-p38 MAPK)的表达量。两组间比较采用独立样本 t检验,多组间比较采用单因素方差分析。 结果:hFOB1.19细胞与骨肉瘤细胞U2-OS、SOSP-9607、Saos-2、SJSA-1中CDKN2BAS的表达水平分别为1.05±0.28、4.26±0.42、3.65±0.56、4.02±0.46、3.75±0.41,miR-98-5p的表达水平分别为0.98±0.06、0.41±0.05、0.64±0.07、0.57±0.06、0.47±0.05,与hFOB1.19细胞比,骨肉瘤细胞株中CDKN2BAS表达明显上调( F=80.889, P<0.05),miR-98-5p表达明显下调( F=130.868, P<0.05),差异均有统计学意义;沉默CDKN2BAS与过表达miR-98-5p后骨肉瘤细胞存活率分别为(68.57±8.63)%、(64.68±7.24)%,迁移细胞数分别为(98.43±11.51)、(93.46±12.54)个,侵袭细胞数分别为(47.93±6.84)、(38.64±6.69)个,沉默CDKN2BAS与过表达miR-98-5p后骨肉瘤细胞增殖活力明显降低( F=37.873、60.131, P<0.05),细胞迁移及侵袭能力明显减弱( F=159.281、189.097,167.638、302.502, P<0.05),Ki-67、MMP-2、MMP-9、p-p38 MAPK蛋白表达水平明显降低( F=101.455、161.465、196.590、149.229、157.759、55.555, P<0.05),而细胞凋亡率明显升高( F=260.694、270.939, P<0.05),p21、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白表达水平明显升高( F=88.672、448.342、202.034、118.338、121.661、290.273, P<0.05),差异均有统计学意义;双荧光素酶报告实验证实CDKN2BAS靶向抑制miR-98-5p的表达;与si-CDKN2BAS+anti-miR-con组比较,si-CDKN2BAS+anti-miR-98-5p组细胞增殖、迁移、侵袭能力明显增强( t=4.546、10.682、5.648, P<0.05),细胞凋亡能力明显减弱( t=6.996, P<0.05),差异均有统计学意义。 结论:lncRNA CDKN2BAS通过靶向负调控miR-98-5p的表达影响骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力。
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编辑人员丨6天前
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miRNA-3653-3p通过抑制PLAC8-Wnt-β-catenin信号通路降低子宫内膜癌细胞的增殖和侵袭能力
编辑人员丨6天前
目的:探讨miRNA-3653-3p(miR-3653-3p)对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭能力的影响及其相关机制。方法:从OncoLnc数据库中下载356例子宫内膜癌患者资料,数据更新时间为2020年;采用Kaplan-Meier法分析miR-3653-3p表达水平与子宫内膜癌患者总生存的关系;采用miRGator数据库预测与miR-3653-3p存在结合位点的靶基因。选择人子宫内膜癌细胞株AN3CA、HEC-1A、HEC-1B、Ishikawa和人正常子宫内膜上皮细胞株ESC,采用实时荧光聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-3653-3p相对表达量。选取miR-3653-3p表达最低的细胞株为研究对象,分为阴性对照组和miR-3653-3p组,分别转染对照空载质粒和miR-3653-3p过表达质粒。采用CCK-8法检测细胞的增殖能力,Transwell法检测细胞的侵袭能力;qRT-PCR和蛋白质印迹法检测miR-3653-3p靶基因的表达。蛋白质印迹法检测miR-3653-3p对Wnt-β-catenin信号通路相关蛋白表达的影响。结果:OncoLnc数据库中数据分析显示,与miR-3653-3p低表达的子宫内膜癌患者相比,miR-3653-3p高表达的患者总生存较好( P<0.01)。与人正常子宫内膜上皮细胞ESC相比,子宫内膜癌细胞株AN3CA、HEC-1A、HEC-1B、Ishikawa中miR-3653-3p表达水平均降低(均 P<0.05),并且HEC-1A细胞中miR-3653-3p的相对表达量最低,选择HEC-1A细胞进行后续实验。CCK-8实验结果显示,与阴性对照组相比,第2、3、4、5天miR-3653-3p组HEC-1A细胞能力均降低(均 P<0.05)。Transwell小室侵袭实验结果显示,培养26 h时,阴性对照组和miR-3653-3p组HEC-1A细胞侵袭数分别为(80±11)个和(21±4)个,差异有统计学意义( t=5.18, P<0.01);与阴性对照组比较,miR-3653-3p组细胞侵袭数降低。采用miRGator数据库预测miR-3653-3p的靶基因可能是胎盘特异蛋白8(PLAC8)。阴性对照组和miR-3653-3p组HEC-1A细胞中PLAC8 mRNA的相对表达量分别为6.26±0.83和0.97±0.31,差异有统计学意义( t=6.00, P<0.01),miR-3653-3p组PLAC8 mRNA的相对表达量低于阴性对照组。与阴性对照组相比,miR-3653-3p组HEC-1A细胞PLAC8蛋白降低,Wnt-β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin、转化生长因子β(TGF-β)、GSK-3β、Rac1表达均降低。 结论:miR-3653-3p可能通过调节PLAC8-Wnt-β-catenin信号通路抑制子宫内膜癌细胞的增殖、侵袭。
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编辑人员丨6天前
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结直肠癌患者循环微小RNA-375和组织Yes相关蛋白1表达的关系及其临床意义
编辑人员丨6天前
目的:分析结直肠癌患者循环微小RNA(miR-375)和组织Yes相关蛋白1(YAP1)表达的相关性,探讨两者与临床病理特征的关系。方法:以嘉兴学院附属第二医院2016年6月至2017年12月收治的87例结直肠癌患者[男45例,女42例,年龄(64.5±11.4)岁]为研究对象,以80例健康志愿者为对照,采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)实验测定外周血miR-375表达水平,采用免疫组织化学实验测定结直肠癌病理组织和癌旁健康组织YAP1表达水平,分析两项指标与临床病理特征及预后的关系,进一步根据miR-375和YAP1的表达情况将研究组分为低miR-375且高YAP1组(A组, n=21),中间组(B组, n=32,包含低miR-375且低YAP1,高YAP1且高miR-375两种情况),高miR-375且低YAP1组(C组, n=34),分析两项指标与患者预后的关系。应用SPSS 22.0统计软件分析。 结果:结直肠癌患者循环miR-375表达水平为0.132±0.085,低于对照组(0.521±0.186),癌组织YAP1表达水平为2.201±0.856,明显高于癌旁健康组织(0.814±0.262),差异有统计学意义( t=51.826、51.175, P<0.05)。miR-375表达和YAP1表达之间呈负相关( r=-0.691, P<0.05),双荧光素酶实验报告证实两者具有相互作用,差异有统计学意义( t=9.564, P<0.05)。miR-375和YAP1表达与Dukes分期明显相关,C期患者miR-375表达低于A和B期,YAP1表达高于A和B期,差异有统计学意义( F=4.347、3.724, P<0.05)。miR-375联合YAP1检查有助于预测结直肠癌复发/转移和死亡(AUC=0.739、0.699, P<0.05),差异有统计学意义,其中低miR-375且高YAP1者中位生存期最短,高miR-375且低YAP1者中位生存期最长,组间差异有统计学意义( χ2=4.685, P<0.05)。 结论:miR-375和YAP1存在交互作用,两者共同参与结直肠癌的发生与发展。
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编辑人员丨6天前
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糖尿病性心肌病小鼠心肌组织差异表达环状RNA的探讨
编辑人员丨6天前
目的:鉴定糖尿病性心肌病(DCM)小鼠心肌组织差异表达的环状RNA(circRNA),并分析其可能的生物学功能及调控网络。方法:C57BL/6小鼠,雄性,8周龄,体重21~27 g。选取8只小鼠作为正常组,15只进行建模。通过腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病小鼠模型。注射1周后,测定小鼠空腹血糖水平,经检测12只小鼠建模成功。在相同的实验室条件下饲养小鼠12周,通过超声心动图检测小鼠的心脏结构和功能,筛选出左心室射血分数≤60%,且二尖瓣舒张早期最大血流速度与心房收缩期最大血流速度比值(E/A)≤1.6的糖尿病小鼠作为DCM组( n=3)。于DCM组确立当天麻醉后处死正常组和DCM组小鼠,取出心脏,从心肌组织中提取RNA备用。采用高通量测序对DCM组和正常组小鼠心肌组织中的RNA进行测序和鉴定分析,并利用DeSeq2进行差异性分析,通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)在组织水平上对分析结果进行验证,并对鉴定的差异circRNA进行GO分析和KEGG通路分析。通过微小RNA(miRNA)靶基因预测软件进行差异表达circRNA-miRNA相互作用预测。 结果:DCM小鼠心肌组织中共鉴定出63种差异表达circRNA。RT-qPCR验证结果示同源性分析筛选出的16种差异表达circRNA中8种组织水平的表达与测序结果一致,其中7种表达上调、1种表达下调。KEGG通路分析结果示,上调的circRNA主要与腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)信号通路以及细胞间的黏着连接通路有关,下调的circRNA主要与心肌病有关。GO功能分析显示,上调表达的circRNA在分子功能方面主要与离子、蛋白质、激酶等因子的结合过程有关,并且在细胞组分方面参与调节细胞内结构尤其是细胞器的构成。分子功能与细胞组分方面的功能分析显示,上调的circRNA与细胞组分起源、募集、组织的生物学过程相关,并由此参与细胞生物学过程的调控;下调的circRNA在分子功能方面与催化活性相关,也与蛋白激酶的结合过程、转移酶及钙调蛋白的活性有关,在细胞组分方面与收缩性纤维的组分、肌原纤维的构成密切相关,而在富集的生物学过程GO分析术语中,包括赖氨酸肽基修饰、肌节的构成、肌原纤维的装配、心肌组织的形态学发育、心肌肥厚等生物学过程。本研究鉴定的差异表达circRNA均存在miRNA的结合位点,且部分miRNA与保护心肌细胞正常生理功能、抗氧化应激损伤、抑制心肌细胞凋亡以及抗心肌肥厚有关。结论:DCM小鼠心肌组织中circRNA存在差异表达,且其与DCM的发生发展密切相关。
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编辑人员丨6天前
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子宫颈癌患者血清miRNA-21水平与临床病理因素及预后的关系
编辑人员丨6天前
目的:探讨子宫颈癌患者血清miRNA-21(miR-21)水平与临床病理因素及预后的关系。方法:选取2013年8月至2016年1月中国医科大学附属第四医院经病理学检查确诊的子宫颈癌患者72例(子宫颈癌组),以60名子宫颈检查排除病变者作为健康对照组。采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测两组血清miR-21水平。分析不同病理学特征的子宫颈癌患者血清miR-21水平差异,采用Cox比例风险回归模型分析子宫颈癌患者生存影响因素。结果:子宫颈癌组患者术前血清miR-21相对表达量高于健康对照组(9.64±2.01比6.38±1.42),差异有统计学意义( t=10.556, P<0.05)。国际妇产科协会(FIGO)分期Ⅲ~Ⅳ期患者(38例)术前血清miR-21相对表达量高于Ⅰ~Ⅱ期患者(34例)(10.14±1.96比9.10±1.88),差异有统计学意义( t=-2.291, P=0.025);淋巴结转移患者(36例)术前血清miR-21相对表达量高于淋巴结未转移的患者(36例)(10.32±1.80比8.91±1.94),差异有统计学意义( t=3.197, P=0.002);生存患者(29例)术前血清miR-21相对表达量低于死亡患者(43例)(9.23±1.93比10.47±1.89)差异有统计学意义( t=2.696, P=0.009);不同年龄、病理学类型、分化程度、浸润深度的子宫颈癌患者间血清miR-21水平比较,差异均无统计学意义(均 P>0.05)。经Cox比例风险回归模型分析,FIGO分期高、发生淋巴结转移、术前血清miR-21水平高是子宫颈癌患者预后的独立危险因素( OR=3.789,95% CI 1.106~12.973, P=0.048; OR=3.228,95% CI 1.116~9.340, P=0.046; OR=1.714,95% CI 1.079~2.723, P=0.039)。 结论:子宫颈癌患者血清miR-21水平高与肿瘤恶性程度高、不良预后有一定的关系。
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编辑人员丨6天前
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miRNA-21及miRNA-181b在精神分裂症患者外周血中的表达及意义
编辑人员丨6天前
目的:探究微小核糖核酸21(miRNA-21)及微小核糖核酸181b(miRNA-181b)在精神分裂症患者外周血中的表达及意义。方法:选取绍兴市第七人民医院2020年3月至2022年3月收治的精神分裂症患者100例为研究对象(研究组),另选取同期在该院体检的健康志愿者30例为对照组,检测比较两组血清miRNA-21、miRNA-181b表达水平。100例精神分裂症患者入科后均接受规范化治疗,采用阳性与阴性症状量表(PANSS)评估其精神症状,监测、收集、比较患者入科前及治疗后1周、4周、8周、12周血清miRNA-21、miRNA-181b表达水平及PANNS评分,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miRNA-21、miRNA-181b表达水平对精神分裂症的诊断价值。结果:研究组血清miRNA-21、miRNA-181b表达水平分别为(2.41±1.12)、(15.62±2.26),均显著高于对照组的(0.73±0.37)、(8.11±0.98)( t=8.07、17.67,均 P < 0.001);随治疗时间的延长,研究组血清miRNA-21、miRNA-181b表达水平及PANNS评分均逐渐降低(均 P < 0.001);血清miRNA-21、miRNA-181b检测诊断精神分裂症的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.616、0.683,两者联合诊断精神分裂症的AUC为0.788,明显高于单独检测。 结论:miRNA-21、miRNA-181b在精神分裂症患者外周血中呈异常高表达,均可作为早期诊断精神分裂症的客观有效指标,两者联合准确性更高。
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编辑人员丨6天前
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二甲双胍对2型糖尿病患者miRNA表达的影响及作用靶点预测研究
编辑人员丨6天前
目的:研究二甲双胍对2型糖尿病患者微小RNA(miRNA)表达水平的影响,并利用网络药理学进行分析,预测其治疗作用潜在的靶点及途径。方法:筛选本院入院治疗的初发2型糖尿病患者15例,住院期间及出院后均规律服用盐酸二甲双胍片。患者服药6个月后,对比其用药前后血清基质金属蛋白酶(MMP)-9、转化生长因子(TGF)-β1及心肌纤维化相关miRNA的表达水平。对呈现统计学差异表达的miRNA进行基因本体论(GO)和KEGG通路富集分析,并构建差异表达miRNA对应靶基因信使RNA(mRNA)网络图。结果:患者用药后,血清MMP-9水平较用药前明显下降( P<0.05)。二甲双胍可显著下调患者血清人类微小RNA(hsa-miR) 29a-3p、hsa-miR133a-5p、hsa-miR21-5p、hsa-miR30c-5p、hsa-miR1-3p表达水平( P<0.05或 P<0.01)。GO和KEGG分析结果显示,差异表达miRNA主要集中在内质网腔、突触、基膜等细胞组分中,通过胶原分解代谢过程、短时神经元突触可塑性调节、轴突延伸等生物过程来发挥Rho GTP酶(Rho GTPase)结合、参与细胞外基质结构成分等分子功能;其主要富集于糖尿病并发症晚期糖基化终末产物-糖基化终末产物受体(AGE-RAGE)信号通路、肿瘤坏死因子(TNF)信号通路、Wnt信号通路等多种细胞信号转导通路。miRNA-mRNA网络分析结果显示,与差异表达miRNA对应mRNA共230个。 结论:二甲双胍可通过下调相关miRNA表达,参与相关细胞信号通路转导,调控染色质、核酸结合及酶活性过程而发挥其治疗2型糖尿病的作用。
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编辑人员丨6天前
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与肺动脉高压相关的miRNA的研究进展
编辑人员丨6天前
肺动脉高压(PH)是一类以肺血管阻力进行性增加、右心功能进行性衰竭为特征的慢性致死性疾病,其主要病理变化是肺血管重塑。微小RNA(microRNA)是一类存在于真核细胞内、长度约为21~25 nt的内源性非编码RNA,可以在转录和翻译水平调控基因的表达,参与机体很多病理及生理过程。本文通过研究microRNA的表达与PH发生发展之间的关系,找寻潜在的PH早期诊断标志物,为PH的临床诊疗提供新的思路。
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编辑人员丨6天前
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肺腺癌患者血清miRNA-21和miRNA-4534水平变化及其对病理特征和预后影响
编辑人员丨6天前
目的:探讨肺腺癌患者血清微小核糖核苷酸(miRNA)-21和miRNA-4534水平变化及其与病理特征和预后的关系。方法:选取湖州市第一人民医院2018年1月至2019年1月收治的肺腺癌患者148例为观察组,另选取该院2018年1月至2019年1月健康体检者100例为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法测定血清miRNA-21和miRNA-4534相对表达量。比较两组血清miRNA-21和miRNA-4534相对表达量,不同病理特征肺腺癌患者血清miRNA-21和miRNA-4534相对表达量;miRAN-21高表达和miRNA-21低表达患者总生存时间;miRNA-4534高表达和miRNA-4534低表达患者总生存时间。结果:观察组血清miRNA-21相对表达量(3.27±0.87)和miRNA-4534相对表达量6.74±1.56均高于对照组(1.00±0.01、1.02±0.02)( t=20.07、36.64,均 P < 0.05)。不同性别、年龄、体质量指数、肿瘤部位和肿瘤直径血清miRNA-21和miRNA-4534相对表达量比较,差异均无统计学意义(均 P > 0.05);Ⅲ~Ⅳ期肺腺癌患者血清miRNA-21相对表达量(4.45±1.05)高于Ⅰ~Ⅱ期1.92±0.53,且淋巴结转移4.97±1.28高于无淋巴结转移1.34±0.60( t=17.53、23.48,均 P < 0.05)。血清miRNA-4534相对表达量Ⅲ~Ⅵ期(8.97±1.85)高于Ⅰ~Ⅱ期(4.48±1.09),且淋巴结转移9.65±1.35高于无淋巴结转移3.78±0.91( t=17.17、30.59, P < 0.05)。miRNA-21高表达患者总生存时间[(18.37±4.35)个月]短于miRNA-21低表达患者[(29.93±3.24)个月]( t=18.45, P < 0.05)。miRNA-4534高表达患者总生存时间[(17.56±4.21)个月]短于miRNA-4534低表达患者[(30.43±3.63)个月]( t=19.97, P < 0.05)。 结论:肺腺癌患者血清miRNA-21和miRNA-4534高表达,且与TNM分期、淋巴结转移及预后密切相关。
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编辑人员丨6天前
