目的:分析结直肠癌患者循环微小RNA(miR-375)和组织Yes相关蛋白1(YAP1)表达的相关性，探讨两者与临床病理特征的关系。方法:以嘉兴学院附属第二医院2016年6月至2017年12月收治的87例结直肠癌患者[男45例，女42例，年龄(64.5±11.4)岁]为研究对象，以80例健康志愿者为对照，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)实验测定外周血miR-375表达水平，采用免疫组织化学实验测定结直肠癌病理组织和癌旁健康组织YAP1表达水平，分析两项指标与临床病理特征及预后的关系，进一步根据miR-375和YAP1的表达情况将研究组分为低miR-375且高YAP1组(A组， n＝21)，中间组(B组， n＝32，包含低miR-375且低YAP1，高YAP1且高miR-375两种情况)，高miR-375且低YAP1组(C组， n＝34)，分析两项指标与患者预后的关系。应用SPSS 22.0统计软件分析。 结果:结直肠癌患者循环miR-375表达水平为0.132±0.085，低于对照组(0.521±0.186)，癌组织YAP1表达水平为2.201±0.856，明显高于癌旁健康组织(0.814±0.262)，差异有统计学意义( t＝51.826、51.175， P<0.05)。miR-375表达和YAP1表达之间呈负相关( r＝－0.691， P<0.05)，双荧光素酶实验报告证实两者具有相互作用，差异有统计学意义( t＝9.564， P<0.05)。miR-375和YAP1表达与Dukes分期明显相关，C期患者miR-375表达低于A和B期，YAP1表达高于A和B期，差异有统计学意义( F＝4.347、3.724， P<0.05)。miR-375联合YAP1检查有助于预测结直肠癌复发/转移和死亡(AUC＝0.739、0.699， P<0.05)，差异有统计学意义，其中低miR-375且高YAP1者中位生存期最短，高miR-375且低YAP1者中位生存期最长，组间差异有统计学意义( χ2＝4.685， P<0.05)。 结论:miR-375和YAP1存在交互作用，两者共同参与结直肠癌的发生与发展。

目的:初步探究微小RNA-203（miR-203）调控锌指蛋白281（ZNF281）对黑素瘤细胞增殖、迁移的影响。方法:常规培养人血管内皮细胞系ECV304、人黑素瘤细胞系A375、M14、SK-MEL-28、SK-MEL-2，实时荧光定量PCR检测各细胞系中miR-203表达情况，Western免疫印迹法检测各细胞系中ZNF281蛋白水平。A375、M14细胞分别分为5组：对照组（细胞正常培养）、miR-203模拟物对照组（加入miR-203模拟物阴性对照）、miR-203抑制剂对照组（加入miR-203抑制剂阴性对照）、miR-203模拟物组（加入miR-203模拟物）、miR-203抑制剂组（加入miR-203抑制剂）。实时荧光定量PCR检测各组A375、M14细胞中miR-203的表达，CCK8法检测各组A375、M14细胞增殖活性，Transwell实验检测各组A375、M14细胞迁移数量，Western免疫印迹法检测各组A375、M14细胞中ZNF281蛋白的表达。双荧光素酶验证miR-203与ZNF281的靶向关系。多组比较采用单因素方差分析，两两比较采用SNK- q法。 结果:与血管内皮细胞系ECV304相比，黑素瘤细胞系A375、M14、SK-MEL-28、SK-MEL-2中miR-203表达水平较低（均 P < 0.05），ZNF281蛋白水平较高（均 P < 0.05）。与对照组、miR-203模拟物对照组、miR-203抑制剂对照组相比，miR-203模拟物组A375、M14细胞中miR-203水平均显著升高（ F = 487.632、68.454，均 P < 0.05），细胞迁移数量均显著降低（均 P < 0.05），ZNF281蛋白表达均显著降低（均 P < 0.05）；miR-203抑制剂组A375、M14细胞中miR-203表达均显著降低（均 P < 0.05），细胞迁移数量均显著增加（均 P < 0.05），A375细胞中ZNF281蛋白表达显著升高（均 P < 0.05），36、48、60、72 h A375细胞增殖活性显著升高（均 P < 0.05），24、36、48、60、72 h M14细胞增殖活性均显著升高（均 P < 0.05）。miR-203与ZNF281之间存在靶位点。 结论:上调miR-203表达可抑制黑素瘤细胞增殖、迁移，下调miR-203表达可促进黑素瘤细胞增殖、迁移，可能通过调控ZNF281的表达实现。

目的:采用高通量测序检测卵巢子宫内膜异位症微小RNA(microRNA，miRNA)及mRNA的表达，分析miRNA-mRNA调控网络关系，探索卵巢子宫内膜异位症的发生机制。方法:回顾性分析2017年3月至2018年3月在中南大学湘雅医院因卵巢子宫内膜异位症行手术的患者20例，取异位内膜及配对在位内膜组织，提取总RNA，分别进行miRNA测序及mRNA测序，获得差异miRNA及mRNA表达谱。运用Targetscan、miRDB数据库预测差异miRNA可能结合的mRNA，并与差异mRNA取交集，获得候选mRNA，采用Cytoscape软件进行miRNA-mRNA调控网络分析，采用DAVID数据库进行基因功能富集(GO)分析和信号通路(pathway)分析。结果:与在位内膜比较，异位内膜差异表达的miRNA有369个(197个上调，172个下调)，差异表达的mRNA 3 765个(1 975个上调，1 790个下调)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)证实miR-202-5p、miR-514a-5p在异位内膜表达高于在位内膜( P<0.05)，而miR-375-3p、miR-449b-5p在异位内膜表达低于在位内膜( P<0.05)，与测序结果相符合。生物信息学发现与这4个miRNA相关的候选mRNA主要富集于核内甾体激素受体结合、跨膜受体及蛋白激酶激活等生物学过程。KEGG通路富集显示其参与了多种信号通路，如TGFβ信号通路、细胞黏附分子信号通路、Wnt信号通路、Rap1信号通路。 结论:miRNA及mRNA在子宫内膜异位症差异表达，二者相互作用通过多种通路参与子宫内膜异位症的发生发展。

目的:探讨微小RNA（miRNA）-181b-5p是否通过靶向普列克底物蛋白（PLEK）抑制皮肤黑素瘤（CM）细胞的增殖及侵袭能力。方法:生物信息学分析CM核心基因；双荧光素酶报告基因实验验证miRNA-181b-5p和PLEK的靶向结合。采用RNA oligo和siRNA分别调控A375细胞miRNA-181b-5p和PLEK的表达，具体分组为：模拟物阴性对照组、miRNA-181b-5p模拟物组、抑制剂阴性对照组、miRNA-181b-5p抑制剂组、PLEK siRNA组、siRNA阴性对照组、miRNA-181b-5p抑制剂和对照siRNA共转染组以及miRNA-181b-5p抑制剂和PLEK siRNA3共转染组。上述各组用相应试剂处理细胞48 h后，采用qPCR检测A375细胞中miRNA-181b-5p和PLEK mRNA的表达，Western印迹检测PLEK蛋白的表达，Transwell小室侵袭实验检测A375细胞的侵袭能力；继续培养24 ~ 96 h后，CCK8实验检测A375细胞增殖能力。结果:PLEK为CM的核心基因，CM原位癌组织较癌旁组织高表达PLEK（ P = 0.031），转移组织较原位癌组织高表达PLEK（ P = 0.001）。与人表皮黑素细胞HEMa-LP相比，A375细胞高表达PLEK mRNA（3.884 ± 0.156比0.997 ± 0.010， t = 18.48， P < 0.001）及PLEK蛋白（2.840 ± 0.301比1.029 ± 0.094， t = 5.47， P = 0.005），低表达miRNA-181b-5p（0.333 ± 0.042比0.967 ± 0.069， t = 7.83， P = 0.001）。双荧光素酶报告基因实验显示，miRNA-181b-5p和PLEK靶向结合。与模拟物阴性对照相比，miRNA-181b-5p模拟物转染后A375细胞的存活率显著降低（48 h， t = 7.96， P = 0.015；72 h， t = 7.50， P = 0.002；96 h， t = 7.96， P = 0.001），侵袭能力也显著降低（ t = 5.07， P = 0.007）；相反miRNA-181b-5p抑制剂组A375细胞存活率高于抑制剂阴性对照组（24 h， t =5.38， P = 0.013；48 h， t = 5.36， P = 0.013；72 h， t =7.63， P = 0.005；96 h， t =5.99， P = 0.004），侵袭能力也高于抑制剂阴性对照组（ t = 7.24， P = 0.002）；与对照siRNA组相比，PLEK siRNA转染后A375细胞的增殖能力降低（48、72、96 h时， P值分别为0.015、0.011、0.001），侵袭能力也降低（ t = 4.93， P = 0.008）；与miRNA-181b-5p抑制剂和对照siRNA共转染组相比，miRNA-181b-5p抑制剂和PLEK siRNA共转染组A375细胞的增殖率明显降低（24、48、72、96 h时， P值分别为0.042、0.042、0.037、0.017），侵袭能力也明显降低（ t = 8.52， P = 0.001）。 结论:miRNA-181b-5p抑制A375细胞增殖和侵袭能力，其机制涉及靶向下调PLEK的表达。

目的:探讨长链非编码核糖核酸ZNRD1-AS1(lncRNA ZNRD1-AS1)在胃癌组织中的表达特点及其诊断学价值。方法:选取嘉兴学院附属第二医院胃肠外科收治的96例经手术治疗、且留有手术样本的胃癌患者作为研究对象，根据是否发生转移分为转移癌41例和原位癌55例。详细统计患者的临床病理和预后资料，并采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)实验检测癌组织及癌旁健康组织的lncRNA ZNRD1-AS1和微小核糖核酸-375模拟物(miR-375 mimic)表达水平。两组之间的比较行配对设计或独立样本 t检验，多组间的比较行单因素方差分析。 结果:癌组织的lncRNA ZNRD1-AS1表达水平高于癌旁健康组织(1.051±0.205比0.645±0.145， t＝15.845， P<0.001)；癌组织的miR-375表达水平低于癌旁健康组织(1.014±0.197比1.365±0.245， t＝10.965， P<0.001)。转移癌组织的lncRNA ZNRD1-AS1表达水平高于原位癌组织(1.201±0.165比0.953±0.148， t＝3.604， P<0.01)；转移癌组织的miR-375表达水平低于原位癌组织(0.995±0.164比1.193±0.176， t＝5.612， P<0.001)。不同TNM分期癌组织的lncRNA ZNRD1-AS1表达水平也不同( F＝14.437， P<0.001)，Ⅰ期低于Ⅱ期(0.937±0.157比1.095±0.187， P<0.001)；Ⅱ期低于Ⅲ期(1.095±0.187比1.185±0.154， P<0.001)。根据lncRNA ZNRD1-AS1表达水平的中位数把患者分为高表达组48例和低表达组48例，高表达组的总生存率低于低表达组[52.1%(25/48)比72.9%(35/48)， χ2＝4.444， P<0.05]，无进展生存率也低于低表达组[41.7%(20/48)比64.5%(31/48)， χ2＝5.061， P<0.05]。 结论:lncRNA ZNRD1-AS1与胃癌的发生与发展密切相关。

目的:观察甲状腺乳头状癌(PTC)组织中微小RNA(miRNA，miR)-375表达，探讨其机制及其临床意义。方法:选取2018年1月至2018年12月郑州大学第一附属医院甲状腺乳头状癌根治手术的患者60例，应用实时定量聚合酶链反应检测PTC组织和癌旁正常组织miR-375表达水平，应用甲基化特异性PCR法检测组织内miR-375上游CpG岛甲基化。应用受试者工作特征(ROC)曲线法分析miR-375对PTC的诊断效能；应用独立样本 t检验分析PTC组织中miR-375表达水平和临床病理特征的相关性；应用检验分析miR-375上游甲基化率和其表达异常的相关性。 结果:PTC组织miR-375表达水平低于癌旁正常组织(0.824±0.182比1.079±0.212)，差异有统计学意义( t＝－7.080， P<0.05)；当以组织miR-375表达水平≤0.884 2作为诊断PTC的标准，此时敏感度和特异度分别86.7%、71.7%，约登指数为58.3%；PTC肿瘤TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、淋巴结出现癌转移和出现神经或肌肉侵犯者，较肿瘤TNM分期Ⅰ～Ⅱ期、淋巴结未出现癌转移和无神经或肌肉侵犯者组织miR-375表达水平下降，差异有统计学意义(TNM分期， t＝－5.365， P<0.01；淋巴结癌转移， t＝－2.136， P<0.05；神经肌肉侵犯， t＝－2.457， P<0.05)；以截断值0.884 2为分界点定义miR-375的表达水平，则所有120例组织中miR-375低表达者51例(42.5%)，高表达者69例(57.5%)；所有120例组织中miR-375上游CpG岛甲基化者60例(50.0%)，非甲基化者60例(50.0%)；miR-375低表达者上游CpG岛甲基化率(62.7%)较miR-375高表达者甲基化率(40.6%)高，差异有统计学意义( χ2＝5.763， P<0.05)。 结论:miR-375上游CpG岛甲基化可能导致miR-375表达下降，进而促进PTC的发生；PTC组织miR-375低表达提示PTC预后不良。

目的:筛选血浆外泌体微小核糖核苷酸(microRNA)作为肝细胞癌(HCC)的诊断标志物，并分析候选miRNA在HCC进展中可能发挥的作用。方法:2018年10月至2019年2月收集12例于广州市第一人民医院初诊为"HCC"的患者及12例健康志愿者血浆样本，利用超速离心法收集血浆外泌体，经动态光散射法及蛋白质免疫印迹法鉴定后，提取RNA进行测序。通过定量聚合酶链反应(qPCR)验证候选外泌体miRNA差异表达量，使用 t检验分析各miRNA表达量差异。通过生物信息学方法预测候选miRNA的靶基因及可能调控的通路，分析其在HCC进展过程中发挥的作用，组间比较采用 t检验。 结果:以差异表达倍数2倍以上(Fold change>2.0或<0.5，且 P<0.05)作为标准，分别比较HCC患者术前、术后及健康志愿者血浆外泌体miRNA的差异表达结果，结合两次结果，筛选表达同时上/下调miRNA共12个。其中，表达上调6个(miR-2115-3p、miR-214-3p、miR-511-5p、miR-1299、miR-10a-5p、miR-375-3p)，表达下调6个(miR-219a-2-3p、miR-127-3p、miR-9-5p、miR-383-5p、miR-212-5p、miR-1248)。qPCR验证候选miRNA在HCC患者及健康志愿者血浆外泌体中的表达差异，HCC组miR-1248表达低于健康志愿者组(9.046 ΔCt比7.597 ΔCt， t＝2.849， P<0.05)。 结论:血浆外泌体miR-1248有作为HCC的诊断标志物的潜力。血浆外泌体miR-1248可通过调控受体细胞的细胞外基质受体相互作用、介导代谢重编程抑制HCC进展。

目的 探讨微小RNA(miR)-148b、miR-375在胎儿先天性心脏病孕妇血清中的水平,及其联合产前超声在胎儿先天性心脏病诊断中的价值.方法 收集2019年1月至2023年1月进行产前筛查的疑似胎儿先天性心脏病的106例孕妇作为研究对象,根据产后随访结果将其分为病例组(先天性心脏病,n=80)和对照组(均无先天性心脏病,m=26).比较2组血清miR-148b、miR-375水平;ROC曲线分析血清miR-148b、miR-375对胎儿先天性心脏病的诊断效能;四表格法分析产前超声联合血清miR-148b、miR-375水平对胎儿先天性心脏病的诊断效能.结果 与对照组比较,病例组血清miR-148b水平显著降低,血清miR-375水平显著升高(P＜0.05).产前超声联合血清miR-148b、miR-375诊断胎儿先天性心脏病的准确率为93.40％,敏感性为92.50％,特异性为96.15％.其中,三项联合诊断的敏感性高于血清miR-148b、miR-375单独诊断(P＜0.05),三项联合诊断的准确率和特异性高于产前超声、血清miR-148b、miR-375单独诊断(P＜0.05).结论 胎儿先天性心脏病的孕妇血清miR-148b水平显著降低,血清miR-375水平显著升高,产前超声联合血清miR-148b、miR-375对胎儿先天性心脏病具有较高的诊断价值.

目的 考察环状RNA(circRNA)circ_0054633是否靶向miR-375调控过氧化氢(H2O2)诱导的心肌细胞氧化损伤.方法 将H9C2心肌细胞分为对照组(正常培养,未进行任何处理)、H2O2组(150 μmol·L-1 H2O2处理心肌细胞6 h)、H2O2+si-NC 组、H2O2+si-circ_0054633 组、H2O2+miR-NC 组、H2O2+miR-375 组、H2 O2+si-circ_0054633+anti-miR-NC 组、H2 O2+si-circ_0054633+anti-miR-375 组(在心肌细胞中分别转染 si-NC、si-circ_0054633、miR-NC、miR-375 模拟物、si-circ_0054633+anti-miR-NC、si-circ_0054633+anti-miR-375,转染24 h后,用150 μmol·L-1 H2O2处理心肌细胞6 h).用实时荧光定量聚合酶链反应法测定miR-375的表达水平,用试剂盒测定丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,用流式细胞术测定细胞凋亡情况.结果 对照组、H2O2组、H2O2+si-NC 组、H2 O2+si-circ_0054633 组、H2 O2+miR-NC 组、H2O2+miR-375 组、H2O2+si-circ_0054633+anti-miR-NC 组、H2O2+si-circ_0054633+anti-miR-375 组的心肌细胞 miR-375 表达量分别为 1.00±0.00、0.42±0.05、0.40±0.06、0.69±0.08、1.00±0.00、3.41±0.28、1.00±0.00 和 0.26±0.02,MDA 含量分别为(3.19±0.32)、(13.46±1.27)、(15.39±1.04)、(5.26±0.51)、(16.05±1.36)、(9.18±0.85)、(4.89±0.44)和(10.05±0.92)nmol·L-1,SOD 活性分别为(64.69±5.81)、(18.23±1.33)、(17.07±1.41)、(55.74±5.13)、(17.12±1.64)、(47.66±4.59)、(56.77±4.71)和(27.95±2.47)U·mL-1,凋亡率分别为(6.21±0.59)％、(29.22±2.19)％、(30.94±2.85)％、(10.05±0.92)％、(31.14±2.83)％、(13.74±1.24)％、(10.39±0.88)％和(21.31±1.92)％.H2O2 组的上述指标与对照组比较,H2O2+si-circ_0054633组的上述指标与H2O2+si-NC组比较,H2O2+miR-375组的上述指标与H2O2+miR-NC组比较,H2 O2+si-circ_0054633+anti-miR-375 组的上述指标与 H2 O2+si-circ_0054633+anti-miR-NC组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 干扰circ_0054633表达可通过靶向调控miR-375表达,减轻H2O2诱导的心肌细胞氧化应激和凋亡,从而保护心肌细胞免受氧化损伤.

目的 探讨钩藤碱对甲基苯丙胺依赖人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)模型及微小RNA-375-3p(miR-375-3p)/胚胎致死异常视觉-样4蛋白(Elav14)表达的影响.方法 用最大安全剂量诱导法建立甲基苯丙胺依赖细胞模型.将细胞分成正常组(完全培养液)、对照组(完全培养液+400 μmol·L-1钩藤碱孵育48 h)、模型组(完全培养液+100 μmol·L-1甲基苯丙胺孵育48 h)、实验组(完全培养液+400 μmol·L-1的钩藤碱孵育15 min后,再加入100μmol·L-1甲基苯丙胺孵育48 h).以酶联免疫吸附法检测细胞环腺苷酸(cAMP)、5-羟色胺(5-HT)水平;以实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞miR-375-3p表达情况;以蛋白质印迹法检测Elavl4蛋白表达情况.结果 正常组、对照组、模型组和实验组cAMP表达水平分别为(6.33±0.93)、(6.57±1.12)、(10.89±1.03)和(7.81±1.32)pmol·mg-1;5-HT分别为(682.46±17.32)、(690.31±15.09)、(510.11±27.67)和(649.99±21.42)pg·mL-1;miR-375-3p 表达水平分别为 1.00±0.13、1.13±0.24、3.48±0.18 和 1.58±0.19;Elavl4 表达水平分别为 1.00±0.05、0.89±0.10、0.50±0.09和0.90±0.11.模型组上述指标与正常组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01,P＜0.05);实验组上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论 本研究建立甲基苯丙胺依赖细胞模型,同时发现钩藤碱可能调控miR-375-3p/Elavl4表达拮抗甲基苯丙胺成瘾.