目的 探讨子宫内膜癌(endometrial carcinoma,EC)中微小RNALet-7(miRNA Let-7)表达水平与DNA错配修复(DNA mismatch repair,dMMR)蛋白表达缺失的关系及意义.方法 选取2016年5月～2022年12月在江苏省连云港市妇幼保健院行根治性手术切除的子宫内膜癌患者74例,分别用免疫组织化学法检测dMMR蛋白(包括MLH1,PMS2,MSH2,MSH6)的表达、实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miRNALet-7的相对表达量,按照dMMR蛋白表达情况,将EC患者分为表达完整组(n=43)和表达缺失组(n=31),采用Logistic多因素回归分析与dMMR蛋白缺失相关的危险因素、绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评估相关因素的预测价值.结果 74例EC病例中,miRNALet-7的表达水平在肌层浸润＜1/2组显著高于肌层浸润≥ 1/2组,差异具有统计学意义(t=1.79,P=0.04);dMMR蛋白表达的缺失率为41.89％,且年龄＜55岁组和miRNA Let-7低表达组(＜0.715)患者中的dMMR蛋白缺失率高于≥55岁组和miRNALet-7高表达组(≥0.715),差异具有统计学意义(x2=3.92,4.50,均P＜0.05);Logistic多因素回归分析结果显示miRNALet-7表达水平是发生dMMR表达缺失的独立危险因素(P=0.012);Spearman相关分析表明,miRNA Let-7的表达水平与dMMR蛋白缺失呈明显负相关(r=-0.247,P=0.034);ROC曲线分析结果显示,miRNA Let-7表达水平对于预测EC患者中发生dMMR蛋白的缺失具有一定的价值,其AUC为0.737,最佳临界值为0.77,敏感度和特异度分别为0.651,0.806.结论 子宫内膜癌患者中miRNA Let-7的表达水平与dMMR蛋白缺失具有相关性,也是发生dMMR蛋白缺失的危险因素,有望为预测dMMR的表达缺失提供帮助.

目的 检测Let7a微小RNA(miRNA let7a)和长链非编码RNA H19 (lncRNA H19)在甲状腺癌中的表达情况,探讨其与甲状腺癌临床病理特征及预后的相关性. 方法 收集2009-01～2012-01在我院手术的131例甲状腺癌组织和癌旁组织为病例组,另外同期选取122例甲状腺良性肿瘤的正常甲状腺组织作为对照组.采用实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)方法检测实验组与对照组甲状腺组织中miRNA let7a和lncRNA H19的表达水平.然后进行5年的跟踪随访.通过受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)评估miRNA let7a和lncRNA H19对甲状腺癌的诊断价值.应用Kaplan-Meier方法计算5年累积生存率,预后相关单因素分析采用Log-rank检验,多因素分析采用Cox回归模型,分析rniRNA let7a和lncRNA H19表达水平与甲状腺癌临床病理特征及生存预后的关系. 结果 与甲状腺良性肿瘤组织及癌旁组织相比,甲状腺癌组织中miRNA let7a表达下降,lncRNA H19表达升高(P＜0.05).miRNA let7a和lncRNA H19诊断甲状腺癌ROC曲线下面积(AUC)分别为0.116和0.801,诊断阈值分别为0.87和3.58,敏感度分别为84.0％和72.5％,特异度分别为77.0％和75.4％,约登指数分别为0.610和0.479.niRNAlet7a低表达者和lncRNA H19高表达者5年生存率下降.rniRNAlet7a和lncRNA H19表达水平、肿瘤直径、TNM分期和淋巴结转移是影响甲状腺癌预后的独立风险因素(P＜0.05). 结论miRNA let7a表达水平下调和lncRNA H19表达水平上调与甲状腺癌临床病理特征及生存预后差相关,提示二者之间可能具有调控作用,并在甲状腺癌发生发展过程中有重要作用,可为甲状腺癌早期的无创诊断及治疗靶点的寻找提供重要的理论依据.

目的 探讨肾透明细胞癌(clear renal cell carcinoma,cRCC)患者血清miRNA let-7a水平变化及let-7a对cRCC的诊断价值.方法 选择于湖南省人民医院泌尿外科住院治疗的40例cRCC患者血清标本作为实验组、42例健康体检者血清标本作为对照组,予以实时定量聚合酶链式反应(Real time-PCR)测定血清标本let-7a表达水平.分析血清let-7a水平与cRCC的临床及病理指标的关联,分析let-7a对cRCC的诊断效能.结果 ①let-7a在实验组、对照组的相对表达量分别为(0.519 ±0.114)和(1.622 ±0.131),两组间表达水平有明显差别(P＜0.05);②cRCC患者血清let-7a相对表达量与癌栓形成有关(x2=2.158,P＜0.05),与性别、年龄、肿瘤直径、Fuhrman分级、TNM分期、淋巴结转移无关(P＞0.05);③采用受试者工作特征曲线(ROC)分析,以0.527为let-7a的相对表达量的最佳临界值作为诊断cRCC标准,其灵敏度为81.4％,特异度为73.9％,AUC为0.794,95％置信区间为0.657 ～0.912.结论 cRCC患者血清let-7a水平出现下调,对cRCC的诊断、合并癌栓形成情况判断具有一定的参考意义.PCR法技术成熟,操作简便,扩增效率高,具有一定的临床价值.

目的:探讨在喉癌细胞株Hep－2中上调miRNA let－7a的表达对高迁移率族蛋白(high mobility group A,HMGA2)的作用机制以及对喉癌细胞增殖的影响.方法:合成miRNA let－7a模拟体(let－7a mim-ics)并采用阳离子脂质体法转染入Hep－2内;分别用流式细胞术和MTT法检测let－7a高表达对细胞凋亡和增殖的影响;实时荧光PCR(Real－time qPCR)和Western blot检测上调let－7a后对HMGA2表达的影响.结果:本实验将let－7a mimics成功转染入Hep－2内,流式细胞术及MTT法检测显示Hep－2内let－7a的表达上调会抑制喉癌细胞的增殖,促进喉癌细胞的凋亡.RT－qPCR检测显示:let－7a mRNA在空白组和阴性对照组(NC组)的表达水平明显低于实验组(P＜0.05);HMGA2 mRNA在空白组、NC组的表达水平明显高于实验组(P＜0.01).Western blot检测细胞中HMGA2蛋白的表达显示:实验组HMGA2蛋白的表达量明显低于空白组和NC组(P＜0.01).上述实验中空白组与NC组之间比较均无统计学差异(P＞0.05).结论:let－7a能够显著下调HMGA2基因和蛋白的表达,抑制喉癌细胞的增殖,促进其凋亡,为喉癌基因靶向治疗提供坚实的理论基础.

目的:研究微小RNA Let-7a(miRNA Let-7a)在人乳头状瘤病毒(HPV)阴性组、HPV阳性组宫颈组织中的差异性表达,初步探讨其在HPV诱导子宫颈鳞状细胞癌的发生、发展过程中的作用.方法:通过HPV分型检测将宫颈脱落细胞及子宫颈活检样本分为HPV阴性组、低危HPV感染组、高危HPV感染组,结合病理学活检将高危HPV感染组分为慢性子宫颈炎组、低级别鳞状上皮内病变(LSIL)组、高级别鳞状上皮内病变(HSIL)组及子宫颈鳞状细胞癌组,用RT-PCR法对各组间miRNA Let-7a表达水平进行定量及差异性分析.结果:宫颈脱落细胞中miRNA Let-7a表达水平在HPV感染组显著低于HPV阴性组(P<0.01),而高危与低危间差异无统计学意义;组织活检样本中miRNA Let-7a表达水平在鳞状上皮内病变及鳞状细胞癌中显著下降(P<0.01),而鳞状上皮内病变与鳞状细胞癌组间差异无统计学意义.结论:HPV感染能显著降低子宫颈上皮细胞中miRNA Let-7 a表达水平;且在HPV感染的组织学样本中,鳞状上皮内病变及鳞状细胞癌组中miRNA Let-7a水平显著低于炎性对照组.提示miRNA Let-7a水平下降是HPV介导的子宫颈鳞状细胞癌的发病机制之一.

目的 构建microRNAlet-7a重组慢病毒表达载体,建立稳定表达let-7a的睾丸卵黄囊瘤细胞株(TYST-1),并探索let-7a过表达后对睾丸卵黄囊瘤(TYST)细胞增殖的影响.方法 根据miRBase数据库let-7a的序列,设计合适的引物序列,利用聚合酶链反应(PCR)钓取目的基因片段,经过扩增、酶切后,与慢病毒载体GV309连接.转化DH5α感受态细胞,阳性克隆进行PCR及测序鉴定.293T细胞中包装慢病毒,利用荧光法测定病毒滴度.将构建好的let-7a慢病毒载体感染睾丸卵黄囊瘤(TYST)细胞,经嘌呤霉素筛选并扩大培养后得到稳定克隆株,建立稳定表达let-7a的TYST-1.用Quantitative real-time PCR (qRT-PCR)检测let-7a表达水平,用Cell Counting Kit-8(CCK-8)检测let-7a过表达后对TYST细胞增殖的影响.结果 构建的let-7a慢病毒载体经质粒酶切和测序鉴定正确;let-7a慢病毒感染组细胞内let-7a水平比阴性病毒对照组和空白对照组分别提高3.O倍和3.8倍(P＜0.05).CCK-8法细胞增殖试验结果显示,较空白组和阴性病毒组,let-7a慢病毒感染组细胞的增殖能力明显受到抑制(P＜0.05).结论 成功构建let-7a慢病毒载体并感染TYST细胞,获得稳定过表达let-7a的TYST-1;并证实let-7a过表达后抑制了TYST细胞的增殖.

目的 探讨血清miRNA let-7a对喉鳞状细胞癌的诊断价值以及let-7a对喉癌细胞增殖与凋亡的影响.方法 选择湖南省人民医院2016年1月至2018年4月经病理确诊的喉癌患者为研究对象,实时定量PCR(qRT-PCR)测定50例患者的喉癌组织、癌旁组织和血清标本,以及50名健康体检者血清标本miRNA let-7a的表达水平.合成miRNA let-7a模拟体(let-7a mimics)并采用阳离子脂质体法瞬时转染入喉癌细胞株Hep-2内;流式细胞术、四甲基偶氮唑蓝法(MTT)分别检测let-7a表达上调后对喉癌Hep-2细胞凋亡、增殖的影响;分析血清let-7a与喉癌临床、病理指标的关联及对喉癌的诊断价值.计量资料采取t检验或方差分析;计数资料选择χ2检验及Fisher确切概率法;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析let-7a对喉癌的诊断价值.结果 健康人和喉癌患者血清let-7a相对表达量分别为(0.931±0.094)和(0.380±0.113),差异有统计学意义(t=26.507,P<0.01);喉癌患者术前和术后血清let-7a相对表达量分别为(0.380±0.113)和(0.493±0.164),差异有统计学意义(t=3.848,P<0.01);血清let-7a相对表达量与淋巴转移有关(t=2.946,P<0.01).let-7a在喉癌组织中的相对表达量与血清中相对表达量呈正相关(r=0.466,P=0.003).转染let-7a mimics后Hep-2细胞中let-7a表达明显上升(P<0.01),Hep-2细胞的增殖受到抑制(P<0.01),Hep-2细胞凋亡率明显升高(P<0.01).ROC曲线分析,以0.557为let-7a相对表达量的最佳临界值诊断早期喉癌(Ⅰ-Ⅱ期),其灵敏度为0.794,特异度为0.727,曲线下面积为0.859,95％CI为0.773～0.926.结论 let-7a可抑制喉癌Hep-2细胞的增殖,促进其凋亡;喉癌患者血清let-7a出现下调,let-7a水平变化与淋巴转移有关,以上特点有助于喉癌的早期诊断与术后病情监测.

目的:探讨miRNA let-7a对ACVR1B表达的影响.方法:生物信息学分析表明activin receptor type 1B(ACVR1B)是一个let-7a的潜在靶基因.构建ACVR1B 3'UTR野生型(ACVR1B 3'UTR-WT)和ACVR1B 3'UTR突变型(ACVR1B 3'UTR-MUT)双荧光素酶报告载体,分别与let-7a模拟物(let-7a mimic)或let-7a阴性对照(let-7a NC)共同转染HEK293T细胞,通过双荧光素酶报告系统检测各组细胞的荧光素酶活性.分别转染let-7a mimic、let-7a inhibitor和let-7a NC至HEK293T细胞,采用qRT-PCR和Western blot分别检测ACVR1B的mRNA和蛋白表达水平.结果:ACVR1B 3'UTR含有let-7a潜在的高度保守的结合靶点(77～83位点).在HEK293T细胞中共转染ACVR1B 3'UTR-WT报告载体的let-7a mimic组比let-7a NC组荧光素酶活性组明显降低(P<0.05);而共转染ACVR1B 3'UTR-MUT报告载体的let-7a mimic与let-7a NC组其荧光素酶活性差异无统计学意义(P>0.05).在HEK293T细胞中let-7a mimic转染组中ACVR1B的mRNA和蛋白水平均低于let-7a NC组和let-7a inhibitor组(P<0.05).结论:ACVR1B是let-7a潜在调控的靶基因,miRNA let-7a可以直接抑制HEK293T细胞中ACVR1B基因的表达.