目的:探讨山楂酸（MA）对异丙肾上腺素（ISO）诱导的小鼠心肌纤维化的影响。方法:使用ISO诱导成年雄性C57BL/6小鼠心肌纤维化，MA给药2周，检测MA对心功能和纤维化的影响。RT-PCR和免疫印迹检测纤维化标志物和信号通路分子变化。将原代培养的大鼠成纤维细胞中分别加入磷酸缓冲盐溶液（PBS）、PBS+p38 MAPK抑制剂（SB203580）、PBS+MA、ISO、ISO+SB203580、ISO+MA。48 h后收集细胞进行后续检测。结果:本研究成功制备心肌纤维化小鼠模型，ISO+MA组的左心室短轴缩短率（FS）和左心室内压最大上升速率和最大下降速率（±dp/dt）显著高于ISO组[分别为（35.1±1.8）%比（28.5±2.6）%、（7 256±153）mmHg/s比（6 402±240）mmHg/s、（7 156±163）mmHg/s比（6 319±219）mmHg/s， P<0.05]；ISO+MA组间质和血管周胶原沉积程度高于ISO组（ P<0.05），ISO+MA组的COL-1、COL-3和TGF-β mRNA相对水平显著低于ISO组（1.70±0.24比3.69±0.34、1.72±0.56比4.84±0.82、1.52±0.19比2.64±0.29， P<0.05）；ISO+MA组的p38 MAPK和Smad3的磷酸化水平和TGF-β1蛋白表达水平低于ISO组（1.67±0.35比2.61±0.58、1.68±0.23比2.52±0.19、1.56±0.15比2.48±0.26， P<0.05）；体外细胞实验结果显示，p38 MAPK特异性抑制剂（SB203580）组和MA组的COL-1、COL-3、TGF-β mRNA水平均显著低于ISO组（分别为2.25±0.51，2.16±0.48比5.29±1.21；1.58±0.34，1.69±0.29比4.97±1.32；1.41±0.31，1.55±0.38比3.53±0.56， P<0.05）；SB203580组和MA组的p38 MAPK、Smad3的磷酸化水平均显著低于ISO组，TGF-β1的蛋白表达低于ISO组（分别为1.81±0.18，1.77±0.16比2.56±0.32；1.85±0.21，1.81±0.17比2.48±0.37；1.84±0.24，1.72±0.17比2.52±0.29， P<0.05）。 结论:MA可抑制p38 MAPK的磷酸化，进而抑制经典的TGF-β1/Smads纤维化信号通路来发挥抗纤维化的作用。

目的:通过网络药理学挖掘和实验方法，考察麦冬五味子联用方抗动脉粥样硬化的作用，探讨其作用机制。方法:从TCMGeneDIT数据库系统中，挖掘麦冬、五味子靶点蛋白，构建麦冬-五味子多成分-蛋白网络，提取显著性差异的子网络中蛋白并进行信号通路映射。将ApoE-等位基因敲除小鼠按随机数字表法分成对照组，模型组，低、中、高剂量组和阿托伐他汀钙片组，每组6只。除对照组外，其余各组以H10540高脂饲料喂饲12周。第4周开始给药，阿托伐他汀钙片组灌胃阿托伐他汀钙片混悬液6 mg/kg，低、中、高剂量组灌胃麦冬五味子混煎液4.68、2.34、1.17 g/kg，1次/d，连续灌胃8周。采用油红染色观察动脉粥样硬化主动脉管壁病理学改变。采用Western blot法检测肝组织促分裂素原活化蛋白激酶p38(mitogen-activated protein kinases p38, p38)、ATP结合盒亚家族G成员1(ATP binding cassette subfamily G member 1, ABCG1)、Toll样受体4(toll-like receptor 4, TLR4)、热休克蛋白90α家族A成员1 (heat shock protein 90 alpha family class A member 1, HSP90AA1)、MMP-9和花生四烯酸5脂氧合酶(arachidonate 5-Lipoxygenase, ALOX5)蛋白表达，以及脑组织核因子E相关因子(nuclear factor related factor, Nrf2)和血红素加氧酶1(hemeoxygenase 1, HO-1)蛋白表达。结果:发现麦冬五味子联用方中有11个成分，与数据库中挖掘到的37个蛋白有匹配，构成48个结点、190条边界的成分-蛋白网络，提取显著性差异蛋白网络中 P<0.05的子网络1个。与模型组比较，低、中、高剂量组小鼠肝组织p-p38/p38 [(2.12±0.12)、(1.76±0.11)、(1.69±0.10)比(2.45±0.16)]、TLR4[(1.98±0.10)、(1.64±0.11)、(1.55±0.12)比(2.68±0.06)]、HSP90AA1[(1.79±0.10)、(1.66±0.09)、(1.59±0.11)比(2.06±0.07)]、MMP-9[(1.84±0.11)、(1.75±0.12)、(1.66±0.08)比(2.68±0.10)]蛋白表达降低( P<0.05)，ABCG1[(0.53±0.08)、(0.78±0.09)、(0.81±0.10)比(0.45±0.04)]、ALOX5[(0.59±0.04)、(0.67±0.09)、(0.88±0.07)比(0.47±0.02)]蛋白表达升高( P<0.05)，脑组织细胞质Nrf2[(1.62±0.12)、(1.32±0.09)、(1.14±0.06)比(2.12±0.08)]蛋白表达降低( P<0.05)，细胞核中Nrf2[(1.12±0.09)、(1.61±0.07)、(1.68±0.11)比(1.07±0.08)]蛋白表达升高( P<0.05)，HO-1[(1.16±0.09)、(1.73±0.11)、(1.82±0.08)比(1.05±0.04)]蛋白表达升高( P<0.05)。 结论:本研究采用网络药理学和分子生物学方法，阐释了麦冬五味子联用防治动脉粥样硬化的分子机制，并且在氧化应激诱导Nrf2途径上进行验证，为联用方的进一步研究提供参考。

目的 探讨血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1(SGK1)是否参与血管外膜成纤维细胞(AF)表型转化.方法 选取雄性SD大鼠,组织切块法培养胸主动脉AF,将未用转化生长因子β1(TGF-β1)刺激的AF分别作为空白组、对照1和2组,用2.5、5.0、10.0和15.0 ng/ml TGF-β1诱导AF依次为A、B、C和D组;分别用50 μmol/L的EMD638683和SB203580预处理细胞为抑制剂1和2组;用5 ng/ml TGF-β1刺激细胞分别为刺激1和2组.Western blot检测SGK1、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原蛋白相对表达量.结果 与空白组比较,A、B和C组SGK1表达显著增加(P＜0.05),B组SGK1表达量最高;B、C和D组α-SMA表达显著增加(P＜0.05),C组α-SMA表达量最高(P＜0.05).与对照1组比较,刺激1组细胞a-SMA和Ⅰ型胶原蛋白表达明显升高(P＜0.05),与刺激1组比较,抑制剂1组细胞α-SMA和Ⅰ型胶原蛋白表达显著降低(P＜0.05);与对照2组比较,刺激2组细胞SGK1表达明显升高(P＜0.05),与刺激2组比较,抑制剂2组细胞SGK1表达显著降低(P＜0.05).结论 SGK1通过p38促分裂素原活化蛋白激酶参与TGF-β1诱导的血管AF表型转化,参与血管的病理性重构.

目的 探讨变应性鼻炎(AR)患者中促分裂素原活化蛋白激酶(MAPK)和核转录因子(NF-κB)信号通路的表达及变化.方法 采用酶联免疫吸附试验检测AR患者(试验组)和健康体检者(对照组)血清中肿瘤坏死因子-α(T N F-α)、白细胞介素(IL)-Iβ、IL-4、p38M A PK和N F-κB的表达.结果 与对照组相比,试验组中T N F-α、IL-Iβ、IL-4、p38M A PK和N F-κB的表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 A R患者血清中 T N F-α、IL-Iβ、IL-4、p38M A PK和N F-κB呈过度表达状态;检测患者血清中的相关细胞因子,N F-κB有利于了解患者过敏状态并协助AR的诊断.

目的 探讨表皮生长因子(EGF)对宫颈癌Hela细胞紧密连接蛋白3(Claudin-3)表达的影响及其可能机制.方法 培养Hela细胞至贴壁,接种至3组6孔板,分别进行如下处理:①以0.0、0.5、5.0、10.0及100.0 ng/ml EGF处理8 h,测评不同浓度EGF对Claudin-3蛋白及其信使RNA(mRNA)的影响;②培养基中加入10 ng/ml EGF,分别于培养0 min、10 min、30 min、1 h、2 h、4 h、8 h、24 h,测评Claudin-3蛋白及mRNA水平、EGF相关作用通路各蛋白磷酸化情况;③分别以EGF受体(EGFR)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3-K)、促分裂素原活化蛋白激酶(MAPK)、p38、c-Jun氨基末端激酶(JNK)阻断剂干预1 h,随后加入含EGF 10 ng/ml的培养基培养,测评Claudin-3蛋白及mRNA水平.结果 EGF对Hela细胞Claudin-3蛋白及mRNA的表达有促进作用,且10 ng/ml EGF的促进作用最明显,该促进作用随EGF刺激时间的延长而增强.EGF刺激后,EGFR、蛋白激酶B(AKT)、细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)、p38、JNK均发生磷酸化,各阻断剂均能特异性阻断EGF诱导的上述磷酸化现象.阻断EGFR、PI3-K、MAPK、p38及JNK信号通路均能有效抑制Claudin-3蛋白的表达.结论 EGF能够增加Hela细胞Claudin-3的表达,其机制可能涉及EGFR、PI3-K、MAPK、p38及JNK信号通路.

目的 探讨CUEDC2对卵巢癌细胞顺铂敏感性的影响及相关作用机制.方法采用siRNA技术敲低浆液性卵巢癌(SKOV3)细胞株中CUEDC2基因,Western blotting法检测siRNA技术在细胞中的敲除效果,采用MTS比色法、锥虫蓝染色计数方法检测在顺铂作用下si-control组与Si-CUEDC2组SKOV3细胞增殖情况,Western blotting法检测加药组(顺铂8μmol/L)、si-control组(顺铂8μmol/L,si-control 50 nmol/L)、Si-CUEDC2组(顺铂8 μ mol/L,Si-CUEDC2 50 nmol/L)、空白组SKOV3细胞中促分裂素原活化蛋白激酶(MAPK)通路中相关蛋白的表达水平.结果未加顺铂处理的Si-CUEDC2组与si-control组SKOV3细胞数量无差异,而经顺铂处理的si-CUEDC2组与si-control组相比SKOV3细胞数明显减少(P ＜0.05);si-CUEDC2的SKOV3细胞在顺铂的作用下Phosphorylatio-p38高表达,Phosphorylatio-ERK低表达.结论敲低CUEDC2可显著增加卵巢癌细胞对顺铂的敏感性;CUEDC2可能通过MAPK通路影响顺铂对卵巢癌细胞增殖的抑制作用.

目的:研究天麻水煎液对A53T α-突触核蛋°白(α-synuclein)转基因帕金森小鼠的治疗作用,及其对凋亡相关通路表达的影响.方法:以A53T α-synuclein转基因帕金森小鼠为实验对象,设置模型组、天麻组、空白组、阳性组(美多芭组);采用基因型鉴定法、苏木素-伊红(HE)染色法和行为学实验测定小鼠中脑黑质神经元病理改变,以判断造模是否成功;Illumina HiSeq 2500平台测序,检测天麻组所有基因转录本的差异表达,通过功能注释和富集分析筛选出与帕金森保护相关的基因及代谢途径.结果:预给予天麻水煎液治疗后能改善A53T α-synuclein转基因帕金森小鼠中脑黑质神经元病变,转录数据分析显示其作用机制主要涉及原癌基因大鼠肉瘤(Ras),p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)及Ca2+等相关凋亡途径的抑制或激活调控.与模型组相比,天麻组中多巴胺第三受体,神经肽Y,Ras蛋白特异鸟嘌呤核苷酸释放因子1,钙/钙调蛋白依赖的磷酸二酯酶1A等基因表达上调,原癌基因c-Fos,p38 MAPK和人促分裂素原活化蛋白激酶激活的蛋白激酶3等凋亡基因表达下调.结论:天麻水煎液对A53T α-synuclein转基因帕金森小鼠具有一定的治疗作用,其机制可能与抑制多种凋亡相关信号通路有关.

目的 研究促分裂素原活化蛋白激酶(MAPK)通路对胚胎干细胞诱导分化心肌细胞的影响.方法 采用10-4M维生素C诱导小鼠R1胚胎干细胞分化为心肌细胞.以未经处理ESC心肌细胞分化(ESCM)相应时间点的总RNA作对照组,20 μM细胞外信号调节激酶(ERK)特异性抑制剂PD98059和20 μM p38 MAPK特异性抑制剂SB203580孵育细胞,诱导分化后期通过计数搏动拟胚体的比率和实时定量聚合酶链式扩增反应(RT-PCR)和免疫印迹(WesternBlotting)检测心肌标志物的表达确定其作用.结果 与对照组相比,诱导分化第14天,SB203580组搏动拟胚体比率显著降低(24％ vs.56％,P=0.025);RT-PCR和Western Blotting结果表明SB203580、PD98059组均可下调心肌特异性标志物表达,SB203580组更加明显.结论 MAPK通路与心肌细胞分化有关,以p38信号通路为主.

目的 探讨胃饥饿素(ghrelin)对HK-2细胞缺氧/复氧的保护作用及机制.方法 以HK-2细胞为研究对象,建立缺氧/复氧模型,模拟肾缺血再灌注损伤过程.胃饥饿素预处理后,采用CCK-8试剂盒检测不同质量浓度胃饥饿素(0,12.5,25,50,100,200,400,800,1600 ng/mL)对缺氧/复氧及正常HK-2细胞活力的影响.将细胞分为正常对照组(N组),缺氧/复氧损伤组(H/R组),胃饥饿素(400 ng/mL)预处理组+缺氧/复氧损伤组(ghrelin+H/R组).造模成功后,采用原位末端转移酶标记(TUNEL)试剂盒检测细胞凋亡,蛋白质印迹法(WB)检测各组细胞外调节蛋白激酶(ERK)及磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)、P38促分裂素原活化蛋白激酶(P38)及磷酸化P38促分裂素原活化蛋白激酶(p-P38)的表达.结果 缺氧4 h,复氧12 h能有效诱导HK-2细胞缺氧/复氧损伤模型;与胃饥饿素质量浓度为0 ng/mL时相比,质量浓度为12.5,25,50 ng/mL时对缺氧/复氧损伤的HK-2细胞无影响;胃饥饿素质量浓度为100,200,400,800 ng/mL预处理能有效提高细胞活力(P<0.01),质量浓度为1600 ng/mL时HK-2细胞的活力开始降低;胃饥饿素质量浓度大于800 ng/mL对正常HK-2细胞活力有影响(P<0.05);与N组相比,H/R组细胞凋亡明显,ERK,p-ERK,P38及p-P38表达无差异;与H/R组相比,ghrelin+H/R组细胞凋亡水平下降,ERK,p-ERK,P38表达无差异,p-P38表达增高.结论 胃饥饿素预处理能对HK-2细胞缺氧/复氧损伤起到保护作用,可能是通过激活P38信号通路发挥其功能.

目的 研究橄榄苦苷对脑缺血再灌注损伤大鼠神经元凋亡及c-Jun氨基末端激酶(JNK)/促分裂素原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路的影响.方法 SD大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组(0.5 mg/kg)及橄榄苦苷高、低剂量组(40、20 mg/kg),每组14只.连续灌胃给药14 d,末次给药结束后采用线栓法建立脑缺血再灌注损伤模型,进行2 h缺血后再灌注24 h,测定神经症状评分、脑梗死面积、脑组织含水量、半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3、B淋巴细胞瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关的x蛋白(Bax)mRNA表达及磷酸化的JNK(p-JNK)、磷酸化的p38 MAPK(p-p38)蛋白表达等指标.结果 与模型组比较,橄榄苦苷高、低剂量组大鼠神经症状评分、脑梗死面积及橄榄苦苷高剂量组脑组织含水量均显著降低(P<0.05);与模型组比较,橄榄苦苷高、低剂量组大鼠Caspase-3、Bax mRNA及p-JNK、p-p38蛋白表达均明显降低(P<0.05),而Bcl-2 mRNA表达明显增加(P<0.05).结论 橄榄苦苷对大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用,该作用与抑制JNK/p38 MAPK信号通路的活化进而减少神经元凋亡有关.