目的:探讨山楂酸（MA）对异丙肾上腺素（ISO）诱导的小鼠心肌纤维化的影响。方法:使用ISO诱导成年雄性C57BL/6小鼠心肌纤维化，MA给药2周，检测MA对心功能和纤维化的影响。RT-PCR和免疫印迹检测纤维化标志物和信号通路分子变化。将原代培养的大鼠成纤维细胞中分别加入磷酸缓冲盐溶液（PBS）、PBS+p38 MAPK抑制剂（SB203580）、PBS+MA、ISO、ISO+SB203580、ISO+MA。48 h后收集细胞进行后续检测。结果:本研究成功制备心肌纤维化小鼠模型，ISO+MA组的左心室短轴缩短率（FS）和左心室内压最大上升速率和最大下降速率（±dp/dt）显著高于ISO组[分别为（35.1±1.8）%比（28.5±2.6）%、（7 256±153）mmHg/s比（6 402±240）mmHg/s、（7 156±163）mmHg/s比（6 319±219）mmHg/s， P<0.05]；ISO+MA组间质和血管周胶原沉积程度高于ISO组（ P<0.05），ISO+MA组的COL-1、COL-3和TGF-β mRNA相对水平显著低于ISO组（1.70±0.24比3.69±0.34、1.72±0.56比4.84±0.82、1.52±0.19比2.64±0.29， P<0.05）；ISO+MA组的p38 MAPK和Smad3的磷酸化水平和TGF-β1蛋白表达水平低于ISO组（1.67±0.35比2.61±0.58、1.68±0.23比2.52±0.19、1.56±0.15比2.48±0.26， P<0.05）；体外细胞实验结果显示，p38 MAPK特异性抑制剂（SB203580）组和MA组的COL-1、COL-3、TGF-β mRNA水平均显著低于ISO组（分别为2.25±0.51，2.16±0.48比5.29±1.21；1.58±0.34，1.69±0.29比4.97±1.32；1.41±0.31，1.55±0.38比3.53±0.56， P<0.05）；SB203580组和MA组的p38 MAPK、Smad3的磷酸化水平均显著低于ISO组，TGF-β1的蛋白表达低于ISO组（分别为1.81±0.18，1.77±0.16比2.56±0.32；1.85±0.21，1.81±0.17比2.48±0.37；1.84±0.24，1.72±0.17比2.52±0.29， P<0.05）。 结论:MA可抑制p38 MAPK的磷酸化，进而抑制经典的TGF-β1/Smads纤维化信号通路来发挥抗纤维化的作用。

骨质疏松症（OP）是由于骨吸收大于骨形成，导致骨量减少、骨质结构变差的一种全身骨代谢性疾病，其并发症导致的致残率、致死率已成为全球公共难题。促分裂素原活化蛋白激酶(MAPK)是调节和维持细胞能量平衡的重要分子，与骨稳态的保持有着密切的联系。从临床实践来看，中医药防治OP具有明显的优势，然而关于祖国传统医学基于该信号通路治疗OP的调节机制仍然缺乏相对全面且系统的归纳总结。因此，基于MAPK信号通路在骨代谢的调节机制，从单味中药及中药复方的角度综述防治OP的作用机制，以期为今后OP相关基础及临床研究提供理论依据。

目的:通过网络药理学挖掘和实验方法，考察麦冬五味子联用方抗动脉粥样硬化的作用，探讨其作用机制。方法:从TCMGeneDIT数据库系统中，挖掘麦冬、五味子靶点蛋白，构建麦冬-五味子多成分-蛋白网络，提取显著性差异的子网络中蛋白并进行信号通路映射。将ApoE-等位基因敲除小鼠按随机数字表法分成对照组，模型组，低、中、高剂量组和阿托伐他汀钙片组，每组6只。除对照组外，其余各组以H10540高脂饲料喂饲12周。第4周开始给药，阿托伐他汀钙片组灌胃阿托伐他汀钙片混悬液6 mg/kg，低、中、高剂量组灌胃麦冬五味子混煎液4.68、2.34、1.17 g/kg，1次/d，连续灌胃8周。采用油红染色观察动脉粥样硬化主动脉管壁病理学改变。采用Western blot法检测肝组织促分裂素原活化蛋白激酶p38(mitogen-activated protein kinases p38, p38)、ATP结合盒亚家族G成员1(ATP binding cassette subfamily G member 1, ABCG1)、Toll样受体4(toll-like receptor 4, TLR4)、热休克蛋白90α家族A成员1 (heat shock protein 90 alpha family class A member 1, HSP90AA1)、MMP-9和花生四烯酸5脂氧合酶(arachidonate 5-Lipoxygenase, ALOX5)蛋白表达，以及脑组织核因子E相关因子(nuclear factor related factor, Nrf2)和血红素加氧酶1(hemeoxygenase 1, HO-1)蛋白表达。结果:发现麦冬五味子联用方中有11个成分，与数据库中挖掘到的37个蛋白有匹配，构成48个结点、190条边界的成分-蛋白网络，提取显著性差异蛋白网络中 P<0.05的子网络1个。与模型组比较，低、中、高剂量组小鼠肝组织p-p38/p38 [(2.12±0.12)、(1.76±0.11)、(1.69±0.10)比(2.45±0.16)]、TLR4[(1.98±0.10)、(1.64±0.11)、(1.55±0.12)比(2.68±0.06)]、HSP90AA1[(1.79±0.10)、(1.66±0.09)、(1.59±0.11)比(2.06±0.07)]、MMP-9[(1.84±0.11)、(1.75±0.12)、(1.66±0.08)比(2.68±0.10)]蛋白表达降低( P<0.05)，ABCG1[(0.53±0.08)、(0.78±0.09)、(0.81±0.10)比(0.45±0.04)]、ALOX5[(0.59±0.04)、(0.67±0.09)、(0.88±0.07)比(0.47±0.02)]蛋白表达升高( P<0.05)，脑组织细胞质Nrf2[(1.62±0.12)、(1.32±0.09)、(1.14±0.06)比(2.12±0.08)]蛋白表达降低( P<0.05)，细胞核中Nrf2[(1.12±0.09)、(1.61±0.07)、(1.68±0.11)比(1.07±0.08)]蛋白表达升高( P<0.05)，HO-1[(1.16±0.09)、(1.73±0.11)、(1.82±0.08)比(1.05±0.04)]蛋白表达升高( P<0.05)。 结论:本研究采用网络药理学和分子生物学方法，阐释了麦冬五味子联用防治动脉粥样硬化的分子机制，并且在氧化应激诱导Nrf2途径上进行验证，为联用方的进一步研究提供参考。

慢性低度炎症(chronic low-grade inflammation,CLGI)属于较新的概念,尚无明确定义,一般认为是一种非特异性、慢性、持续、低度的炎症状态,与肥胖、炎症性肠病、神经退行性疾病、肿瘤等多种慢性疾病密切相关,改善CLGI可有效减缓相关疾病进程.抗炎治疗是防治CLGI的重要策略,但目前还没有确切的药物治疗方法.姜黄素是从姜科植物根茎中提取的多酚类化合物,具有显著的抗炎活性.研究表明,姜黄素通过调节核转录因子-κB(NF-κB)、Janus激酶信号转导/转录激活因子通路(JAK/STAT)、磷脂酰肌醇 3 激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)、促分裂素原活化蛋白激酶(MAPK)、NOD样受体蛋白 3(NLRP3)炎症小体和核因子E2 相关因子 2/抗氧化反应元件(Nrf2/ARE)等炎症相关通路发挥抗炎作用.该文系统总结了姜黄素的抗炎作用机制及其在改善慢性低度炎症相关疾病中的药理作用和临床应用情况,以期为姜黄素改善CLGI的深入研究和临床应用提供参考.

目的 观察当飞利肝宁胶囊治疗慢性乙型肝炎(CHB)患者的临床疗效,并预测其作用机制.方法 收集2019年8月-2020年12月昆明市第三人民医院诊治的98例CHB患者,按随机数字表法分为对照组和观察组各49例,对照组给予恩替卡韦进行治疗,观察组给予当飞利肝宁胶囊联合恩替卡韦治疗,疗程为24周.观察两组患者治疗前后肝功能指标如总胆红素(TBIL)、血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、谷氨酰基转移酶(GGT)、乙肝e抗原(HBeAg)转阴率、HBV DNA载量及肝脏硬度值(LSM)值的变化;再基于网络药理学的方法,对当飞利肝宁胶囊治疗CHB的作用进行理论论证.结果 治疗后,对照组TBIL、ALT、AST和GGT分别为(20.61±10.17)μmol/L、(53.28±17.90)U/L、(49.32±15.24)U/L和(41.97±13.34)U/L,HBeAg转阴率为 24.49％,HBV DNA 载量为(3.34±1.25)log10copies/mL,LSM 值为(8.95±1.14)kPa;观察组 TBIL、ALT、AST 和 GGT 分别为(18.75± 9.76)μmol/L、(49.74±18.25)U/L、(46.19±17.63)U/L和(39.28±14.11)U/L,HBeAg转阴率为30.61％,HBV DNA载量为(2.07±1.18)log10 copies/mL,LSM值为(7.43±1.06)kPa;与对照组比较,观察组肝功能指标TBIL、ALT、AST和GGT较对照组降低,但差异均无统计学意义(t=0.924、0.969、0.940、0.970,P均＞0.05).观察组HBV DNA载量和LSM值均明显低于对照组,差异均有统计学意义(t=5.172、6.835,P均＜0.05).当飞利肝宁胶囊筛选得到40个活性成分,可能通过作用于信号传导与转录激活因子3(STAT3)、转录因子JUN、促分裂素原活化蛋白激酶l(MAPK1)等靶点调控CHB相关通路而发挥临床疗效.结论 当飞利肝宁胶囊联合恩替卡韦治疗慢性乙型肝炎患者,可以有效改善患者肝功能,降低HBV DNA载量,还可以明显降低LSM值,改善肝脏纤维化程度,这可能是其起效的作用机制.

目的 探讨促红细胞生成素(EPO)基因修饰的人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)对神经元周期和凋亡的调控作用及机制.方法 将对数生长期SH-SY5Y细胞随机分为MSCs组、正常对照(NC)-间充质干细胞(MSCs)组及EPO-MSCs组,MSCs组细胞不做任何转染,NC-MSCs组及EPO-MSCs组细胞分别转染对照病毒空载体和过表达EPO慢病毒载体.应用荧光显微镜和流式细胞术验证NC-MSCs组及EPO-MSCs组细胞转染效率,应用Western blot检测MSCs组、NC-MSCs组及EPO-MSCs组细胞中EPO蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链反应检测MSCs组、NC-MSCs组及EPO-MSCs组细胞中EPO mRNA表达,酶联免疫吸附法检测MSCs组、NC-MSCs组及EPO-MSCs组细胞上清液中EPO蛋白表达.将SH-SY5Y细胞分为常氧组和缺氧缺血组,常氧组细胞正常培养,缺氧缺血组细胞置于含体积分数0.5％O2三气体培养箱中24 h制备缺氧缺血细胞模型;将缺氧缺血SH-SY5Y细胞随机分为MSCs共培养组、NC-MSCs共培养组、EPO-MSCs共培养组,MSCs共培养组、NC-MSCs共培养组、EPO-MSCs共培养组缺氧缺血SH-SY5Y细胞分别与MSCs、NC-MSCs、EPO-MSCs共培养;应用流式细胞术检测各组细胞周期及凋亡情况.对MSCs共培养组、NC-MSCs共培养组、EPO-MSCs共培养组缺氧缺血SH-SY5Y细胞行RNA-Seq分析,并行富集京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集.结果 EPO-MSCs慢病毒转染效率为98.51％,NC-MSCs慢病毒转染效率为97.83％.EPO-MSCs组细胞中EPO蛋白和mRNA相对表达量显著高于MSCs组和NC-MSCs组(P＜0.05);MSCs组与NC-MSCs组细胞中EPO蛋白和mRNA相对表达量比较差异无统计学意义(P＞0.05).EPO-MSCs组细胞上清液中EPO蛋白表达水平显著高于MSCs组和NC-MSCs组(P＜0.05);MSCs组与NC-MSCs组细胞上清液中EPO表达水平比较差异无统计学意义(P＞0.05).缺氧缺血组SH-SY5Y细胞凋亡率及G0-G1期细胞比例显著高于常氧组(P＜0.05).EPO-MSCs共培养组SH-SY5Y细胞凋亡率及G0-G1期细胞比例显著低于MSCs共培养组和NC-MSCs共培养组(P＜0.05);MSCs共培养组与NC-MSCs共培养组SH-SY5Y细胞凋亡率及G0-G1期细胞比例比较差异无统计学意义(P＞0.05);MSCs共培养组、NC-MSCs共培养组和EPO-MSCs共培养组SH-SY5Y细胞凋亡率及G0-G1 期细胞比例显著低于缺氧缺血组(P＜0.05).RNA-Seq分析显示,促分裂素原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路和细胞凋亡通路是NC-MSCs共培养缺氧缺血SH-SY5Y细胞、EPO-MSCs共培养缺氧缺血SH-SY5Y细胞中富集程度最高的通路,p53途径的激活在细胞凋亡的调节中起关键作用.结论 EPO基因修饰的MSCs可显著抑制缺氧缺血神经元凋亡,减少细胞间期阻滞,增强MSCs对缺氧缺血性脑病的保护作用,其机制可能与EPO基因修饰的MSCs激活MAPK-p53信号通路相关.

目的 探讨变应性鼻炎(AR)患者中促分裂素原活化蛋白激酶(MAPK)和核转录因子(NF-κB)信号通路的表达及变化.方法 采用酶联免疫吸附试验检测AR患者(试验组)和健康体检者(对照组)血清中肿瘤坏死因子-α(T N F-α)、白细胞介素(IL)-Iβ、IL-4、p38M A PK和N F-κB的表达.结果 与对照组相比,试验组中T N F-α、IL-Iβ、IL-4、p38M A PK和N F-κB的表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 A R患者血清中 T N F-α、IL-Iβ、IL-4、p38M A PK和N F-κB呈过度表达状态;检测患者血清中的相关细胞因子,N F-κB有利于了解患者过敏状态并协助AR的诊断.

目的 探讨表皮生长因子(EGF)对宫颈癌Hela细胞紧密连接蛋白3(Claudin-3)表达的影响及其可能机制.方法 培养Hela细胞至贴壁,接种至3组6孔板,分别进行如下处理:①以0.0、0.5、5.0、10.0及100.0 ng/ml EGF处理8 h,测评不同浓度EGF对Claudin-3蛋白及其信使RNA(mRNA)的影响;②培养基中加入10 ng/ml EGF,分别于培养0 min、10 min、30 min、1 h、2 h、4 h、8 h、24 h,测评Claudin-3蛋白及mRNA水平、EGF相关作用通路各蛋白磷酸化情况;③分别以EGF受体(EGFR)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3-K)、促分裂素原活化蛋白激酶(MAPK)、p38、c-Jun氨基末端激酶(JNK)阻断剂干预1 h,随后加入含EGF 10 ng/ml的培养基培养,测评Claudin-3蛋白及mRNA水平.结果 EGF对Hela细胞Claudin-3蛋白及mRNA的表达有促进作用,且10 ng/ml EGF的促进作用最明显,该促进作用随EGF刺激时间的延长而增强.EGF刺激后,EGFR、蛋白激酶B(AKT)、细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)、p38、JNK均发生磷酸化,各阻断剂均能特异性阻断EGF诱导的上述磷酸化现象.阻断EGFR、PI3-K、MAPK、p38及JNK信号通路均能有效抑制Claudin-3蛋白的表达.结论 EGF能够增加Hela细胞Claudin-3的表达,其机制可能涉及EGFR、PI3-K、MAPK、p38及JNK信号通路.

目的 探讨CUEDC2对卵巢癌细胞顺铂敏感性的影响及相关作用机制.方法采用siRNA技术敲低浆液性卵巢癌(SKOV3)细胞株中CUEDC2基因,Western blotting法检测siRNA技术在细胞中的敲除效果,采用MTS比色法、锥虫蓝染色计数方法检测在顺铂作用下si-control组与Si-CUEDC2组SKOV3细胞增殖情况,Western blotting法检测加药组(顺铂8μmol/L)、si-control组(顺铂8μmol/L,si-control 50 nmol/L)、Si-CUEDC2组(顺铂8 μ mol/L,Si-CUEDC2 50 nmol/L)、空白组SKOV3细胞中促分裂素原活化蛋白激酶(MAPK)通路中相关蛋白的表达水平.结果未加顺铂处理的Si-CUEDC2组与si-control组SKOV3细胞数量无差异,而经顺铂处理的si-CUEDC2组与si-control组相比SKOV3细胞数明显减少(P ＜0.05);si-CUEDC2的SKOV3细胞在顺铂的作用下Phosphorylatio-p38高表达,Phosphorylatio-ERK低表达.结论敲低CUEDC2可显著增加卵巢癌细胞对顺铂的敏感性;CUEDC2可能通过MAPK通路影响顺铂对卵巢癌细胞增殖的抑制作用.

目的:研究炎症状态下血管平滑肌细胞中沉默调节蛋白1(SIRT1)的表达及其相关的信号通路.方法:以大鼠左颈总动脉球囊损伤和原代血管平滑肌细胞为模型,采用免疫组化的方法研究颈总动脉球囊损伤后SIRT1蛋白表达;采用免疫荧光观察血管平滑肌中TNF-α对SIRT1表达和定位的影响;采用Western blotting检测TNF-α对血管平滑肌细胞中SIRT1表达及p42/p44促分裂素原活化蛋白激酶(MAPK)表达的影响;并考察用MAPKs抑制剂处理后TNF-α对SIRT1表达的影响.结果:免疫组化结果显示球囊损伤的大鼠颈总动脉平滑肌细胞中SIRT1表达增加;免疫荧光显示SIRT1主要定位于血管平滑肌细胞核且TNF-α处理后SIRT1表达增加;Western blotting结果表明TNF-α处理的大鼠血管平滑肌细胞中SIRT1和磷酸化p42/p44 MAPK表达高于对照组;用p42/p44 MAPK抑制剂处理后,TNF-α诱导的SIRT1表达被抑制.结论:球囊损伤及TNF-α处理均可增高血管平滑肌细胞中SIRT1表达,p42/p44 MAPK信号通路参与对这一过程的调控.