探讨二妙散通过α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAchR)-Janus激酶2(JAK2)/信号转导及转录激活因子3(STAT3)途径改善类风湿关节炎大鼠炎症的免疫学机制.56只雌性Wistar大鼠随机分为正常(HG)组、胶原诱导性关节炎模型(CM)组、迷走神经切断(VA)组、假手术(SH)组、二妙散治疗模型(EM)组、二妙散治疗迷走神经切断(EV)组、二妙散治疗假手术(ES)组,每组8只.除HG组外,其他组均构建胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠模型,造模成功后进行颈部单侧迷走神经切断术及假手术(仅分离迷走神经),术后7 d开始给药治疗,持续治疗35 d.记录大鼠体质量及关节情况,观察大鼠脾脏病理学变化,ELISA检测大鼠血清中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,qRT-PCR、Western blot和免疫组化检测脾脏中α7nAchR-JAK2/STAT3通路核心基因mRNA及蛋白表达.结果显示,CM组对比HG组、VA组对比CM组和SH组,大鼠体质量显著降低(P＜0.05,P＜0.01),关节炎评分显著升高(P＜0.05,P＜0.01),踝关节明显肿胀伴畸形,脾脏淋巴小结显著增大,血清中IL-6、IL-1β、TNF-α含量显著增加(P＜0.05,P＜0.01),脾脏中JAK2、STAT3 mRNA水平显著升高(P＜0.05,P＜0.01),磷酸化 JAK2(p-JAK2)/JAK2、磷酸化 STAT3(p-STAT3)/STAT3 水平显著升高(P＜0.05,P＜0.01),JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3细胞数增加(P＜0.05,P＜0.01).EM组对比CM组、ES组对比SH组,大鼠体质量显著升高(P＜0.01),关节炎评分显著下降(P＜0.05,P＜0.01),踝关节肿胀度明显减轻,脾脏淋巴小结体积减小,炎症减轻,血清中IL-6、IL-1β、TNF-α 含量显著下降(P＜0.05,P＜0.01),脾脏 JAK2、STAT3 mRNA 表达显著降低(P＜0.05,P＜0.01),p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3 水平显著降低(P＜0.05,P＜0.01),JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3 细胞数量显著减少(P＜0.05,P＜0.01),α7nAChR mRNA及蛋白表达显著上升(P＜0.01).EV组对比VA组,大鼠体质量上升及关节炎评分无明显差异,脾脏淋巴小结数量减少不显著,体积仍较大,炎症无明显改善,血清IL-6、IL-1β、TNF-α含量表达不显著,脾脏中α7nAChR、JAK2、STAT3 mRNA无明显差异,脾脏中p-JAK2/JAK2、α7nAChR蛋白表达显著降低(P＜0.05,P＜0.01),p-STAT3/STAT3蛋白表达不显著,JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3细胞数量无明显差异.以上实验结果显示,单侧迷走神经切断促进磷酸化的JAK2和STAT3表达增加,加剧炎症状态,二妙散通过迷走神经激活α7nAChR介导的JAK2/STAT3途径改善CIA大鼠炎症,提示α7nAchR-JAK2/STAT3途径可能是治疗类风湿关节炎的潜在靶标.

目的:观察经皮耳穴-迷走神经刺激(taVNS)对脂多糖(LPS)诱导抑郁样行为大鼠脾脏α7烟碱乙酰胆碱受体(α7nAchR)/Janus激酶2(JAK2)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路的影响,探讨taVNS抗抑郁的作用机制.方法:SD大鼠和α7nAchR基因敲除大鼠(简称α7)分别随机分为空白组、模型组、taVNS组,每组6只.SD taVNS组和α7 taVNS组每天进行1次30 min的taVNS干预(第1-9天).通过腹腔注射1 mg/kg LPS(第8天)建立抑郁样行为大鼠模型.旷场实验记录干预后(第9天)大鼠旷场实验平均速度、活动时间和边上不动时间,采用电化学发光多因子方法检测大鼠血清白细胞介素(IL)-10、CXC趋化因子配体1(CXCL1)含量,采用Western blot法检测各组大鼠脾脏磷酸化(p)-JAK2、p-STAT3蛋白表达.结果:与SD空白组比较,SD模型组大鼠旷场实验平均速度、活动时间,脾脏p-JAK2、p-STAT3蛋白表达量显著减少(P<0.01,P<0.05),边上不动时间,血清IL-10、CXCL1含量显著增加(P<0.001,P<0.01,P<0.05);与SD模型组比较,SD taVNS组旷场实验平均速度、活动时间,脾脏p-JAK2、p-STAT3蛋白表达量显著增加(P<0.01,P<0.001),边上不动时间,血清IL-10、CXCL1含量显著减少(P<0.001,P<0.05).与α7空白组比较,α7 模型组旷场实验平均速度、活动时间,脾脏p-JAK2 蛋白表达量显著减少(P<0.05,P<0.001,P<0.01),边上不动时间,血清IL-10、CXCL1含量显著增加(P<0.001,P<0.01);α7模型组与α7 taVNS组各指标差异无统计学意义.与SD taVNS组比较,α7 taVNS组旷场实验边上不动时间、血清IL-10含量增加(P<0.001,P<0.05),脾脏p-JAK2、p-STAT3蛋白表达减少(P<0.01,P<0.05).结论:taVNS可能通过调节脾脏α7nAchR/JAK2/STAT3信号通路发挥抗炎作用,从而改善LPS诱发的大鼠抑郁样行为.

脑卒中的发病机制是一个动态演变过程,表现为一系列神经毒性和神经保护相互作用的反应,参与反应的蛋白质作为信号通路通常在外界刺激下激活.目前已明确针刺能通过抑制脑卒中后脑组织神经细胞铁死亡从而促进神经功能修复,近年来针刺通过调控铁死亡治疗脑卒中的相关信号通路研究取得了显著进展,主要包括以下几方面:miR-23a-3p和核转录因子红系2 样2(NFE2L2)信号通路;p62/Kelch样ECH关联蛋白 1/核因子E2 相关因子 2(p62/Keap1/Nrf2)信号通路;α7nAChR介导的Janus激酶2/信号转导及转录激活因子3(JAK2/STAT3)信号通路;环磷酸腺苷/cAMP依赖性蛋白激酶/cAMP反应元件结合蛋白(cAMP/PKA/CREB)信号通路;磷脂酰肌醇-3 激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路;p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路;过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子 1α/线粒体转录因子A(PGC-1 α/TFAM)信号通路;Notch信号通路和脑源性神经营养因子(BDNF)介导的Nrf2 信号通路.其中有已被证实的信号通路,亦有待研究的信号通路.

目的:探讨和痹方(HBR)通过胆碱能抗炎通路(CAP)治疗类风湿关节炎(RA)的机制.方法:将60只雄性大鼠随机平均分为空白组、模型组、激动剂组、HBR组、甲氨蝶呤(MTX)组、HBR+MTX组,激动剂组药物干预4周,其余组药物干预60d后,取血与关节滑膜,分别检测关节肿胀、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素(IL)-6、IL-17、α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAChR)、转录激活因子3(STAT3)水平.结果:HBR组关节肿胀体积下降,α 7nAChR、STAT3水平升高(P＜0.05),TNF-α、IL-6、IL-17水平降低(P＜0.01).结论:HBR能够通过CAP,激活JAK2/sTAT3信号通路,降低TNF-α、IL-6、IL-17水平,抑制炎性反应,减轻RA的关节肿胀.

目的 评价α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAChR)在电针减轻大鼠内毒索性急性肺损伤(ALI)中的作用及其与Janus激酶2信号转导和转录激活因子3(JAK2/STAT3)信号通路的关系.方法 清洁级健康雄性SD大鼠60只,体重200～220 g,8周龄,采用随机数字表法分为6组(n=10):对照组(C组)、ALI组、电针+ALI组(EA组)、α7nAChR拮抗剂α-银环蛇毒素(α-BGT)+ALI组(BA组)、电针+α-BGT+ ALI组(EBA组)和非经非穴+ALI组(SEA组).采用静脉注射脂多糖(LPS)5 mg/kg的方法制备大鼠内毒素性ALI模型.EA组和EAB组于模型制备前1～4d(刺激时间9:00至10:00,30 min/次,1次/d)及模型制备过程中电针刺激双侧足三里及内关穴(刺激强度以大鼠肢体出现微颤为宜,疏密波频率2/15 Hz,波宽0.2～0.5 ms,电流强度1～2 mA.SEA组以相同电针参数刺激足三里穴及内关穴旁开0.5 cm非经非穴处.于模型制备前30 min BA组和EBA组腹腔注射α-BGT 1 μg/kg.给予LPS后6h时处死大鼠取肺组织,观察病理学结果并行肺损伤评分,确定肺湿/干重(W/D)比值,采用ELISA法确定肺组织TNF-α、IL-1β、IL-6含量,Western blot法检测α7nAChR、磷酸化JAK2(p-JAK2)及磷酸化STAT3(p-STAT3)的表达水平.结果 与C组比较,余5组肺损伤评分、W/D比值和肺组织TNF-o、IL-1β、IL-6含量升高,α7nAChR、p-JAK2及p-STAT3表达上调(P＜0.05);与ALI组比较,EA组肺损伤评分、W/D比值和肺组织TNF-α、IL-1β及IL-6含量降低,α7nAChR、p-JAK2及p-STAT3表达上调,BA组肺损伤评分、W/D比值和肺组织TNF-α、IL-1β及IL-6含量升高,α7nAChR、p-JAK2及p-STAT3表达下调(p＜0.05),SEA组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);与EA组比较,EBA组肺损伤评分、W/D比值和肺组织TNF-α、IL-1β及IL-6含量升高,α7nAChR、p-JAK2及p-STAT3表达下调(P＜0.05).结论 α7nAChR表达上调激活JAK2/STAT3信号通路参与了电针减轻大鼠内毒素性ALI的过程.

Objective:Acupuncture has a definite therapeutic effect on chronic obstructive pulmonary disease (COPD),and the cholinergic anti-inflammatory pathway (CAP) has been shown to be involved in regulation of inflammation.In this study,we investigated whether electro-acupuncture (EA) affects the CAP in COPD.Methods:Sprague-Dawley rats were induced into COPD through exposure to cigarette smoke combined with lipopolysaccharide.EA treatment was applied at Zusanli (ST36) and Feishu (BL1 3) points for 30 min/d for 7 d.Seventy-two rats were randomly divided into six study groups,including normal,normal + EA,normal + α-bungarotoxin (α-BGT) (the antagonist of the nicotinic acetylcholine receptor α7 subunit (α7nAChR)) + EA,COPD,COPD + EA,and COPD + α-BGT + EA.Lung function,pathology and vagus nerve discharge were tested.The levels of acetylcholine (ACh),acetylcholinesterase (ACHE),interleukin-6 (IL-6) and tumor necrosis factor-α (TNF-α) in bronchoalveolar lavage fluid (BALF) and lung tissue were measured by enzyme-linked immunosorbent assay.The mRNA and protein expression and immunoreactivity of α7nAChR and its postreceptor inflammation signal pathway,including janus kinase 2 (JAK2),signal transducers and activators of transcription 3 (STAT3),nuclear factor-κB (NF-κB),were observed by quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction,Western blot and immunohistochemistry.Results:Compared with normal rats,there were a significant decline in lung function and discharge of the vagus nerve (P ＜ 0.01),a marked sign of lung inflammation and an increase of ACh,ACHE,IL-6 and TNF-α level in BALF or lung tissue (P ＜ 0.05,P ＜ 0.01) and higher expression of α7nAChR,JAK2,STAT3 and NF-κB (P ＜ 0.05,P ＜ 0.01) in the COPD rats.In rats receiving EA,the lung function and vagal discharge were enhanced (P ＜ 0.01),lung inflammation was improved and the levels of ACh,ACHE,IL-6 and TNF-α were decreased (P＜ 0.01).Further,the expression of α7TnAChR,JAK2,STAT3 and NF-κB was downregulated (P ＜ 0.05,P ＜ 0.01).However,the above effects of EA were blocked in rats injected with α-BGT (P ＜ 0.01).Conclusion:EA treatment can reduce the lung inflammatory response and improve lung function in COPD,which may be related to its involvement in the regulation of CAP.

胆碱能抗炎通路(CAP)是一种神经免疫调节通路,具有胆碱能神经系统与免疫系统之间吻合的结构基础,激活后可调节全身炎症和免疫反应.类风湿关节炎(RA)的发病机制与核转录因子(NF-κB)、Janus蛋白酪氨酸激酶2/信号转导子和转录激活子3 (JAK2/STAT3)炎症信号通路密切相关.在CAP中,乙酰胆碱与α-7nAchR结合可以调节这两条通路的信号转导,从而发挥抗炎效应.总结近年来有关CAP与NF-κB、JAK2/STAT3、RA关系的研究及CAP在中医药抗炎、免疫调节机制中的作用,为今后相关研究提供参考.参考文献35篇.

本研究旨在研究螺环哌嗪季铵盐化合物LXM-15抗完全弗氏佐剂引起的慢性炎性痛,及慢性坐骨神经压迫损伤(CCI)引起的慢性神经病理性疼痛的作用及机制.结果 表明,在慢性炎性疼痛模型中,给予LXM-15后,小鼠足肿胀、踝肿胀明显减轻;机械缩足阈值和热痛敏缩足潜伏期明显增加.用外周烟碱受体拮抗剂六烃季铵,或α7烟碱受体拮抗剂甲基牛扁亭预处理,可阻断LXM-15的抗慢性痛作用.在慢性神经病理性疼痛模型中,LXM-15能明显缓解CCI大鼠的机械刺激痛和热刺激痛觉过敏.进一步研究显示,LXM-15可明显抑制CCI大鼠背根神经节中JAK2和STAT3蛋白的磷酸化,以及TNF-α和c-fos mRNA的表达.综上所述,本研究表明LXM-15可缓解啮齿类动物的慢性炎性疼痛和慢性神经病理性疼痛.其作用机制可能是通过激活外周α7烟碱受体,进一步抑制JAK2/STAT3信号通路,降低TNF-α和c-fos的表达.

目的 探讨α7烟碱型胆碱能受体(α7nAChR)激动剂对体外循环(CPB)致大鼠肺损伤的影响及机制.方法 选取60只清洁级健康雄性SD大鼠为研究对象,采用随机数字表法将其分为假手术组(S组)、CPB组、α7nAChR激动剂(PNU 282987)+CPB组(PC组)、PNU282987+α7nAChR阻断剂(MLA)+CPB组(MC组)、PNU282987+JAK2-STAT3通道特异性抑制剂(AG490)+CPB组(AC组),每组各12只.观察各组病理学变化并进行肺损伤评分,计算肺湿/干重比值;采用酶联免疫吸附法检测肺组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)水平;蛋白免疫印迹法检测α7nAChR、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达情况.结果 与S组比较,CPB组、PC组、MC组和AC组大鼠肺损伤评分、湿/干重比值、呼吸指数(RI)明显升高,氧合指数(OI)明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05).与CPB组比较,PC组肺损伤评分、湿重/干重比值、OI、RI明显降低;MC组OI明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05).与S组比较,CPB组、PC组、MC组、AC组α7nAChR、p-JAK2、p-STAT3蛋白的表达均增加,差异均有统计学意义(P<0.05).与CPB组比较,PC组α7nAChR表达增加,p-JAK2及p-STAT3表达减少,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 α7nAChR激动剂通过上调 α7nAChR的表达抑制JAK2/STAT3信号通路,进而抑制CPB引起的炎症反应,减轻大鼠肺损伤,起到保护肺组织、改善肺功能的作用.

探讨反式茴香脑(trans-anethol,ANE)对慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease, COPD)的治疗作用,以及对胆碱能抗炎途径的调节作用.通过香烟烟雾和脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导COPD Sprague-Dawley大鼠模型.每天按照100 mg/kg的剂量对大鼠灌胃ANE,另外,在ANE治疗前30 min对大鼠腹膜内注射选择性α7nAChR拮抗剂α-真菌毒素组(α-BGT,1.0 μg/kg),共治疗4周.治疗后,检查大鼠的肺功能和肺组织病理.酶联免疫吸附法测定肺组织中的乙酰胆碱(acetylcholine,ACh)、乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平.通过RT-PCR、蛋白质印迹和免疫组化观察大鼠肺组织中α7nAChR、JAK2、STAT3和NF-κB的表达.研究显示,ANE提高了COPD大鼠的用力肺活量(forced vital capacity, FVC)、第0.1秒用力呼气量(FEV 0.1)、第0.3秒用力呼气量(FEV 0.3)、FVC 0.1占FVC比值(FEV 0.1/FVC)、FEV 0.3占FVC比值(FEV 0.3/FVC) (p＜0.05).XANE升高了COPD大鼠肺组织中的ACh和AChE水平(p＜0.05).ANE降低了COPD大鼠肺组织中TNF-α和IL-6的水平(p＜0.05).ANE上调了COPD大鼠肺组织中α7nAChR的表达,但下调了JAK2、STAT3和NF-κB的表达(p＜0.05).α-BGT处理可逆转ANE对大鼠肺功能的保护作用(p＜0.05).反式茴香脑对COPD大鼠的治疗作用可能与其对胆碱能抗炎途径的激活有关.