目的:研究还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶4(NOX4)在肝癌细胞诱导巨噬细胞M2型极化中的作用和机制。方法:单核巨噬细胞系THP-1和肝癌细胞系HepG2共培养模拟巨噬细胞的M2型极化，采用靶向NOX4的小干扰RNA(si-NOX4)和NOX4特异性抑制剂GLX351322抑制THP-1中NOX4的表达。将细胞分为对照组、si-NOX4组和GLX351322组。CCK-8法检测细胞活力，流式细胞术检测CD206 ＋F4/80 ＋M2型巨噬细胞比例，试剂盒检测M1型相关分子诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、TNF-α的表达，蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测M2型标志物精氨酸酶1(Arg1)、CCL22的表达以及TGF-β信号关键蛋白TGF-β1、Smad1的表达，试剂盒检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)的表达，免疫荧光染色检测CD206的表达。构建肝癌荷瘤小鼠模型，GLX351322干预后检测CD206的表达，Western blot法检测M2型标志物以及TGF-β信号关键蛋白的表达。 结果:si-NOX4和GLX351322抑制了NOX4的表达，THP-1和HepG2共培养后可显著抑制THP-1细胞活力，si-NOX4组和GLX351322组细胞活力显著低于对照组( P<0.05)。此外，si-NOX4组和GLX351322组CD206 ＋F4/80 ＋M2细胞比例也显著低于对照组( P<0.05)。M1型标志物iNOS和TNF-α的组间比较差异无统计学意义( P>0.05)，而对照组中M2型标志物Arg1、CCL22以及TGF-β1、Smad1的表达显著高于si-NOX4组和GLX351322组( P<0.05)。免疫荧光染色结果也显示M2型标志物CD206在si-NOX4组和GLX351322组中表达下调，荧光强度低于对照组( P<0.05)。肝癌荷瘤小鼠模型中，GLX351322干预后肿瘤组织中CD206的表达水平下调，与对照组比较差异有统计学意义( P<0.05)；M2型标志物Arg1、CCL22以及TGF-β1、Smad1的表达也显著低于对照组( P<0.05)。 结论:抑制NOX4表达可显著抑制肝癌细胞诱导的巨噬细胞M2型极化，提示NOX4在肿瘤相关巨噬细胞的转化中具有重要作用。

目的:评价烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD +)介导的沉默信息调节因子1(SIRT1)去乙酰化活性在小鼠内毒素性急性肺损伤(ALI)中的作用。 方法:SPF级健康雄性C57BL/6小鼠25只，6~8周龄，体重20~25 g，野生(WT)型10只，NAD +合成途关键酶烟酰胺单核苷酸腺苷酸转移酶1(NMNAT1)敲除(KO)型15只，采用随机数字表法，将WT型小鼠分为2组( n＝5)：对照组(WT+C组)和ALI组(WT+ALI组)；将KO型小鼠分为3组( n＝5)：对照组(KO+C组)、ALI组(KO+ALI组)和ALI+ NAD +前体物质烟酰胺单核苷酸(NMN)组(KO+ALI+NMN组)。静脉注射LPS 15 mg/kg制备内毒素性ALI模型，KO+ALI+NMN组注射静脉注射LPS前1 h腹腔注射NMN 500 mg/kg。各对照组给予等容量生理盐水。注射LPS或生理盐水后12 h时，取腹主动脉血标本行血气分析，后处死小鼠留取肺组织，测定肺湿重/干重(W/D)比值，光镜下观察肺组织病理学改变，并行肺损伤评分；采用ELISA法检测肺组织IL-6、IL-1β、TNF-α含量，采用分光光度计法测定NAD +含量，采用Western blot法测定肺组织SIRT1、乙酰化NF-κB (Ac-NF-κB)、乙酰化p53(Ac-p53)、乙酰化叉头框蛋白O1(Ac-FoxO1)、乙酰化过氧化物酶体增殖激活物受体γ辅激活因子(Ac-PGC1α)水平。 结果:与各C组比较，各ALI组pH值和PaO 2降低，PaCO 2、肺W/D比值、肺损伤评分、肺组织IL-6、IL-1β、TNF-α和NAD +含量升高，SIRT1表达上调，Ac-NF-κB、Ac-p53、Ac-FoxO1和Ac-PGC1α表达下调( P<0.05)。与WT+ALI组比较，KO+ALI组pH值和PaO 2降低，PaCO 2、肺W/D比值、肺损伤评分、肺组织IL-6、IL-1β和TNF-α含量升高，NAD +含量降低，SIRT1表达下调，Ac-NF-κB、Ac-p53、Ac-FoxO1和Ac-PGC1α表达上调( P<0.05)。与KO+ALI组比较，KO+ALI+NMN组pH值和PaO 2升高，PaCO 2、肺W/D比值、肺损伤评分、肺组织IL-6、IL-1β和TNF-α含量降低，NAD +含量升高，SIRT1表达上调，Ac-NF-κB、Ac-p53、Ac-FoxO1和Ac-PGC1α表达下调( P<0.05)。 结论:NAD +介导的SIRT1去乙酰化活性增强参与了小鼠内毒素性ALI时的内源性保护机制。

目的:探讨还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4（NOX4）抑制剂GKT137831与M2型巨噬细胞对大鼠肝星状细胞（HSC）系（HSC-T6）氧化应激指标NOX4、核因子E2相关因子2（Nrf2）和血红素加氧酶1（HO-1）的影响。方法:分离大鼠骨髓巨噬细胞，用白细胞介素（IL）-4诱导其分化为M2巨噬细胞表型。选5 μg/L转化生长因子β1（TGF-β1）激活HSC-T6，采用细胞计数（CCK-8）法检测5～80 μmol/L浓度梯度下NOX4抑制剂GKT137831刺激活化的大鼠HSC-T6细胞48 h后细胞增殖情况，选定最适药物浓度。分单独培养HSC组（对照组）、TGF-β1刺激组、TGF-β1+GKT137831刺激组、共同培养M2型巨噬细胞+HSC组、M2型巨噬细胞+TGF-β1刺激组、M2型巨噬细胞+TGF-β1+GKT137831刺激组，后5组为实验组。采用DCFH-DA探针法检测各组细胞活性氧（ROS）产生水平，采用qRT-PCR法和蛋白质印迹法检测各组HSC细胞NOX4、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Nrf2和HO-1水平。两组数据间的比较采用 t检验，多组间比较行One-way ANOVA法分析。 结果:TGF-β1刺激后细胞内ROS显著升高，各组细胞ROS相对水平分别为1.03±0.11、3.88±0.07、2.90±0.08、0.99±0.06、3.30±0.05、2.21±0.11， F ?=?686.1， P ?=?0.001；NOX4、α-SMA、Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白表达显著升高（ P ?

目的:建立高效液相色谱（HPLC）测定血液烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）主要消耗酶CD38酶活性的方法，检测CD38酶活性在不同年龄和健康状态人群中的差异。方法:选择50 μl全血作为检测样本、150 μl 浓度为500 μmol/L 的β-NAD为酶反应底物，全血预孵育消耗掉内源性β-NAD后，加入底物，在37 ℃温育40 min，高氯酸（PCA）终止反应，HPLC测定酶促反应前后产物烟酰胺（NAM）变化量并计算CD38酶活性。评价方法的线性、检测限、定量限、精密度、回收率和稳定性等。用所建方法检测60名健康体检者和30名结直肠癌患者血液CD38活性。结果:37 ℃ 预孵育20 min可消除内源性β-NAD的影响。NAM在浓度为0.1~3.2 μmol/L的范围内线性良好， r=0.999，检测限为0.5 nmol/L，定量限为2.1 nmol/L。平均批内精密度（ CV）和总 CV分别为3.22%~4.03%、2.91%~4.70%。加样回收率在94.82%~96.81%。全血在4 ℃放置48 h、室温放置8 h、冻存全血融化后室温放置2 h以及反复冻融3次均不影响CD38酶活性。NAM、β-NAD标准品和前处理后的样本在4 ℃放置48 h、室温放置8 h均可保持稳定。CD38活性随加入的CD38抑制剂4-氨基喹啉衍生物78c的浓度升高而逐渐降低。60例健康体检者结果显示，老年组CD38酶活性高于青年组（ t=-2.776， P=0.007），30例结直肠癌患者CD38酶活性高于健康体检者（ t=-2.572， P=0.012）。 结论:本研究建立的HPLC测定CD38酶活性的方法简单高效、准确性高、重复性好，为衰老及衰老相关疾病的研究提供了技术手段。

目的:探讨睡眠障碍(sleep disorders，SD)对骨髓造血干细胞放射损伤的影响。方法:采用6～8周龄C57BL/6J雄性小鼠56只，以 60Co γ射线对小鼠进行全身照射5.0、7.5 Gy。通过睡眠障碍仪建立SD模型，按照随机数表法，将小鼠分为对照组(Con组)、睡眠障碍组(SD组)、单纯照射组(IR组)、照后SD组(IR＋SD组)、照后SD给磷酸盐缓冲盐溶液(PBS)组(IR＋SD＋PBS组)、照后SD给GSK2795039组(IR＋SD＋GSK组)、照后SD给N-乙酰半胱氨酸(NAC)组(IR＋SD＋NAC组)，共7组，每组8只。取小鼠尾静脉血，检测5.0 Gy受照后外周血变化；并观察7.5 Gy照后小鼠生存率。采用苏木精和伊红(HE)染色观察骨髓细胞致密性与细胞数量变化。通过流式细胞术，检测骨髓造血干细胞(LSK)的数量，以及凋亡水平和细胞周期变化，分析LSK的活性氧(ROS)、线粒体来源活性氧(mtROS)等指标。采用酶标仪检测烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP＋/NADPH)和谷胱甘肽(GSSG/GSH)观察LSK的氧化应激水平。采用流式细胞术，检测烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶2(NOX2)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(caspase－1)的表达，分选小鼠LSK细胞，并采用聚合酶链式反应(PCR)检测NOX1-4、白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)、白介素18(IL-18)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)炎症因子的表达。 结果:与IR组相比，IR＋SD组小鼠白细胞(WBC)和血小板(PLT)恢复显著减慢( t＝4.39、6.37， P<0.05)，骨髓细胞计数由(2.14±0.38)×10 7降至(3.59±0.29)×10 7( t＝8.55， P<0.05)，LSK细胞的G 0期比例显著降低，凋亡比例显著升高( t＝7.53、8.21， P<0.05)，ROS、mtROS、NADP＋/NADPH水平均显著升高( t＝22.99、29.47、3.77， P<0.05)。IR情况下，SD进一步促进NOX2及Caspase-1活化及下游IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α炎症因子mRNA表达的升高( t＝6.95、6.01、8.39、4.91、5.56， P<0.05)。抑制NOX2-ROS可以挽救SD诱导的照后造血损伤加重，从而显著减少LSK凋亡比例以及炎症因子表达，最终加速LSK的损伤恢复( t＝9.24、3.92， P<0.05)。 结论:SD促进了IR介导的骨髓造血干细胞损伤，主要通过激活NOX2-ROS-Caspase-1轴使细胞内炎症因子和ROS水平升高，促进细胞凋亡，最终抑制骨髓造血恢复。

为探讨β-烟酰胺单核苷酸(β-nicotinamide mononucleotide,NMN)的稳定性特征,为NMN的生产制备和相关产品研发提供数据支撑,该研究建立简单基质下NMN的HPLC含量测定方法,探讨NMN在不同化学、物理学和生物学条件下的降解行为、降解产物和降解动力学特征.HPLC方法的色谱柱为Welch Xtimate AQ-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm),检测波长 266 nm,柱温 30℃,流速 1.0 mL·min-1,进样量 5 μL,流动相甲醇(A)-10 mmol·L-1 甲酸铵水溶液(B),梯度洗脱(0～6.7 min,0～4%A;6.7～13 min,4%～18%A;13～14.2 min,18%A;14.2～15 min,18%～0 A;15～22 min,0 A).该方法下NMN与潜在杂质和降解产物分离度良好,线性范围广,分析时间短,耐用性好,准确度高,平均加样回收率为 98.71%(RSD 1.2%),仪器精密度良好(RSD 0.26%),在考察范围内的线性良好(R2≥0.999 9),可以应用于简单基质下NMN的含量测定.NMN水溶液降解过程符合表观一级反应,降解速率主要受高温和pH影响,在低温、中性或弱酸弱碱环境较为稳定;强酸、强碱可加速其降解,降解速率受胃蛋白酶和胰蛋白酶影响小.在室温水溶液中符合动力学方程 lg Ct= 0.005 7t + 4.817 2,t0.9 和 t1/2 分别为95.58、860.26 h.结果提示:pH、温度是NMN在水溶液中稳定性的主要影响因素,低温、防潮和弱酸性环境更有利于NMN及其制品的贮存、应用.

目的:探讨脂蛋白相关 lncRNA通过参与炎症反应导致冠心病血管损伤的作用机制.方法:通过慢病毒来敲低lnc-MICALL2-2,实验分为对照组、氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)组、NC-shRNA+ox-LDL组、sh-MICALL2-2+ox-LDL组.逆转录实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和荧光原位杂交技术测定 lnc-MICALL2-2 的表达;细胞计数试剂盒(CCK-8)和流式细胞术检测细胞活力及凋亡率;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定细胞培养物上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-10、IL-1β、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)含量;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测各组内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、磷酸化 eNOS(p-eNOS)、内皮素(ET-1)、Bcl-2、Bax、Caspase-3、单磷酸活化蛋白激酶-α1(AMPKα1)和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶 2(NOX-2)的蛋白表达;检测各组活性氧(ROS)水平.结果:lnc-MICALL2-2 在 ox-LDL诱导的人冠状动脉内皮细胞(HCAECs)损伤模型中表达增加,敲低 lnc-MICALL2-2 后减弱了 ox-LDL 对 HCAECs 增殖和细胞凋亡的影响.ELISA结果表明,敲低 lnc-MICALL2-2 促炎因子 TNF-α、IL-6 和 IL-1β降低,抗炎因子 IL-10 表达升高,VCAM-1、ICAM-1、MCP-1 水平及 eNOS、p-eNOS表达水平下降.同时,敲低 lncRNA后,ROS水平和细胞凋亡率也有所下降.结论:lnc-MICALL2-2 在冠心病中表达升高,敲低 lnc-MICALL2-2后可改善 ox-LDL诱导的炎症反应,减少血管内皮细胞损伤.

目的 探讨烟酰胺单核苷酸(NMN)对 D-半乳糖(D-gal)诱导小鼠肾脏衰老的作用及其可能的抗炎机制.方法 将24 只雄性C57BL/6 小鼠随机分为 4 组:对照组、NMN组、D-gal组与D-gal+NMN组.采用皮下注射D-gal的方法构建肾脏衰老模型.记录各组小鼠体质量;采用苏木精-伊红(HE)和马松(Masson)染色观察小鼠肾脏病理损伤和纤维化;应用衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色评估组织衰老水平;使用免疫组化法(IHC)和蛋白免疫印迹法(Western blot)观察衰老指标p16、p21 的定位及表达;使用Western blot测定抗衰老蛋白沉默信息调节因子 1(SIRT1)及炎症指标肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、核因子-κB(NF-κB)的表达水平.采用SPSS 26.0 统计软件进行数据分析.根据数据类型,分别采用单因素方差分析、LSD-t检验或Kruskal-Wallis检验进行组间比较.结果 NMN对D-gal组小鼠体质量未产生显著影响(P>0.05).与对照组比较,D-gal组肾脏出现肾小球萎缩,肾小管肿胀、扩张和间质纤维化改变.IHC结果示p16、p21表达增加,并且主要位于肾小管,同时可见SA-β-gal阳性率增加,差异有统计学意义(P<0.05).Western blot结果示D-gal组肾脏衰老蛋白 p16、p21 及炎症指标 TNF-α、IL-1β、NF-κB 表达上调,而抗衰老蛋白 SIRT1 表达下调,差异有统计学意义(P<0.05).NMN处理后,D-gal组肾小球萎缩,肾小管肿胀、扩张及间质纤维化程度明显降低,衰老及炎症指标显著下降,此外,SIRT1 下调及SA-β-gal阳性率增加均得到缓解,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 NMN可能通过促进SIRT1 表达和抑制NF-κB途径介导的炎症反应,延缓D-gal诱导的肾脏衰老.

目的 探讨不同浓度锶对高血压小鼠抗氧化功能的影响,为防治人类高血压提供新思路.方法 100 只小鼠随机分为正常对照组(n=20)和造模组.正常对照组给予纯水,造模组给予 2 mg/L N'-硝基-L-精氨酸甲酯盐酸盐(L-NAME),4 w 建立高血压小鼠模型.造模成功的 80 只小鼠随机分为模型对照组(n=20)、模型 2.5 mg/L 锶水组(n=20)、模型 5.0 mg/L锶水组(n=20)和模型 10.0 mg/L锶水组(n=20),每 2 日监测小鼠饮水量和饲料消耗量,每周记录体重变化.10 w后测定小鼠主要脏器系数,血清和心脏中超氧化物歧化酶(T-SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、β-烟酰胺单核苷酸(NMN)和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)含量.结果 10 w后,5.0、10.0 mg/L锶水组小鼠血清和心脏SOD和GSH-Px活性分别为[(86.41±11.06)U/ml vs.(50.91±4.56)μmol/L vs.(7556.37±340.64)U/g tissue vs.(237.52±9.51)U/g tissue]和[(99.47±10.06)U/ml vs.(51.29±8.22)μmol/L vs.(7576.23±263.07)U/g tissue vs.(228.06±17.70)U/g tissue],较模型对照组明显上升[(69.47±12.45)U/ml vs.(43.95±8.02)μmol/L vs.(7165.82±715.19)U/g tissue vs.(228.06±17.70)U/g tissue,P＜0.05].10.0 mg/L锶水组小鼠血清CAT活性(7.17±0.55)U/ml较模型对照组(6.45±0.58)U/ml和 5.0 mg/L锶水组(6.47±0.35)U/ml显著提高(P＜0.05).5.0、10.0 mg/L锶水组小鼠血清和心脏MDA含量分别为[(11.13±2.69)nmol/ml vs.(25.43±4.06)nmol/g]和[(11.63±2.14)nmol/ml vs.(27.74±4.37)nmol/g],较 2.5 mg/L锶水组[(14.01±2.90)nmol/ml vs.(33.13±7.32)nmol/g]明显降低(P＜0.05).2.5 mg/L锶水组小鼠心脏NMN含量(876.99±139.21)μg/g tissue]显著高于其他四组[(700.77±91.38)μg/g tissue vs.(797.70±76.44)μg/g tissue vs.(722.13±58.49)μg/g tissue vs.(761.05±55.97)μg/g tissue,P＜0.05)].2.5、10.0 mg/L锶水组小鼠心脏 NAD+含量分别为[(65.32±11.48)nmol/g 和(73.68±10.39)nmol/g],较正常对照组(51.85±7.17)nmol/g和模型对照组(48.61±10.55)nmol/g显著提高(P＜0.05).结论 饮水锶可以在一定程度上提高小鼠体内的抗氧化酶活性,降低氧化损伤程度,增加细胞的能量代谢,从而改善机体的氧化应激状态,提示锶可能有抗衰老、延长寿命的作用.[营养学报,2023,45(5):460-464]

β-烟酰胺单核苷酸(NMN)是一种具有重要生物学活性的核苷酸,广泛存在于多种生物体内,是NAD+(辅酶Ⅰ)和NADP+(辅酶Ⅱ)的重要前体物之一.近年来,NMN的生理保健功能,尤其是其延缓衰老作用在国内外受到广泛关注.本综述重点介绍NMN的生理作用和保健功能,并简要介绍NMN的食物来源、膳食补充和安全性,及其合成方法和应用等方面的国内外研究进展,以期为相关人员和感兴趣的读者提供参考.