目的:探讨自噬是否参与屋尘螨(HDM)诱导的哮喘气道重塑，评估自噬抑制剂氯喹(CQ)在小鼠哮喘模型中的临床疗效。方法:用转化生长因子-β(TGF-β)单独或联合自噬抑制剂CQ共同体外培养人支气管上皮细胞，蛋白质印迹法(Western blot)检测气道重塑相关蛋白胶原蛋白Ⅰ(Collagen-Ⅰ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及自噬相关蛋白(LC3-Ⅰ/Ⅱ)表达。2、用6~8周龄的BALB/c小鼠建立HDM诱导过敏性哮喘动物模型，正常对照组用生理盐水替代；HDM+CQ组小鼠在HDM激发第4周开始同时给与CQ(50 mg/kg)鼻内注射2周，收集支气管肺泡灌洗液，进行嗜酸性粒细胞，中性粒细胞分析计数，酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测TGF-β、白细胞介素(IL)-4、IL-5含量，采用两样本 t检验、单因素方差分析统计数据。 结果:TGF-β可增强人支气管上皮细胞Collagen-Ⅰ、α-SMA及自噬标志物LC3-Ⅰ/Ⅱ的表达，加用自噬抑制剂CQ后Collagen-Ⅰ、α-SMA表达均被到抑制HDM+CQ组嗜酸细胞数低于HDM组[(1.36±0.17)×10 5比(2.54±0.13)×10 5， t＝13.275， P<0.01]；HDM+CQ组中性粒细胞数低于HDM组[(0.45±0.06)×10 5比(0.59±0.08)×10 5， t＝72.582， P<0.05]；HDM组TGF-β高于对照组[(16.82±1.35) ng/ml比(5.90±1.03) ng/ml， t＝11.234， P<0.01]；HDM+CQ组TGF-β低于HDM组[(13.13±1.98) ng/ml比(16.82±1.35) ng/ml， t＝17.035， P<0.05]；HDM+CQ组IL-4低于HDM组[(52.75±5.12) pg/ml比(61.13±4.57) pg/ml， t＝10.790， P<0.05]。Western blot检测肺组织匀浆中Collagen-Ⅰ、α-SMA及LC3-Ⅰ/Ⅱ的表达：HDM组Collagen-Ⅰ、α-SMA及LC3-Ⅱ的表达较对照组均明显增强，给与自噬抑制剂CQ后Collagen-Ⅰ、α-SMA的表达明显减弱。 结论:自噬参与了过敏性哮喘的气道重塑，自噬抑制剂可减轻哮喘模型小鼠中气道炎性细胞的聚集及气道重塑因子的生成。

目的:探讨高氧致新生大鼠慢性肺损伤中PDZ结合基序转录共激活因子(transcriptional co-activator with PDZ-binding motif，TAZ)的表达及其作用。方法:建立新生大鼠高氧致肺损伤模型，实验组和对照组分别吸入氧气(85%)和空气。分别在第1、3、7、14、21天留取肺组织，肺组织切片苏木精-伊红染色观察肺组织病理改变，应用实时荧光定量聚合酶链式反应、Western blot和免疫组织化学技术检测肺组织中TAZ、表面活性蛋白C(surfactant protein C，SPC)、水通道蛋白5(aquaporin-5，AQP5)蛋白的动态表达情况。结果:实验组肺组织逐渐出现肺泡间隔增厚，肺泡棘消失，肺泡腔增大，数目减少，肺泡结构简单化。与对照组相比，实验组肺组织中第1、3天TAZ、SPC、AQP5表达无差异( P>0.05)；第7、14、21天实验组肺组织中TAZ的mRNA和蛋白表达明显降低，SPC的mRNA和蛋白表达明显升高，而AQP5的mRNA和蛋白表达量下降，差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:高氧可致新生大鼠肺泡结构紊乱和肺发育停滞；由SPC、AQP5表达结果说明Ⅰ型肺泡上皮细胞损伤严重，Ⅱ型肺泡上皮细胞虽然数量有所增加但其分化能力明显下降，而TAZ表达量减少可能致使大量的Ⅱ型肺泡上皮细胞失去了分化为Ⅰ型肺泡上皮细胞的功能。

目的:结合生物信息学分析结果研究抗肌营养不良蛋白(DMD)在特发性肺纤维化(IPF)中的作用及分子机制。方法:从GEO数据库下载IPF数据集GSE47460、GSE150910及GSE135893，验证DMD表达，随后下载IPF数据集GSE27957、GSE28042和GSE93606，分析DMD表达水平与IPF患者预后的关系。挑选GSE150910数据集，根据DMD表达水平的中位数，将样本分为DMD高表达组和DMD低表达组，采用R 4.1.3软件对2组基因进行差异基因分析，根据差异基因进行功能富集分析和通路预测。采用随机数字表法，将12只6~8周龄C57BL/6小鼠随机分为对照组和实验组，每组6只。实验组小鼠气管内滴注博来霉素(BLM)构建肺纤维化模型。取小鼠肺组织进行免疫组织化学染色和实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)，检测DMD的蛋白和mRNA表达水平。将A549细胞分为NC-shRNA组、BLM组、NC-shRNA+BLM组和DMD-shRNA+BLM组。应用蛋白质印迹法检测各组衰老相关蛋白p21、凋亡蛋白Bax、MAPK信号通路相关蛋白以及Ⅰ型胶原蛋白的表达，并应用衰老相关β-半乳糖苷酶染色检测各组衰老细胞所占的比例，用流式细胞术检测各组凋亡细胞所占的比例。结果:DMD在GSE47460、GSE150910及GSE135893数据集中均为高表达，并且主要表达于Ⅱ型肺泡上皮细胞内，高表达DMD患者预后更差。GSE150910数据集中，DMD高表达组和DMD低表达组共有147个差异基因，上述基因主要富集在细胞衰老和凋亡的生物学过程，富集的通路得分最高的是MAPK信号通路。RT-qPCR及免疫组织化学染色结果提示DMD在BLM诱导的小鼠肺纤维化组织中为高表达(均 P<0.05)。BLM组A549细胞中的DMD蛋白表达高于NC-shRNA组和DMD-shRNA+BLM组(均 P<0.05)。BLM组A549细胞的p21、Bax、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白以及Ⅰ型胶原蛋白表达水平高于NC-shRNA组和DMD-shRNA+BLM组(均 P<0.05)。衰老相关β-半乳糖苷酶染色结果提示BLM组A549细胞的衰老细胞的比例高于NC-shRNA组和DMD-shRNA+BLM组(均 P<0.05)。流式细胞术结果提示BLM组A549细胞的凋亡细胞的比例高于NC-shRNA组和DMD-shRNA+BLM组(均 P<0.05)。 结论:DMD在BLM诱导的小鼠肺纤维化组织内呈高表达，干扰DMD可以通过MAPK信号通路减轻BLM诱导的A549细胞衰老和凋亡，从而抑制IPF的进展。

平足蛋白（PDPN）是一种小分子Ⅰ型跨膜黏蛋白样糖蛋白，表达于淋巴管内皮细胞、肾小球足细胞、Ⅰ型肺泡上皮细胞和某些肿瘤细胞等细胞表面，参与胚胎发育、免疫应答、炎症和癌症等多种生理和病理过程。C型凝集素样受体2（CLEC2）主要表达于血小板上，作为其唯一配体的PDPN可与CLEC2相互作用，在调控脓毒症的发病机制方面受到广泛关注。本文回顾分析近年来关于PDPN与脓毒症的研究，系统阐述PDPN参与脓毒症的可能机制以及针对PDPN治疗脓毒症的一些潜在措施，为深入研究PDPN和脓毒症的关系以及探索脓毒症的发生机制和临床干预措施提供理论依据。

目的:研究多瘤促活化因子3(PEA3)在高氧诱导的Ⅱ型肺泡上皮细胞(AEC Ⅱ)损伤中的作用及其机制。方法:体外培养AEC Ⅱ，分为高氧组和常氧组。给予高氧或空气后24 h、48 h及72 h，收取各组细胞，选取最佳造模时间为48 h。将AEC Ⅱ分3大组：空白组、阴性对照组(转染空载)、过表达质粒组(转染PEA3)，每大组均分为高氧亚组和常氧亚组。给予高氧或空气后48 h，收取各组细胞。检测活性氧(ROS)、Nod样受体蛋白3(NLRP3)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8、IL-18、表面活性物质蛋白C(SP-C)、水通道蛋白5(AQP5)、PEA3及锰超氧化物歧化酶(MnSOD)等。采用SPSS 20.0统计软件，数据比较采用 t检验和重复测量方差分析。 结果:分组与时间的交互作用对AEC Ⅱ内ROS、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-18、SP-C和AQP5均有显著影响( F＝19.857、20.132、23.133、18.673、28.341、27.333和34.217，均 P<0.05)。在24 h、48 h和72 h，高氧组ROS分别是同时间常氧组的1.78倍、1.94倍和2.26倍( t＝18.649、17.486和19.385，均 P<0.05)；NLRP3、MCP-1均明显增加；IL-1β、IL-6、IL-8和IL-18分别是同时间常氧组的1.33倍、1.69倍和1.65倍，1.26倍、1.56倍和2.12倍，1.13倍、1.47倍和2.34倍，1.46倍、1.72倍和1.95倍(均 P<0.05)；SP-C蛋白表达明显减少，AQP5蛋白表达明显增加；SP-C核酸相对含量分别比同时间常氧组减少了22%、63%和72%，差异均有统计学意义( t＝3.982、16.328和20.259，均 P<0.05)，AQP5核酸相对含量分别是同时间常氧组的1.92倍、5.23倍和7.36倍，差异均有统计学意义( t＝14.631、18.945和19.521，均 P<0.05)。在24 h、48 h和72 h 3个时间点，高氧组ROS、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-18、SP-C和AQP5比较差异均有显著差异( F＝22.343、20.566、23.701、19.222、32.146、40.278和37.107，均 P<0.05)。在PEA3过表达48 h，与高氧阴性对照组相比，高氧过表达质粒组AEC Ⅱ内ROS降低了34%( t＝14.635， P<0.05); NLRP3、MCP-1均减少；IL-1β、IL-6、IL-8和IL-18分别降低了29%、22%、27%和18%( t＝15.895、17.872、18.749和15.274，均 P<0.05)；SP-C增加，AQP5减少；PEA3和MnSOD均明显增加。 结论:PEA3过表达可能通过上调MnSOD蛋白表达，缓解高氧刺激后AEC Ⅱ内ROS增多和多种炎症通路激活，减少AEC Ⅱ向AEC Ⅰ转化，减轻高氧诱导的AEC Ⅱ损伤。

目的:探讨小鼠肺上皮MLE-12细胞（简称MLE-12细胞）受到 60Co γ射线照射后分泌的外泌体介导的T细胞活化。 方法:将MLE-12细胞分为对照组和 60Co γ射线照射组（2、4、6和8 Gy），采用超速离心法分别从其培养液的上清液中提取外泌体，应用透射电子显微镜和纳米颗粒跟踪分析技术确定外泌体的形态结构和数量特征，采用蛋白质印迹法（WB）检测外泌体中溶酶体相关膜蛋白3（CD63）、四次跨膜蛋白28（CD81）、肿瘤易感基因101蛋白（TSG101）、Ⅰ型内质网膜蛋白（Calnexin）的表达，采用流式细胞术（FCM）检测外泌体表面Ⅰ类主要组织相容性复合体（MHC Ⅰ）、Ⅱ类主要组织相容性复合体（MHC Ⅱ）、免疫调节蛋白B7-1（CD80）和免疫调节蛋白B7-2（CD86）的表达水平。将从小鼠脾脏中分离出来的初始T细胞分别与对照组MLE-12细胞（简称NC MLE-12）分泌的外泌体（简称exo/NC-MLE）、6 Gy γ射线照射组的MLE-12细胞（简称IR MLE-12）分泌的外泌体（简称exo/IR-MLE）共培养，采用FCM检测T细胞亚群CD3 +、CD4 +和CD8 +及其活化指标T细胞特定表面糖蛋白CD28和早期活化抗原1（CD69）的变化；将初始T细胞分别与NC MLE-12、IR MLE-12和外泌体抑制剂GW4869处理组的MLE-12细胞共培养，采用FCM检测T细胞亚群CD3 +、CD4 +和CD8 +及其活化指标CD28和CD69的变化。2组间比较采用两独立样本 t检验，多组间比较采用方差分析法，组间两两比较采用Bonferroni调整法。 结果:MLE-12细胞分泌的外泌体显示出典型的一面凹陷的茶托样结构，粒径为30~150 nm；WB结果显示，与MLE-12细胞相比，其外泌体中特异性标志物CD63、CD81和TSG101高表达，而阴性标志物Calnexin低表达。与对照组相比，在6 Gy γ射线照射后不同时间，单个MLE-12细胞分泌的外泌体数量于24、48 h时均增加（ t=5.36、6.66，均 P<0.05）；在不同剂量γ射线照射后24 h，单个MLE-12细胞分泌的外泌体数量增加的现象具有剂量-效应关系，在照射剂量为6、8 Gy时，差异均有统计学意义（ t=4.14、5.67，均 P<0.05）。与exo/NC-MLE相比，exo/IR-MLE中MHCⅠ、MHC Ⅱ、CD81和TSG101的表达水平均升高。FCM结果显示，与exo/NC-MLE相比，exo/IR-MLE中MHC Ⅰ、MHC Ⅱ、CD80和CD86表达水平均升高（ t=4.04~6.47，均 P<0.05）。与exo/NC-MLE相比，在与exo/IR-MLE共培养的T细胞中，CD3 +、CD4 +和CD8 + T细胞均出现增殖现象（ t=3.08~5.88，均 P<0.05），CD28和CD69表达水平均升高（ t=3.02~8.65，均 P<0.05）；外泌体抑制剂GW4869可以抑制IR MLE-12所诱导的T细胞活化（ t=3.64~23.03，均 P<0.05）。 结论:60Co γ射线照射后的MLE-12细胞分泌的外泌体可以通过抗原呈递激活T细胞。

目的:通过观察Ⅱ型肺泡上皮细胞表面活性蛋白C (proSP-C)、Ⅰ型肺上皮细胞标志蛋白(HOPX)、间质细胞标志蛋白波形蛋白(vimentin)及转化生长因子β 1(TGF-β 1)在肺组织表达的动态变化，以确定放射诱导肺纤维化的间质细胞是由Ⅱ型肺上皮细胞异分化所致，并探讨其可能的机制。 方法:给予8周龄C57BL/6j雌性小鼠胸部X线单次照射20 Gy，分别在照射后24 h、1周、1～6个月收集小鼠肺组织，通过对比肺组织(0 Gy)形态学变化，明确肺纤维化形成时间点。另通过免疫荧光染色观察proSP-C、HOPX、vimentin及TGF-β 1表达改变，判断Ⅱ型上皮细胞在不同损伤阶段的动态表型，再用Western blot进行定量分析。 结果:单次20 Gy照后3个月肺组织发生局部纤维化。Ⅱ型细胞能共表达proSP-C/HOPX和proSP-C/vimentin；而Western blot显示这些蛋白和TGF-β 1的表达量随肺损伤而发生改变。 结论:推测肺Ⅱ型上皮细胞在X线照射后因TGF-β 1升高异分化为间质样细胞，这可能是放射性肺纤维化的主要诱因。

目的:结合生物信息学分析结果研究头蛋白基因(NOG)在博来霉素诱导的A549细胞衰老模型中的作用及分子机制。方法:从GEO数据库下载IPF数据集GSE28042和GSE135893。在GSE28042中，运用R软件进行衰老相关基因的差异表达分析，通过单因素Cox回归初步筛选出与预后相关的基因，利用随机森林和LASSO回归2种算法，筛选出关键基因。采用Kaplan-Meier法绘制NOG高、低表达组患者的生存曲线。应用统一流形逼近与投影算法对GSE135893数据集中的单细胞测序数据降维，分析NOG在Ⅱ型肺泡上皮细胞的差异表达。采用随机数字表法将12只6~8周龄的C57BL/6小鼠随机分为对照组和实验组，每组6只，实验组小鼠气管内滴注博来霉素构建肺纤维化模型，取小鼠肺组织进行免疫组织化学染色和实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测NOG的蛋白和mRNA表达水平。将A549细胞分为空白对照组、博来霉素组(5 mg/L)、阴性对照组(博来霉素5 mg/L+空载体慢病毒)以及NOG过表达组(博来霉素5 mg/L+NOG过表达慢病毒)，应用蛋白质印迹法检测各组衰老相关蛋白P16、P21，Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白以及Ⅰα型胶原蛋白和α-平滑肌肌动蛋白的表达，并应用SA-β-Gal染色检测各组细胞衰老细胞所占的比例。结果:GSE28042数据集中筛选出95个差异表达的衰老相关基因，其中35个上调，60个下调。结合单因素Cox回归、LASSO回归和随机森林算法，筛选出关键衰老相关基因NOG。高表达NOG的IPF患者总体生存时间较低表达NOG的IPF患者更长( P<0.05)。单细胞测序显示NOG在IPF患者Ⅱ型肺泡上皮细胞的表达量低于正常肺组织( P<0.05)。RT-qPCR及免疫组织化学染色结果提示NOG在博来霉素诱导的小鼠肺纤维化组织中为低表达( P值均<0.05)。博来霉素组A549细胞中的NOG蛋白表达低于空白对照组和NOG过表达组( P值均<0.05)。博来霉素组A549细胞的衰老相关蛋白、Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白以及Ⅰα型胶原蛋白和α-平滑肌肌动蛋白表达水平高于空白对照组和NOG过表达组( P值均<0.05)。SA-β-Gal染色结果提示博来霉素组A549细胞株中衰老细胞的比例明显高于空白对照组和NOG过表达组( P值均<0.05)。 结论:NOG在博来霉素诱导的小鼠肺纤维化组织内呈低表达，过表达NOG可以通过Wnt/β-catenin信号通路减轻博来霉素诱导的A549细胞衰老，从而抑制肺纤维化的进展。

肺泡巨噬细胞主要存在于肺泡腔内，其与肺泡Ⅰ型和Ⅱ型上皮细胞紧密接触，是肺脏固有免疫反应的重要组成成分，参与肺脏固有免疫稳态的维持。肺泡巨噬细胞具有较强的可塑性和异质性，可根据周围微环境的改变，在多种细胞因子的介导下极化为M1、M2亚群，不同亚群之间可以相互转化，并赋予特定的功能和表型。革兰阴性菌是医院获得性肺炎的重要致病菌，其致病性强、易耐药和定植等特性，为临床疾病的治疗带来了巨大挑战，严重威胁人类健康。当发生革兰阴性菌感染时，肺泡巨噬细胞在杀灭病原体，维持肺脏免疫稳态中发挥了重要作用。本文就肺泡巨噬细胞的起源、极化以及其在革兰阴性菌感染过程中发挥的作用进行综述，为肺泡巨噬细胞的深入研究提供参考。

目的:通过动物实验探讨机械通气（MV）诱导内质网应激（ERS）促进机械通气相关性肺纤维化（MVPF）的机制，明确血管紧张素受体1（AT1R）通路在该过程中的重要作用。方法:将C57BL/6小鼠按随机数字表法分为对照组（Sham组）、MV组、AT1R敲减组（AT1R-shRNA组）、AT1R敲减+MV组（MV+AT1R-shRNA组），每组6只。MV组和MV+AT1R-shRNA组小鼠气管插管后MV 2 h（参数设置：呼吸频率70次/min，潮气量20 mL/kg，吸入氧浓度0.21）以建立MVPF动物模型；Sham组和AT1R-shRNA组小鼠气管插管后自主呼吸。AT1R-shRNA组和MV+AT1R-shRNA组小鼠于制模前1个月经气管注射AT1R-shRNA-腺相关病毒悬液以抑制肺组织内AT1R基因表达。分别用免疫荧光和蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测肺组织AT1R、ERS标志性蛋白免疫球蛋白重链结合蛋白（BIP）、蛋白质二硫键异构酶（PDI），以及纤维化标志性蛋白Ⅰ型胶原蛋白（COL1A1）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达情况；苏木素-伊红（HE）染色评估肺损伤情况，Masson染色评估肺纤维化程度。结果:与Sham组相比，MV组小鼠肺纤维化程度和肺损伤情况显著，肺组织AT1R、BIP、PDI、COL1A1、α-SMA蛋白表达水平明显升高（AT1R/β-actin：1.40±0.02比1，BIP/β-actin：2.79±0.07比1，PDI/β-actin：2.07±0.02比1，COL1A1/α-Tubulin：2.60±0.15比1，α-SMA/α-Tubulin：2.80±0.25比1，均 P<0.01），肺组织内E-cad +/AT1R +和E-cad +/BIP +细胞数量增加，COL1A1和α-SMA荧光强度增强。与MV组相比，MV+AT1R-shRNA组小鼠肺纤维化程度和肺损伤情况显著缓解，肺组织AT1R、BIP、PDI、COL1A1、α-SMA蛋白表达水平明显下降（AT1R/β-actin：0.53±0.03比1.40±0.02，BIP/β-actin：1.73±0.15比2.79±0.07，PDI/β-actin：1.04±0.07比2.07±0.02，COL1A1/α-Tubulin：1.29±0.11比2.60±0.15，α-SMA/α-Tubulin：1.27±0.10比2.80±0.25，均 P<0.01），肺组织内E-cad +/AT1R +和E-cad +/BIP +细胞数量减少，COL1A1和α-SMA荧光强度减低。AT1R-shRNA组各指标与Sham组比较差异均无统计学意义。 结论:MV可上调肺泡上皮细胞AT1R表达，活化AT1R通路而诱导ERS，促进MVPF进程。