目的:探讨中国汉族人群腓骨肌萎缩症（CMT）致病基因的分布特点，并与2013年北京大学第三医院总结的CMT基因分布数据进行比较，分析8年来CMT基因分布比例的异同。方法:收集2007年1月至2021年3月于北京大学第三医院和中日友好医院诊治的CMT及其相关疾病家系520个，采用多重连接探针扩增技术检测外周髓鞘蛋白22（PMP22）基因重复和缺失突变后，采用二代基因测序包或全外显子组测序技术对上述家系的先证者进行基因检测，对阳性结果采用Sanger一代测序的方法验证。结果:在520个家系中，确定了336个CMT家系的基因诊断，确诊比例从2013年的48.6%（51/105）增加到2021年的64.6%（336/520；χ 2=9.54， P=0.003），其中PMP22基因重复占26.7%（139/520）、缝隙连接蛋白B1（GJB1）基因突变占8.8%（46/520）、线粒体融合蛋白2（MFN2）基因突变占5.0%（26/520）、髓鞘蛋白零（MPZ）基因突变占2.3%（12/520）、PMP22基因点突变占2.1%（11/520）、热休克蛋白B1基因突变占1.9%（10/520）、神经节苷脂诱导分化相关蛋白1（GDAP1）基因突变占1.9%（10/520）、SH3结构域和四三肽重复序列2（SH3TC2）基因突变占1.5%（8/520）、免疫球蛋白mu-DNA结合蛋白2（IGHMBP2）基因突变占1.3%（7/520）、MORC家族CW型锌指2（MORC2）基因突变占1.2%（6/520）、山梨醇脱氢酶（SORD）基因突变占1.0%（5/520），其余非常少见的基因突变家系有16个（16/520，3.1%），未确诊家系184个（184/520，35.4%）。 结论:与2013年相比，影响CMT最常见的3种基因仍然为PMP22、GJB1和MFN2基因，但MPZ基因突变患者的比例与其他基因如SH3TC2、GDAP1基因的差距越来越小。近年新发现的CMT致病基因如MORC2及SORD基因所占比例与IGHMBP2基因接近，应予以重视。二代测序技术提高了CMT的诊断效率，尤其是对于常染色体隐性突变导致的CMT诊断价值很大。

目的:评价电针对肝部分切除术后小鼠肝再生的影响及Notch信号通路在其中的作用。方法:SPF级健康雄性C57BL/6小鼠36只，6周龄，体质量20～22 g。采用随机数字表法分为6组( n＝6)：假手术组(S组)、肝部分切除术组(PH组)、非穴位电针＋肝部分切除术组(NPH组)、肝部分切除术＋Fli-06组(PH＋F组)、穴位电针＋肝部分切除术组(EPH组)和穴位电针＋肝部分切除术＋Fli-06组(EPH＋F组)。除S组以外，其余组小鼠均接受肝部分切除术；PH＋F组和EPH＋F组术前2 d开始腹腔注射Fli-06 4.8 mg/kg，1次/d，直至小鼠处死，其余组注射等体积0.9%氯化钠溶液；EPH组术后即刻开始电针刺激，选择双侧足三里穴，连续波，频率2 Hz，强度1 mA，以后肢出现轻微颤动为度，每次15 min，1次/d，连续3 d。肝部分切除术后第2天时麻醉小鼠，眼球取血样，采用全自动生化分析仪测定血清ALT和AST浓度，ELISA法测定表皮生长因子(EGF)和肝细胞生长因子(HGF)浓度。随后处死小鼠取肝组织，计算肝质量/体质量比，免疫组织化学染色法检测肝脏Ki-67表达；Western blot法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、G1/S-物异性同期蛋白-D1(CCND1)、Notch胞内结构域(NICD)和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达；RT-PCR法检测Notch1、锯齿状典型Notch配体1(Jagged1)和Hes家族bHLH转录因子1(Hes1) mRNA表达。 结果:与S组比较，PH组血清ALT、AST、EGF和HGF浓度升高，肝脏Notch1、Jagged1、Hes1 mRNA表达和Ki-67、PCNA、CCND1、NICD表达上调( P<0.05或0.01)；与PH组比较，EPH组肝质量/体质量比、血清EGF和HGF浓度升高，血清ALT和AST浓度降低，肝脏Notch1、Jagged1、Hes1 mRNA表达和Ki-67、PCNA、CCND1、NICD、HIF-1α表达上调，PH＋F组肝质量/体质量比、血清HGF浓度降低，血清ALT和AST浓度升高，肝脏Jagged1、Hes1 mRNA和Ki-67、PCNA、CCND1、NICD、HIF-1α表达下调( P<0.05或0.01)；与EPH组比较，EPH＋F组肝质量/体质量比、血清EGF和HGF浓度降低，血清ALT和AST浓度升高，肝脏Notch1、Jagged1、Hes1 mRNA和Ki-67、PCNA、CCND1、NICD和HIF-1α表达下调( P<0.05或0.01)。 结论:电针足三里穴促进肝部分切除术后小鼠肝再生，其机制可能与激活Notch信号通路有关。

目的 探讨溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)活动期患者血清三结构域家族蛋白22(tripartite motif protein 22,TRIM22)、Kruppel样转录因子2(Kruppel-like factor 2,KLF2)水平与病情及临床结局的关系.方法 选取上海健康医学院附属崇明医院2020年1月～2023年1月收治的97例溃疡性结肠炎活动期患者为活动期组、56例缓解期患者(缓解期组)和80例健康体检者(对照组)为对照.活动期患者根据病情分为轻度组(n=46)、中度组(n=31)和重度组(n=20),根据治疗后临床结局分为好转组(n=68)和未好转组(n=29).采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清TRIM22和KLF2水平,Pearson积矩相关分析其与改良Mayo评分相关性,多因素Logistic回归分析溃疡性结肠炎活动期患者未好转的影响因素,绘制ROC曲线评估两指标对未好转的预测价值.结果 对照组、缓解期组和活动期组血清 TRIM22(37.16±9.22pg/ml,51.05±10.83 pg/ml,64.29±13.51 pg/ml)依次升高,血清 KLF2(45.27±7.98 pg/ml,36.91±7.34 pg/ml,27.03±6.25 pg/ml)依次降低,差异具有统计学意义(F=121.076,143.946,均 P＜0.05).轻度组、中度组和重度组血清 TRIM22(56.07±11.18 pg/ml,67.29±13.04 pg/ml,78.56±13.69 pg/ml)依次升高,血清 KLF2(32.07±4.95 pg/ml,25.86±4.32 pg/ml,17.25±4.09 pg/ml)依次降低,差异具有统计学意义(F=24.541,74.141,均P＜0.05).溃疡性结肠炎活动期患者血清TRIM22与改良Mayo评分呈正相关性(r=0.692,P＜0.05),血清KLF2与改良Mayo评分呈负相关性(r=-0.716,P＜0.05),血清TRIM22与KLF2呈负相关性(r=-0.659,P＜0.05).与轻度患者比较,中度和重度患者未好转风险增加(OR=1.232,2.298,均P＜0.05),血清TRIM22水平升高是未好转的危险因素(OR=1.835,P＜0.05),血清KLF2水平升高是保护因素(OR=0.731,P＜0.05).血清TRIM22,KLF2和联合检测对未好转有预测价值,AUC分别为0.806,0.803和0.907,指标联合检测预测价值大于单独指标检测(Z=2.049,2.053,均P＜0.05).结论 溃疡性结肠炎活动期患者血清TRIM22水平升高,KLF2水平下降,并与病情严重程度及临床结局有关,指标联合检测可作为临床早期预测未好转的生化标志物.

目的 探讨人乳头瘤病毒LI(HPVL1)蛋白、三结构域家族蛋白22(TRIM22)、人表皮生长因子受体-2(HER-2)联合检测在人乳头瘤病毒(HPV)阳性宫颈上皮内瘤变(CIN)中的早期诊断价值.方法 回顾性选取2021年1月至2023年6月承德医学院附属医院就诊的162例薄层液基细胞学(TCT)检查异常且HPV阳性的CIN患者为研究组,另选取同期经组织病理学诊断为正常宫颈组织的138名对象为对照组.免疫组织化学法检测宫颈组织中HPVL1蛋白、TRIM22、HER-2表达.比较对照组、研究组组织中HPVL1蛋白、TRIM22、HER-2表达,并比较不同分级CIN患者HPVL1蛋白、TRIM22、HER-2表达.多因素Logistic回归模型分析CIN发生的影响因素;受试者操作特征(ROC)曲线分析HPVL1蛋白、TRIM22、HER-2表达对CIN的早期诊断价值.结果 研究组组织中HPVL1蛋白及TRIM22蛋白阳性率分别为34.57％、32.72％,均显著低于对照组(74.64％、71.01％),HER-2阳性率为60.49％,显著高于对照组(10.87％),差异均有统计学意义(P＜0.05).CIN Ⅰ级、CIN Ⅱ级和CIN Ⅲ级HPVL1蛋白和TRIM22阳性率呈下降趋势,HER-2阳性率呈上升趋势(P＜0.05).多因素Logistic回归分析结果显示,宫颈组织中HPVL1蛋白、TRIM22及HER-2表达均为CIN的影响因素(OR=5.110、5.231、9.652,P＜0.05).ROC曲线结果显示,HPVL1蛋白表达诊断CIN的曲线下面积(AUC)为0.700,敏感度为65.43％;TRIM22表达诊断CIN的AUC为0.691,敏感度为67.28％;HER-2表达诊断CIN的AUC为0.748,敏感度为60.49％.三者联合诊断CIN的AUC为0.814,显著高于单独诊断的AUC(P＜0.05).结论 宫颈组织中HPVL1蛋白、TRIM22及HER-2表达影响CIN的发生、发展,三者联合对CIN具有较高的诊断价值.

[目的]三七素(β-N-草酰-L-α,β-二氨基丙酸,β-ODAP)是山黧豆、三七等物种中的神经活性物质,其生物合成与草酰辅酶A密切相关.研究基于全基因组鉴定山黧豆草酰辅酶A合成酶的编码基因,为β-ODAP生物合成的调控研究奠定基础.[方法]用AMP结合结构域隐马尔科夫模型在山黧豆基因组中鉴定酰基激活酶超家族(acyl-activating enzyme superfamily,AAE)基因,在此基础上,克隆山黧豆草酰辅酶A合成酶基因LsAAE3,用多序列比对、原核表达及酶活检测等方法分析LsAAE3基因功能.[结果]山黧豆中至少存在22 条 AAE家族基因;系统发育分析表明:LsAAE3与拟南芥AtAAE3等聚为一支,隶属于酰基辅酶A合成酶家族.基因克隆及序列分析表明:LsAAE3基因cDNA全长为1 566 bp;LsAAE3和AtAAE3的保守结构域类似,均含有AMP结合位点、CoA结合位点及AAE保守结构域.SDS-PAGE检测表明所获融合蛋白条带单一,大小在56 kD左右;用His标签抗体进行Western blot分析发现,诱导后和纯化的融合蛋白均能检测到特征条带,说明所获融合蛋白为LsAAE3.体外酶活检测表明:LsAAE3具有草酰辅酶A合成酶活性,其活性发挥依赖于ATP、Mg2+.[结论]研究在全基因组水平鉴定山黧豆AAE超家族基因,并验证了 LsAAE3具有草酰辅酶A合成酶活性,为进一步分析山黧豆LsAAE3在β-ODAP生物合成过程中的功能奠定基础.

1 前蛋白转化酶枯草溶菌素 9(PCSK9)概述PCSK9 既往又被称为神经细胞凋亡调节转化酶(neural apoptosis-regulated convertase-1,NARC-1),于 2003 年 由Seidah 等[1]首次发现,为蛋白转化酶(proprotein convertase, PC)家族的第 9 个成员.人类 PCSK9 基因定位于 1p32,长度约 22 kb,包含 12 个外显子及 1 个内含子,编码由 692 个氨基酸组成的糖蛋白,该糖蛋白含有信号肽、前结构域、枯草杆菌蛋白酶样催化结构域及可变羧基末端结构域,包含一个既往未在枯草杆菌蛋白酶样丝氨酸蛋白酶中发现的折叠方式[2].PCSK9 以可溶性酶原形式合成,在内质网内发生分子内自身催化反应,在剪切位点 SSVFAQ152↓52 进行自我剪切,形成稳定的由大小约 14 kDa 的前结构域及大小约为 57 kDa 的成熟片段两部分组成的异质二聚体,后运输至高尔基体经乙酰化等修饰后分泌入血液中[3-4].与前蛋白转化酶家族中其他成员不同,PCSK9 在成熟过程中无需二次剪切即可获得蛋白酶活性[5].Naureckiene 等[6]发现,PCSK9含有由 Asp186、His226、Ser386 组成的催化三基团(catalytic triad),而影响 Ser386 的突变将导致 PCSK9 因无法完成自我剪切过程而滞留于内质网内.McNutt 等[3]进一步研究表明,自我剪切后形成的前结构域片段在 PCSK9 分泌过程中起着重要作用,可能发挥了分子伴侣的功能.PCSK9 在不同脏器中表达水平不同,对不同组织特异性 PCSK9 基因敲除小鼠的研究发现,循环中 PCSK9 几乎均由肝分泌,在肾、小肠及小脑中也存在少量表达[7].PCSK9 具有血脂调节功能.现有大量研究表明,PCSK9 可直接与低密度脂蛋白受体(low density lipoprotein receptor,LDLR)结合,影响LDLR 的再循环,减少肝细胞表面 LDLR 数量,从而间接升高循环中低密度脂蛋白胆固醇(low density cholesterol, LDL-C)浓度[8-9].

一、D1R和D2R的结构DR属于G蛋白偶联受体,由7个跨膜区域组成,DR家族共有5个成员,D1R-D5R.在中枢神经系统中,以D1R和D2R分布最为广泛.D1R基因位于人类5号染色体q35,D2R位于11号染色体q22-23.D2R分为短型(dopamine receptor D2 short isoform,D2S)和长型(dopamine receptor D2 long isoform,D2L),D2L比D2S在第三胞内环处多29个氨基酸序列.D1R和D2R羧基端含有磷酸化和棕榈酰化位点,参与激动剂依赖的受体去敏感化过程及第四胞内环的形成.

目的:构建家蝇C型凝集素基因(Mdctl)原核表达体系,对Mdctl基因及编码蛋白进行生物信息学分析.方法:采用生物信息学方法,分析Mdctl基因及编码蛋白;将构建的pET28a(+)/Mdctl重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21-DE3中,以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白并通过SDS-PAGE对表达产物进行分析;Ni-IDA法纯化重组蛋白,Western-Blot对其鉴定.结果:生物信息学分析显示,Mdctl基因开放阅读框全长333 bp,共编码110个氨基酸,理论分子量为13.13 kDa,等电点为4.49,信号肽位于1～22位氨基酸之间;Mdctl蛋白中存在Clect结构域,属于C型凝集素超家族;Mdctl重组蛋白在大肠杆菌BL21-DE3中主要以包涵体形式表达,重组蛋白的相对分子质量与Mdctl蛋白两端融合6×His标签后的总分子量相一致.结论:成功构建Mdctl原核表达系统,并获得重组蛋白.

目的 分析循环血浆中微RNA(miR)-150-5p表达与原发性高血压的关系.方法 选取2019年5—11月在盐城市第一人民医院住院的80例原发性高血压[收缩压≥140 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)和(或)舒张压≥90 mmHg]患者作为高血压组,选取同期31例非高血压(收缩压<140 mmHg和舒张压<90 mmHg)患者作为非高血压组.应用问卷收集两组患者的一般资料,包括性别、年龄、体重、体质指数(BMI)、空腹血糖、血红蛋白、总蛋白、白蛋白、总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、血尿酸等;采用实时定量聚合酶链反应测定并比较两组患者的血浆miR-150-5p相对表达水平,采用Pearson积矩相关分析miR-150-5p相对表达水平与血压的相关性,并采用生物信息学方法预测miR-150-5p作用的靶基因及其可能参与调节的细胞信号通路.结果 高血压组的体重、BMI、收缩压、舒张压均高于非高血压组[(70±11)kg比(59±11)kg,(25±4)kg/m2比(22±3)kg/m2,(158.0±16.5)mmHg比(121.8±11.9)mmHg,(91.0±2.2)mmHg比(74.7±8.4)mmHg,均P<0.01].高血压组血浆miR-150-5p的相对表达水平低于非高血压组[2.33(1.96,3.29)×104 AU比5.46(3.98,7.01)×104 AU](Z=-6.080,P<0.001);受试者血浆miR-150-5p的相对表达水平与其收缩压、舒张压均呈负相关(r=-0.521、r=-0.503,均P<0.01);miR-150-5p结合靶基因转录因子特异性蛋白1、锌指E盒同源结合蛋白1、基质金属蛋白酶14、蛋白激酶Cα、VPS53、程序性细胞死亡因子4、EPH受体B2、核受体亚家族2 F组成员2、高尔基体SNAP受体复合物成员1、缺氧诱导的脂滴相关蛋白、锌指和含BTB结构域的蛋白7A、脂联素受体2、Cbl原癌基因、肿瘤蛋白p53、E1A结合蛋白EP300、早期生长反应蛋白2和转录因子原癌基因MYB,参与血压调节.结论 原发性高血压患者循环血浆中的miR-150-5p表达水平降低,且其表达水平与血压呈负相关,生物信息学分析发现miR-150-5p可与多种靶基因结合,参与高血压的发生发展.

[目的]探讨三结构域家族蛋白22(tripartite motif protein 22,TRIM22)在宫颈癌中的表达及其与临床病理学特征的关系,并分析TRIM22对高危型人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)阳性宫颈癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响.[方法]收集2017年8月至2018年9月41例手术切除或活检的宫颈癌组织和18例正常子宫颈组织,分别提取总RNA和总蛋白.实时定量PCR分析TRIM22 mRNA表达,Western blot分析TRIM22蛋白水平,并分析TRIM22 mRNA表达变化与患者临床病理学特征的关系.以HPV16阳性宫颈癌细胞系CaSki和HPV18阳性宫颈癌细胞系HeLa为研究对象,用TRIM22表达质粒(pUNO1-hTRIM22a)和对照表达质粒(pUNO1)稳定转染CaSki细胞和HeLa细胞,以未转染细胞为对照组.实时定量PCR和Western blot检测转染后细胞中TRIM22 mRNA表达和蛋白水平.采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞增殖;Transwell细胞侵袭实验检测细胞侵袭能力;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;Western blot检测抗磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)和磷酸化AKT (phosphorylated AKT,p-AKT)蛋白表达.[结果]TRIM22在宫颈癌组织中mRNA表达(0.99±0.16 vs 4.39±1.41,t=15.40,P＜0.001)和蛋白水平(0.30±0.12 vs 1.32±0.27,t=19.97,P＜0.001)均明显低于正常子宫颈组织,TRIM22在高危型HPV阳性宫颈癌组织中mRNA表达(0.94±0.14 vs 1.17±0.12,t=4.21,P＜0.001)和蛋白水平(0.27±0.08 vs 0.43±0.18,t=-3.86,P＜O.001)均明显低于高危型HPV阴性宫颈癌组织.TRIM22 mRNA表达与淋巴结转移明显相关(1.04±0.16 vs 0.89±0.13,t=-3.15,P=0.003),与肿瘤大小、临床分期无明显相关(P＞0.05).pUNO1转染CaSki细胞和HeLa细胞与未转染细胞在TRIM22 mRNA和蛋白水平、细胞增殖、侵袭数、细胞周期、凋亡率、PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达量的差异均无统计学意义(P＞0.05),pUNO1-hTRIM22a转染后CaSki细胞和HeLa细胞中TRIM22 mRNA和蛋白水平显著性高于pUNO1组和对照组(P＜0.001),细胞增殖、侵袭数量(CaSki细胞:31.00±5.30 vs 135.30±17.24 vs 120.40±22.95,F=56.01,P＜0.001;HeLa细胞:27.20±9.04 vs 112.80±12.03 vs 117.00±18.56,F=67.45,P＜0.001)、处于G2～M期的细胞比例(CaSki细胞:2.04％±0.36％ vs 12.72％±1.98％ vs 12.40％±1.62％,F=57.82,P＜0.001;HeLa细胞:3.07％±1.08％ vs 8.26％±2.98％ vs 10.92％±3.56％,F=22.82,P＜0.001)、PI3K、p-AKT蛋白表达量均显著性低于pUNO1转染细胞和未转染细胞,而凋亡率显著性高于pUNO1组和对照组(CaSki细胞:11.90％±2.78％ vs 5.27％ ±1.78％ vs 6.64％±1.19％,F=16.78,P＜0.001:HeLa细胞:18.79％±4.64％ vs 6.78％±1.03％ vs 5.23％±1.09％,F=27.91,P＜0.001).[结论]TRIM22在宫颈癌中的表达明显减低,其表达水平与高危型HPV感染、转移恶化密切相关.上调TRIM22表达可明显减弱高危型HPV阳性宫颈癌细胞的增殖、侵袭能力,促进宫颈癌细胞凋亡.