目的:观察风药（葛根、石菖蒲）与三七总皂苷配伍后对脑缺血再灌注大鼠的神经保护作用，阐明“风药增效”的作用机制。方法:将140只雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、三七总皂苷组、葛根组、石菖蒲组、葛根+三七总皂苷组、石菖蒲+三七总皂苷组，每组20只。除假手术组外，其余各组采用改良Longa线栓法建立脑缺血再灌注模型。各组给予相应药物干预7 d后，采用Zea-longa评分法进行神经功能评分，TTC染色法测定脑梗死体积，伊文思蓝（EB）染色检测缺血侧脑组织血脑屏障（BBB）通透性，透射电子显微镜观察BBB超微结构，免疫组化染色检测脑组织密封蛋白（Claudin 5）表达，Western blot检测闭锁小带蛋白1（ZO-1）、主要促进因子超家族成员2a（Mfsd2a）、闭合蛋白（Occludin）和P糖蛋白（P-gp）、单羧酸转运蛋白1（MCT1）、乳腺癌抗性蛋白（BCRP）表达。结果:与模型组比较，各给药组大鼠神经功能评分降低（ P<0.05），脑梗死率降低（ P<0.05），脑组织EB含量下降（ P<0.05），脑组织Claudin 5、ZO-1、Mfsd2a、Occludin蛋白表达升高（ P<0.05），P-gp、BCRP、MCT1蛋白表达降低（ P<0.05），且葛根+三七总皂苷组、石菖蒲+三七总皂苷组Claudin 5、ZO-1、Mfsd2a、Occludin蛋白表达高于各单独用药组（ P<0.05），MCT1蛋白表达低于各单独给药组（ P<0.05）；葛根+三七总皂苷组ZO-1蛋白表达水平高于单独给药组（ P<0.05）；石菖蒲+三七总皂苷组P-gp蛋白表达低于三七总皂苷组、石菖蒲组及葛根+三七总皂苷组（ P<0.05）。 结论:风药（葛根、石菖蒲）可增强三七总皂苷对脑缺血再灌注大鼠的神经保护作用，其机制可能与保护BBB结构完整性、维持中枢屏障特性，同时调节物质转运蛋白、提高药物脑内含量有关。

目的:探讨主要促进因子超家族成员2a(MFSD2A)在肝细胞癌组织中的表达及其与肝细胞癌临床病理指标之间的相关性,评估其对肝癌患者预后的预测价值.方法:从癌症基因组图谱(TCGA)数据库下载424例肝细胞癌和50例癌旁转录组数据以及相关临床信息.利用生物信息平台,在泛癌组织中比较MFSD2A的表达情况.使用Kaplan-Meier Plotter数据库,探索MFSD2A表达与肝癌患者预后的相关性.利用STRING数据库构建MFSD2A蛋白相互作用网络,使用GEPIA2数据库检索相关基因,进一步进行通路富集分析,探索MFSD2A的分子功能.采用免疫组织化学验证肝细胞癌肿瘤组织中MFSD2A蛋白的表达情况.结果:TCGA数据分析显示,MFSD2A基因在不同肿瘤和癌旁组织中表达水平普遍存在差异,与癌旁组织相比,在肝细胞癌组织中低表达(P<0.01).MFSD2A在>60岁组(P=0.014)、病理分级G1组(P<0.01)、血液中AFP含量≤400 ng/mL组(P<0.01)表达量升高.MFSD2A高表达组肿瘤患者的总生存期(P=0.008)、无进展生存期(P=0.008)和无复发生存期(P=0.016)均显著延长.MFSD2A及其相互作用蛋白主要涉及脂质代谢相关的PPAR信号通路.免疫组织化学验证结果显示,相对于MFSD2A低表达组患者,MFSD2A高表达组患者预后更好(P=0.016),且随着患者MFSD2A评分升高,血清AFP水平下降.结论:MFSD2A在肝细胞癌组织中低表达,且与患者不良预后相关.MFSD2A可能通过调控肝脏脂质代谢抑制肝细胞癌的进展,提示其可能是肝细胞癌的潜在治疗靶点.

主要促进因子超家族结构域蛋白2a(MFSD2A)在神经系统疾病和脑血管疾病中的作用近年来日益受到关注,它被认为是突破血脑屏障的关键蛋白.MFSD2A能维持和调节血脑屏障(BBB)的完整性和通透性,对出现BBB损伤症状的多种疾病具有治疗效果,能转运二十二碳六烯酸入脑,预防和治疗阿尔茨海默病、常染色体隐性遗传原发性小头畸形等疾病;也能作为载体蛋白或调节BBB囊泡转运输送药物透过BBB治疗其他脑病.本文综述了目前MFSD2A在阿尔茨海默病、脑卒中、小头畸形等脑病中作用的研究现状,旨在为MFSD2A的基础研究和临床应用提供科学参考.

唾液酸黏附素(Siglec-1或CD169)是表达于组织的巨噬细胞上免疫球蛋白超家族类黏附分子.在炎症反应中,Siglec-1可调节MIP-1α/β、MCP-1、MIP-2等细胞因子的分泌,促进炎症反应的发生;在病毒感染过程中,Siglec-1可通过介导病原体与巨噬细胞的的结合,促进病毒感染和吞噬;在对免疫的调节过程中,Siglec-1既可也以抑制IFN-α的过量表达,抑制固有免疫,也可抑制DC细胞活性,降低适应性免疫.本文主要阐述了Siglec-1在病原体感染、炎症反应和免疫调节中最新研究进展.

目的为开发新型抗痤疮药物,构建具有杀菌和促进愈合的人防御素2和酸性成纤维因子1融合蛋白.方法 以人肝癌细胞HepG2 cDNA为模板,分别扩增hBD-2基因和haFGF-1基因.采用SOE-PCR方法构建hBD2-haFGF1融合基因.构建hBD2-haFGF1/pET21b原核表达载体,并转化入E.coli BL(21)进行诱导表达.通过生物信息学方法对融合蛋白的理化性质进行预测和分析.结果 RT-PCR分别获得123 bp的hBD-2基因和420 bp的haFGF-1基因,SOE-PCR获得了588 bp的hBD2-haFGF1融合基因,成功构建原核表达载体hBD2-haFGF1/pET21b,经过IPTG诱导,hBD2-haFGF1融合蛋白可在E.coli BL(21)中有效表达,相对分子量为23 800.生物信息学显示hBD2-haFGF1蛋白适合在大肠杆菌中表达,是一个不稳定的亲水性蛋白,具有较好的热稳定性.hBD2-haFGF1融合蛋白主要由延伸链、β转角和随机卷曲组成,结构中保留了β防御素保守结构域和FGF超家族保守结构域.结论 构建了hBD2-haFGF1融合基因,并在体外诱导表达了hBD2-haFGF1融合蛋白,通过生物信息学分析对融合蛋白的理化性质进行了预测和分析,上述研究为进一步的纯化和活性分析奠定了研究基础.

目的 对树鼩主要促进因子超家族成员2a(Mfsd2a)基因进行克隆、测序和生物信息学分析,并定量检测其组织表达量.方法 从树鼩脑和脊髓中提取总RNA,RT-PCR扩增Mfsd2a基因片段,测序后利用生物信息学软件对其序列特征、系统进化、编码蛋白的结构和理化性质进行分析;以树鼩β-actin为内参,qPCR检测树鼩Mfsd2a基因在不同组织中的表达情况.结果 克隆获得Mfsd2a基因片段全长1796 bp,与NCBI上公布的树鼩Mfsd2a基因预测序列高度一致,比对显示其与MFS转运蛋白超家族同源.其编码区全长1464 bp,编码488个氨基酸.预测结果显示树鼩Mfsd2a蛋白具有明显的疏水性区域,无信号肽,二级结构元件由α螺旋、β折叠、无规卷曲和延伸链组成.OCTOPUS分析发现Mfsd2a存在12个跨膜结构,修饰结构预测发现Mfsd2a蛋白存在两处N糖基化位点,亚细胞定位发现其可能主要分布于细胞膜和内质网.qPCR检测树鼩不同组织的Mfsd2a表达,结果显示各组织均有表达,在大脑、脊髓中的表达水平相对较高.结论 成功克隆了树鼩Mfsd2a基因,建立了该基因表达定量检测方法,为今后利用树鼩神经系统疾病模型深入开展Mfsd2a基因功能研究提供了理论和技术支持.

肾脏纤维化是慢性肾脏病的病理基础,多种因素可加剧其进展为终末期肾衰竭.TGF-β超家族成员中的TGF-β1在所有类型肾脏细胞中广泛表达,且是发挥抗纤维化作用的主要因子.Smads蛋白是Mad蛋白和秀丽隐杆线虫小蛋白的组合,根据其在TGF-β1/Smads信号通路中的功能不同,分为受体调节型Smads(Smad1、2、3、5、8)、共同通路型Smad(Smad4)以及抑制性Smads(Smad6、7),其可作为一种细胞内信使,将细胞外信号转导至细胞核,进而激活下游基因转录.TGF-β是通过激活细胞膜上具有丝氨酸-苏氨酸激酶活性的跨膜受体激活Smads蛋白发挥信号传导作用.TGF-β1/Smads信号通路在肾脏纤维化发生、发展过程中发挥至关重要作用.巨噬细胞、同源结构域相互作用蛋白激酶2及肾素-血管紧张素系统均通过激活TGF-β信号通路的上游因子参与肾脏纤维化的发生、发展;通过激活下游因子Smad3以刺激单核细胞向成纤维细胞的转变,进而促进肾脏纤维化.Smads蛋白中的Smad3、Smad4升高会导致肾脏纤维化,Smad2可通过竞争性抑制Smad3磷酸化、核转位、转录活性及其与靶基因的结合而起到抑制Smad3介导纤维化的作用,Smad7在肾脏纤维化中发挥负性调节作用.miRNAs中的miRNA 146A、miRNA let-7、miRNA 324-3p在抗肾脏纤维化中起关键作用;miRNA 21、miRNA 433、miRNA 132、miRNA 212、miRNA 324-3p、miRNA 382发挥促肾脏纤维化作用.多种lncRNAs会破坏组织稳态,并在肾脏纤维化病理生理过程中发挥重要作用.

FcγRⅢa(CD16a)属于免疫球蛋白的超家族成员,为低亲和力的IgG受体,是一种表达于自然杀伤细胞( NK细胞)、巨噬细胞、肥大细胞和中性粒细胞等免疫效应细胞表面的跨膜蛋白,是机体细胞免疫功能发挥作用的一个比较重要的结合位点.FcγR Ⅲa与人IgG1 和IgG3 的Fc段结合,诱导免疫效应细胞(主要是NK细胞)的细胞毒作用——即抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用( antibody-dependent cell-media-ted cytotoxicity, ADCC)杀伤靶细胞[1] ,也可直接介导NK细胞对肿瘤靶细胞的杀伤作用[2];还可促进IFN-γ、TNF和基质金属蛋白酶等细胞因子的分泌,影响细胞免疫功能发挥[3-4].以ADCC为作用基础的单克隆抗体介导分子靶向治疗在恶性肿瘤中应用越来越广泛,作为结合位点的FcγR Ⅲa越来越受到关注,现将FcγR Ⅲa在疾病中的作用、免疫治疗相关及近年来的研究方向做一介绍.

目的 探索主要促进因子超家族蛋白2A(major facilitator superfamily domain containing 2A,MFSD2A)对肝癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响.方法 使用慢病毒载体构建差异表达MFSD2A的肝癌细胞株HepG2和SMMC-7721,由qPCR及Western blotting法评估其转染效率;CCK-8法分析差异表达MFSD2A对细胞增殖的影响,流式细胞术测定转染后细胞的基础凋亡率的变化,Transwell小室细胞侵袭实验明确MFSD2A对细胞侵袭能力的影响.结果 在肝癌细胞中上调MFSD2A表达可以显著抑制细胞增殖、促进基础凋亡,同时还可降低细胞的侵袭能力;而下调MFSD2A则可导致相反的效应.结论 MFSD2A在肝癌的肿瘤进程中发挥抑癌基因的功能,这种功能主要是通过抑制细胞增殖并诱导凋亡实现的.

主要促进因子超家族成员2a(MFSD2A)属于主要协同转运蛋白超家族成员,是一种钠依赖性溶血磷脂酰胆碱(LPC)同向转运蛋白,将二十二碳六烯酸(DHA)通过血脑屏障转运进入大脑,并抑制脑血管上皮细胞的胞吞作用,以此形成血脑屏障的低通透性,这些重要的功能使得MFSD2A基因受到了广泛的关注.近些年来的研究表明,MFSD2A在血脑屏障形成、DHA转运、胎盘发育、肝细胞再生、棕色脂肪代谢等生理过程中起到关键作用,在阿尔茨海默病、糖尿病视网膜病变、肿瘤发生等疾病进展中起到重要的调控作用.因此,本文结合近期的研究,对MFSD2A基因在生理病理过程中的作用及其机制研究进行总结.