目的:分析慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B，CHB)HBeAg阳性患者血清干扰素γ诱导单核细胞因子(monokine induced by IFN-γ，Mig)、白细胞介素(interle－ukin，IL)-9与乙型肝炎病毒(hepatitis B Virus，HBV)前C/BCP区变异的相关性以及其对干扰素疗效影响。方法:回顾性分析2015年2月至2018年2月四川省简阳市人民医院收治的110例CHB且HBeAg阳性患者资料，均给予聚乙二醇α-干扰素抗病毒治疗；治疗前扩增患者血清HBV前C/BCP区的基因片段并将患者分成HBV前C/BCP区野生型组(野生组61例)及突变型组(突变组49例)，并比较两组患者血清Mig、IL-9情况以及抗病毒治疗疗效差异。结果:突变组治疗前患者血清IL-9[(10.8±1.9) ng/L]明显高于野生组[(8.3±1.7) ng/L]( P<0.05)。突变组治疗48周后获得完全应答率[46.9%(23/49)]显著高于野生组[16.4%(10/61)]χ 2＝7.083， P＝0.018；突变组治疗24周后HBsAg下降>1 lg10者较下降≤1 lg10者治疗前的血清Mig显著升高[(129.2±37.9) ng/L与(91.5±25.7) ng/L]( P<0.05)。突变组治疗12、24周血清IL-9分别为(8.8±1.9)、(8.9±1.6) ng/L，均较治疗前显著降低( P均<0.05)。 结论:CHB且HBeAg阳性患者治疗前血清IL-9的高表达与HBV前C/BCP区的变异关系密切，IL-9的表达与干扰素抗病毒疗效无相关性；患者治疗前Mig的高表达可能对HBV前C/BCP区变异者干扰素抗病毒疗效更有利。

目的 探讨HBV相关慢加急性肝衰竭患者外周血调节性T淋巴细胞(Treg)、辅助性T淋巴细胞(Th)17细胞表达特点及其与HBV前C区/BCP区变异的相关性.方法 选择HBV相关慢加急性肝衰竭和肝衰竭前期患者各41例,采用ELISA检测外周血IL-17、TGFβ1、IFN γ、IL-1β及IL-21水平,流式细胞术检测Treg和Th17表达水平,直接测序法检测HBV前C区及BCP区基因,统计学处理用t检验.结果 肝衰竭患者Treg、Th17、IL-17、TGF-β1、IFN-γ、IL-1β水平、HBV变异位点中A1762T/G1764A双突变、G1896A突变比例分别为(9.28±1.12)％、(0.23±0.05)％、(151.83±35.22) pg/mL、(153.24±34.15) pg/mL、(177.61±29.25) pg/mL、(77.46±13.15) pg/mL、22/19、23/18,均高于肝衰竭前期患者的(7.47±0.74)％、(0.19±0.03)％、(134.02±34.39) pg/mL、(130.76±35.13) pg/mL、(130.68±22.87) pg/mL、(60.12±15.67) pg/mL、13/28、12/29,差异均有统计学意义(t’值分别为8.594、4.609、2.316、2.939、8.094、5.429,x2值分别为4.038、6.032,均P＜0.05);而Treg/Th17比值、IL-21水平在两组中差异无统计学意义(t=0.902,P=0.370;t=0.294,P=0.769).HBV BCP区A1762T/G1764A双突变和G1896A突变的患者Treg、Th17水平均高于野生型,差异有统计学意义(t=2.932,P=0.004;t=2.339,P=0.022;F 3.232,P=0.002;t'=2.990,P=0.004),而Treg/Th17比值在突变型和野生型中差异均无统计学意义(t=0.030,P=0.976;t’=0.272,P=0.787).结论 Treg细胞及Th17细胞变化,HBV BCP区A1762T/G1764A双突变、G1896A突变可能与HBV相关慢加急性肝衰竭相关.

为研究福建省慢性HBV感染者HBV基因多样性及变异规律,了解该人群HBV-DNA的病毒学特征.收集慢性HBV感染者血清标本,通过巢式PCR法扩增其HBV基因序列,比对NCBI数据库中标准基因型序列,分析HBV基因S区,基本核心启动子区(BCP)及前C区的序列变异情况,并对这些变异可能造成的病毒抗原表达,疫苗逃逸,患者病症改变等情况进行探讨.最终成功扩增82例HBV全长基因序列,其中B基因型56例,C基因型26例.基因组特定功能区序列分析发现慢性HBV感染者HBV基因在S区(23.2％)、BCP区(61.0％)和前C区(29.3％)均出现了不同程度的变异.其中主蛋白(HBsAg)主要抗原决定簇a决定簇45.8％位点出现了变异,这些变异位点中包括与肝炎重症化及免疫逃逸密切相关的位点(aa126、aa129、aa145等).位点G1896A(19.5％),G1764A(11.0％)和A1762T(9.8％)依然是BCP/前C区的主要突变位点.而位点A1752G(25.6％)高突变率的出现在BCP区应引起关注.此外位点G1764A(x2=5.742,P=0.030)、A1896G(x2=14.392,P=0.000)以及A1762T/G1764A(x2=7.289,P=0.012)的突变更容易发生在HBeAg阴性的样品中;而位点A1846T(x2=11.882,P=0.003)、A1762T(x2 =6.561,P=0.038)和A1896G(x2=6.958,P=0.030)的突变与HBV-DNA的病毒载量存在一定相关性.总之,福建省慢性HBV感染者在HBV不同基因功能区域均存在不同程度的变异,一些与HBeAg表达情况、HBV-DNA载量、疫苗免疫逃避及肝细胞癌发生具有相关联的变异位点已经出现,BCP区A1752G位点的高频率出现应值得关注,对于这些变异位点的患者应加强监测.

目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)前核心区(PC区)G1896A和基本核心启动子区(BCP区)A1762T/G1764A突变与聚乙二醇化干扰素α-2b(Peg-IFNα-2b)治疗应答的关系及相关变异在治疗前后的变化.方法:69例HBeAg阳性慢性乙型肝炎(CHB)患者,接受48周Peg-IFNα-2b治疗并随访24周.PCR扩增每位患者第0周和第72周HBV PC和BCP区并测序分析突变情况,同时监测患者第0、4、8、12、24、36、48、60和72周HBsAg、HBeAg、丙氨酸转氨酶(ALT)和HBV的DNA水平.结果:共14例患者检测为野生型(20.29％),55例患者检测为突变型(79.71％).野生型较突变型HBeAg基线水平更高(P=0.024).患者基线和72周时野生型、PC突变型、BCP突变型和PC+BCP突变型所占构成比发生明显变化(P=0.004).野生型、PC突变型、BCP突变型和PC+BCP突变型患者在72周的HBeAg血清转换率和联合应答率差异均无统计学意义.结论:PC区和BCP区突变对HBeAg阳性B/C基因型CHB患者Peg-IFNα-2b治疗应答无明显影响,但治疗前后各突变所占构成比发生明显变化.

目的 探讨乙型肝炎病毒(HBV)合并人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)感染者和HBV单独感染者HBV基因组三个重点区域的变异.方法 收集湖南省HIV-1/HBV合并感染患者(试验组)和HBV单独感染患者(对照组)血清各40份,进行HBV全基因组扩增及测序,并对突变位点进行分析.结果 有59份血清HBV成功分型和测序,其中试验组21份,对照组38份,试验组与对照组HBV载量值和不同基因型比较,差异均有统计学意义(均P<0.05).试验组4例患者血清标本HBV在前S区22个氨基酸发生变异,12例在前C区和BCP区45个核苷酸发生突变,试验组和对照组前S区氨基酸总体缺失突变率分别为0.60％、0.64％,差异无统计学意义(χ2=0.042,P>0.05).试验组与对照组前C区和BCP区各个主要突变位点变异发生率比较,差异无统计学意义(均P>0.05),试验组和对照组前C区和BCP区总体变异发生率分别为1.36％、1.73％,差异无统计学意义(χ2=1.920,P>0.05).结论 共感染患者的HBV变异水平与单感染患者基本一致,短时间内HIV-1暂未对HBV的进化突变造成显著影响.

目的 探讨HBV S基因序列变异与HBV相关慢加急性(亚急性)肝衰竭(HBV-related acute on chronic liver failure,HBV-ACLF)的关系.方法 纳入2012年7月至2017年9月广州市第八人民医院门诊或住院的非活动性HBsAg携带者51例(携带组)、CHB患者78例(CHB组)、HBV-ACLF患者101例(HBV-ACLF组)、HBV相关肝硬化(liver cirrhosis,LC)患者69例(LC组)和HBV相关肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者78例(HCC组).采用套式PCR扩增HBV全基因组和S基因片段,直接测序法检测HBV变异位点,使用Mega 7.0软件Neighbor-joining法构建基于S基因的进化树进行基因分型,使用Geneious R10.0.5软件对S抗原的读码框进行翻译,确定非同义突变和同义突变的变异位点.组间比较采用x2检验、Fisher确切概率法,相关性采用logistic回归分析.结果 在HBV-ACLF组、CHB组、携带组、LC组和HCC组中,HBV B基因型患者分别为83、51、34、31和35例,HBV C基因型患者分别为18、27、17、38和43例.在HBV B基因型患者中,HBV全基因组差异显著的变异位点有:S基因(T216C、G285A和A529G),增强子I(A1317G),基本核心启动子区(A1762T/G1764A),前C/C区(A1846T、C1913A、G1896A、T2045A、C2078G和C2304A);在HBV C基因型患者中,未发现差异显著的变异位点.HBV B基因型的患者中,T216C(sL21S)变异在HBV-ACLF组显著高于携带组、CHB组和HCC组(x2值分别为14.474、10.982和5.440,均P＜0.05),但与LC组比较差异无统计学意义(x2=2.641,P=0.106);G285A(sG44E)变异在HBV-ACLF组显著高于携带组、CHB组、LC组和HCC组(x2值分别为27.301、29.287、15.719和16.076,均P＜0.01).在HBV C基因型的患者中,HBV S基因高频变异在各组患者中均差异无统计学意义(均P＞0.05).logistic回归分析提示男性(OR =6.90,95％CI:1.52 ～24.39,P=0.010)、HBeAg阴性(OR=4.73,95％ CI:1.60 ～ 13.94,P=0.005)、B基因型(OR =4.80,95％ CI:1.82～12.16,P=0.006)和G285A变异(OR=7.72,95％ CI:5.64 ～ 16.37,P=0.006)是HBV-ACLF发生的独立危险因素.结论 HBV S基因变异可能与HBV-ACLF的发生有关.

目的 探讨乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性学生家庭内乙型肝炎病毒(HBV)感染状况以及肝细胞癌相关的HBV变异情况,为HBV感染、肝细胞癌的防控提供科学依据.方法 从浦东新区15个学校及幼儿园60个班级中调查学生1611名,其中HBsAg阳性学生8名.对该8名学生及其18名一级亲属进行流行病学调查,采集静脉血应用酶联免疫吸附实验检测乙肝五项.采用荧光PCR法检测HBV DNA,采用multiplex-PCR、巢式PCR法联合克隆测序方法 检测HBV基因组、基本核心启动子(BCP)区和前S(PreS)区.结果 一级亲属HBsAg与HBcAb阳性率分别为33.3％(6/18)与38.9％(7/18).母亲HBsAg与HBcAb阳性率均为71.4％(5/7),高于其他一级亲属阳性率(P<0.05).8个家庭中7个家庭(87.5％)有2人及2人以上HBV感染或曾经感染,8个家庭共26名家庭成员中14人HBsAg阳性,阳性率为53.8％.共检测了4组母亲和子女的HBV基因,其中3组HBV基因为C型,1组母亲为C型、子女为B型;在肝细胞癌相关HBV变异中,子女的BCP区热点突变频率低于母亲,PreS区C型有8个变异位点在母亲和子女体内均表达、其余关键位点均未在子女体内发现.结论 HBV感染存在明显的家庭聚集性;此次调查结果 显示学生HBV感染通过母婴传播可能性较大,但也存在后天血液传播等方式感染;子女HBV基因进化程度低于母亲,符合HBV进化的规律.

目的 了解核酸检测初筛阴性献血者中低水平乙肝表面抗原(HBsAg)乙肝病毒(HBV)感染情况并探讨其分子生物学特征.方法 从本中心2017～2018年100363(人)份无偿献血者血样中,收集HBsAg酶联免疫试验(ELISA)阳性核酸检测(NAT)阴性献血者标本,用化学发光微粒子免疫法CMIA复检HBsAg,用电化学发光免疫法(ECLI)定量检测乙肝两对半,再做NAT单人份复检,采用巢武聚合酶链反应(PCR)扩增病毒BCP/PC和S区,用荧光定量PCR(qPCR)测定病毒载量.结果 本中心2017～2018年HBV DNA(-)的低水平HBsAg献血者(标本)的检出率0.054％(60/100363),其中HBsAg ELISA试剂1检出比例90％ (54/60),试剂2检出比例95％ (57/60);60例中有33个可做HBV基因分型的标本,B型占87.9％ (29/33),其中3.4％ (1/29)为血清型ayw1、96.6％ (28/29)血清型adw2;C型占12.1％(4/33),均为血清型adqr+.巢式PCR扩增:在B型S基因区发现影响HBsAg检测Q101R、Q129H、T131I、M133L/T、F134L、G145R、V168A、L175S和V177A变异株,在BCP/PC区发现减少HBV复制的高频突变C1799G(87.5％,21/24).qPCR测得病毒载量中位数49.6(0 ～ 628) IU/ml.结论 ELISA检测低水平HBsAg且NAT阴性献血者标本中存在少数未能被目前ELISA方法检出的HBV.在献血者血液筛查中应用灵敏度和特异性更高的HBsAg和NAT检测方法可提高检出HBV突变株的能力.

目的 探讨BCP区A1762T/G1764A和前C区G1896A变异与慢性乙型肝炎疾病进程的关系.方法 选取本院肝病中心慢性HBV感染患者540例(421例慢性乙型肝炎和119例乙肝肝硬化),所有患者采用基因芯片法检测A1762T/G1764A和G1896A变异,分析变异与慢性乙型肝炎疾病进程的相关性.结果 LC患者的A1762T/G1764A变异率高于CHB患者(P＜0.05);而G1896A变异率在2组间差异无统计学意义(P＞0.05).HBeAg/HBeAb模式与.1762/1764变异无关,而HBeAg(+)患者1896变异率显著降低(x2=91.255,P＜0.001).不同HBV-DNA复制水平患者的1762/1764、1896变异率差异均无统计学意义(P＞0.05).1762/1764变异者FIB-4显著高于无变异者(P＜0.05),1896变异者APRI、FIB-4、S指数均显著高于无变异者(P＜0.05).不同肝纤维化分期(S＜2和S≥2)间1762/1764变异率差异无统计学意义(P＞0.05),而肝纤维化患者(S≥2)1896变异率显著升高(x2=7.008,P＜0.01).结论 BCP区A1762T/G1764A和前C区G1896A变异影响了慢性乙型肝炎疾病进程,特别是A1762T/G1764A与肝硬化的发生紧密相关,而G1896A变异有可能在疾病的早期阶段发挥作用.