目的 探讨药物相关分子靶标检测在儿童颅外恶性实体瘤个体化治疗中的作用和意义.方法 将2011年4月至2013年4月期间于上海交通大学医学院附属新华医院治疗的38例难治性儿童颅外恶性实体瘤的手术标本及外周血,通过免疫组织化学、酶联免疫吸附试验、荧光原位杂交、聚合酶链式反应扩增和测序的方法检测肿瘤药物相关分子靶标.共检测15种化疗药物和2种靶向药物的基因表达或突变.结果 入组的38例标本中,35例为手术标本,其中3例为二次手术标本、3例为外周血标本送检肿瘤药物相关分子靶标.检测了肿瘤标本化疗药物分子靶点DNA拓扑异构酶ⅡA(TopoⅡA)34例、微管蛋白β3(Tubulinβ3) 32例、人切除修复交叉互补基因1(ERCC1) 28例、DNA拓扑异构酶Ⅰ(TOPO Ⅰ)28例、DNA修复蛋白O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(MGMT) 20例、胸苷酸合成酶(TS) 13例、核糖核苷酸还原酶M1 (RRM1)6例.68.75％对氟尿嘧啶及培美曲赛敏感,66.67％对吉西他滨敏感,56.25％对长春碱类敏感;而67.65％对蒽环类/依托泊苷敏感性低,64.29％对铂类药物、拓扑替康/伊立替康敏感性低,63.64％对替莫唑胺敏感性低.外周血标本化疗药物分子靶点33例CYP2C9*3、14例二氢叶酸还原酶(DHFR C829T)基因多态性PCR测序,结果显示100.00％和93.33％对环磷酰胺和甲氨蝶呤敏感;用外周血标本化疗药物分子靶点检测肿瘤化疗药物毒性反应情况,结果 显示100.00％环磷酰胺及甲氨蝶呤毒副反应弱,76.19％伊立替康/依托泊苷毒副反应弱;肿瘤标本靶向药物基因血管内皮生长因子受体-2 15例、表皮生长因子受体(EGFR)5例和外周血标本细胞间黏附分子-1检测10例,显示68.00％对贝伐珠单抗敏感,EGFR 5例都无扩增,对络氨酸激酶抑制剂无效.依据上述检测结果,对标准化疗方案疗效欠佳的患儿,及时调整治疗策略后,取得了初步效果.结论 本研究首次在儿童颅外恶性实体瘤的治疗中引入药物相关性分子靶标的检测,对于开展规范化治疗基础上的个体化治疗方案的选择及药物毒副作用的预测,提供了实验室依据.

目的 观察黄芪总皂苷对小肠上皮细胞(IEC-6)迁移和增殖的影响,并从多胺及其调控的细胞增殖相关蛋白(转录因子c-Myc、Rho-GTP酶RhoA和细胞周期依赖激酶Cdk2)表达角度研究其作用机制.方法 从黄芪中提取黄芪总皂苷(皂苷含量88.8％)作为受试药,高效液相色谱仪蒸发光检测(HPLC-ELSD)获得受试药色谱图;移液器吸头划痕法检测细胞迁移率;MTT法检测细胞增殖;Western Blot法检测相关蛋白表达.结果 黄芪总皂苷(25、50、100 mg·L-1)对细胞迁移无明显影响(与空白组比较,P＞0.05).黄芪总皂苷(50 mg·L-1或100 mg·L-1)有促进细胞增殖作用(与空白组比较,P＜0.05),且能逆转二氟甲基鸟氨酸(DFMO,多胺合成抑制剂)所致的细胞增殖抑制;可提高c-Myc、RhoA和Cdk2蛋白表达,逆转DFMO所致的c-Myc、RhoA和Cdk2蛋白表达抑制.结论 黄芪总皂苷可促进IEC-6细胞增殖,其作用机制与影响多胺调控的增殖相关蛋白表达有关.

目的 研究二氟甲基鸟氨酸(difluoromethylornithine,DFMO)对2型糖尿病(T2DM)大鼠心肌肥厚的作用,以及对内质网应激蛋白GRP78和CHOP的影响.方法 采用高糖高脂膳食负荷链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)单次腹腔注射,建立T2DM大鼠模型.实验大鼠分为正常对照组、T2DM模型组和DFMO治疗组,上述条件继续饲养12周.检测各组大鼠空腹血糖、心脏参数、心肌纤维化程度;测定MDA含量、SOD和T-AOC活性;检测GRP78和CHOP蛋白表达.结果 DFMO治疗后,降低T2DM大鼠空腹血糖和心脏参数(P<0.05),心肌间质纤维化程度下降(P<0.05),MDA含量降低,SOD和T-AOC活性增加.同时,DFMO治疗可以下调GRP78和CHOP蛋白表达水平(P<0.05).结论 DF-MO抑制T2DM大鼠心肌肥厚,机制与下调GRP78和CHOP蛋白表达,抑制内质网应激有关.

目的 本研究探讨腐胺是否通过抗氧化应激的机制提高体外培养的高龄卵母细胞的质量. 方法 从9月龄C56/B6J雌鼠获取GV期卵丘-卵母复合体(COC),分为对照组、0.5 mmol/L腐胺处理组、0.5 mmol/L α-二氟甲基鸟氨酸(DFMO,腐胺抑制剂)组.三组COC体外培养液16～18 h,收集MⅡ期卵母细胞.计算各组高龄卵母细胞成熟率,检测卵母细胞mtDNA拷贝数,JC-1荧光分析染色线粒体膜电位,并分析卵母细胞内氧自由基和超氧化物歧化酶1(SOD1)的表达.结果 腐胺组卵母细胞成熟率显著高于对照组[(87.57±1.70)％ vs.(66.02±4.05)％,P＜0.01].DFMO处理组线粒体DNA拷贝数显著高于对照组(P＜0.05).与对照组相比,腐胺组卵母细胞内氧化应激水平显著下降(P＜0.01);DFMO组氧化应激水平显著升高(P＜0.01).与对照组比较,腐胺组卵母细胞线粒体膜电位显著升高(P＜0.01),而DFMO组显著下降(P＜0.05).与对照组比较,腐胺组卵母细胞内SOD1蛋白表达显著增高(P＜0.05),DFMO组显著下降(P＜0.05). 结论 体外培养的高龄卵母细胞,腐胺通过抗氧化应激、改善线粒体功能提高卵母细胞质量和胚胎发育潜能,具有潜在的临床应用价值.

天仙子(Hyoscyamus niger)是重要的托品烷生物碱(tropane alkaloids,TAs)药源植物,鸟氨酸脱羧酶(ornithine decarboxylase,ODC)作为腐胺生物合成的关键酶在植物的生长发育及次生代谢中发挥着重要作用.但是ODC是否参与天仙子TAs的生物合成,目前尚不清楚.本研究利用2.5 mmol·L-1的ODC特异性抑制剂二氟甲基鸟氨酸(difluoromethylornithine,DFMO)处理3周龄天仙子植株,处理2周后对实验组和对照组植株的多胺、TAs和生物量分别进行了测定.测定结果表明,DFMO能够显著抑制天仙子生长和多胺及TAs的生物合成.本研究表明ODC在天仙子生长发育及TAs生物合成中发挥着重要的作用.

目的:本文旨在研究二氟甲基鸟氨酸对糖尿病合并抑郁症大鼠的认知功能障碍及血清代谢组学的调节作用的影响.方法:将大鼠随机分为5组:对照组(Control)、模型组(Model)、二氟甲基鸟氨酸低剂量组(DFMO 0.1)、二氟甲基鸟氨酸中剂量组(DFMO 0.25)、二氟甲基鸟氨酸高剂量组(DFMO 0.5)进行后续实验.HE染色检测海马神经元病理损伤程度;TU?NEL染色检测神经元细胞凋亡;RT-PCR检测Survivin、Caspase-3 mRNA水平及Bcl-2/Bax;试剂盒检测serotonin(5-HT)及me?tabolite 5-hydroxyindoleacetic(5-HIAA)含量;全自动生化分析仪检测总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇水平(HDL-C);Western blot检测GLT-1、BDNF、AMPKα1、PGC-1α、GLUT4蛋白表达水平.结果:与Model组相比,DFMO 0.25、0.5组病理损伤程度明显改善(P<0.05),凋亡细胞明显减少(P<0.05),Survivin mRNA水平、Bcl-2/Bax显著升高(P<0.05),Caspase-3 mRNA水平显著降低(P<0.05),GLT-1、BDNF蛋白水平显著升高(P<0.05),5-HT、5-HI?AA含量显著升高(P<0.05),TC、TG、LDL-C水平显著降低(P<0.05),HDL-C水平显著升高(P<0.05),AMPKα1、PGC-1α、GLUT4蛋白水平显著升高(P<0.05).结论:二氟甲基鸟氨酸对糖尿病合并抑郁症大鼠具有治疗作用.

地方性氟中毒(地氟病)是严重危害人体健康的疾病,我国对地氟病已经建立了有效的预防措施,但是缺乏有效的治疗手段.我们综述了近年来有关氟中毒拮抗物的研究进展,为进一步研究氟中毒的治疗提供参考依据.结果表明,具有氟中毒拮抗作用的物质包括:微量元素如硒、镁、钙、铜和锌等;中药成分如龙眼参多糖、黄芪、二苯乙烯苷、天麻素、白藜芦醇等;一氧化氮合酶(NOS)抑制剂如7-硝基吲唑(7-NI)、L-亚氨基乙基鸟氨酸(L-NIO)、L-单甲基-精氨酸(L-NMMA)和N-[3-(氨甲基)苄基]乙脒(1400W);其他物质如硫酸软骨素.

目的 考察四君子汤含药血清(sijunzi decoction con-taining serum,SJZDS)对小肠上皮细胞增殖、多胺含量、核仁磷酸蛋白(nucleophosmin,NPM)及p53表达的影响,以探讨四君子汤修复胃肠黏膜损伤的作用机制.方法 采用SD大鼠制备SJZDS,MTT法检测细胞增殖,HPLC法检测细胞内多胺含量,RT-PCR法检测NPM及p53 mRNA表达,Western blot法检测NPM及p53蛋白表达.结果 与空白对照组比较,10％、20％SJZDS可促进给药24 h后细胞增殖(P<0.01),可增加精脒含量及降低p53 mRNA表达(P<0.05,P<0.01),5％、10％、20％SJZDS可促进给药48 h及72 h后细胞增殖和提高腐胺含量(P<0.01),抑制p53蛋白表达(P<0.01)和NPM mRNA及蛋白表达(P<0.05,P<0.01).与α-二氟甲基鸟氨酸组比较,5％、10％、20％SJZDS可促进给药48 h后细胞增殖(P<0.01),降低NPM、p53 mRNA及蛋白表达(P<0.05,P<0.01),10％、20％SJZDS可促进给药72 h后细胞增殖和增加腐胺及精脒含量(P<0.01).结论 SJZDS可促进小肠上皮细胞增殖,其机制与影响多胺调控生长相关基因NPM及p53表达有关.

目的 观察四君子汤对IEC-6细胞(大鼠小肠上皮细胞)增殖,多胺调控生长相关基因细胞周期检测点激酶2 (Checkpoint kinase 2,Chk2)、c-Myc表达,以及对大鼠胃肠黏膜c-Myc蛋白表达的影响.方法 采用SD大鼠制备空白血清及四君子汤含药血清;无负荷细胞实验设空白对照组、腐胺组(10 μmol·L-1)及四君子汤含药血清低、中、高(5％、10％、20％)剂量组;α-二氟甲基鸟氨酸(α-difluoromethylomithine,DFMO)负荷细胞实验设空白对照组、DFMO组(2.5 mmol·L-1)、腐胺组(10 μmol·L-1)及四君子汤含药血清低、中、高(5％、10％、20％)剂量组;动物实验将SD大鼠随机分为空白对照组、模型组(吲哚美辛组)及四君子汤低、高(5、15 g·kg-1)剂量组.采用MTT法检测IEC-6细胞增殖情况;qPCR法检测细胞Chk2、c-Myc mRNA表达;Western Blot法检测细胞Chk2、p-Chk2、c-Myc蛋白表达和大鼠胃肠黏膜的c-Myc蛋白表达.结果 ①细胞实验:与空白对照组比较,10％、20％四君子汤含药血清可促进给药24 h后IEC-6细胞的增殖(P＜0.01),提高p-Chk2蛋白及c-Myc mRNA/蛋白表达水平(P＜ 0.05,P＜0.01);5％、10％、20％四君子汤含药血清可促进给药48、72 h后细胞增殖(P＜0.01),促进Chk2 mRNA/蛋白表达(P＜0.05,P＜0.01).与DFMO组比较,5％、10％、20％四君子汤含药血清可促进给药48 h后细胞增殖(P＜0.01),提高c-Myc mRNM蛋白表达(P＜ 0.05,P＜0.01);10％、20％四君子汤含药血清可促进给药72 h后细胞增殖(P＜0.01),促进Chk2及p-Chk2蛋白表达(P＜ 0.05,P＜0.01);20％四君子汤含药血清可促进Chk2 mRNA表达(P＜0.05).②动物实验:与模型组比较,四君子汤5、15 g·kg-1可上调模型大鼠胃黏膜及小肠黏膜c-Myc蛋白表达(P＜ 0.05,P＜0.01).结论 四君子汤可促进IEC-6细胞增殖,其作用机制可能与影响多胺信号通路,上调生长相关基因Chk2、c-Myc表达有关.四君子汤可提高胃肠黏膜损伤模型大鼠胃及小肠黏膜c-Myc蛋白表达水平.

目的 探讨二氟甲基鸟氨酸(DFMO)对异丙肾上腺素(ISO)诱导的心肌肥厚模型线粒体动力学改变及对氧化应激的影响.方法 将Wistar大鼠随机分为空白组、模型组和实验组,每组10只.空白组给予等量0.9％NaCl连续皮下注射1周;模型组给予5 mg·kg-1 ISO连续皮下注射1周复制心肌肥厚模型;实验组给予2％DFMO水溶液,连续给药10 d.比较3组大鼠的心脏指数和心肌组织谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性.将H9 C2心肌细胞分为空白组、模型组、实验组和对照组.空白组给予磷酸盐缓冲溶液处置;模型组给予10μmol·L-1 ISO作用48 h;实验组在加入10μmol·L-1 ISO前24 h加入1 mmol·L-1 DFMO处置;对照组在加入10μmol·L-1 ISO前24 h加入0.5 mmol·L-1腐胺.用蛋白质印迹(Western blot)法检测线粒体分裂蛋白(DRP1)和线粒体融合蛋白(MFN2)蛋白的表达水平,用单管多功能检测仪测定细胞内钙离子浓度,用试剂盒测定心肌细胞线粒体超氧化物的水平.结果 动物实验:空白组、模型组和实验组的心脏指数分别为(3.58±0.59),(3.74±1.49)和(3.62±0.76)mg·g-1,GSH-Px含量分别为(183.12±29.28),(149.60±24.24)和(173.29±23.59)U·mg-1,实验组的上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05).细胞实验:空白组、模型组、实验组和对照组心肌细胞的DRP1蛋白相对表达水平分别为1,2.26±0.31,1.09±0.19和2.28±0.42,MFN2蛋白相对表达水平分别为1,0.77±0.13,1.16±0.02和0.95±0.11,细胞内钙离子浓度(荧光强度)分别为(66.10±4.54),(80.90±10.18),(61.60±5.30)和(73.00±8.06)abs·unit,实验组的上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论 DFMO对心肌肥厚有保护作用,其机制与抑制线粒体分裂和氧化应激有关.