目的:探讨胰高血糖素样肽-1（GLP-1）通过调控NADPH氧化酶-4（Nox-4）及二肽基肽酶-4（DPP-4）/核因子-κB（NF-κB）信号通路，影响脂肪炎症的发生及其相关机制。方法:小鼠胚胎成纤维细胞（3T3-L1细胞，Procell，CL-0006）进行传代培养并进一步分为空白对照组（Control）、加入5 μg/ml内质网应激诱导剂衣霉素（TM）组及GLP-1组（加入10 nmol/L GLP-1预处理24 h后，加入TM），3组培养24 h；在3T3-L1脂肪细胞中用小干扰RNA（siRNA）沉默DPP-4的表达，后分别提取总RNA和提取蛋白，其浓度测定并进行实时反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白质印迹法（Western blot）实验分析Nox-4、GLP-1受体（GLP-1R）、NF-κB亚基（p-50、p-65）蛋白以及炎性因子如单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、白细胞介素-6（IL-6）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的mRNA和蛋白表达水平，组间均数比较采用方差分析。结果:3T3-L1脂肪细胞加入GLP-1后，GLP-1组GLP-1R的mRNA表达水平高于TM组（1.10±0.05比0.47±0.07），差异有统计学意义（ F＝183.912， P<0.001）；其DPP-4和Nox-4的mRNA表达水平低于TM组（2.68±0.30比1.31±0.15；2.04±0.21比1.38±0.11），差异有统计学意义（ F＝90.196、60.166， P<0.001）。GLP-1组p-50和p-65的蛋白表达水平低于TM组（1.48±0.23比1.22±0.03；1.66±0.13比1.15±0.06），差异有统计学意义（ F＝13.049、73.488， P<0.001）；GLP-1组MCP-1、IL-6及TNF-α的mRNA相对表达水平低于TM组（1.62±0.18比0.95±0.03；1.80±0.32比1.23±0.02；2.05±0.31比1.30±0.03），差异有统计学意义（ F＝45.140、19.524， F＝35.933， P<0.001）。si-DPP-4敲低组的p-50和p-65的蛋白表达水平低于TM组（1.42±0.07比1.13±0.02；1.59±0.18比1.12±0.03），差异有统计学意义（ F＝93.111、30.849， P<0.001）；si-DPP-4敲低组的Nox-4（2.13±0.10比1.34±0.05， F＝219.708， P<0.001）和炎性因子MCP-1、IL-6及TNF-α的mRNA表达水平低于TM组（1.46±0.06比1.19±0.04，1.79±0.13比1.23±0.05，2.26±0.14比1.32±0.07），差异有统计学意义（ F＝87.228、72.369、153.372， P<0.001）。 结论:GLP-1通过下调DPP4/NF-κB信号通路抑制氧化应激诱导3T3-L1脂肪细胞炎症。

目的 观察维甲酸相关孤核受体α(RORα)过表达病毒载体尾静脉注射对多柔比星(DOX)诱导小鼠心脏毒性(DIC)的影响,并探讨其可能的机制.方法 将80只雄性C57BL/6小鼠随机分为Con组、DIC组、DIC+RORα组、DIC+RORα+EX527组,每组20只.DIC+RORα组和DIC+RORα+EX527组经尾静脉注射过表达RORα基因的腺相关病毒9型(AAV9)载体,DIC组经尾静脉注射AAV9空白对照载体;AAV9载体注射3周后,除Con组外均采用尾静脉注射DOX的方法建立DIC小鼠模型;DIC+RORα+EX527组每次DOX注射后腹腔注射沉默信息调节因子(SIRT1)信号通路特异性阻断剂EX527.各组分组处理后4周,经胸超声心动图检查测算左心室射血分数(LVEF)和左心室缩短分数(LVFS),处死后取眼眶血和心肌组织.采用HE染色观察心肌组织病理情况,ELISA法检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌钙蛋白I(cTnI)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α),TUNEL染色后计算细胞凋亡率,二氢乙锭法检测心肌组织活性氧(ROS)表达,比色法检测心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)表达,免疫荧光染色观察心肌组织巨噬细胞浸润和NF-κB p65表达,Western blotting法检测心肌组织cleaved Caspase-3、RORα、SIRT1蛋白表达并计算Ac-NF-κB p65/NF-κB p65、Ac-Foxo1/Foxo1,实时荧光定量PCR法检测心肌组织RORα、SIRT1 mRNA表达.结果 与Con组比较,DIC组小鼠心肌纤维排列紊乱且断裂明显,心肌细胞空泡化显著;与DIC组、DIC+RORα+EX527组比较,DIC+RORα组小鼠心肌纤维断裂及心肌细胞空泡化均减轻.LVEF、LVFS及心肌组织SOD、GSH-Px:Con组>DIC+RORα组>DIC组、DIC+RORα+EX527组(P均<0.05).血清CK-MB、LDH、cTnI、IL-1β、IL-6、TNF-α及心肌组织细胞凋亡率、cleaved Caspase-3蛋白、ROS、MDA、巨噬细胞浸润、NF-κB p65:Con组DIC组(P均<0.05).SIRT1 mRNA及蛋白:Con组、DIC+RORα组>DIC组、DIC+RORα+EX527组(P均<0.05).Ac-Foxo1/Foxo1、Ac-NF-κB p65/NF-κB p65:Con组、DIC+RORα组

目的 探讨黄连素对慢性湿疹大鼠皮肤损伤及磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响.方法 60只SD大鼠分为对照组,慢性湿疹组,黄连素低、中、高剂量组和泼尼松组,每组10只.除对照组外,其余组大鼠背部涂抹2,4-二硝基氯苯(DNCB)构建慢性湿疹模型.进行湿疹面积及严重度指数(EASI)评分;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清组胺、胃泌素释放肽(GRP)、免疫球蛋白E(IgE)、白细胞介素(IL)-4、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)水平;苏木素-伊红(HE)染色观察皮损组织病理学改变;Western blot法检测皮损组织PI3K/AKT/NF-κB信号通路相关蛋白表达.结果 与对照组比较,慢性湿疹组大鼠皮损组织受损严重,血清组胺、GRP、IgE、IL-4、IL-6、TNF-α水平以及皮损组织IL-4、IL-6、TNF-α蛋白表达和p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-NF-κB抑制蛋白α(IκBα)/IκBα比值升高,血清和皮损组织IFN-γ降低(P＜0.05).与慢性湿疹组比较,黄连素各剂量组和泼尼松组大鼠皮损组织病理损伤有所改善,EASI评分下降,血清组胺、GRP、IL-4、IL-6、TNF-α水平以及皮损组织IL-6、TNF-α蛋白表达和p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-IκBα/IκBα比值降低,血清和皮损组织IFN-γ升高(P＜0.05),同时黄连素中、高组和泼尼松组大鼠血清IgE和皮损组织IL-4降低(P＜0.05),且黄连素高剂量组效果更好;黄连素高剂量组和泼尼松组上述指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 黄连素尤其是高剂量黄连素可抑制PI3K/AKT/NF-κB信号通路激活,减轻免疫失衡和炎症反应,改善慢性湿疹大鼠皮肤损伤.

目的:基于网络药理学预测二至丸治疗良性前列腺增生的作用靶点,探讨其多成分-多靶点-多通路的作用机制,对其治疗良性前列腺增生的分子机制进行科学阐释.方法:采用网络药理学软件生物反应路径分析(IPA)构建“化合物-靶点-疾病”的网络;对二至丸作用靶点构建蛋白互作网络(PPI),进行基因富集分析(GO)功能注释和京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,预测二至丸治疗前列腺增生的作用机制.结果:二至丸总共有19个化合物在IPA中,并且芹菜素(Apigenin),木犀草素(Luteolin),熊果酸(Oleanolic acid)和槲皮苷(Quercitrin)4个化合物是女贞子和墨旱莲共有化合物,是二至丸的主要物质基础;毒蕈碱型乙酰胆碱受体M3(CHRM3),毒蕈碱型乙酰胆碱受体M2(CHRM2),尿激酶型纤溶酶原激活物受体(PLAUR),激肽释放酶3(KLK3),钙黏蛋白1(CDH1),趋化因子3(CCL3)和金属蛋白酶1(MMP1)等二至丸治疗前列腺增生的关键靶点;PPI网络靶点蛋白有20条GO功能富集和5条主要的KEGG通路富集,并对相关靶点进行Docking验证.结论:二至丸通过激活MMP1和抑制KLK3以及CCL3蛋白表达,诱导细胞凋亡和抑制细胞增殖,干预丝裂原活化蛋白激酶/胞外信号调节激酶(MAPK/ERK),核转录因子-κB(NF-κB)等信号通路发挥抑制前列腺增生的作用.

目的 探讨2型糖尿病小鼠发生主动脉血管钙化后,机体内二肽基肽酶-Ⅳ(dipeptidyl peptidase-4,DPP-4)、细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK1/2)与kappa基因相结合的核因子(nuclear factor-kappa gene binding,NF-κB)等变化及相关机制的研究.方法 对正常小鼠(对照组)与糖尿病小鼠均进行高糖高脂饲料喂养,按照不同的给药方式进行分组治疗后,通过血液检测各组小鼠血糖及ELISA试剂盒检测各组小鼠DPP-4浓度变化,通过钙离子试剂盒测定主动脉中钙离子含量,通过Von Kossa钙化染色测定各组小鼠腹主动脉钙化情况,通过免疫组化与Western blot实验测定血管组织各蛋白的表达情况.结果 与对照组比较,糖尿病组小鼠血糖含量、主动脉钙离子含量、DPP-4浓度及血管钙化程度均升高(P<0.05);与糖尿病组比较,西格列汀及各抑制剂组小鼠血糖含量、主动脉钙离子含量、DPP-4浓度及血管钙化程度均降低(P<0.05).与对照组比较,糖尿病组p-ERK与NF-кB蛋白表达量显著增加(P<0.05);与糖尿病组比较,西格列汀及各抑制剂组p-ERK与NF-κB蛋白表达量显著减少(P<0.05).结论 糖尿病小鼠体内DPP-4含量明显增多,从而激活ERK1/2与NF-κB信号通路,促进其主动脉血管发生钙化.

目的:探讨一氧乙酰旋覆花内酯 (1-O-acetylbritannilactone, ABL) 在心肌细胞缺氧损伤中的作用及其机制.方法:体外培养H9C2心肌细胞, 构建缺氧损伤模型, 分为对照组、缺氧组、1μmol/L ABL组和10μmol/L ABL组.采用CCK-8法检测心肌细胞活力, 采用RT-PCR检测白细胞介素-1 (IL-1) 、白细胞介素-6 (IL-6) 、肿瘤坏死因子-α (TNF-α) 等炎症指标及还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸 (NADPH) 氧化酶p67phox亚基、NADPH氧化酶gp91phox亚基、超氧化物歧化酶 (SOD) 、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH-Px) 等氧化应激相关指标的mRNA表达水平, 采用活性氧检测试剂盒进行活性氧 (ROS) 水平检测, 用缺口末端标记法 (TUNEL) 检测细胞凋亡率, Western blot检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2、细胞色素C (Cyt C) 及核因子κB (NF-κB) p65、NF-κB抑制蛋白α (IKBα) 的蛋白表达水平.结果: (1) 不同浓度ABL对心肌细胞存活率的影响:1、2、5、10μmol/L的ABL均未影响心肌细胞存活率 (P均＞0.05) . (2) 各组心肌细胞缺氧损伤后炎症因子的表达:与对照组相比, 缺氧组细胞内IL-1、IL-6、TNF-α等炎性因子的mRNA表达水平均明显升高 (P均＜0.05), ABL预处理后上述促炎性因子表达水平呈浓度依赖性降低 (P均＜0.05), 但仍高于对照组 (P均＜0.05), 且1μmol/L和10μmol/L ABL组组间差异有统计学意义 (P均＜0.05) . (3) 各组心肌细胞缺氧损伤后氧化应激的变化:与对照组相比, 缺氧组细胞ROS水平明显升高, p67phox、gp91phox的mRNA表达水平均明显升高, ABL预处理后上述改变呈浓度依赖性降低 (P均＜0.05);与对照组相比, 缺氧组细胞SOD、GSH-Px的mRNA表达水平均明显降低 (P均＜0.05), ABL预处理后上述抗氧化物的表达呈浓度依赖性升高 (P均＜0.05) . (4) 各组心肌细胞缺氧损伤后凋亡的变化:与对照组相比, 缺氧组细胞凋亡率、Bax和Cyt C的蛋白表达水平均明显升高, Bcl-2的蛋白表达水平则明显降低 (P均＜0.05), ABL预处理后逆转了上述细胞凋亡率及凋亡相关蛋白的改变 (P均＜0.05), 且作用呈浓度依赖性 (P均＜0.05); (5) 各组心肌细胞缺氧损伤后相关信号通路的变化:与对照组相比, 缺氧组细胞的磷酸化p65、IKBα蛋白的表达水平均明显升高 (P均＜0.05), ABL预处理后上述蛋白表达水平呈浓度依赖性降低 (P均＜0.05) .结论:ABL可通过抑制NF-κB p65/IKBα信号通路对缺氧损伤的心肌细胞发挥保护性作用.

目的:研究杨桃根活性成分2-十二烷基-6-甲氧基-2,5-二烯-1,4-环己二酮(DMDD)对高糖诱导H9c2心肌细胞损伤的改善作用及机制.方法:将H9c2心肌细胞分为正常组、高糖组、渗透压对照组和DMDD高、中、低浓度组(8、4、2μmol/L).正常组和高糖组细胞分别加入低糖(含5.5 mmol/L葡萄糖,下同)、高糖DMEM培养基(含33.3 mmol/L葡萄糖,下同)培养48 h;渗透压对照组细胞加入含27.5 mmol/L甘露醇的低糖DMEM培养基培养48 h;DMDD各浓度组细胞先加入高糖DMEM培养基培养24 h,再加入含相应浓度DMDD的高糖DMEM培养基继续培养24 h.各组细胞培养结束后,采用MTT法检测细胞存活率;采用相应试剂盒检测细胞上清液中活性氧簇(ROS)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、乳酸脱氢酶(LDH)的活性;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)的水平;采用吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)染色法检测细胞凋亡情况;采用Western blot法检测细胞中凋亡相关蛋白[活化的胱天蛋白酶3(cleaved caspase-3)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)]的表达水平以及核因子κB(NF-κB)/NF-κB抑制蛋白α(IκBα)信号通路相关蛋白(NF-κB p65、IκBα)的磷酸化水平.结果:与正常组比较,高糖组细胞存活率、GSH-Px活性、Bcl-2蛋白表达水平均显著降低(P<0.01);ROS、LDH活性,TNF-α、IL-6水平,Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平和NF-κB p65、IκBα蛋白磷酸化水平均显著升高(P<0.01);细胞呈橙黄色荧光,且形态模糊的细胞明显增多,表现出明显的凋亡状态.渗透压对照组细胞上述指标与正常组比较差异无统计学意义.与高糖组比较,DMDD各浓度组细胞上述指标活性或水平(低浓度组细胞存活率、LDH活性除外)均显著逆转(P<0.05或P<0.01);细胞中橙黄色荧光明显减少,细胞形态较完整.结论:DMDD可改善高糖诱导的H9c2心肌细胞损伤;其作用机制可能与抑制氧化应激和炎症反应、调控凋亡相关蛋白和NF-κB/IκBα通路相关蛋白的表达有关.

目的 探讨砷化合物抗肿瘤多药耐药性(MDR)的作用及作用机制.方法 查阅相关文献,分别从细胞、分子、基因水平,以及相关通路阐述砷化合物抗肿瘤MDR的作用及作用机制.结果 三氧化二砷(ATO)联合维生素C、雄黄转化溶液(RST)均可抑制耐药性肿瘤细胞血管再生和转移;ATO、负载紫杉醇的亚砷酸钆纳米颗粒、ATO与阿霉素联用均可抑制耐药性肿瘤细胞侵袭和迁移;ATO、口服纳米硫化砷均可诱导肿瘤MDR细胞发生自噬.ATO,RTS,ATO-As4O6-顺铂的组合,白藜芦醇(RSV)和ATO联用,丁硫氨酸亚砜亚胺与ATO联用,As4S4均可抑制耐药相关蛋白的表达.ATO可抑制耐药酶谷胱甘肽S转移酶和DNA拓扑异构酶Ⅱ的表达;ATO与阿霉素联用可下调Stathmin表达.ATO,ATO联合RSV,As4S4均可抑制凋亡控制基因表达;ATO,ATO联合RSV均可抑制核因子κB;RST可下调MDR1基因;载有砷的双重药物(阿霉素和ATO)纳米药物系统协同DNA损伤和干预DNA修复.ATO、亚砷酸、亚砷酸钠、加马布他汀和p38丝裂原活化蛋白激酶抑制剂SB203580均可激活膜受体酪氨酸蛋白激酶信号传导途径(RAS/RAF/MAPK);As4S4,As4S4和L-丁硫氨酸-(S,R)-亚磺酰亚胺联用,单用ATO或与磷脂酰肌醇激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路抑制剂LY294002均可抑制PI3K-AKT信号通路;ATO可引发内质网应激反应;ATO可抑制Notch信号通路.结论 砷化合物能有效逆转肿瘤细胞的MDR,是极具潜力的抗肿瘤药物.

该研究基于Keap1/Nrf2与TLR4/NF-κB p65信号通路研究藏族药二十五味松石丸(Ershiwuwei Songshi Pills,ESP)改善对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)致小鼠肝损伤的作用机制.将昆明小鼠随机分为空白组,模型组,二十五味松石丸高(400 mg·kg-1)、中(200 mg·kg-1)、低(100 mg·kg-1)剂量组和乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)组.各给药组小鼠均连续给药14 d后,除空白组外,其余各组小鼠腹腔注射200 mg·kg-1 APAP,12 h后收集小鼠血清与肝脏组织.通过肝脏病理切片苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE),并检测小鼠血清中天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)水平以及肝组织匀浆中谷胱甘肽(glutathione,GSH)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)、总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)水平,观察与分析二十五味松石丸对APAP致小鼠肝损伤的保护作用.通过ELISA法测定小鼠血清中肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)、白细胞介素(interleukin-1 beta,IL-1β)与(interleukin-6,IL-6)水平,Western blot法测定小鼠肝细胞核内核转录因子E2相关因子2(nuclear transcription factor E2 related factor 2,Nrf2)、细胞质kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(kelch-like ECH-associated protein 1,Keap1)、肝脏内Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)以及细胞核内核因子-κB p65(nuclear factor-kappa B,NF-κB p65)蛋白表达,实时荧光定量PCR测定小鼠肝脏中谷氨酸半胱氨酸连接酶催化亚基(glutamate-cysteine ligase catalytic subunit,GCLC)、谷氨酸半胱氨酸连接酶调节亚基(glutamate-cysteine ligase regulatory subunit,GCLM)、血红素氧合酶1(heme oxygenase-1,HO-1)、还原型辅酶/醌氧化还原酶[NAD(P)H dehydrogenase quinone 1,NQO-1]基因mRNA相对表达水平,初步探究藏族药二十五味松石丸改善APAP致小鼠肝损伤的作用机制.结果显示,与模型组相比,二十五味松石丸给药组小鼠肝脏病理损伤程度有所改善;血清中AST、ALT水平有所降低;肝脏中GSH、SOD、CAT、T-AOC水平有所升高,MDA、MPO有所降低;血清TNF-α、IL-6水平有所降低;小鼠肝脏细胞质Keap1、细胞核NF-κB p65表达有所减少,细胞核Nrf2表达有所增加,肝脏TLR4表达无显著性差异;GCLC、GCLM、HO-1、NQO-1等抗氧化基因mRNA相对表达量也有所增加.研究结果表明,二十五味松石丸可减轻APAP引起的氧化损伤与炎症反应,其作用机制可能与Keap1/Nrf2信号通路以及TLR4/NF-κB p65通路上的信号转导因子有关.

目的 观察低聚原花青素对2,4二硝基氯苯(dinitrochlorobenzene,DNCB)诱导的小鼠皮肤损伤的氧化应激、炎症调控作用并探讨其机制.方法 使用DNCB建立小鼠皮损模型.低聚原花青素[50、100、200 mg/(kg-d)]灌胃处理皮损小鼠,观察记录皮损情况.ELISA法检测血清中活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、IgE、IL-4、IFN-γ、TNF-α的含量.Western blot检测组织中核因子2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)信号通路关键基因Nrf2、血红素氧化酶-1(HO-1)、磷酸酰胺腺嘌呤二核苷酸醌氧化还原酶-1(NQO-1)及Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核因子κB(NF-κB)信号通路关键基因TLR4、MyD88、NF-KB P65的蛋白水平.结果 与空白组相比,模型组小鼠皮损评分显著升高(4.58±0.59 vs.1.25±0.18,P＜0.05),血清 ROS 荧光强度、MDA、GSH含量显著升高(7.44±0.55 vs.28.66±3.42,6.61±0.62 vs.17.85±3.38,110.38±7.47 vs.66.60±4.78;P＜0.05),Nrf2、HO-1、NQO-1 蛋白水平显著升高(0.45±0.07 vs.0.75±0.03,0.25±0.02 vs.0.51±0.06,0.28±0.02 vs.0.57±0.01;P＜0.05),血清 IgE、IL-4、IFN-γ、TNF-α 的含量也显著升高(1.28±0.16 vs.2.59±0.32,11.24±3.38 vs.27.49±3.72,29.01±1.74 vs.47.74±3.38,15.98±2.51 vs.32.51±3.89;P＜0.05),TLR4、MyD88和 NF-κB P65的蛋白水平也显著升高(0.23±0.03 vs.0.60±0.04,0.33±0.03 vs.0.74±0.04,0.36±0.02 vs.0.86±0.04;P＜0.05);低聚原花青素(低剂量、中剂量、高剂量)显著负向调控上述指标的变化.结论 低聚原花青素对DNCB诱导的小鼠皮损具有抗氧化、抗炎功效,其机制与抑制Nrf2/ARE信号通路和TLR4/MyD88/NF-κB信号通路活性有关.