目的 探讨麦冬多糖(OJP)对烟曲霉菌性角膜炎(AFK)小鼠的治疗作用及机制.方法 通过对小鼠角膜注射烟曲霉菌(AF)悬浮液建立AFK模型,将54只建模成功的AFK小鼠随机分为5组:模型组(n=11)、低剂量组(n=11)、中剂量组(n=11)、高剂量组(n=11)和激动剂组(n=10);取未建模的小鼠作为对照组(n=10).低剂量组、中剂量组和高剂量组小鼠分别用50 μL浓度为5,10,20 g/L的OJP溶液滴眼.激动剂组小鼠用50μL浓度为20g/L的OJP溶液滴眼,同时用0.25 mg/kg的Toll样受体4(TLR4)激动剂CRX-527溶液灌胃.对照组和模型组小鼠分别用50 μL生理盐水滴眼.各组小鼠均给药1周.治疗结束24 h后,在裂隙灯显微镜下进行角膜炎症评分.采用苏木素伊红(HE)染色观察角膜形态;采用ELISA法检测角膜组织上清液中促炎因子白介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6水平;采用qRT-PCR分析角膜IL-1 β、TNF-α、IL-6、TLR4、髓样分化因子 88(MyD88)、核因子-κB(NF-κB)p65 的 mRNA 水平;采用 Western blot分析角膜 TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白相对表达.结果 与对照组比较,模型组大鼠的角膜炎症评分升高(P＜0.05),角膜出现明显病变,角膜IL-1β、TNF-α、IL-6蛋白表达和mRNA水平均升高(P＜0.05),角膜TLR4、MyD88和NF-κB p65的mRNA水平和蛋白表达均升高(P＜0.05).与模型组比较,低剂量组、中剂量组和高剂量组大鼠的角膜炎症评分降低(P＜0.05),角膜病变减轻,角膜IL-1β、TNF-α、IL-6蛋白表达和mRNA水平均降低(P＜0.05),角膜TLR4、MyD88和NF-κB p65的mRNA水平和蛋白表达均降低(P＜0.05).与低剂量组比较,中剂量组和高剂量组大鼠的角膜炎症评分降低(P＜0.05),角膜病变减轻,角膜IL-1β、TNF-α、IL-6蛋白表达和mRNA水平均降低(P＜0.05),角膜TLR4、MyD88和NF-κB p65的mRNA水平和蛋白表达均降低(P＜0.05).与高剂量组比较,激动剂组大鼠的角膜炎症评分升高(P＜0.05),角膜病变加重,角膜IL-1β、TNF-α、IL-6蛋白表达和mRNA水平均升高(P＜0.05),角膜TLR4、MyD88和NF-κB p65的mRNA水平和蛋白表达均升高(P＜0.05).结论 OJP可能通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路减轻AFK小鼠角膜炎症损伤.

目的:探讨生脉强心颗粒对慢性心力衰竭气阴两虚夹瘀证病人Toll样受体4(TLR4)/髓分化因子88(MyD88)/核因子-κB(NF-κB)信号通路及心肌纤维化的影响.方法:选取2021年10月—2022年10月黑龙江中医药大学附属第二医院收治的慢性心力衰竭气阴两虚夹瘀证病人80例,采用随机数字表法分为研究组与对照组,每组40例.对照组采用常规治疗方案,研究组在对照组基础上加用生脉强心颗粒治疗.比较两组临床疗效及不良反应发生率,观察两组治疗前后中医证候积分、TLR4、MyD88及NF-κB的mRNA及蛋白表达,心肌纤维化指标[Ⅲ型前胶原氨基末端肽(PⅢNP)、转化生长因子β1(TGF-β1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)]水平.结果:研究组临床疗效总有效率明显高于对照组,差异有统计学意义(90.0％与65.0％,P＜0.05).治疗后,研究组中医证候各项积分均明显低于对照组(P＜0.05),TLR4、MyD88及NF-κB的mRNA及蛋白表达均明显低于对照组(P＜0.05),血清TGF-β1、MMP-2及PⅢNP水平均明显低于对照组(P＜0.05).两组不良反应发生率比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:生脉强心颗粒治疗慢性心力衰竭气阴两虚夹瘀证病人,可缓解临床症状,抑制TLR4/MyD88/NF-KB信号通路及心肌纤维化进程,且安全性较好.

研究参附注射液对慢性心力衰竭小鼠的治疗作用及其对巨噬细胞极化的影响.将C57BL/6J小鼠随机分为正常组、造模组.通过腹腔注射异丙肾上腺素(ISO,7.5 mg·kg-1,28 d)建立心力衰竭模型,通过检测心功能、N-端前脑钠肽(NT-pro-BNP)判断模型是否复制成功.将造模成功的小鼠随机分为模型组、参附注射液(SFI)组、TAK-242组,并予以相应药物腹腔注射15 d.利用超声心动图评价心脏功能;HE染色检测病理形态;ELISA检测血清NT-proBNP、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)、精氨酸1(Arg-1)水平;流式细胞术检测心脏巨噬细胞相对含量及M1/M2极化状态;qPCR、Western blot检测Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)通路相关mRNA及蛋白表达变化.结果显示,与正常组比较,模型组小鼠左室射血分数(LVEF)、短轴缩短分数(LVFS)降低,左室舒张末内径(LVIDd)、左室收缩末内径(LVIDs)、NT-proBNP、TNF-α、IL-6 升高(P＜0.01);心脏组织中巨噬细胞数量增多(P＜0.05),M1-F4/80+CD86+值上升(P＜0.01),M2-F4/80+CD163+值下调(P＜0.05);心肌组织TLR4、髓样分化因子88(MyD88)、IκB激酶α(IKKα)、NF-κB p65 mRNA及蛋白表达升高(P＜0.05,P＜0.01).与模型组比较,SFI 组、TAK-242 组小鼠 LVEF、LVFS、IL-10、Arg-1 升高,LVIDd、LVIDs、NT-proBNP、TNF-α、IL-6 降低(P＜0.05,P＜0.01);心脏 F4/80+CD11b+(巨噬细胞)、M1-F4/80+CD86+值下调,M2-F4/80+CD163+值上升(P＜0.01,P＜0.05);心肌组织TLR4、MyD88、IKKα、NF-κB p65 mRNA及蛋白表达降低(P＜0.05,P＜0.01).综上,慢性心力衰竭小鼠存在M1/M2型巨噬细胞极化失衡,以M1型巨噬细胞为主;参附注射液可通过调控TLR4/NF-κB信号通路,促进巨噬细胞向M2极化,抑制M1型巨噬细胞活化,减轻心力衰竭炎症反应.

目的 探究熊果酸(UA)对I型糖尿病(T1DM)大鼠TLR4/NF-KB信号通路及Th17/Treg细胞的影响.方法 腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制备T1DM大鼠模型,随机分为空白组(Control组)、模型组(Model组)、二甲双胍组(MET组)和熊果酸组(UA组).记录大鼠体重、血糖等一般情况,灌胃6周后采集大鼠外周血、胰腺组织评估胰岛素干预情况.免疫组化观察胰腺组织病理变化;鲎试剂检测血清脂多糖(LPS)含量变化;qRT-PCR法检测胰腺 TLR4、MyD88、IκBα、NF-κB p65 mRNA 的表达,以及转录因子 RORγt、Foxp3 mRNA 的表达;Western blot 法检测胰腺TLR4、MyD88、IKBα、NF-κB p65蛋白的表达,以及转录因子RORγt、Foxp3蛋白的表达;流式细胞术检测外周血 Th17、Treg细胞比例变化;ELISA法检测血清TNF-α、IL-6、IL-1β含量变化.结果 经STZ诱导的糖尿病大鼠经6周灌胃处理,与模型组相比,二甲双胍组大鼠和熊果酸组大鼠空腹血糖(FBG)均明显下降,体重均明显升高;胰岛β细胞炎性浸润减少;TLR4、MyD88、IκBα、NF-κB p65、RORγt mRNA和蛋白的表达明显降低;LPS含量明显下降;IκBα、Foxp3 mRNA和蛋白表达明显升高;Th17/Treg比值明显下降;TNF-α、IL-6、IL-1β含量明显下降.结论 UA可通过减少LPS移位,抑制TLR4/NF-KB通路,下调RORγt并上调Foxp3的表达纠正T1DM大鼠Th17/Treg细胞比例失衡来改善大鼠症状.

目的:基于Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路分析妇科千金胶囊联合头孢地尼治疗慢性盆腔炎的疗效及其机制.方法:根据随机数字表法,将2022年2月～2023年2月期间西北妇女儿童医院收治的慢性盆腔炎患者(n=148)分为对照组(头孢地尼治疗,74例)和研究组(头孢地尼、妇科千金胶囊联合治疗,74例).对比两组临床症状消失时间、炎症因子水平[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)、白细胞介素-8(IL-8)]、血液流变学指标和TLR4/NF-κB信号通路相关指标.结果:研究组的腹部坠胀、疼痛缓解时间和腰骶部酸痛缓解时间均短于对照组(P＜0.05).治疗后两组CRP、TNF-α、IL-8下降,且研究组较对照组低(P＜0.05).两组治疗后红细胞聚集指数、全血高切/低切黏度、纤维蛋白原下降,且研究组低于对照组(P＜0.05).两组治疗后TLR4、髓样分化因子88(MyD88)、NF-KB下降,且研究组低于对照组(P＜0.05).结论:慢性盆腔炎患者采用妇科千金胶囊联合头孢地尼治疗,可改善临床症状,调节炎症因子水平和血液流变学水平,可能与调节TLR4NF-κB信号通路有关.

目的 探究壮药双路通脑方对缺血性脑卒中大鼠脑组织Toll样受体(TLR)4/核因子(NF)-κB信号通路及肠组织损伤、肠道菌群的影响.方法 将50只大鼠建立缺血性脑卒中模型,随机分为低(7.16 g/kg)、中(14.33 g/kg)、高(28.66 g/kg)剂量双路通脑方组和模型(M)组,并设假手术(S)组,每组10只.制作模型前30 min予以相应剂量双路通脑方颗粒溶液灌胃,在大鼠成模清醒后1 h给予该颗粒灌胃,连续6 d,每天2次.M组和S组同步灌胃无菌水.2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)法测量脑梗死体积;酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、干扰素(INF)-γ水平;Western印迹检测脑TLR4/NF-κB通路蛋白及结肠密封蛋白(Occludin)、闭合蛋白(Claudin)-1、紧密连接蛋白(ZO)-1蛋白表达;苏木素-伊红(HE)染色观察结肠组织结构变化;16SrDNA扩增测序法分析肠道菌群构成.结果 M组脑梗死比例较S组显著增加(P＜0.05);中、高剂量双路通脑方组脑梗死比例较M组显著降低(P＜0.05),且高剂量双路通脑方组最低,后续以高剂量28.66 g/kg进行研究.与S组相比,M组结肠黏膜结构损伤,TNF-α、1L-6、INF-γ、TLR4、髓样细胞分化因子(MyD)88 蛋白及 p-核因子 κB 抑制蛋白(IκB)/IκB、p-NF-κB p65/NF-κB p65 水平显著较高,ZO-1、Occludin、Claudin-1 蛋白水平显著较低(均P＜0.05).与M组相比,双路通脑方治疗可改善结肠黏膜结构,TNF-α、IL-6、INF-γ、TLR4、MyD88蛋白及p-IκB/IκB、p-NF-κB p65/NF-κB p65水平明显降低,ZO-1、Occludin、Claudin-1蛋白水平显著较高(P＜0.05).肠道菌群分析显示,与S组相比,M组菌群多样性和丰度降低,在门水平,M组厚壁菌门丰度和F/B值明显升高,而拟杆菌门明显降低(P＜0.05);在属水平,M组瘤球菌属、拟杆菌属等丰度明显较高,双歧杆菌属、乳杆菌属等丰度明显较低(P＜0.05).与M组相比,双路通脑方治疗可上调菌群多样性和丰度,明显提高拟杆菌门丰度,提高降低厚壁菌门丰度和F/B值,明显增加双歧杆菌属、乳杆菌属等丰度,明显降低艾克曼菌属等丰度(均P＜0.05).结论 双路通脑方可重塑肠道菌群,恢复肠道屏障,并抑制脑TLR4/NF-κB通路活化,实现对缺血性脑卒中大鼠的治疗作用.

目的 探讨脓毒症合并心肌损伤患者Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)信号通路与心肌损伤标志物的相关性.方法 回顾性选取2020年6月至2022年6月应急管理部应急总医院收治的脓毒症患者84例作为研究对象,根据患者有无心肌损伤分为无心肌损伤组(n=59)和心肌损伤组(n=25).以酶联免疫吸附试验法检测血清脑钠肽(BNP)、N末端B型脑钠肽(NT-proBNP)、人心型脂肪酸结合蛋白(h-FABP)、心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)、肌酸激酶同工酶(CK-MB);以实时荧光定量PCR法检测外周血单个核细胞(PBMC)中TLR4、NF-KB、MyD88 mRNA相对表达量.比较两组血清 BNP、NT-proBNP、h-FABP、cTn Ⅰ、CK-MB 水平,以及 PBMC 中 TLR4、NF-KB、MyD88 mR-NA 相对表达量.以Pearson相关系数分析血清BNP、NT-proBNP、h-FABP、cTn Ⅰ、CK-MB水平与TLR4、NF-κB、MyD88相对表达量的相关性.结果 心肌损伤组血清BNP、NT-proBNP、h-FABP、cTnⅠ、CK-MB水平分别为(442.17 ±85.06)ng/L、(2 306.94±417.39)pg/mL、(16.09±3.17)μg/L、(0.43±0.11)μg/L、(11.47±3.75)μg/mL,均高于无心肌损伤组[(374.39±51.82)ng/L、(418.52±112.64)pg/mL、(13.27±3.84)μg/L、(0.24±0.07)μg/L、(2.16± 0.41)μg/mL],差异均有统计学意义(P＜0.05).心肌损伤组TLR4、NF-KB、MyD88 mRNA相对表达量分别为2.73± 0.42、2.33±0.38、1.94±0.47,均高于无心肌损伤组(1.68±0.35、1.49±0.24、1.22±0.29),差异均有统计学意义(P＜0.05).经相关性分析,血清 BNP、NT-proBNP、h-FABP、cTn Ⅰ、CK-MB 水平与 TLR4、NF-κB、MyD88 mRNA 相对表达量呈正相关(P＜0.05).结论 脓毒症合并心肌损伤患者血清BNP、NT-proBNP、h-FABP、cTn Ⅰ、CK-MB等标志物水平出现明显升高,其机制可能与TLR4/NF-κB信号通路的激活有关.

目的:基于Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核因子-κB(NF-κB)信号通路探讨安肠汤联合艾灸治疗肝郁脾虚证腹泻型肠易激综合征(IBS)的疗效及其机制.方法:采用随机数字表法,将广州中医药大学第一附属医院在2019年4月～2022年12月期间收治的108例腹泻型IBS患者分为对照组(常规药物联合艾灸治疗,n=54)和研究组(对照组基础上接受安肠汤治疗,n=54).对比两组疗效、中医证候总积分、IBS症状严重程度问卷(IBS-SSS)评分、肠屏障功能指标、TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关信使核糖核酸(mRNA)表达水平.结果:研究组的临床总有效率高于对照组(P＜0.05).两组治疗后中医证候总积分、IBS-SSS评分下降,且研究组低于对照组(P＜0.05).两组治疗后肠脂肪酸结合蛋白(IFABP)、D-乳酸及二胺氧化酶(DAO)下降,且研究组低于对照组(P＜0.05).两组治疗后TLR4、MyD88、NF-KB mRNA表达下降,且研究组低于对照组(P＜0.05).结论:安肠汤联合艾灸治疗肝郁脾虚证腹泻型IBS患者,可有效改善临床症状和肠屏障功能,疗效较好,可能与调节TLR4/MyD88/NF-κB信号通路有关.

目的:探讨糖皮质激素治疗IgA肾病大鼠对骨密度变化和TLR4信号通路活性的影响.方法:选择5月龄SPF级SD雄性大鼠共60只,平均体重185 g,随机分为4组,分别为对照组、非激素组、激素低剂量组和高剂量组,每组各15只.采用牛血清白蛋白灌胃+CC14和蓖麻油皮下注射+脂多糖尾静脉注射法复制IgA肾病模型,周期为9周.非激素组采用盐酸贝那普利片(1.041 mg/kg/d),激素低剂量组采用甲泼尼龙15 mg/kg/d,高剂量组采用甲泼尼龙30 mg/kg/d,持续灌胃10周至实验结束.检测各组尿红细胞计数和24h尿蛋白定量,血清肌酐和尿素氮,采用双能X射线吸收法测量股骨的骨密度值,Micro-CT骨扫描并计算骨小梁微观结构参数,包括骨小梁数、骨小梁厚度和体积分数,Western blot法检测骨组织中Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子(MyD88)和核因子-κB(NF-κB)蛋白.结果:各组大鼠均存活至实验结束,激素低剂量组和高剂量组治疗后尿红细胞计数、24h尿蛋白定量、血清肌酐和尿素氮均显著降低,骨密度值、骨小梁数、骨小梁厚度和体积分数也显著下降,但是TLR4、MyD88和NF-κB蛋白表达量明显升高(P＜0.05).结论:糖皮质激素治疗IgA肾病能够改善临床症状和肾功能,但同时降低了骨密度和改变了骨小梁结构,可能与骨组织TLR4信号通路的异常激活有关.

目的:观察股骨头坏死愈胶囊治疗激素性股骨头坏死(steroid-induced osteonecrosis of femoral head,SONFH)的效果,基于多重免疫组化(multiplex immunohistochemistry,mIHC)技术探讨其治疗SONFH的作用机制.方法:将100只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、低剂量药物治疗组、高剂量药物治疗组.将模型组、低剂量药物治疗组、高剂量药物治疗组大鼠采用改良的脂多糖联合甲泼尼龙法建立SONFH模型.造模结束后,低剂量药物治疗组按照0.33 g·kg-1的剂量给予股骨头坏死愈胶囊溶液(将股骨头坏死愈胶囊粉剂溶于水中)灌胃,高剂量药物治疗组按照0.67 g·kg-1的剂量给予股骨头坏死愈胶囊溶液灌胃,正常对照组和模型组给予等量生理盐水灌胃.每日灌胃2次,连续治疗4周.治疗结束后,采用Micro-CT扫描分析大鼠股骨头松质骨微结构,组织切片染色观察大鼠股骨头组织病理学改变,并采用mIHC分析巨噬细胞极化及Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)/髓样分化因子初次应答基因 88(myeloid differentiation primary response gene 88,MyD88)/核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路相关蛋白表达.结果:①一般结果.模型组1只大鼠于造模后死亡,低剂量药物治疗组和高剂量药物治疗组分别有3只和2只大鼠在治疗过程中死亡.正常对照组大鼠精神状态良好、进食正常、毛发光泽无脱落,模型组、低剂量药物治疗组、高剂量药物治疗组大鼠在造模开始后第3天出现神情不振、进食减少、少量脱毛,1周后精神、进食等逐渐恢复.②大鼠股骨头松质骨微结构Micro-CT扫描分析结果.模型组大鼠股骨头松质骨骨体积分数、骨小梁厚度、骨小梁数量小于正常对照组(P=0.000,P=0.000,P=0.000),骨小梁分离度大于正常对照组(P=0.000);低剂量药物治疗组大鼠股骨头松质骨骨体积分数、骨小梁厚度与模型组的差异均无统计学意义(P=0.052,P=0.071),骨小梁数量大于模型组(P=0.012),骨小梁离散度小于模型组(P=0.001);高剂量药物治疗组大鼠股骨头松质骨骨体积分数、骨小梁厚度、骨小梁数量大于模型组(P=0.001,P=0.011,P=0.000),骨小梁离散度小于模型组(P=0.001),骨体积分数、骨小梁厚度、骨小梁数量、骨小梁离散度与低剂量药物治疗组的差异均无统计学意义(P=0.146,P=0.414,P=0.086,P=0.146).③大鼠股骨头组织病理学观察结果.模型组大鼠股骨头空骨陷窝率、骨坏死发生率均高于正常对照组(P=0.000,P=0.000);低剂量药物治疗组大鼠股骨头空骨陷窝率低于模型组(P=0.000),骨坏死发生率与模型组的差异无统计学意义(P=0.054);高剂量药物治疗组大鼠股骨头空骨陷窝率和骨坏死发生率均低于模型组(P=0.000,P=0.000),空骨陷窝率低于低剂量药物治疗组(P=0.049),骨坏死发生率与低剂量药物治疗组的差异无统计学意义(P=0.556).④巨噬细胞极化mIHC分析结果.模型组大鼠股骨头M1型巨噬细胞、M2型巨噬细胞占比均高于正常对照组(P=0.000,P=0.000);低剂量药物治疗组大鼠股骨头M1型巨噬细胞、M2型巨噬细胞占比与模型组的差异均无统计学意义(P=0.270,P=0.533);高剂量药物治疗组大鼠股骨头M1型巨噬细胞占比低于模型组(P=0.009),与低剂量药物治疗组的差异无统计学意义(P=0.131),M2型巨噬细胞占比高于模型组和低剂量药物治疗组(P=0.006,P=0.038).⑤TLR4/MyD88/NF-KB信号通路蛋白表达mIHC分析结果.模型组大鼠股骨头TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白相对表达量均高于正常对照组(P=0.000,P=0.000,P=0.000);低剂量药物治疗组大鼠股骨头TLR4、MyD88蛋白相对表达量与模型组的差异均无统计学意义(P=0.268,P=0.280),NF-κB p65蛋白相对表达量低于模型组(P=0.034);高剂量药物治疗组TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白相对表达量均低于模型组和低剂量药物治疗组(TLR4:P=0.002,P=0.040;MyD8:P=0.000,P=0.013;NF-κB p65:P=0.000,P=0.039).结论:股骨头坏死愈胶囊治疗SONFH,能够显著改善股骨头骨微结构、抑制骨坏死,其作用具有一定的剂量依赖性;其作用机制与调控TLR4/MyD88/NF-KB信号通路及巨噬细胞极化有关.