目的:初步探究微小RNA-203（miR-203）调控锌指蛋白281（ZNF281）对黑素瘤细胞增殖、迁移的影响。方法:常规培养人血管内皮细胞系ECV304、人黑素瘤细胞系A375、M14、SK-MEL-28、SK-MEL-2，实时荧光定量PCR检测各细胞系中miR-203表达情况，Western免疫印迹法检测各细胞系中ZNF281蛋白水平。A375、M14细胞分别分为5组：对照组（细胞正常培养）、miR-203模拟物对照组（加入miR-203模拟物阴性对照）、miR-203抑制剂对照组（加入miR-203抑制剂阴性对照）、miR-203模拟物组（加入miR-203模拟物）、miR-203抑制剂组（加入miR-203抑制剂）。实时荧光定量PCR检测各组A375、M14细胞中miR-203的表达，CCK8法检测各组A375、M14细胞增殖活性，Transwell实验检测各组A375、M14细胞迁移数量，Western免疫印迹法检测各组A375、M14细胞中ZNF281蛋白的表达。双荧光素酶验证miR-203与ZNF281的靶向关系。多组比较采用单因素方差分析，两两比较采用SNK- q法。 结果:与血管内皮细胞系ECV304相比，黑素瘤细胞系A375、M14、SK-MEL-28、SK-MEL-2中miR-203表达水平较低（均 P < 0.05），ZNF281蛋白水平较高（均 P < 0.05）。与对照组、miR-203模拟物对照组、miR-203抑制剂对照组相比，miR-203模拟物组A375、M14细胞中miR-203水平均显著升高（ F = 487.632、68.454，均 P < 0.05），细胞迁移数量均显著降低（均 P < 0.05），ZNF281蛋白表达均显著降低（均 P < 0.05）；miR-203抑制剂组A375、M14细胞中miR-203表达均显著降低（均 P < 0.05），细胞迁移数量均显著增加（均 P < 0.05），A375细胞中ZNF281蛋白表达显著升高（均 P < 0.05），36、48、60、72 h A375细胞增殖活性显著升高（均 P < 0.05），24、36、48、60、72 h M14细胞增殖活性均显著升高（均 P < 0.05）。miR-203与ZNF281之间存在靶位点。 结论:上调miR-203表达可抑制黑素瘤细胞增殖、迁移，下调miR-203表达可促进黑素瘤细胞增殖、迁移，可能通过调控ZNF281的表达实现。

目的:探讨问号钩端螺旋体(简称钩体)跨血管内皮细胞转运分子机制。方法:采用Transwell法了解问号钩体赖株穿越人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)单层能力。采用透射电镜和激光共聚焦显微镜法检测HUVEC内吞问号钩体后形成内吞泡情况。采用细胞内吞抑制试验确定HUVEC内吞问号钩体方式。采用激光共聚焦显微镜法检测HUVEC胞内问号钩体与溶酶体标志分子LAMP1共定位情况。采用暗视野显微镜Petroff-Hausser计数法检测HUVEC胞内问号钩体出胞情况。结果:问号钩体赖株能迅速穿越HUVEC细胞单层。问号钩体通过PI3K-微丝依赖的细胞内吞方式进入HUVEC并形成内吞泡。HUVEC胞内问号钩体不与LAMP1共定位，提示问号钩体内吞泡不与溶酶体融合。HUVEC胞内问号钩体通过FAK-微丝/微管途径出胞。结论:问号钩体通过跨细胞转运方式穿越人血管内皮细胞导致体内播散并加重病情。

目的:探究类泛素蛋白FAT10对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的血管内皮炎症因子释放的作用机制。方法:选取雄性16周龄WKY大鼠3只和人脐静脉内皮细胞（HUVEC）、人乳腺癌细胞（MDA-MB-231）、人血管平滑肌细胞（VSMC）。使用Western blot检测大鼠胸主动脉、颈动脉、肾动脉以及上述细胞中FAT10的表达。使用HUVEC细胞筛选FAT10表达量最高时AngⅡ的浓度及作用时间。构建空白对照质粒、过表达FAT10质粒、无效干扰质粒及干扰FAT10质粒，使用上述质粒转染HUVEC细胞。在加入100 nmol/L AngⅡ培养36 h后，采用Western blot 检测炎症因子单核细胞趋向性蛋白-1（MCP-1）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的蛋白表达水平；采用激光共聚焦显微镜检测细胞内活性氧生成水平；对转染空白对照质粒和过表达FAT10质粒的细胞应用活性氧清除剂N-乙酰基-L-半胱氨酸（NAC），采用Western blot检测应用或不应用NAC时MCP-1、TNF-α蛋白的表达水平。结果:FAT10在正常血压大鼠的颈动脉、胸主动脉、肾动脉以及HUVEC、VSMC、MDA-MB-231细胞系中均有表达。在HUVEC中，随着AngⅡ作用时间及浓度增加，FAT10的表达量逐渐增高，且在100 nmol/L AngⅡ作用36 h时达最高（ P<0.01）。在AngⅡ诱导下，过表达FAT10的HUVEC中炎症因子MCP-1（ P<0.001）与TNF-α的蛋白表达显著增加（ P<0.01），干扰FAT10的HUVEC中MCP-1与TNF-α的蛋白表达降低（ P均<0.001）。过表达FAT10的HUVEC中活性氧生成水平增加（ P<0.001），干扰FAT10的HUVEC中活性氧生成水平降低（ P<0.05）。应用NAC后，过表达FAT10的HUVEC中炎症因子MCP-1与TNF-α的蛋白表达升高趋势被逆转（ P均<0.05）。 结论:FAT10通过增加细胞内活性氧生成水平而促进AngⅡ诱导的内皮细胞炎症因子释放。

目的:研究X射线对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中缝隙连接蛋白43(Cx43)的表达、分布和细胞刚性的影响，初步探讨Cx43对受照细胞刚性的调控作用。方法:采用Western blot方法检测10 Gy X射线照射后不同时间(0、6、12、24和48 h)和不同剂量X射线(0、2.5、5、10和20 Gy)照射后12 h HUVEC细胞中Cx43表达水平的改变，以及不同剂量(0、5和10 Gy)X射线照射后不同时间(3、6、24和48 h)Cx43 3个磷酸化位点(Ser279/282、Ser368和Tyr265)磷酸化水平的变化。采用细胞免疫荧光方法检测Cx43蛋白在受照HUVEC细胞中的分布变化。采用原子力显微镜检测受照细胞在探针压入不同深度(50、100和200 nm)时杨氏模量(细胞刚性)的变化，以及Cx43过表达对受照细胞杨氏模量(细胞刚性)的影响。结果:10 Gy X射线照射后6、12、24、48 h，HUVEC细胞中Cx43表达量降低( t＝3.262、3.708、3.686、6.825， P<0.05)，且在2.5、5、10和20 Gy照射后24 h Cx43表达水平的降低与受照剂量呈现剂量依赖性( t＝3.034、10.720、13.130、13.650， P<0.05)。5、10和20 Gy X射线照射后24 h，HUVEC细胞中Cx43分布由细胞间隙转移入核及核周，照射后24和48 h，Cx43的Ser368位点磷酸化水平升高并且随剂量增加而增加。10 Gy X射线照射HUVEC细胞后24 h，照射组与对照组相比，在探针压入100和200 nm时，杨氏模量均明显降低( t＝3.362、5.122， P<0.05)；过表达Cx43的受照组与空载体受照组相比，在探针压入100和200 nm时，杨氏模量增高( t＝2.674、4.398， P<0.05)。 结论:X射线照射可导致HUVEC细胞内Cx43 Ser368位点磷酸化，促进Cx43降解和分布变化，降低细胞刚性。提高Cx43的表达水平，有助于受照细胞刚性的恢复，提示Cx43可能是调控X射线致血管内皮细胞损伤的作用靶点。

目的:分析瞬时受体电位香草酸亚型4（TRPV4）激活对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）功能及内皮-间质转化（EndMT）的作用，并探讨TRPV4激活对大鼠穿支皮瓣血流灌注和成活的影响及其机制。方法:采用实验研究方法。取第3~6代HUVEC进行实验，分为0.5 μmol/L 4α-佛波醇12，13-二癸酸酯（4αPDD）组、1.0 μmol/L 4αPDD组、3.0 μmol/L 4αPDD组、10.0 μmol/L 4αPDD组、磷酸盐缓冲液（PBS）组，分别采用相应终物质的量浓度的4αPDD及PBS培养，采用细胞计数试剂盒8（CCK-8）法检测培养6、12 h细胞增殖活性。另取细胞分为PBS组、1 μmol/L 4αPDD组、3 μmol/L 4αPDD组，同前处理并检测培养6、12、24、48 h的细胞增殖活性；采用划痕试验检测划痕后12、24、48 h剩余划痕面积，并计算剩余划痕面积百分比；采用Transwell实验检测培养24、48 h细胞迁移数量；采用成管实验检测培养4、8 h管状结构数量；采用蛋白质印迹法检测培养24 h细胞上皮钙黏素、神经钙黏素、Slug、Snail蛋白表达。体外实验每组各时间点样本数均为3。取36只8~10周龄雄性SD大鼠，按随机数字表法分为皮瓣延迟组、4αPDD组和生理盐水组，每组12只，均建立背部髂腰动脉穿支皮瓣模型。皮瓣延迟组大鼠仅于皮瓣移植术前1周行皮瓣延迟。4αPDD组和生理盐水组大鼠不行皮瓣延迟，在术前10 min及术后24、48 h，分别经腹腔注射4αPDD和等量的生理盐水。分别于术后0（即刻）、1、4、7 d，行大体观察并计算术后7 d的皮瓣成活率；于术后1、4、7 d，采用激光散斑对比成像技术检测皮瓣血流灌注；术后7 d，采用免疫组织化学染色法检测皮瓣闭塞血管区域微血管密度。体内实验每组各时间点样本数均为12。对数据行析因设计方差分析、重复测量方差分析、单因素方差分析、LSD- t检验、Bonferroni校正。 结果:培养6、12 h，PBS组、0.5 μmol/L 4αPDD组、1.0 μmol/L 4αPDD组、3.0 μmol/L 4αPDD组、10.0 μmol/L 4αPDD组细胞增殖活性组间总体比较，差异均无统计学意义（ P>0.05）。培养6、12、24、48 h，PBS组、1 μmol/L 4αPDD组、3 μmol/L 4αPDD组细胞增殖活性组间总体比较，差异均无统计学意义（ P>0.05）。划痕后12 h，1 μmol/L 4αPDD组、3 μmol/L 4αPDD组细胞剩余划痕面积百分比均与PBS组相近（ P>0.05）；划痕后24、48 h，与PBS组比较，3 μmol/L 4αPDD组细胞剩余划痕面积百分比均明显降低（ t值分别为2.83、2.79， P<0.05），1 μmol/L 4αPDD组细胞剩余划痕面积百分比均无明显变化（ P>0.05）。培养24 h，1 μmol/L 4αPDD组、3 μmol/L 4αPDD组细胞迁移数量均与PBS组相近（ P>0.05）；培养48 h，1 μmol/L 4αPDD组、3 μmol/L 4αPDD组细胞迁移数量均明显多于PBS组（ t值分别为6.20、9.59， P<0.01）。培养4 h，1 μmol/L 4αPDD组、3 μmol/L 4αPDD组细胞管状结构数量均明显多于PBS组（ t值分别为4.68、4.95， P<0.05或 P<0.01）；培养8 h，1 μmol/L 4αPDD组、3 μmol/L 4αPDD组细胞管状结构数量均与PBS组相近（ P>0.05）。培养24 h，与PBS组比较，3 μmol/L 4αPDD组细胞上皮钙黏素的蛋白表达明显降低（ t=5.13， P<0.01），1 μmol/L 4αPDD组细胞上皮钙黏素的蛋白表达无明显变化（ P>0.05）；3 μmol/L 4αPDD组细胞神经钙黏素蛋白表达明显升高（ t=4.93， P<0.01），1 μmol/L 4αPDD组细胞神经钙黏素的蛋白表达无明显变化（ P>0.05）；1 μmol/L 4αPDD组和3 μmol/L 4αPDD组细胞Slug的蛋白表达均明显升高（ t值分别为3.85、6.52， P<0.05或 P<0.01）；3 μmol/L 4αPDD组细胞Snail的蛋白表达明显升高（ t=4.08， P<0.05），1 μmol/L 4αPDD组细胞Snail的蛋白表达无明显变化（ P>0.05）。1 μmol/L 4αPDD组和3 μmol/L 4αPDD组细胞上皮钙黏素、神经钙黏素、Slug、Snail的蛋白表达组间两两比较，差异均无统计学意义（ P>0.05）。术后0 d，3组大鼠皮瓣一般情况均良好；术后1 d，3组大鼠皮瓣远端均出现青紫肿胀；术后4 d，3组大鼠皮瓣肿胀消退、远端变成暗褐色、发生坏死，其中生理盐水组大鼠皮瓣坏死面积比4αPDD组和皮瓣延迟组大；术后7 d，3组大鼠皮瓣坏死面积基本稳定，其中皮瓣延迟组大鼠皮瓣远端坏死面积最小。术后7 d，4αPDD组［（80±13）%］和皮瓣延迟组［（87±9）%］大鼠的皮瓣成活率相近（ P>0.05）且均明显高于生理盐水组［（70±11）%， t值分别为2.24、3.65， P<0.05或 P<0.01］。术后1 d，3组大鼠皮瓣整体血流信号基本一致，闭塞血管区域的血流信号均相对较强，远端均存在一定程度的灌注不足。术后4 d，3组大鼠皮瓣存活区与坏死区分界渐清晰，闭塞血管区域的血流信号增强，其中生理盐水组大鼠皮瓣远端低灌注区范围大于皮瓣延迟组和4αPDD组。术后7 d，3组大鼠皮瓣整体的血流信号基本稳定，其中皮瓣延迟组和4αPDD组大鼠皮瓣闭塞血管区域及整体血流信号强度均明显大于生理盐水组。术后7 d，4αPDD组和皮瓣延迟组大鼠皮瓣闭塞血管区域中的微血管密度相近（ P>0.05）且均明显高于生理盐水组（ t值分别为4.11、5.38， P<0.01）。 结论:TRPV4激活后可能通过EndMT机制促进人血管内皮细胞的迁移和成管，从而增加穿支皮瓣的血流灌注、闭塞血管区域微血管密度，提高皮瓣成活率。

血管渗漏引起的烧伤休克是严重烧伤患者病死率较高的主要原因之一。然而，血管渗漏的病理生理机制尚不清楚。南京医科大学附属苏州医院孙炳伟教授团队在《Burns & Trauma》发文《Neutrophil-derived heparin binding protein triggers vascular leakage and synergizes with myeloperoxidase at the early stage of severe burns (with video)》。该研究团队分离人外周血中性粒细胞，采用ELISA法检测血浆中性粒细胞来源的颗粒蛋白和糖萼损伤产物，采用小鼠激光共聚焦活体成像评估血管渗漏和中性粒细胞运动，采用实时荧光定量RT-PCR检测黏附相关分子表达，采用透射电镜和扫描电镜观察血管内皮细胞糖萼的损伤。采用蛋白质组学、流式细胞术和免疫荧光技术进一步研究人外周血中性粒细胞来源的次氯酸盐与人血管内皮细胞CD44的关系。该研究团队观察到，在严重烧伤后，迅速增加的活化中性粒细胞分泌肝素结合蛋白(HBP)和髓过氧化物酶(MPO)，HBP升高与MPO协同引发血管渗漏，导致全身水肿和烧伤休克；MPO的催化产物次氯酸盐能触发CD44胞外结构域从血管内皮细胞脱落，从而损伤糖萼；糖萼的损伤导致中性粒细胞的粘连，增加血管渗漏。该研究认为这2种生物分子的靶向干预可能会引入新的减少大量液体流失和随后的烧伤休克的策略。

目的:探讨健康者和RA患者血浆来源外泌体对人静脉内皮细胞功能的影响。方法:收集健康者和RA患者血浆，用试剂盒分离外泌体后，通过透射电镜观察其形态特征、纳米颗粒分析仪（NTA）测量其大小及免疫印迹实验对表面标志蛋白进行鉴定。通过CCK8、细胞划痕、Transwell小室实验检测外泌体对内皮细胞增殖和迁移侵袭能力的影响；RT-PCR检测细胞分泌缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）含量变化。采用 t检验。 结果:透射电镜观察到双凹圆盘状的囊性小泡，纳米颗粒跟踪分析（NTA）测其直径在50~150 nm，蛋白质印迹法显示出血浆外泌体表面标志蛋白flotillin1和CD81，相对分子质量分别为47 000和26 000。内皮细胞活性随着外泌体浓度增高而降低，但2组差异均无统计学意差义（ t=1.86， P>0.05）。与健康者血浆外泌体相比，RA血浆外泌体可显著抑制内皮细胞迁移[（2.24±0.23）和（1.46±0.13）， t=6.60， P<0.05]，侵袭能力减弱[（0.673±0.030）和（0.827±0.030）， t=8.11， P<0.05]，分泌HIF-1α、VEGF细胞因子的能力也显著降低，差异均有统计学意义[（0.706±0.020）和（0.908±0.040）， t=10.10， P<0.05；（0.692±0.010）和（0.841±0.020）， t=14.90， P<0.05]。 结论:血浆来源的外泌体可能在RA并血管损伤中发挥重要的作用。

目的 探究红景天苷(SAL)对人血管内皮细胞系EA.hy926 增殖及迁移的影响.方法 实验分为对照组、1、10 和 100 nmol/L SAL组、10 nmol/L SAL+2 μg/mL avastin[血管内皮生长因子(VEGF)阻断剂贝伐珠单抗]组、10 nmol/L SAL+2 μg/mL IgG(阻断剂阴性对照)组、10 nmol/L SAL+8 μg/mL avastin组、10 nmol/L SAL+8 μg/mL IgG组、10 μmol/L YC-1[低氧诱导因子-1α(HIF-1α)阻断剂]组和 10 μmol/L YC-1+10 nmol/L SAL组.MTS法和Transwell小室法检测EA.hy926 细胞的增殖及迁移;RT-qPCR和Western blot检测HIF-1α和VEGF基因及蛋白水平;荧光素酶报告基因实验检测SAL对EA.hy926 细胞HIF-1α转录活性的影响.然后,通过鸟苷酸环化酶激活剂(YC-1)作为HIF-1α阻断剂验证SAL能否通过HIF-1α影响VEGF的表达.结果 SAL能显著促进EA.hy926 细胞增殖(P＜0.05),SAL(10 nmol/L)的促增殖作用被avastin(2 μg/mL)显著减轻(P＜0.05).SAL 能显著促进EA.hy926细胞的迁移(P＜0.05),这一作用被avastin(8 μg/mL)显著减轻(P＜0.05).SAL能够提高HIF-1α、VEGF基因和蛋白的表达水平并促进HIF-1α的转录活性(P＜0.05),并且加入HIF-1α阻断剂YC-1后HIF-1α、VEGF蛋白水平下调(P＜0.05).结论 HIF-1α/VEGF 通路可能参与 SAL促进 EA.hy926 细胞的增殖和迁移.

目的 探讨人巨细胞病毒RNA UL112 对人血管内皮细胞mRNA表达的影响.方法 构建人巨细胞病毒微小RNA UL112 腺病毒过表达载体并使其感染人原代脐静脉内皮细胞作为转染组,感染无义空白腺病毒载体的脐静脉内皮细胞为对照组.检测人巨细胞病毒微小RNA UL112 对脐静脉内皮细胞mRNA表达谱的影响.结果 与对照组相比,转染组mRNA存在差异表达基因365个,其中表达基因上调303个,下调62个,差异表达基因富集于丝裂原活化蛋白激酶通路.结论 人巨细胞病毒微小RNA UL112影响脐静脉内皮细胞mRNA的表达.

目的:研究长链非编码RNA(LncRNA)小核仁RNA宿主基因12(SNHG12)调控miR-138-5p/低氧诱导因子-1α(HIF-1α)轴改善缺氧/复氧(H/R)人血管内皮细胞损伤的作用.方法:体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),随机分为对照组、H/R模型组、H/R+LncRNA SNHG12过表达组、H/R+miR-138-5p mimics组、H/R+共转染组、H/R+共转染阴性对照组,各转染组分别进行转染处理,除对照组外,其余各组给予5 h缺氧,再进行复氧1 h处理,诱导细胞模型,然后通过CCK-8实验检测各组细胞活力情况;通过流式细胞实验检测各组细胞凋亡情况,比较各组细胞凋亡率;通过试剂盒测量各组细胞活性氧(ROS)、乳酸脱氢酶(LDH)及炎症因子IL-6、IL-17、IL-18水平;通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)实验测定各组细胞miR-138-5p及HIF-1α mRNA表达;通过免疫印迹实验检测各组细胞凋亡蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及HIF-1α蛋白表达.结果:与对照组相比,H/R模型组细胞凋亡率、细胞ROS、LDH、IL-6、IL-17及IL-18水平、细胞HIF-1α mRNA和蛋白水平、细胞caspase-9、Bax及HIF-1α蛋白水平升高(P<0.05),细胞活力、miR-138-5p水平降低(P<0.05).与H/R模型组、H/R+共转染组相比,H/R+LncRNA SNHG12过表达组细胞活力、细胞HIF-1α mRNA及蛋白水平升高(P<0.05),细胞凋亡率、细胞ROS、LDH、IL-6、IL-17及IL-18水平、细胞caspase-9与Bax蛋白水平、miR-138-5p水平降低(P<0.05);H/R+miR-138-5p mimics组细胞活力、细胞HIF-1α mRNA及蛋白水平降低(P<0.05),细胞凋亡率、细胞ROS、LDH、IL-6、IL-17及IL-18水平、细胞cas-pase-9与Bax蛋白水平升高(P<0.05).与H/R模型组相比,H/R+共转染阴性对照组、H/R+共转染组细胞各指标水平差异无统计学意义(P>0.05).结论:LncRNA SNHG12可通过下调miR-138-5p表达,上调HIF-1α表达,抑制H/R诱导的HUVECs炎症与氧化应激,减轻细胞损伤及凋亡.