目前，青光眼滤过术后滤过区域瘢痕形成机制尚未被完全了解。现认为术后伤口愈合期间细胞因子和生长因子的刺激使结膜囊内成纤维细胞过度活化，导致细胞外基质沉积，瘢痕形成。长链非编码RNA(lncRNA)是一类不编码蛋白质的RNA序列，可调控细胞的增生、凋亡及作为微小RNA的前体等，已被证实其在多种纤维化组织内特异性表达并发挥重要的调控功能。随着研究的不断深入，lncRNA也被发现还可参与青光眼滤过术后滤过泡瘢痕化的形成和发展。已有研究结果显示，lncRNA在青光眼滤过术后结膜囊组织内有特定表达，且不同的lncRNA可通过不同途径影响结膜囊内成纤维细胞的增生或细胞外基质的合成，对滤过泡瘢痕化的形成产生影响。本文对不同lncRNA在结膜囊成纤维细胞增生机制中的作用及潜在滤过泡瘢痕化的治疗前景进行综述，以期为滤过术后瘢痕化的治疗提供新的方向。

目的:探讨氯化锂对人Tenon囊成纤维细胞(HTFs)缝隙连接细胞间通讯(GJIC)的影响及其可能的作用机制。方法:收集2019年4月于德州市人民医院眼科行斜视手术的1例患者的Tenon囊组织，剪成1 mm×1 mm×1 mm的组织块，进行原代培养并传代，取第4代HTFs进行实验。将HTFs分为对照组和氯化锂处理组，对照组加入不含氯化锂的细胞培养基，氯化锂处理组加入含80 mmol/L氯化锂的细胞培养基，继续培养48 h。采用细胞划痕染料标记示踪法标记偶联指数，评估GJIC功能；采用细胞免疫荧光法检测HTFs中Cx43的表达和定位；采用实时荧光定量PCR和Western blot法检测HTFs中Cx43 mRNA及蛋白的表达水平。结果:培养的细胞呈长梭形并呈单层放射状或涡旋状贴壁生长，细胞质vimentin染色呈阳性。细胞划痕染料示踪实验结果显示，氯化锂处理组细胞偶联指数为9.04±0.53，明显高于对照组的4.94±0.39，差异有统计学意义( t＝-18.79， P<0.01)。免疫荧光染色结果显示，对照组可见Cx43荧光呈点状分布于细胞相连处的细胞膜上，氯化锂处理组Cx43染色明显增强。实时荧光定量PCR结果显示，对照组Cx43 mRNA相对表达量设为1，氯化锂处理组Cx43 mRNA相对表达量明显升高，为1.97±0.23，差异有统计学意义( t＝-14.426， P<0.01)。Western blot检测结果显示，氯化锂处理组Cx43蛋白相对表达量为0.871±0.057，明显高于对照组的0.446±0.028，差异有统计学意义( t＝-11.682， P<0.01)。 结论:氯化锂可上调HTFs中Cx43 mRNA及蛋白表达并增强HTFs间GJIC功能，提示氯化锂增强GJIC的功能可能是其抑制HTFs增生的机制之一。

目的:探讨绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人Tenon囊成纤维细胞(HTFs)活化的作用及其可能的作用机制。方法:收集9例9眼晚期原发性开角型青光眼患者小梁切除术中获取的结膜下Tenon囊组织，通过组织贴壁培养获得原代细胞，采用免疫荧光染色法(波形蛋白+角蛋白)进行细胞鉴定，取4~6代细胞进行后续实验。利用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测0~80 μmol/L EGCG干预条件下的细胞存活率。将细胞分为空白对照组、转化生长因子(TGF)-β1诱导组和EGCG干预组，分别于正常培养基、含10 ng/ml TGF-β1培养基以及含10 ng/ml TGF-β1+50 μmol/L EGCG培养基中培养。采用BrdU标记法检测各组细胞增生率，采用细胞划痕实验观察各组细胞迁移情况，采用免疫荧光法检测各组细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达，采用Western blot法检测空白对照组、TGF-β1诱导组、10 μmol/L EGCG组和50 μmol/L EGCG组Smad2/3、p-Smad2/3、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)及磷酸化Akt(p-Akt)的表达。结果:体外培养HTFs呈长梭形，生长规律，免疫荧光鉴定波形蛋白呈阳性。CCK-8检测显示，10、20、30、40、50 μmol/L EGCG处理细胞存活率与0 μmol/L EGCG处理细胞比较，差异均无统计学意义(均 P<0.05)。BrdU标记实验显示，TGF-β1诱导组细胞增生率为(66.37±12.65)%，高于EGCG组的(14.75±12.33)%，差异有统计学意义( P<0.05)。划痕实验第3天，TGF-β1诱导组相对划痕面积为(47.33±12.22)%，明显低于EGCG干预组的(92.67±4.04)%，差异有统计学意义( P<0.05)。免疫荧光染色结果显示，TGF-β1诱导组细胞α-SMA蛋白荧光较空白对照组显著增强，EGCG干预组α-SMA蛋白荧光则减弱至空白对照组水平。Western blot法检测结果显示，各组间细胞中p-Smad2/3、PI3K和p-Akt蛋白相对表达量总体比较差异均有统计学意义( F＝58.820、121.153、69.289，均 P<0.001)，其中TGF-β1诱导组p-Smad2/3、PI3K和p-Akt蛋白相对表达量明显高于空白对照组、10 μmol/L和50 μmol/L EGCG组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:EGCG能够通过Smad通路及PI3K/Akt信号通路抑制TGF-β1诱导的HTFs活化。

目的:探讨血管紧张素1型受体(AGTR1)拮抗剂奥美沙坦(OMS)对人Tenon囊成纤维细胞(HTF)凋亡的作用及其机制。方法:收集于西安交通大学第二附属医院行斜视手术的患者Tenon囊组织，采用组织块法培养原代HTF，vimentin免疫荧光染色及流式细胞术鉴定原代细胞。采用10 ng/ml转化生长因子β2(TGF-β2)诱导HTF建立细胞纤维化模型。将体外培养的细胞分为正常对照组、TGF-β2组、TGF-β2+OMS组和OMS组，各组细胞分别予以普通培养液、含TGF-β2的培养液、含TGF-β2和OMS的培养液、含OMS的培养液培养细胞48 h。Annexin V/PI染色流式细胞术检测细胞凋亡情况，分析细胞早期凋亡率、晚期凋亡率及总凋亡率。Western blot法检测线粒体凋亡途径中procaspase-9、cleaved caspase-9、bax和bcl-2蛋白表达水平。比色法检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:成功分离培养原代HTF，所培养细胞呈长梭形，vimentin免疫荧光染色呈阳性，流式细胞术检测所培养原代细胞中vimentin表达阳性率>99%。正常对照组、TGF-β2组、TGF-β2+OMS组和OMS组细胞早期凋亡率、晚期凋亡率、总凋亡率总体比较，差异均有统计学意义( F＝24.92、3.96、41.82，均 P<0.05)，其中TGF-β2+OMS组早期凋亡率和总凋亡率较正常对照组和TGF-β2组明显升高，TGF-β2+OMS组晚期凋亡率较正常对照组明显升高，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。正常对照组、TGF-β2组、TGF-β2+OMS组和OMS组cleaved caspase-9/procaspase-9、bax、bax/bcl-2总体比较差异均有统计学意义( F＝4.40、7.98、4.61，均 P<0.05)，其中TGF-β2+OMS组bax/bcl-2较正常对照组明显升高，TGF-β2+OMS组cleaved caspase-9/procaspase-9、bax、bax/bcl-2较TGF-β2组明显升高，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。正常对照组、TGF-β2组、TGF-β2+OMS组、OMS组细胞LDH活性值分别为(783.99±79.97)、(913.16±196.86)、(2 529.06±240.21)、(2 134.29±138.96)μmol/(min·L)，总体比较差异有统计学意义( F＝24.95， P<0.05)，其中与正常对照组和TGF-β2组比较，TGF-β2+OMS组和OMS组LDH活性值明显升高，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。正常对照组、TGF-β2组、TGF-β2+OMS组、OMS组细胞SOD活性值分别为(50.35±0.97)、(41.61±4.56)、(28.88±3.26)、(37.61±4.83)μmol/(min·L)，总体比较差异有统计学意义( F＝5.71， P<0.05)，其中TGF-β2+OMS组SOD活性值低于正常对照组和TGF-β2组，OMS组SOD活性值低于正常对照组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:AGTR1拮抗剂OMS可以有效促进HTF凋亡，bax/bcl-2/caspase-9介导的线粒体凋亡途径及氧化应激途径可能是OMS调控HTF凋亡过程的潜在机制。

目的:探讨青光安颗粒剂抑制转化生长因子β1 （TGF-β1）诱导的人类Tenon成纤维细胞（HTFs）增殖的可能机制。方法:从接受青光眼滤过手术（GFS）的个体获得人结膜下Tenon胶囊样品。实验设计分为3组：对照组（HTFs未经处理，n = 10）；TGF-β1诱导组（100 ng/ ml TGF-β1诱导HTFs，构建GFS术后细胞模型，n = 10）；TGF-β1+青光安治疗组（TGF-β1诱导+青光安颗粒剂血清处理HTFs，n = 30）。TGF-β1+青光安治疗组按照青光安血清的剂量进一步分为3组：TGF-β1+青光安高剂量组（TGF-β1诱导+青光安颗粒剂血清5 ml处理HTFs）；TGF-β1+青光安中剂量组（TGF-β1诱导+青光安颗粒剂血清2.5 ml处理HTFs）；TGF-β1+青光安低剂量组（TGF-β1诱导+青光安颗粒剂血清处理1 ml HTFs）；每组设10个培养皿。通过CCK-8检测青光安对TGF-β1诱导HTFs增殖的影响；通过流式细胞术评估青光安对细胞周期的影响；通过Cyto-ID免疫细胞化学染色测定青光安颗粒剂对HTFs细胞自噬的影响；采用RT-PCR和Western Blot法测定自噬体形成的必需蛋白质Beclin-1，ATG-5和LC3-Ⅲ基因和蛋白的表达水平。多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。结果:青光安能够抑制TGF-β1诱导HTFs的增殖能力，TGF-β1+青光安高剂量组细胞增殖水平（13.52±1.24）较TGF-β1诱导组（23.42±1.25）降低，差异有统计学意义（F = 12.347，P < 0.01）；TGF-β1诱导G0/ G1期的比例（88.29±0.35）降低，而S期的比例（9.04±0.25）升高，而青光安治疗能够导致G0/ G1期的比例（91.18±1.04）增加，而S期的比例（5.41±0.59）降低，差异有统计学意义（F = 13.857，P < 0.01）；与TGF-β1诱导组相比，用TGF-β1+青光安治疗组导致荧光染色强度（1.84±0.14）降低，HTFs阳性细胞数目（112.46±12.11）减少，差异有统计学意义（F = 12.347，P = 18.472）；TGF-β1+青光安治疗组能抑制TGF-β1诱导对自噬基因Beclin-1、ATG-5和LC- 3Ⅲ mRNA和蛋白质表达增加（P < 0.05）。结论:青光安颗粒剂抑制TGF-β1诱导的HTFs增殖，且可能机制为青光安诱导HTFs细胞周期停滞于G0/G1期，而且青光安可减少TGF-β1诱导的HTFs自噬。

患者，女性，47岁。2022年9月患者因左眼眼痛和眼干1年余病史，近1个月余症状加重并伴视力下降，遂就诊于北京大学人民医院眼科。主诉1年前因左眼眼痛、眼干及雾状遮档，伴视力下降，就诊于外院，诊断为左眼角膜炎，行左眼羊膜覆盖术治疗与药物治疗(药品治疗与方法不详)，术后症状有所好转。9个月前出现左眼眼前白色雾状遮挡，药物治疗后轻微缓解。1个月前再次出现左眼眼痛和眼干，症状逐渐加重，伴视力显著下降。既往2018年诊断为急性淋巴白血病后行异基因造血干细胞移植，曾出现肝脏、肺部、关节及口腔等多器官排异反应，目前全身排异反应控制良好，已停用全身激素及免疫抑制剂治疗。结合病史，遂给予左眼配戴角膜绷带镜，左氧氟沙星滴眼液(日本参天制药株式会社生产)点眼，4次/d；妥布霉素地塞米松滴眼液(美国爱尔康公司生产)点眼，2次/d；玻璃酸钠滴眼液(日本参天制药株式会社生产)点眼，6次/d；小牛血去蛋白提取物眼用凝胶(沈阳兴齐眼药公司生产)，3次/d；更昔洛韦眼用凝胶(湖北科益药业公司生产)，3次/d。患者右眼视力0.3，最佳矫正视力0.6；左眼视力眼前手动，矫正不提高，光感光定位正常；右眼眼压21 mmHg(1 mmHg＝0.133 kPa)，左眼眼压23 mmHg。右眼睑结膜瘢痕化，角膜透明，角膜上皮点状染色，前房中等深度，虹膜纹理清，晶状体介质清，视网膜在位，左眼睑结膜瘢痕化，结膜轻度充血，绷带镜在位，角膜多个浸润病灶，边界稍模糊，角膜浅层新生血管，中央角膜明显变薄，角膜后白色色素沉着，前房积脓1 mm，眼底窥视不清。见图1A。结合病史及查体结果诊断为右眼角膜炎原因待查，双眼移植物抗宿主病。鉴于不除外感染性角膜炎，除去患者绷带镜，更改治疗为给予患者左氧氟沙星滴眼液点眼，4次/d；更昔洛韦眼用凝胶，3次/d；左氧氟沙星眼膏(日本参天制药株式会社生产)，右眼每晚滴眼；更昔洛韦片(湖北科益药业)，1000 mg口服，3次/d。患者2周后复诊，左眼中央角膜溶解明显，下方浸润灶明显扩大，前房积脓加重。见图1B。角膜刮片可见真菌，角膜刮片培养结果提示近平滑念珠菌阳性。修正诊断为左眼真菌性角膜炎，双眼移植物抗宿主病。给予左眼1%伏立康唑滴眼液(医院自制)点眼，1次/h；伏立康唑(北京博康健基因科技有限公司生产)，200 mg口服，2次/d；治疗2 d后角膜浸润灶减小，同时角膜基质溶解明显，后弹力层膨出，前房积脓减少。见图1C。治疗3 d后，左眼角膜穿孔，为患者行左眼穿孔修补联合结膜瓣遮盖术，术中可见角膜中央偏下方1.5 mm左右穿孔，取下方球结膜做4 mm宽度桥状结膜瓣，取少量tenon囊组织使用10－0不可吸收缝线将其填塞缝合于穿孔处角膜，10－0不可吸收缝线间断缝合将桥状结膜瓣缝合于角膜，将线结转入角膜基质，10：00时钟位角膜缘做侧切口，注入眼内冲洗液建立前房检查穿孔处水密封，前房形成良好。术后继续给予左眼1%伏立康唑滴眼液点眼，1次/h；伏立康唑，200 mg口服，2次/d，术后2周左眼角膜上皮愈合良好，结膜瓣在位，前房存在。见图2A。术后6周左眼前房消失，溪流征阳性。见图2B。再次行角膜穿孔修补，术中取约150 μm厚度微小切口基质透镜取出术基质微透镜片，裁剪至1.5 mm×1.5 mm，将2针10－0不可吸收缝线穿过基质片后，2针呈90°，缝合固定于穿孔处角膜基质，10：00时钟位侧切口注入眼内冲洗液建立前房检查穿孔处水密封，前房形成良好。见图2C。术后2周复查，再次发现前房消失，溪流征阳性。第三次行角膜穿孔修补，术中采用多层4层羊膜，填塞于角膜穿孔处，10－0不可吸收缝线间断缝合8针于角膜基质，10：00时钟位侧切口注入眼内冲洗液建立前房检查穿孔处水密封，前房形成欠佳，前房注入无菌空气，术毕。术后1周，患者左眼前房偏浅，溪流征仍阳性。见图2D。为进一步控制病情，患者行第四次角膜穿孔修补。术中使用3 mm角膜环钻环切至约1/2角膜剩余厚度基质，手动剖切角膜基质接近后弹力层，使用3.25 mm角膜环钻冲切2片厚度约120 μm微小切口基质透镜取出术角膜基质微透镜片，使用10－0不可吸收缝线将2片角膜基质重叠间断缝合8针于角膜植床，10：00时钟位侧切口注入眼内冲洗液建立前房检查穿孔处水密封，前房形成欠佳，前房注入无菌空气，术毕。术后左眼使用重组牛碱性成纤维细胞生长因子滴眼液(珠海亿胜生物公司生产)点眼，6次/d，左眼他克莫司滴眼液(日本千寿制药株式会社生产)点眼，2次/d；左眼1%伏立康唑滴眼液点眼，6次/d，逐渐减量。术后3个月，左眼视力眼前手动，角膜表层新生血管，中央植片在位，角膜缝线在位，角膜植片及部分基质白斑，前房不浅，角膜荧光素钠染色溪流征阴性。见图2E。前节光学相干断层扫描成像显示角膜植片愈合良好。见图3。患者继续使用无防腐剂人工泪液，左眼按需给予他克莫司滴眼液点眼，2次/d。此后患者长期眼科门诊随访，病情稳定。左眼使用重组牛碱性成纤维细胞生长因子滴眼液点眼，6次/d，左眼他克莫司滴眼液点眼，2次/d；左眼1%伏立康唑滴眼液点眼，6次/d，逐渐减量。术后3个月，左眼视力眼前手动，角膜表层新生血管，中央植片在位，角膜缝线在位，角膜植片及部分基质白斑，前房不浅，角膜荧光素钠染色溪流征阴性。见图2E。前节光学相干断层扫描成像显示角膜植片愈合良好。见图3。患者继续使用无防腐剂人工泪液，左眼按需给予他克莫司滴眼液点眼，2次/d。此后患者长期眼科门诊随访，病情稳定。

目的:探讨 ALK5 抑制剂 EW-7197 对转化生长因子 β1(TGF-β1)诱导的人Tenon囊成纤维细胞(HTFs)增殖和迁移的影响及其机制.方法:采用MTS法检测细胞增殖率,并摸索EW-7197 最佳的作用浓度和作用时间.之后将细胞分为3 个组,分别为正常对照组、TGF-β1 诱导组和TGF-β1+EW-7197 处理组,采用 Transwell 小室观察各组细胞迁移情况,采用Western blot检测各组细胞Fibronectin、α-SMA、p-Smad2、p-Smad3的蛋白表达水平.结果:MTS 结果显示,不同处理条件的 EW-7197 以6.0μmol/L作用 24h 的细胞增殖率最低(均 P<0.01).Transwell小室实验结果显示,TGF-β1 诱导组的细胞迁移数量为228.0±17.0 个/视野,明显高于正常对照组(149.0±15.0 个/视野)和TGF-β1+EW-7197 处理组(46.0±8.0个/视野)(均P<0.01).Western blot检测结果显示,TGF-β1诱导组细胞中 Fibronectin、α-SMA、p-Smad2、p-Smad3相对表达量高于正常对照组和TGF-β1+EW-7197 处理组(均P<0.001).结论:EW-7197 能够通过 TGF-β/Smad 信号通路抑制TGF-β1 诱导的HTFs增殖和迁移.

目的:探讨人Tenon's囊成纤维细胞(HTFs)在肝细胞生长因子(HGF)刺激下,其低密度脂蛋白受体(LDLr)表达的动态变化.方法:分别以0、10、20、40、80和160μg/L的HGF刺激人Tenon's囊成纤维细胞12、24和48 h;应用MTT法检测HTFs的增殖率;real-time PCR定量分析不同增殖状态的HTFs上LDLr mRNA的表达水平;Western blot法检测不同增殖状态HTFs上LDLr蛋白表达水平的变化.结果:HTFs上LDLr mRNA及蛋白的表达水平均与HTFs的增殖率呈正相关,HGF以时间和浓度依赖的方式促进HTFs的增殖,同时以时间和浓度依赖的方式促进LDLr的表达(P<0.05).结论:在HGF刺激下,增殖活跃的HTFs上LDLr呈高表达状态,提示增殖异常活跃的HTFs上高表达的LDLr,可能成为一种新型的抗代谢药物作用靶点,尤其是在抗青光眼术后滤过泡瘢痕化的研究中可能得到广泛应用.

目的:改良和补充兔Tenon's囊组织原代成纤维细胞的分离培养、鉴定方法,为开展抗青光眼术后滤过泡瘢痕化的药物研究提供成熟的原代成纤维细胞.方法:应用组织块培养法,无菌条件下摘取组织,机械剪碎,于含10％胎牛血清的DMEM中培养,显微镜下观察细胞形态,免疫荧光法鉴定,实时荧光定量PCR法检测细胞波形蛋白、角蛋白的mRNA水平.结果:分离培养的细胞具有成纤维细胞形态,7-10 d从组织块周围大量爬出,15 d铺满培养皿;免疫荧光法鉴定显示,波形蛋白表达阳性,角蛋白阴性表达;实时荧光定量PCR检测出细胞中波形蛋白mRNA水平远远高于角蛋白.结论:改良和补充了兔Tenons囊组织成纤维细胞原代培养与鉴定方法,为后续青光眼术后滤过泡抗瘢痕化的药物研究奠定基础.

目的:探讨小干扰 RNA(the small interference RNA, SiRNA)沉默整合素链接激酶 (integrin-linked kinase, ILK)基因对转化生长因子-β2(transforming growth factor beta 2,TGF-β2)诱导的人 Tenon 囊成纤维细胞(human Tenon fibroblasts,HTFs)增殖和凋亡的影响.方法:体外培养HTFs细胞,波形蛋白(Vimentin)和角蛋白(keratin)免疫荧光染色进行鉴定.实验分组包括NC组:正常对照HTFs;H+T组:HTFs+5μg/L TGF-β2;H+T+NC SiRNA 组:HTFs+5μg/L TGF-β2+50nmol/L 阴性对照SiRNA;H+T+ILK SiRNA 组:HTFs+5μg/L TGF-β2+50nmol/L ILK SiRNA.50nmol/L ILK SiRNA转染HTFs细胞,5μg/LTGF-β2刺激后,分别利用Western-blot 检测细胞内ILK的蛋白表达,CCK-8检测细胞增殖能力,Hoechst 33342/PI双染检测细胞凋亡.结果:Western-blot结果显示,TGF-β2可以明显上调HTFs细胞内ILK的表达,ILK SiRNA可以明显抑制TGF-β2诱导的ILK蛋白表达(P<0.05).CCK-8检测结果显示, 5μg/L TGF-β2可以促进HTFs细胞增殖,ILK SiRNA转染后48h,细胞的增殖明显受到抑制,且低于正常对照组(P<0.05).Hoechst 33342/PI双染结果显示,TGF-β2并不诱导HTFs细胞发生凋亡(P>0.05),但ILK SiRNA可以诱导HTFs细胞发生明显凋亡,并出现少量坏死细胞(P<0.05).结论:ILK SiRNA可以抑制TGF-β2诱导的HTFs增殖,并诱导HTFs细胞发生凋亡.