目的:观察仙鹤草素抑制人胃癌HGC-27、MKN-45的作用机制.方法:将胃癌HGC-27、MKN-45细胞分为对照组、不同剂量仙鹤草素组、卡培他滨(阳性对照)组及仙鹤草素+NRF2激活剂(Bardoxolone)组.采用CCK-8法检测HGC-27、MKN-45细胞活力,划痕实验观察细胞迁移能力,流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)水平,western blotting法检测PI3K-AKT通路相关蛋白及抗铁死亡分子NRF2、Histone H3、HO-1、SLC7A11、GPX4表达.结果:与对照组相比,不同剂量仙鹤草素对HGC-27、MKN-45细胞活性均有显著的抑制作用(P＜0.05),且随着时间延长和仙鹤草素剂量增加,抑制作用增强.与对照组比较,仙鹤草素低、高剂量组和阳性对照组HGC-27、MKN-45细胞迁移能力减弱,ROS和MDA水平升高,GSH/GSSG、P-PI3K/PI3K、P-AKT/AKT比值降低,总NRF2(Total-NRF2)、细胞核内NRF2(Nuclear-NRF2)、HO-1、SLC7A11、GPX4蛋白表达下调(均P＜0.05).仙鹤草素+Bar-doxolone组Total-NRF2、GPX4蛋白表达水平升高(P＜0.05).结论:仙鹤草素可促进胃癌HGC-27、MKN-45细胞铁死亡,其作用机制可能与抑制PI3K-AKT-NRF2信号通路的激活有关.

目的 探讨仙鹤草-白术治疗腹泻型肠易激综合征脾虚湿阻证的临床效果及机制.方法 将120例患者随机分为治疗组和对照组,每组60例.治疗组予以仙鹤草-白术汤剂口服治疗,对照组予以培菲康联合蒙脱石散口服治疗,疗程1个月.观察治疗后2组主要症状改善情况、综合疗效以及治疗前后血清5-羟色胺(5-HT)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平.结果 治疗组腹胀或腹痛症状改善率高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).治疗组总有效率高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).2组治疗后血清5-HT、IL-1β均下降,但治疗组较对照组下降更明显,差异有统计学意义(P＜0.05).治疗后,2组腹痛积分和腹泻积分下降,且治疗组较对照组下降更明显,差异有统计学意义(P＜0.05).2组治疗后汉密尔顿焦虑量表(HAMA)评分和肠易激综合征生活质量量表(IBS-QOL)评分均较治疗前下降,且治疗组HAMA评分和IBS-QOL评分低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 仙鹤草-白术可能通过降低5-HT、IL-1β的分泌水平,达到治疗腹泻型肠易激综合征脾虚湿阻证的作用.

目的 评价抗寄生虫中药水提物和有机溶剂粗提物体外对细粒棘球蚴的作用效果.方法 从感染绵羊肝脏细粒棘球蚴包囊中分离原头节,体外培养24h后,取活性大于95％的原头节(100 μl,约100个)加入96孔板,分别加入终浓度为0.8 mg/ml(低浓度组)、1.6 mg/ml(中浓度组)、3.2 mg/ml(高浓度组)的鸦胆子、苦楝皮、辣蓼、石榴皮、使君子、槟榔、贯众、鱼藤、马蔺子、五倍子和仙鹤草等11种抗寄生虫中药的水提物,体外作用72 h后,伊红染色法检测原头节活性,倒置显微镜观察下观察原头节的形态,计算死亡率;同时设相同浓度的阿苯达唑组和空白对照组.从具有体外抗原头节作用的中药中提取黄酮、多糖、皂苷和生物碱等粗提物,分别以终浓度1.00 mg/ml体外作用于原头节72 h后,观察原头节形态,计算死亡率;同时设空白对照组.对体外抗原头节效果明显的粗提物进行液相色谱与串联质谱联用分析.组间比较采用单因素ANOVA分析,两两比较采用LSD-t检验.结果 中药水提物作用72h后,鸦胆子、苦楝皮、辣蓼水提物高浓度组原头节边缘模糊,结构松散,基质溶解;其余8种中药水提物高浓度组原头节形态正常,各部分结构清晰;阿苯达唑组原头节生发层有轻微损伤;空白对照组原头节形态正常.体外培养72 h后,鸦胆子、苦楝皮和辣蓼水提物高浓度组原头节的死亡率分别为(99.63±0.57)％、(90.89±1.10)％和(51.93±0.60)％,中浓度组分别为(85.97±1.50)％、(81.14±1.19)％、(42.46±0.56)％,低浓度组分别为(78.34±1.35)％、(77.27±0.92)％、(36.66±0.60)％,与空白对照组[(0.62±0.51)％]相比差异均有统计学意义(F=180 678.22、41 488.99、44 346.38,19 543.86、27 887.32、34 590.79,20 059.467、41 953.68、17 993.77,均 P＜0.01),与阿苯达唑组[(30.03±2.02)％]比较差异均有统计学意义(F=6 585.72、4 210.84、646.46,2 956.80、2 849.68、210.83,2 365.92、2 712.28、58.12,均 P＜0.01);其余8种中药水提物高、中、低浓度组原头节的死亡率与对照组比较差异均无统计学意义(均P＞0.05).鸦胆子黄酮、苦楝皮黄酮、鸦胆子皂苷、辣蓼皂苷和辣蓼生物碱组原头节皱缩、结构松散、基质溶解,原头节死亡率分别为(98.33±2.89)％、(96.67±5.77)％、100％、(99.33±1.15)％和(56.67±2.11)％,与空白对照组[(10.33±2.51)％]比较差异均有统计学意义(F=1 584.00、563.71、3 808.47、3 099.52、14.65,均P＜0.01);其余中药粗提物组原头节的死亡率与对照组比较差异均无统计学意义(均P＞0.05).液相色谱与串联质谱联用分析结果显示,正、负离子模式下分别鉴定出741、398种代谢产物,其中正离子模式下从鸦胆子黄酮粗提物中鉴定出差异显著的黄酮类化合物4种,分别为漆黄素、5-甲基-7-甲氧基异黄酮、儿茶素和甜橙黄酮;负离子模式下鉴定出8种,分别为原花青素B2、槲皮素-3β-D-葡萄糖苷、枸桔苷、橙皮素、槲皮素、木犀草素、芹菜素和黄豆黄素.结论 鸦胆子、苦楝皮和辣蓼水提物,鸦胆子黄酮、苦楝皮黄酮、鸦胆子皂苷和辣蓼皂苷有明显体外抗细粒棘球蚴的作用,且效果优于阿苯达唑.

目的 运用网络药理学和分子对接技术探讨仙鹤草改善慢性萎缩性胃炎的物质基础及作用机制.方法 通过TCMSP数据库筛选仙鹤草的活性成分并预测其作用靶点;通过GeneCards、OMIM数据库筛选慢性萎缩性胃炎相关靶点;将活性成分靶点与慢性萎缩性胃炎靶点取交集,通过String 12.0 数据库构建蛋白相互作用(PPI)网络,并运用Cytoscape 3.10.1 软件构建"中药-疾病-化合物-交集靶标"网络图;通过R软件对核心靶点进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析以预测作用机制;通过AutoDock软件进行分子对接验证.结果 从仙鹤草中筛选出 5 个活性成分,作用于 90 个靶点,其中仙鹤草改善慢性萎缩性胃炎的核心活性成分为鞣花酸、山柰酚、儿茶素、木犀草素、槲皮素;核心靶点为B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(CASP3)、表皮生长因子受体(EGFR)、缺氧诱导因子-1A(HIF-1A)、原癌基因(MYC)等;作用机制主要涉及抗肿瘤、调节免疫、调节脂代谢、抗病毒等多条信号通路;分子对接显示,仙鹤草核心活性成分与核心靶点具有较高亲和力.结论 仙鹤草可能通过调节细胞增殖、凋亡、炎症、代谢等相关基因及通路发挥多靶点、多通路的治疗作用.

仙鹤草主要含有黄酮类、酚类、三萜类、糖苷类和鞣质等多种活性成分,其在血液、呼吸、循环、内分泌等系统疾病显示出良好的临床疗效.通过对仙鹤草的化学成分及药理作用进行整合归纳,并结合中药质量标志物(quality marker,Q-Marker)新理念,从植物亲缘学、中药药性、有效性证据、化学成分可测性等方面对仙鹤草的Q-Marker进行预测分析.初步预测木犀草素、齐墩果酸、仙鹤草内酯、仙鹤草酚、鹤草酚等成分可作为仙鹤草的主要Q-Marker,为仙鹤草药效物质基础及质量标准提升提供依据.

目的 对一株分离自药用植物仙鹤草中的产非达霉素菌株N12W0304进行分类研究.方法 通过形态特征、培养特征观察、生理生化特征、胞壁分析及16S rDNA序列分析等多相分类研究对菌株进行鉴定.结果 菌株N12W0304属于游动放线菌属(Actinoplanes sp.)菌株.结论 本报道是首次从仙鹤草中分离到游动放线菌属非达霉素产生菌.

目的:优化仙鹤草总黄酮的超声提取工艺,并对其体外抗氧化、抗肿瘤活性进行研究.方法:以总黄酮提取量为考察指标,在单因素实验基础上,通过Plackett-Burman (PB)试验设计筛选影响总黄酮提取量的显著性因素,运用Box-Behnken设计(BBD)对影响提取工艺的显著性因素进行优化,对试验数据进行多元线性回归和二项式拟合,应用效应面法对最佳工艺进行预测分析,优选仙鹤草总黄酮的超声提取工艺;采用FRAP法、清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基和羟基自由基的方法,对最佳工艺所得总黄酮的抗氧化活性进行评价,并采用CCK-8比色法对其抗胃癌MKN-45、肝癌HepG2、骨髓瘤U266、乳腺癌MCF-7、肺癌A549、宫颈癌HeLa 6种人源肿瘤细胞增殖活性进行研究.结果:对仙鹤草总黄酮提取量影响较大的4个因素为液料比、超声时间、乙醇体积分数、超声温度;最优超声提取工艺为:乙醇体积分数64.00％,液料比10.50 mL·g-,超声时间74.00 min,超声温度40.00℃,超声功率200 W,超声次数3次,在此条件下总黄酮提取量为106.28 mg·g-1,与预测值108.12 mg·g-1相对误差为1.70％;总黄酮总抗氧化活性的FRAP值为56.87 mg-,其抗氧化活性随着质量浓度的增大而增强,对DPPH和羟基自由基的半数抑制浓度(IC50)分别为19.53和16.27 μg·mL-1;总黄酮对MKN-45、HepG2、U266、MCF-7、A549、HeLa细胞的增殖均有抑制作用,且呈现明显的浓度依赖性,IC50分别为127.50、53.31、202.10、206.80、54.17、170.40 μg·mL-1.结论:优选的仙鹤草总黄酮的超声提取工艺合理、可行,且仙鹤草总黄酮在体外具有良好的抗氧化、抗肿瘤活性.

目的 建立HPLC-DAD法同时测定益肺清化颗粒中苦杏仁苷、齐墩果酸、熊果酸、仙鹤草酚B、甘草苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、鲁斯可皂苷元、没食子酸、补骨脂素和紫菀酮的方法.方法 采用反相液相色谱法,色谱柱为Waters Symmetry-C18(250 mm×4.6 mm,5.0 μm);流动相为KH2PO4缓冲溶液(KH2PO4 1.0 g,加水1 000 mL使溶解,磷酸调节pH值至3.5)-(乙腈-甲醇1∶1),梯度洗脱,体积流量0.8 mL/min;柱温40℃.结果 苦杏仁苷、齐墩果酸、熊果酸、仙鹤草酚B、甘草苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、鲁斯可皂苷元、没食子酸、补骨脂素和紫菀酮10种成分能够达到良好分离;其线性范围分别为0.2～2.0 μg/mL (r=0.999 5)、0.4～4.0 μg/mL (r=0.999 4)、0.3～3.0 μg/mL (r=0.999 6)、0.1～1.0 μg/mL(r=0.999 3)、0.5～5.0 μg/mL (r=0.999 1)、0.15～1.50 μg/mL(r=0.999 2)、0.25～2.50μg/mL (r=0.999 5)、0.6～6.0 μg/mL(r=0.999 1)、0.45～4.50 μg/mL (r=0.999 3)、0.12～1.20 μg/mL (r=0.999 4),平均加样回收率分别为98.7％、98.0％、99.6％、98.0％、99.1％、99.4％、98.8％、101.1％、100.6％、101.7％,RSD分别为0.7％、1.3％、1.4％、1.4％、1.1％、0.8％、0.9％、0.5％、0.5％、0.8％.10批次供试品中苦杏仁苷、齐墩果酸、熊果酸、仙鹤草酚B、甘草苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、鲁斯可皂苷元、没食子酸、补骨脂素和紫菀酮质量浓度分别为0.104～0.123、0.600～0.621、0.501～0.523、0.100～0.121、0.103～0.122、0.231～0.260、0.043～0.065、0.055～0.069、0.061～0.079、0.031～0.043 mg/g.结论 本方法操作简便,结果准确可靠,可用于益肺清化颗粒的质量控制.

目的:建立同时测定仙鹤草及近缘植物委陵菜提取物中山柰酚-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷、汉黄芩素、木犀草素和芹菜素的HPLC法,并比较两种提取物中各成分的含量差异.方法:采用HPLC法,Hypersil ODS C18(250×4.6 mm,5μm),0.2％醋酸水(A)-乙腈(B)进行梯度洗脱:0～12 min,15％B～43％B;12～18 min,43％B～58％B;18～30 min,58％B～80％B;30～35 min,80％B～90％B;35～42 min,90％B～15％B;检测波长:265 nm,流速:1 ml·min-1;柱温:30℃.结果:山柰酚-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷、汉黄芩素、木犀草素和芹菜素分别在2.385～95.400μg·ml-1、6.092～243.700μg·ml-1、4.187～167.500μg·ml-1和4.635～185.400μg·ml-1范围内线性关系良好(r=0.9996、0.9998、0.9997、0.9996).仙鹤草中上述4种成分的平均回收率分别为99.47％(RSD=1.27％)、99.18％(RSD=1.26％)、99.38％(RSD=1.37％)和98.99％(RSD=1.66％),委陵菜中木犀草素和芹菜素的平均回收率分别为98.45％(RSD=1.31％)、98.83％(RSD=1.20％).仙鹤草提取物中山柰酚-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷、汉黄芩素、木犀草素和芹菜素的含量分别为2.1720 mg·g-1、6.3630 mg·g-1、4.2150 mg·g-1和4.4990 mg·g-1,而委陵菜提取物中仅能检测到木犀草素和芹菜素,含量分别为5.2480 mg·g-1和5.7570 mg·g-1,此二者含量均显著高于仙鹤草中的含量.结论:该方法准确、可靠,重复性好,可用于仙鹤草及委陵菜提取物的质量评价与控制标准.

目的:优化仙鹤草总黄酮提取纯化工艺条件,评价其体外抗肝肿瘤活性.方法:以乙醇浓度、料液比、提取时间为考察因素,总黄酮为评价指标,优化提取工艺条件;以树脂型号、上样浓度、上样液pH值、洗脱溶剂用量等为考察因素,总黄酮为评价指标,优化纯化工艺条件;MTT法检测仙鹤草总黄酮提取物及纯化物对人肝癌细胞HepG2的抑制作用.结果:最佳提取工艺条件为:16倍量60％乙醇回流提取2次,每次1.5h,总黄酮得率达10.68％,纯度达46.13％;最佳纯化工艺条件为:以D101型大孔吸附树脂为吸附剂,上样液浓度为0.2 g/mL(生药),上样液pH为5,上样量为0.6g/mL(药材/湿树脂),上样体积流量为2 BV/h,水除杂用量为4 BV,8 BV的60％乙醇以2 BV/h体积流量进行洗脱,总黄酮得率达4.19％,纯度达91.71％;仙鹤草总黄酮纯度提高45％后,IC50由1.36 mg/mL降为0.65 mg/mL.结论:优选的提取纯化工艺条件稳定、简单、可行,可用于提取纯化仙鹤草总黄酮,该研究为仙鹤草总黄酮开发为抗肝肿瘤新药奠定实验基础.