背景 与目的既往研究提示谷氨酰胺转胺酶2(transglutaminase 2,TGM2)是多种肿瘤的潜在治疗靶点,但其在胃癌中的作用及机制尚未明确.本研究中,我们试图揭示TGM2在胃癌中的作用和相关机制.方法 分析TGM2在胃癌细胞和组织中的表达水平,并通过一系列体内外实验分析TGM2在胃癌中的功能,包括蛋白质印迹、免疫组化、CCK8、集落形成实验、transwell实验、异种移植瘤模型和转移瘤模型.通过基因富集分析、定量PCR和蛋白质印迹筛选TGM2在胃癌中潜在的作用靶标.通过功能损益实验和挽救实验验证TGM2对STAT1的调控作用.通过免疫共沉淀、质谱分析、定量PCR和蛋白质印迹筛选STAT1互作蛋白,并阐明其调控机制.最后,通过突变TGM2和使用TGM2的酶活性调节剂(ZM39923和A23187)以明确TGM2通过何种酶活性促进胃癌恶性进展,并阐明其潜在机制.结果 研究结果表明TGM2在胃癌组织中高表达,与病理分级密切相关,其高表达预示患者不良预后.TGM2过表达/敲低能够促进/抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭.而敲低/过表达STAT1能够逆转TGM2在胃癌细胞中的作用.进一步分析提示TGM2通过抑制STAT1泛素化/降解促进胃癌恶性进展.TRIM21被鉴定为胃癌中STAT1的E3泛素连接酶.TGM2通过与GTP结合的酶活性促进TRIM21和STAT1解离.A23187能够抑制TGM2对STAT1的作用,并在体外和体内实验中逆转TGM2的促肿瘤作用.结论 本研究揭示了在胃癌中TGM2调控STAT1的作用和机制,提示TGM2可作为胃癌治疗的潜在靶点,了解TGM2与GTP结合的酶活性有助于开发靶向药物,优化现有治疗策略.

目的:研究突变型RAB39B基因的表达水平及RAB39B对细胞自噬水平和α-突触核蛋白的影响，并初步探索RAB39B基因c.536dupA突变在帕金森病发病机制中的作用。方法:基于前期发现由RAB39B基因新的突变c.536dupA导致青少年型帕金森综合征家系的工作背景，构建含有RAB39B基因c.536dupA突变型的重组表达质粒（pcDNA3.1-HA-RAB39B-536），与RAB39B野生型重组表达质粒（pcDNA3.1-HA-RAB39B），利用脂质体法将重组表达质粒转染至N2a细胞培养作为实验组。对照组为接受pcDNA3.1-HA转染的N2a细胞。利用实时荧光定量聚合酶链反应、蛋白质印迹、免疫荧光及免疫共沉淀等技术来明确突变型RAB39B的表达水平及RAB39B对自噬功能和α-突触核蛋白的影响。结果:在N2a细胞模型中，突变型RAB39B的转录水平约为野生型RAB39B的2倍，而突变型RAB39B的蛋白水平（0.30±0.00）明显低于野生型（1.50±0.25， t=8.313， P<0.05），加入蛋白酶体抑制剂MG132后突变型RAB39B蛋白水平有所升高（0.70±0.10， t=6.925， P<0.05）；RAB39B基因突变组的微管相关蛋白1轻链3BⅡ/Ⅰ值（3.11±0.30）显著低于野生组（7.03±0.20， t=18.831， P<0.05）；过表达野生型和突变型的RAB39B不影响内源性α-突触核蛋白水平，而过表达野生型的RAB39B会导致外源性的野生型和突变型（p.A53T）α-突触核蛋白水平升高[野生型：由0.60±0.11上升至1.25±0.08， t=8.254， P<0.05；突变型：由0.55±0.08上升至1.15±0.08， t=9.293， P<0.05]。 结论:RAB39B基因c.536dupA突变型蛋白稳定性下降，突变型蛋白可能通过泛素-蛋白酶体通路降解，且该突变可能影响细胞的自噬水平；RAB39B蛋白可能与α-突触核蛋白存在体内相互作用关系，可能参与α-突触核蛋白的稳态水平的维持。

目的:探讨富含生物活性的脱钙骨基质（decalcified bone matrix，DBM）对外科级医用硫酸钙的影响，观察不同含量DBM对硫酸钙理化性能影响的变化规律，为制备含有成骨性能的、可注射性的硫酸钙骨水泥提供理论依据。方法:按照DBM在硫酸钙复合物的质量比，分为0组、5%组、10%组、20%组、30%组、40%组共6组。充分混合不同含量DBM与外科级硫酸钙制备骨水泥的粉剂。将0.3 g甲基纤维素溶于10 ml的去离子水中，制备浓度为3%的甲基纤维素溶液，作为骨水泥的液剂。按液固比0.4∶1，混合上述骨水泥的粉剂和液剂，搅拌均匀，形成浆体。根据不同的模具，测量并记录DBM/硫酸钙复合物的初凝时间、终凝时间、抗压强度、体外降解率及pH值变化。结果:单纯硫酸钙的初凝时间和终凝时间分别为（4.96±0.20）、（5.83±0.12）min。随着DBM的含量的增加，初凝时间和终凝时间增长趋势明显（ F=49.275， P<0.05； F=124.859， P<0.05）。单纯硫酸钙（0组）的抗压强度为（23.33±6.35）MPa，40%组抗压强度仅为3.33 MPa。随DBM的含量的增加，抗压强度先增强后降低；5%组、10%组、20%组的DBM对抗压强度影响不大（ P>0.05）；而30%组、40%组的抗压强度明显降低（ t=3.259， P<0.05）。不同含量的DBM能够明显改变硫酸钙复合物的降解速率，30%组和40%组体内完全降解时间仅为10 d；0组30 d的降解速率为63%。在体外降解的任何时间点内，DBM对硫酸钙复合物培养液的pH值均无明显影响，且与单纯硫酸钙的pH变化规律一致。 结论:随着DBM含量的增加，降解速率逐渐加快，抗压强降低、凝固时间延长，这些不利于可注射型硫酸钙骨水泥的制备。

目的:应用3D生物打印技术制备明胶/海藻酸钠/硅酸镁锂复合水凝胶负载骨髓间充质干细胞（BMSCs）的仿生活性组织工程支架，探讨3D生物打印对含BMSCs水凝胶支架的成骨分化作用。方法:常规提取2周龄SD大鼠BMSCs并用流式细胞术鉴定，将明胶、海藻酸钠、硅酸镁锂混合，加入BMSCs后应用3D生物打印技术制备含细胞的复合水凝胶支架，应用注模法制备含细胞的非打印支架。体外实验中根据是否打印分为含细胞打印组和含细胞非打印组，每组制备12个样品，并设置单纯细胞对照组。通过扫描电镜观察复合水凝胶内部结构，冻干法测定支架膨胀率和含水量。在培养3 d后用鬼笔环肽染色观察支架内细胞活性，分别于培养1，3，7 d后进行细胞增殖与毒性检测（CCK-8）实验测定吸光度值确定细胞增殖情况和培养7，14 d后使用RT-PCR检测成骨细胞特异性转录因子（Osterix）、骨钙素（OCN）、Ⅰ型胶原等成骨相关基因表达。体内实验根据是否打印及是否含有细胞分四组：含细胞打印植入组、含细胞非打印植入组、不含细胞打印植入组、不含细胞非打印植入组，每组支架制备9个样品。将四组支架分别植入36只8周龄SD大鼠臀后侧肌袋，左右随机，术后2，4，8周取材分别拍摄X线片，并对8周取材组织进行HE及Masson染色观察成骨分化情况。结果:流式细胞术鉴定细胞为BMSCs。水凝胶内部孔隙明显，细胞在孔隙内可自由伸展。含细胞打印组的支架膨胀率为（1 039.37±30.66）%，支架含水量为（91.21±0.26）%，与含细胞非打印组的支架膨胀率［（1 032.38±35.05）%］和支架含水量［（91.16±0.28）%］比较，差异无统计学意义（ P>0.05）。在体外培养3 d水凝胶内细胞生长状态良好。体外培养1 d，各组吸光度值差异无统计学意义（ P>0.05）；培养3 d时，含细胞打印组和含细胞非打印组吸光度值差异无统计学意义（ P>0.05），但均高于单纯细胞对照组（ P<0.05）；培养7 d后，含细胞打印组吸光度值（2.72±0.17）高于含细胞非打印组（2.35±0.11）（ P<0.05），且均高于单纯细胞对照组（1.95±0.12）（ P<0.05）。体外培养7 d，含细胞打印组和含细胞非打印组的成骨分化相关基因表达量差异无统计学意义（ P>0.05），但均高于单纯细胞对照组（ P<0.05）；体外培养14 d后，含细胞打印组的基因表达量［Osterix（1.650±0.095）、OCN（2.725±0.091）、Ⅰ型胶原（2.024±0.091）］均高于含细胞非打印组［Osterix（1.369±0.114）、OCN（2.174±0.198）、Ⅰ型胶原（1.617±0.082）］和单纯细胞对照组［Osterix（1.031±0.094）、OCN（1.116±0.092）、Ⅰ型胶原（0.736±0.140）］（ P<0.05）。体内植入2周，各组X线片灰度值差异无统计学意义（ P>0.05）；体内植入4周和8周，含细胞打印植入组和含细胞非打印植入组X线片灰度值高于不含细胞打印植入组和不含细胞非打印植入组（ P<0.01）；体内植入8周，HE染色显示载细胞支架不同程度降解并且与细胞相互浸入，Masson染色可见不同程度的胶原生成。 结论:复合水凝胶支架可为BMSCs生长提供良好的三维环境，3D生物打印可促进BMSCs在水凝胶支架内增殖和成骨分化；负载BMSCs的生物支架在体内可缓慢降解，具有较好的异位成骨能力。

线粒体作为卵母细胞含量最丰富的细胞器，其数量和质量直接影响卵母细胞质量与发育潜能，从而决定了女性生育的结局。线粒体自噬作为一种细胞内选择性降解功能异常线粒体的大自噬，对卵母细胞内线粒体功能维持和平衡至关重要。近年来，围绕线粒体自噬在卵母细胞内的相关功能与机制研究也逐渐成为女性生殖领域的研究热点。本文综述了线粒体自噬参与卵母细胞成熟、卵母细胞老化，以及线粒体自噬参与药物与环境刺激影响卵母细胞质量，和在辅助生殖技术中的意义，期望有利于深入理解卵母细胞线粒体自噬的生物学意义，为体外或体内改善卵母细胞质量提供帮助。

目的:比较脱细胞猪小肠黏膜下层可吸收生物膜（SIS膜）及猪胶原可吸收生物膜（Bio-Gide膜）植入小鼠皮下后的降解速率及对周围宿主细胞的调控效果，探讨SIS膜和Bio-Gide膜在性能和促修复效果上的差异。方法:体内研究采用6~8周龄雄性C57BL/6小鼠，通过小鼠皮下植入SIS膜和Bio-Gide膜后不同时间点（1、3、5、7、14及28 d）取材（每个时间点每组3只）进行组织学HE染色，分析比较两种膜的降解速率，通过免疫荧光检测F4/80及CD31表达评估两种膜对局部巨噬细胞及新生血管的影响，通过免疫组化检测Ki67及CD146评估两种膜对干细胞的动员效果。体外研究将小鼠牙周膜干细胞与两种膜材料共培养后，利用扫描电镜观察细胞形态和黏附情况，用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）探讨两组细胞的增殖指标Ki67、趋化因子Cxcl1、Ccl1、炎症因子Tnfa的基因表达情况。结果:小鼠体内研究表明，两种膜植入后28 d时，SIS膜降解率［（16.84±4.00）%］与Bio-Gide膜降解率［（24.07±3.97）%］差异无统计学意义（ P=0.090），两种膜材料均能保持局部屏障效果。植入早期（3 d）两种膜材料周围的F4/80阳性巨噬细胞浸润数量［SIS膜组：（20.67±5.69）个/视野，Bio-Gide膜组：（25.33±2.52）个/视野］差异无统计学意义（ P=0.292），但SIS膜相较Bio-Gide膜可显著促进局部组织中血管再生［CD31阳性细胞数量：SIS膜组为（4.67±1.15）个/视野，Bio-Gide膜组为（1.00±1.00）个/视野］（ P=0.015）及CD146阳性干细胞募集［阳性细胞数量：SIS膜组为（22.33±4.16）个/视野，Bio-Gide膜组为（11.33±2.52）个/视野］（ P=0.025）。体外RT-qPCR结果显示，与Bio-Gide膜相比，SIS膜可显著促进小鼠牙周膜干细胞的趋化因子基因Cxcl1的表达（ P<0.001），但并不影响炎症因子基因Tnfa的表达（ P=0.885）。 结论:SIS膜在体内外实验中与Bio-Gide膜降解速率相当，两种膜材料对植入局部的炎症反应及巨噬细胞的影响未见显著差异，均能满足引导性组织再生术的屏障效果要求。

目的:观察聚乙醇酸（PGA）神经导管降解和生物相容性的相关性能和数据。方法:2022年1月至2022年8月,北部战区总医院烧伤整形科将PGA神经导管浸泡在15 ml生理盐水中进行体外降解实验,实验周期为12周,每周测量浸泡液pH值并计算质量损失率。体外生物相容性实验有实验组和对照组,实验组将含有10%胎牛血清的DMEM培养基作为浸提介质,对照组为单纯浸提介质,将PGA神经导管浸泡在浸提介质中,在（37±1）℃下浸提（72±2）h。分别在24 h、48 h、72 h测量实验组与对照组pH值。将培养好的大鼠许旺细胞（RSC 96）分别用实验组和对照组72 h浸提液制成单细胞悬液,接种至96孔板中,进行噻唑蓝（MTT）实验,观察PGA神经导管对RSC 96增殖的影响。将RSC 96分别以实验组和对照组浸提液孵育24 h后进行Transwell实验，观察PGA神经导管对RSC 96迁移的影响。体内降解和生物相容性实验,共计24只成年雄性SD大鼠随机分为实验组和对照组,每组12只,于大鼠右后肢股二头肌和臀大肌之间钝性分离扩大肌间隙,将PGA神经导管（实验组）和Neurotube（对照组）包埋在间隙中,分别在术后2、4、8、12周进行大体观察对比、血常规、肝肾功能检查和组织学检查,评估PGA神经导管降解和生物相容性。采用SPSS 19.0软件对实验数据进行统计学分析,所得采用均数±标准差（Mean±SD）表示,组间比较采用 t检验,组内及组间比较采用Turkey法, P<0.05为差异具有统计学意义。 结果:PGA神经导管体外降解4周时降解率为（1.470±0.026）%,之后降解率逐渐加快,至12周时降解率为（32.180±0.040）%。前2周pH下降较慢,2周时pH值为6.200±0.061,在第3周时pH值明显下降至3.930±0.118,此后pH下降速度较慢,至12周时pH值为2.560±0.003。MTT和Transwell实验结果表明,PGA神经导管浸提液对RSC 96的增殖和迁移无影响,与对照组相比,差异无统计学意义（ P>0.05）；体内降解包埋实验结果显示,术后2周,两组神经导管均表现出良好的支撑性,术后4~12周,两组神经导管开始逐渐变软、塌陷,但导管完整；血常规及肝、肾功能检查,在实验组和对照组同期两组比较、组内各时间点与术前比较,差异无统计学意义（ P>0.05）。术后2、4、8、12周解剖大鼠肝脏和肾脏形态结构无明显异常；组织学检测结果显示,两组大鼠导管周围肌肉组织无明显变性坏死,炎症细胞无明显浸润,肌肉组织形态未见明显异常。 结论:PGA神经导管生物在本实验条件下，体外可降解性及生物相容性良好,为下一步进行修复神经缺损实验提供依据。

各种致病因素所致全身炎症反应是急性呼吸窘迫综合征（ARDS）发生发展的关键阶段，目前临床上抑制炎症反应和对症支持是治疗ARDS的主要方法。肺泡上皮细胞自噬在ARDS炎症反应中具有重要的调节功能，细胞自噬本身是体内正常的免疫机制，是吞噬细胞借助溶酶体降解细胞内成分维持胞内稳态的代谢过程。目前研究表明，肺内外致病因素可通过引发炎症反应促使肺泡上皮细胞形成缺氧、饥饿、感染甚至凋亡的不利内环境，导致自噬功能紊乱，而过度的自噬激活可继续加重炎症反应。自噬相关蛋白Beclin1、微管相关蛋白1轻链3（LC3）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、p62等是目前研究中常见的自噬标志物，在调控自噬过程及肺损伤发展中起着至关重要的作用，因此细胞自噬基因表达可作为脓毒症ARDS肺损伤的早期标志物及重要机制。Hippo通路来源于果蝇中的蛋白激酶Hippo，Hippo和自噬这两条保守的通路对于维持体内平衡至关重要。Hippo信号通路与细胞自噬的相互调控是目前学术界的热门话题，本文对相关文献进行回顾，探讨Hippo信号通路是否能够通过调控细胞自噬来缓解脓毒症ARDS的炎症反应，从而为ARDS治疗提供更进一步的研究方向。

颞下颌关节（TMJ）由关节囊包绕，关节囊光滑的内层即为滑膜，各种关节内疾病均会累及滑膜，滑膜是关节疾病的关键性区域。滑膜A型细胞位于滑膜衬里层，多位于滑膜靠近关节腔一侧，具有较强的吞噬作用，主要作用是清除关节腔内和细胞外基质的降解物。目前通过体外细胞培养的方法可以有效地模拟体内细胞的生长环境，并能确切地了解单一和多元因素对滑膜细胞的影响，已成为一种基础研究手段。从细胞起源、体外培养、纯化分离及生物学功能等方面对人TMJ滑膜A型细胞的研究进展进行综述。

目的:探讨不可逆电穿孔(IRE)在体内外模型中对结肠癌细胞生长抑制的作用机制及有效性。方法:对不同分化程度的结肠癌细胞株HCT116、SW480、SW620、LoVo进行电击处理，通过二乙酸荧光素(FDA)-碘化丙锭(PI)双色荧光染色实验检测细胞活性，膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡，蛋白质印迹法(Western blot)检测凋亡标志蛋白表达；构建HCT116细胞裸鼠异种移植瘤模型，通过裸鼠体重、肿瘤生长曲线、瘤重对比观察体内抗结肠癌效果。采用非配对 t检验。 结果:FDA-PI荧光实验显示，随着场强增大，SW480、HCT116均表现为细胞总量、活细胞数减少，死细胞数增多。流式双染实验显示，随着场强增大，凋亡细胞比例逐渐增多，多数为早期凋亡。Western blot结果为电击后多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶降解产物(cleaved-PARP)和半胱氨酸蛋白酶3，7，8，9裂解物(cleaved-Caspase 3，7，8，9)蛋白水平升高。IRE组与Control组裸鼠体重分别为(27.81±0.81)、(27.64±0.83) g( t＝0.583， P>0.05)；IRE组与Control组肿瘤体积分别为(212.00±98.85)、(4 381.75±910.20) mm 3( t＝7.713， P<0.001)；IRE组与Control组第15天瘤重分别为(79.93±15.41)、(1 500.97±848.51) mg( t＝2.900， P<0.05)。 结论:IRE能有效抑制结肠癌细胞生长。