木瓜总三萜(total triterpenoids from the fruits of Chaenomeles speciosa,TCS)是防治胃黏膜损伤的活性组分,具有潜在的抗衰老作用.然而,TCS是否改善胃衰老,尤其是对于其抗胃衰老的分子机制目前仍不清楚.基于此,该研究旨在探讨TCS对D-半乳糖(D-galactose,D-gal)诱导人胃黏膜上皮细胞GES-1衰老的影响及作用机制,为TCS在临床上用于预防胃衰老提供科学数据.将体外培养的GES-1细胞和转染谷氨酰胺酶1(glutaminase 1,GLS1)过表达(overexpression GLS1,GLS1-OE)质粒的GES-1 细胞用 D-gal 诱导衰老后,给予 TCS 和谷氨酰胺酶 1(glutaminase 1,GLS1)抑制剂 bis-2-(5-phenylacetamido-1,2,4-thiadiazol-2-yl)ethyl sulfide(BPTES),考察各组细胞存活率、衰老标志物β-半乳糖苷酶(β-galactosidase,SA-β-gal)染色阳性细胞比例、线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)和细胞凋亡的变化;采用酶联免疫吸附测定(enzyme-linked im-muno sorbent assay,ELISA)法和比色法检测各组细胞上清液和细胞内GLS1活性、谷氨酰胺(glutamine,Gln)、谷氨酸(gluta-mate,Glu)、α-酮戊二酸(α-ketoglutarate,α-KG)、尿素和氨水平;采用实时荧光定量PCR和Western blot法检测各组细胞中GLS1、线粒体凋亡信号通路相关基因mRNA和蛋白表达情况.结果显示,与D-gal模型组和GLS1-OE D-gal模型组相比,TCS可显著降低D-gal诱导衰老GES-1细胞和GLS1-OE衰老GES-1细胞SA-β-gal染色阳性细胞率和MMP,抑制衰老细胞存活,促进其细胞凋亡(P＜0.01),降低上清液和细胞内GLS1活性和Gln、Glu、α-KG、尿素、氨含量(P＜0.01),降低线粒体中细胞色素C(cytochrome C,Cyto C)浓度以及细胞中GLS1、增殖细胞核抗原mRNA和蛋白表达(P＜0.01),降低细胞中Bcl-2、Bcl-xl mRNA表达和前体半胱氨酸蛋白酶(pro-caspase)-9、pro-caspase-3蛋白表达以及Bcl-2/Bax和Bcl-xl/Bad比值(P＜0.01),升高胞质中Cyto C浓度和细胞中Bax、Bad、凋亡蛋白酶激活因子1(apoptosis protease activating factor 1,Apaf-1)mRNA表达及剪切型半胱氨酸蛋白酶(cleaved-caspase)-9、cleaved-caspase-3、剪切型聚 ADP 核糖聚合酶-1(cleaved-poly ADP ribose polymerase-1,cleaved-PARP-1)蛋白表达(P＜0.01).以上结果表明,TCS可对抗D-gal诱导GES-1细胞衰老,其作用机制与抑制Gln/GLS1/α-KG代谢轴、激活线粒体凋亡通路,进而促进衰老细胞凋亡、清除衰老细胞密切相关.

目的:观察白芍木瓜汤对碘乙酸诱导的大鼠骨性关节炎的药效作用,并初步探讨其可能机制.方法:取雄性SD大鼠50只,按体质量随机分为正常对照组、模型对照组、阳性对照组、白芍木瓜汤高、低剂量组,每组10只.除正常对照组外,其余各组大鼠双侧膝关节腔注射碘乙酸建立骨性关节炎模型.术后第2d各组大鼠开始给予药物干预,连续6周,每周称量大鼠体质量,检测大鼠抓力.第6周末,各组大鼠麻醉,进行X-ray活体成像观察;心脏取血,分离血清,酶联免疫法检测各组大鼠血清中基质金属蛋白酶13(MMP-13)、软骨蛋白聚糖(Aggrecan)、Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)的含量;截取膝关节,剔除皮肤与肌肉,EDTA脱钙后分别进行HE染色与SO染色,光镜下观察各组大鼠膝关节病理变化.结果:造模后6周,相比于正常对照组,模型组大鼠体质量、血清MMP-13、Col-Ⅱ、Aggrean含量均出现显著性差异(P＜0.01),膝关节影像学上表现出明显损伤,光镜下观察到明显的病理改变;给药6周后,高、低剂量的白芍木瓜汤对OA大鼠体质量、抓力的影响不明显,但相比于模型对照组,白芍木瓜高、低剂量组大鼠血清MMP-13含量均显著降低(P＜0.01),Col-Ⅱ、Aggrean含量均显著升高(P＜0.01),膝关节影像学损伤与光镜下病理改变均得到明显改善.结论:白芍木瓜汤对碘乙酸诱导的大鼠骨性关节炎有良好的药效作用,其作用机制可能与抑制MMP-13产生,促进Aggrecan、Col-Ⅱ合成有关,从而达到修复软骨有关.

目的:对河南产光皮木瓜进行鉴定分析.方法:采用显微鉴别法鉴别光皮木瓜中的特征细胞;参照《中华人民共和国药典》(2015年版),测定光皮木瓜的水分、总灰分、酸度和浸出物含量;采用薄层色谱法对光皮木瓜进行定性鉴别;采用静态顶空进样技术采集光皮木瓜的香气成分,并结合气相色谱-质谱联用分析其成分.结果:显微鉴别中,光皮木瓜粉末特征明显.薄层色谱鉴别的斑点清晰,供试品、对照品和对照药材在相同的位置有对应斑点.气相色谱-质谱联用分析结合美国国家标准与技术局化学数据库检索,光皮木瓜的香气成分主要包括酸类、醇类、醛类、酮类、脂类和烯烃类,其中醛类、酮类和烯烃类是构成香气成分的重要物质.结论:光皮木瓜香味成分丰富,具有较高的营养价值和药用价值.

采用Diaion HP-20、Toyopearl HW-40、ODS、Sephadex LH-20、硅胶及半制备液相等多种色谱方法从光皮木瓜50％丙酮提取物分离得到3个吲哚类生物碱,利用MS、IR、UV、1D和2D NMR等波谱技术对其结构进行鉴定,分别为:木瓜新碱A (1)、Ginsenine (2)和(1S,3S)-1-甲基-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸 (3).其中化合物1为新化合物,化合物2和3为首次从光皮木瓜中分离得到.采用MTT法检测化合物1～3对β淀粉样蛋白25～35(Aβ25-35)诱导大鼠嗜铬细胞瘤细胞(PC-12)细胞损伤的保护作用,结果显示化合物2和3对PC-12细胞具有显著的保护作用.

目的 研究不同干燥过程中光皮木瓜水分迁移变化规律.方法 利用低场核磁共振(LF-NMR)技术无损、非侵入的技术优势,监测不同干燥方式(热风干燥、蒸制后干燥、分段式干燥、阴干)下光皮木瓜的横向弛豫时间(T2)反演谱,分析水分迁移变化.结果 新鲜光皮木瓜片中含有3种状态的水,其含量为自由水＞结合水＞不易流动水,热风干燥、蒸制后干燥、阴干的规律相似,总水分逐渐散失,水分与非水组分的结合力会增强,蒸制加快了木瓜片的失水率,蒸制后干燥与热风干燥下木瓜片失水速率有显著性差异(P＜0.05).分段式烘干中,干燥的间歇阶段会发生不同状态水分之间的转换,以重新达到相对稳定的平衡状态.低温干燥对木瓜组织破坏较小,更利于组织中不易流动水转化为自由水,进而较快散失,而高温干燥在前期就对木瓜片组织结构造成破坏,组织收缩变形,水分与非水组织间的结合力出现短暂增强的现象.结论 光皮木瓜干燥过程中3种状态的水分含量与LF-NMR T2谱的峰面积有较高的相关性,LF-NMR技术为光皮木瓜中水分分布及变化规律研究提供了直观的参考依据,为木瓜的加工开发提供理论基础.

目的:对河南地区的光皮木瓜进行质量分析.方法:采用酸碱滴定法测定总酸含量;采用高效液相色谱法测定齐墩果酸及熊果酸的含量,流动相甲醇-(体积分数)0.5％磷酸(90:10),检测波长:210nm;建立光皮木瓜的高效液相指纹图谱,流动相甲醇-(体积分数)0.1％磷酸(12.4:87.6),检测波长:253 nm.结果:光皮木瓜总酸含量为0.68 ～ 0.75mmol·g-1;齐墩果酸与熊果酸分别在0.17～ 1.10 μg,0.47～3.12 μg与峰面积有良好的线性关系.光皮木瓜指纹图谱共标定了13个共有峰.结论:酸碱滴定法测定总酸含量方法操作简便,高效液相色谱法测定齐墩果酸及熊果酸的总含量方法高效快速,两个峰可完全分离且峰形较好,高效液相色谱法建立指纹图谱方法重现性好,可作为河南产光皮木瓜的质量控制方法.

目的 考察不同采样期皱皮木瓜内在物质含量动态变化,不同部位SOD活性动态变化,保存方式及时间对SOD活性的影响,探讨木瓜最佳采收期、保存方法及时间.方法 通过紫外分光光度法测定木瓜不同采样期、不同部位及保存时间的SOD活性;通过高效液相色谱法测定其指标成分(熊果酸、齐墩果酸)含量,通过醇溶性浸出物测定法测定浸出物含量.结果 不同采样期皱皮木瓜SOD活性及内在物质含量均呈现动态变化;不同部位SOD活性为:果皮先低后高,果肉为先低、中高、后低,果仁皮先高后低.冷藏保鲜和冰冻处理条件下,木瓜果肉SOD均能保持稳定的活性.结论 重庆皱皮木瓜七月中旬到八月中旬为重庆皱皮木瓜的适宜采摘时间;SOD分布:六月初至七月初主要分布在果仁皮与果肉,七月中旬至八月底主要分布于果皮与果肉;鲜品保存时间在3个月以内都能保持SOD很好的活性.

目的:建立科学简易的大鼠皮质神经元的体外培养方法,观察尿激酶对其干预后的表现.方法:取24 h内新生Wistar大鼠脑皮质,用浓度为2 mg/mL的木瓜酶和适量DNase I酶共同消化,并用配置好的无血清Neurobasal培养基接种培养,6 d后免疫荧光法鉴定神经元纯度;分别配置含尿激酶终浓度为5 000 U/mL、8 000 U/mL、10 000 U/mL、15 000 U/mL和20 000 U/mL的Neurobasal培养基并进行全量换液,镜下观察不同浓度尿激酶干预后神经元的变化.结果:培养6 d,神经元分化成熟,胞质丰富,树突及轴突舒展延长,可见密集的神经纤维网络,免疫荧光鉴定神经元纯度为88.2%;尿激酶干预后,发现尿激酶浓度在5 000~10 000 U/mL时,2 h内镜下观察培养体系无明显变化,但随时间的延长,尿激酶浓度为10 000 U/mL作用4 h时,可见少量神经元细胞破碎崩解,细胞间网状结构减少.尿激酶浓度在15 000 U/mL及20 000 U/mL时,干预2 h发现神经元细胞崩解,网状结构消失.结论:本实验建立了一种简易、高效的体外培养新生大鼠皮质神经元的方法,尿激酶浓度在5 000~10 000 U/mL时,2 h内对体外神经元培养体系是安全的.

目的 基于Dincer模型探究不同干燥方式下光皮木瓜的干燥特性,为应用Dincer模型分析中药干燥传热传质过程及筛选适宜的光皮木瓜干燥技术和工艺提供理论依据.方法 采用气体射流冲击、中短波红外和真空脉动干燥技术干燥厚度为12 mm的光皮木瓜切片,采用气体射流冲击干燥9、12、15 mm厚度的光皮木瓜切片,研究其干燥特性并测定干燥后的色泽、维生素C (VC)、总黄酮、复水比和微观结构.结果 相同干燥温度下,3种干燥技术干燥速率从大到小分别为气体射流冲击、中短波红外及真空脉动干燥技术,对应干燥活化能(Ea)为43.10、36.95、20.37 kJ/mol;减小切片厚度有助于提高干燥效率.Weibull分布函数模拟结果表明,不同干燥条件下的尺度参数α为47.85～324.51,α越小干燥时间越短,气体射流冲击和中短波红外干燥形状参数β在0.859 9～0.980 6,说明干燥为内部水分扩散控制的降速干燥过程,而真空脉动干燥条件下β介于1.218 7～1.290 8,说明干燥受内部水分扩散和表面水分蒸发所共同主导;估算水分扩散系数(Dcal)在1.66×10-8～1.13×10-7 m2/s,随着α值的增大而减小.Dincer模型分析干燥特性表明,不同干燥条件下滞后因子(G)为1.135 6～1.337 6,说明干燥初期均有短暂的升速干燥过程;传热毕渥数(Bi)值在1.171 4～136.041 2,且随着干燥温度的升高而减小,水分有效扩散系数(Deff)在3.26×10-9～6.33×10-8 m2/s,相同干燥温度下D*eff＜Deff＜Dcal;传质系数(k)为9.02×10-6～8.82×10-5m/s,随着干燥温度的升高而增大.气体射流冲击干燥适合于光皮木瓜片的干燥加工,在实验参数范围内,干燥温度60℃、切片厚度12mm为最优干燥工艺,干燥时间为5h、明亮度L*为62.80±1.70、色差值△E为19.62±2.60、VC和黄酮质量分数分别为(1.107 8±0.005 0) mg/g和(36.74±0.60) mg/g、复水比为7.11±0.24.结论 该研究可为应用Dincer模型在中药干燥过程分析传热传质特性及筛选适宜的光皮木瓜干燥条件提供理论依据和技术支持.

目的 研究光皮木瓜Chaenomeles sinensis (Thouin) Koehne的化学成分.方法 采用Diaion HP-20、Toyopearl HW-40、MCI gel CHP-20、ODS、硅胶等柱填料并结合半制备液相等柱色谱技术对光皮木瓜提取物的化学成分进行分离,经波谱数据分析鉴定化合物的结构.结果 从光皮木瓜中分离得到7个已知化合物,分别鉴定为mussaendoside X(1)、stroside A(2)、(7R,8S)-dihydrodehydrodiconiferyl alcohol 4-O-β-D-glucopyranoside(3)、(+)-lyoniresinol-3α-O-β-D-glucopyranoside(4)、(-)-lyoniresinol-3α-O-β-D-glucopyranoside(5)、lyonire-sinol(6)、rel-(7R,8S)-3,3',5-trimethoxy-4',7-epoxy-8,5'-neolignan-4,9,9'-triol-9-β-D-glucopyranoside (7),其中化合物1和2为酚苷类化合物,化合物3～7为木脂素类化合物.结论 化合物1～7均为首次从该植物中分离得到.