目的:研究克班宁对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其潜在的作用机制.方法:采用CCK8、克隆形成实验和EdU染色检测克班宁对人胰腺癌细胞Panc-1和Patu-8988增殖的影响;采用流式细胞术和TUNEL染色检测克班宁对细胞凋亡的影响;采用Western blot实验检测克班宁对DUSP5蛋白,增殖相关蛋白Ki67,凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax,以及p-ERK1/2蛋白的影响.结果:克班宁处理24 h后的胰腺癌细胞增殖能力显著降低(P＜0.05),而凋亡率明显升高(P＜0.05);同时,DUSP5的表达上调(P＜0.05),p-ERK1/2的表达下降(P＜0.05).敲低DUSP5能够有效逆转克班宁对胰腺癌细胞的抑增殖和促凋亡作用(均P＜0.05),还能部分恢复克班宁降低的p-ERK1/2的蛋白水平(P＜0.05).结论:克班宁能够抑制胰腺癌细胞增殖并促进细胞凋亡,其机制是促进DUSP5的表达进而抑制ERK1/2的激活.

目的 制备叶酸修饰的克班宁聚乙二醇-聚乳酸羟基乙酸共聚物纳米粒(folic acid modified crebanine polyethylene glycol-polylactic acid hydroxyacetic acid copolymer nanoparticles,FA-Cre@PEG-PLGA NPs),并考察其体外释放及抗肿瘤活性.方法 以克班宁为模型药,用PEG-PLGA共聚物、叶酸等为材料,通过超声乳化-溶剂挥发法制备FA-Cre@PEG-PLGA NPs,采用激光粒度仪、透射电子显微镜和荧光显微镜对FA-Cre@PEG-PLGA NPs的粒径、ξ电位及形态进行表征,紫外光谱法测定并计算克班宁的包封率和载药量,比较FA-Cre@PEG-PLGA NPs和克班宁原料药72 h的体外释放规律,通过溶血实验考察二者生物学特性,CCK-8实验考察两者对正常肝L02细胞存活率的影响及对肝癌Bel-7402细胞体外增殖抑制作用.细胞划痕法考察纳米粒和原料药对肝癌Bel-7402细胞迁移能力的影响.荧光显微镜观察纳米粒在不同时间点对肝癌Bel-7402细胞的摄取情况.结果 FA-Cre@PEG-PLGA NPs 的平均粒径为(247.67+2.49)nm,多分散指数(polydispersity index,PDI)为0.139±0.027,ξ电位为(-9.40±0.54)mV,透射电子显微镜下呈圆球状核壳结构,荧光显微镜下观察纳米粒,其气化后明场呈蓝色光点、暗场呈红色光点.FA-Cre@PEG-PLGA NPs中克班宁的包封率为83.78％,载药量为67.78％.FA-Cre@PEG-PLGA NPs与克班宁原料药体外释放均符合Ritger-Peppas模型;安全性评价结果显示,FA-Cre@PEG-PLGA NPs相比于克班宁原料药在50～300 μg/mL内具有良好的生物相容性.FA-Cre@PEG-PLGA NPs对人正常肝L02细胞毒性较低,相比于克班宁原料药有一定的安全性.体外增殖抑制结果显示,两者对Bel-7402肿瘤细胞的增殖抑制率均呈现出剂量依赖性和时间依赖性,且FA-Cre@PEG-PLGA NPs联合超声辐照后对Bel-7402肝癌细胞具有更强的杀伤作用.细胞划痕实验表明,克班宁原料药、FA-Cre@PEG-PLGA NPs对Bel-7402肿瘤细胞迁移均有抑制作用,呈剂量依赖性,且纳米粒联合超声抑制细胞迁移效果更显著.细胞摄取实验表明,相同时间下超声联合纳米粒能有效增强肿瘤细胞的摄取.结论 成功制得FA-Cre@PEG-PLGA NPs,而且体外具有良好的缓释效果和抑瘤作用,为FA-Cre@PEG-PLGA NPs应用于肝癌的治疗研究提供实验依据.

目的:本论文深入探究黎药海南地不容抗乳腺癌活性化合物氧化克班宁对微管网络的破坏能力,研究氧化克班宁在分子层面和细胞层面对微管网络稳态的影响.方法:首先采用EBI位点竞争法和分子对接来确定氧化克班宁对微管位点的占据力;其次,采用Western Blot法检测STAT3、PKA1、CAMK4和PKA 检测氧化克班宁对微管蛋白的影响.结果:EBI位点竞争法结果显示,EBI与β-微管蛋白加合物比β-微管蛋白出现在分子量更小的区域(ctrl2).分子对接结果显示,氧化克班宁可以占据微管蛋白的秋水仙碱位点.Western Blot结果显示,低、中、高3个浓度的氧化克班宁或阳性药Taxol作用MCF-7细胞48 h后,显著降低STAT3蛋白表达水平(P<0.01),显著降低PKA1和CAMK4蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01),并且可降低PKA蛋白表达水平,与对照组差异均有统计学意义(P<0.01).结论:氧化克班宁结合在微管蛋白秋水仙碱位点扰乱微管蛋白聚合,造成MCF-7细胞有丝分裂,从而导致MCF-7细胞死亡.氧化克班宁可通过抑制MCF-7细胞中STAT3、PKA1、CAMK4和PKA蛋白的表达水平,干扰纺锤体形成,最终造成MCF-7细胞有丝分裂灾难.

书籍名称:《牙齿磨损修复与控制临床实用流程及方法》主编:苏比尔·班纳吉(Subir Banerji),沙米尔·梅塔(Shamir Mehta),尼克·奥普达姆(NiekOp-dam),巴斯·卢曼斯(Bas Loomans)主译:周炜出版社:辽宁科学技术出版社出版时间:2023年2月内容简介:口腔临床工作中经常遇到牙齿磨损的患者,随着患者治疗意识的提升,越来越多的患者开始接受对于磨牙症的治疗.

目的:制备并表征聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)-克班宁纳米粒(PLGA-Cre-NPs),考察其体外释放特性,为克班宁的体内作用时间延长、毒性降低提供参考.方法:以PLGA为载体,采用乳化溶剂扩散法制备PLGA-Cre-NPs.以包封率、粒径、多分散指数(PDI)为评价指标,通过星点设计-效应面法优选PLGA-Cre-NPs的制备工艺.利用膜透析法考察PLGA-Cre-NPs的体外释药规律.结果:PLGA-Cre-NPs的最佳制备工艺为有机相与水相体积比(3:10),丙酮-无水乙醇(8:2),PLGA投入量90 mg.PLGA-Cre-NPs的包封率(84.69±2.54)％,粒径(155.3±14.2) nm,PDI =0.095±0.018,扫描电镜显示其呈规则球形结构.PLGA-Cre-NPs体外释放包括速释和缓释2个阶段,0～24 h符合Weibull方程,24～ 168 h符合Higuchi方程;半衰期18.06 h,168 h时累计释放率达78.77％.结论:优选的工艺条件稳定可行.制得的PLGA-Cre-NPs包封率较高、粒径均匀,有望制备成缓释制剂.

目的:研究聚乙二醇-(聚乳酸-羟基乙酸)-聚乙二醇三嵌段共聚物(PELGE)-克班宁纳米粒(PELGE-Cre-NPs)在家兔体内的药动学.方法:取6只家兔,耳缘静脉注射PELGE-Cre-NPs(3.5 mg/kg),分别于给药后5、15、30、60、90、120、150、180、240、300 min时,于其耳缘静脉采血1 mL.分离血浆,用乙酸乙酯萃取Cre,并采用高效液相色谱法,以盐酸维拉帕米为内标,测定Cre的血药浓度,然后采用DAS 2.0软件绘制血药浓度-时间曲线并计算药动学参数.色谱条件采用色谱柱为Agilent ZORBAX Ex-tend-C18,流动相为甲醇-0.01％三乙胺溶液(75:25,V/V),流速为1 mL/min,检测波长为280 nm,柱温为30℃,进样量为20μL.结果:Cre检测血药浓度的线性范围为45.0～3600μg/L(R2=0.9999),日内、日间精密度试验和稳定性试验的RSD均小于5％(n=6或n=12),准确度为(97.44±2.41)％～(98.45±3.87)％(n=6).PELGE-Cre-NPs在家兔体内分布符合二室模型;主要药动学参数t1/2为(109.357±33.917)min,CL为(0.016±0.001)L/(min·kg),MRT为(76.733±7.502)min,cmax为(3699.458±287.713)μg/L.结论:PELGE-Cre-NPs在家兔体内的半衰期较Cre注射剂长,滞留时间延长,有缓释效果.

目的 测定克班宁贴剂的含量与体外释放度.方法 采用HPLC法测定贴剂中克班宁的含量,并以桨碟法测定其体外释放度.结果 采用Thermo BDS Hypersil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.3％三乙胺(75∶25),流速1 mL· min-1,柱温30℃.结论 所用方法简便、可行,可用于克班宁贴剂的质量控制.克班宁贴剂的体外累积释放度与时间的变化符合零级动力学方程.

目的 研究海南地不容(Stephania hainanensisH.S.Lo etY.Tsoong)生物碱对人肝癌细胞HepG-2、乳腺癌细胞MCF-7、胃癌细胞SGC-7901增殖的影响,筛选出有效的抗肿瘤化合物以及其敏感细胞株;分析其生物碱的构效关系.方法 采用MTT法检测不同浓度的海南地不容生物碱对人肝癌细胞HepG-2、乳腺癌细胞MCF-7、胃癌细胞SGC-7901增殖的抑制率;通过查阅国内外相关文献,分析海南地不容生物碱抗肿瘤活性的基本构效关系.结果 MTT结果显示荷包牡丹碱、氧化克班宁、去甲荷包牡丹碱和克班宁对人肝癌HepG-2、乳腺癌MCF-7和胃癌SGC-7901细胞的增值分别具有不同程度的剂量依赖性的抑制作用,各给药组分吸光度值与空白对照组比具有显著性差异(P＜0.01),与阳性对照比较无明显统计学差异(P＞0.05);海南地不容生物碱结构中的1,2-亚甲二氧基、N-亚甲基等取代基以及其化学结构的平面性对其抗肿瘤活性有重要影响.结论 海南地不容中具有明显抗肿瘤作用的生物碱为荷包牡丹碱、氧化克班宁、去甲荷包牡丹碱和克班宁,其敏感细胞株均为乳腺癌细胞MCF-7;通过分析海南地不容生物碱的结构和抗肿瘤活性的关系,初步明确了其抗肿瘤活性可能与其结构易于抑制DNA拓扑异构酶和诱导细胞凋亡有关.

1 案 例1.1 简要案情及病史摘要李某,女,29岁,辽宁抚顺人,某年7月16日在某健康管理公司接受Aqualyx溶脂针的全身多处注射, 7月24日在该公司接待区休息时出现呼之不应、面色发绀等异常,经送医院抢救无效于当日宣布死亡.经调查,死者十几年前曾有长期心悸、乏力病史,诊断为心律失常,目前职业为模特,平时工作较忙,加班时间长.家属怀疑死者系注射溶脂针导致死亡,要求行法医学鉴定明确死亡原因.

目的:考察克班宁血液和关节微透析探针的体内外回收率及其稳定性.方法:采用正微透析法和反微透析法,分别考察克班宁灌流速率、质量浓度对血液和关节探针体外回收率的影响,探讨正、反微透析法的回收率之间的关系;将血液和关节探针分别植入大鼠颈静脉和关节腔,考察探针在大鼠体内10 h反向回收率的稳定性.结果:克班宁血液和关节探针体外正向和反向微透析的回收率随着灌流速率(1.0,1.5,2.0,2.5,3.0μL· min-)的增大而降低;与克班宁质量浓度(4,8,16,40 μg·mL 1)无关,正向回收率与反向回收率基本一致,说明可以用反微透析法的回收率代替正微透析法的回收率对药物实际浓度进行校正;克班宁血液和关节探针在大鼠体内10h反向回收率保持相对稳定,血液和关节探针体内反向回收率分别为(65.57±1.11)％和(32.7±0.94)％.结论:建立的克班宁血液和关节微透析方法可用于克班宁大鼠血液和关节药动学研究.