目的:探索冠心病疾病进展相关基因,并预测冠心Ⅱ号方防治冠心病的作用靶点.方法:从基因表达综合数据库(GEO)下载急性心肌梗死(AMI)与稳定型冠心病(SCAD)病人转录组表达谱,通过差异表达分析和加权基因共表达网络分析(WGCNA),筛选冠心病疾病进展相关基因,并针对冠心病进展相关基因进行基因本体(GO)功能分析与京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析.从中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)数据库下载冠心Ⅱ号方的有效成分及药效靶点,与冠心病疾病进展相关基因进行交集分析,获得冠心Ⅱ号方防治冠心病的潜在靶点.结果:通过差异表达分析比较 AMI和 SCAD转录组表达谱,共获得 166 个差异表达基因(DEGs).通过 WGCNA获得与 AMI相关的基因模块 Black.取 DEGs与 Black模块的交集,获得 64个冠心病疾病进展相关基因.从 TCMSP数据库共获得 224个冠心Ⅱ号方的药效靶点,将药效靶点与冠心病疾病进展相关基因取交集,得到冠心Ⅱ号方防治冠心病的潜在作用靶点,即过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARG)、单核细胞分化抗原CD14(CD14)和细胞色素P4501b1(CYP1B1).结论:细胞因子信号转导抑制因子 3(SOCS3)、嗜酸性粒细胞阳离子相关蛋白(ECRP)、肿瘤坏死因子受体超家族成员10D(TNFRSF10D)、S100钙结蛋白 A9(S100A9)等 64个基因可能与冠心病疾病进展相关,其中,PPARG、CD14、CYP1B1 是冠心Ⅱ号方防治冠心病的潜在作用靶点.

目的:探讨冠心Ⅱ号(GXⅡ)对抑郁联合高脂大鼠模型的抗抑郁作用及可能的机制.方法:慢性不可预见性温和应激(CUMS)联合孤养造模方法诱导抑郁模型,CUMS联合孤养和高脂饮食诱导抑郁高脂模型.将Wistar大鼠按随机数字表法分为抑郁氟西汀组、抑郁GXⅡ组、抑郁模型组、抑郁高脂氟西汀组、抑郁高脂GXⅡ组、抑郁高脂模型组和空白对照7组,各组分别给予相应药物灌胃连续15 d.HE染色观察胸主动脉及大脑中动脉的病理变化,旷场实验、强迫游泳实验评估行为学变化,Western blot测定海马脑源性神经营养因子(BDNF)含量.结果:抑郁高脂GXⅡ组能改善胸主动脉及大脑中动脉粥样硬化,抑郁氟西汀组、抑郁GXⅡ组、抑郁高脂氟西汀组、抑郁高脂GXⅡ组旷场实验活动总距离增加,强迫游泳不动时间缩短,海马BDNF含量提高.结论:GXⅡ对心脑动脉具有抗动脉粥样硬化的保护作用,同时具有抗抑郁样作用,其机制可能与上调海马BDNF表达相关.本研究体现了中医学“脑心同治”,可能为治疗抑郁症合并冠心病患者提供临床用药参考.

罗铨教授在中医理论的指导下,结合多年的临床经验,总结出气虚血瘀是冠心病的基本病机所在,益气(养阴)活血是治疗冠心病的基本原则,同时治疗中不忘补益肝肾,他善于灵活运用活血药对,并提出了多个针对气虚血瘀型冠心病的自拟方:生脉饮加味、生脉丹参饮、冠心Ⅱ号方、通痹方等,其疗效甚验,对临床治疗冠心病具有重要的指导作用.

目的 利用系统药理学方法探究冠心Ⅱ号方治疗冠心病的作用机制.方法 利用TCMSP数据库筛选出冠心Ⅱ号方五味药所含有效化学成分,用DrugBank数据库和PharmMapper服务器对有效化学成分进行作用靶点预测;通过GeneGards和CTD数据库筛选出与冠心痛相关靶点,将疾病相关靶点与化合物靶点进行对比得到交集靶点,利用David在线分析工具对交集靶标基因进行GO分析和KEGG分析,用IGEMDOCK软件验证靶标基因与活性成分的结合活性.结果 共得出150个活性成分,对应176个靶点,与冠心病相关靶点22个,网络分析结果表明靶点参与血压调节、一氧化氮生物合成过程的正调控、谷胱甘肽代谢过程等生物学过程;线粒体、细胞外间隙、神经元胞体等细胞组成;超氧化物歧化酶活性、蛋白酪氨酸激酶活性等分子功能;调节FOXO信号转导通路、ErbB信号通路、HIF-1信号通路和AMPK信号通路等通路发挥治疗冠心痛作用.结论 本研究从系统药理学层面初步揭示了冠心Ⅱ号方治疗冠心病的作用机制,冠心Ⅱ号方治疗冠心痛具有多成分、多靶点、多途径等特点,为下一步深入验证研究提供了良好的理论基础和新的思路.

Objective:To study the pharmacological mechanism of Guanxin Ⅱ formula(冠心Ⅱ号方,GX Ⅱ)for treatment of coronary heart disease(CHD).Methods:A network pharmacology-based method was utilized.First candidate compounds,targets of GX Ⅱ were collected using PharmMapper,BATMAN-TCM,DrugBank and SwissTargetPrediction,and targets on CHD were mined from GeneCards,DisGenet,DrugBank and GEO.Afterwards,the big hub compounds and targets were chosen in the candidate compounds-direct therapeutic targets on the CHD(C-T)network and the direct therapeutic targets on the CHD(T-D)network.Furthermore,the Gene Ontology and Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes analysis were performed to identify the enriched terms.Finally,a molecular docking simulation strategy was adopted to verify the binding capacity between the big hub compounds and big hub targets on CHD.Results:First,114 candidate compounds were selected with the following criteria:OB≥30％,DL≥0.18,and HL ≥4 h.Then,1,035 targets of GX Ⅱ were gathered,while 928 targets on CHD were collected.Afterwards,196 common targets of compound targets and therapeutic targets on CHD were defined as direct therapeutic targets acting on CHD.In addition,the contribution index(CI)in the C-T network was calculated,and 4 centrality properties,including degree,betweenness,closeness and coreness,in the T-D network,4 big hub compounds,and 6 big hub targets were eventually chosen.Furthermore,the GO and KEGG analysis indicated that GX Ⅱ acted on CHD by regulating the reactive oxygen species metabolism,steroid metabolism,lipid metabolism,inflammatory response,proliferation,differentiation and apoptosis.The docking results manifested excellent binding capacity between the 4 big hub compounds and 6 big hub targets on CHD.Conclusion:This network pharmacology-based exploration revealed that GX Ⅱ might prevent and inhibit the primary pathological processes of CHD.

目的 对冠心Ⅱ号方的活性成分进行鉴定,探讨其在治疗急性心肌梗死中作用机制.方法 采用高效液相色谱-质谱联用技术(HPLC-MS/MS)对冠心Ⅱ号方的成分进行鉴定;利用中药系统药理数据库筛选出已检测出成分的作用靶点;利用GendCards、OMIM数据库筛选疾病相关靶点;使用STRING平台对靶点进行PPI网络构建;利用Bioconductor数据库对靶点进行GO和KEGG富集分析;利用Cytoscape 3.7.2软件构建中药-成分-靶点-通路-疾病网络图,然后通过拓扑学参数分析获得冠心Ⅱ号方治疗急性心肌梗死的核心靶点,最后将鉴定出的质控成分与核心靶点进行分子对接验证.结果 整合HPLC-MS/MS和网络药理学结果,检测出冠心Ⅱ号方5种化学成分,分别为阿魏酸、芍药苷、羟基红花黄色素A、丹参素、原儿茶醛;筛选出CHRM1、CHRM2、CHRM3、PTGS1、ADRA1A、PLAU、GABRA1、AR、IL6共9个关键靶点,涉及神经活性配体受体相互作用、钙信号通路、胆碱能突触、肌动蛋白细胞骨架调节4条信号通路.分子对接显示,5种质控成分与核心靶点CHRM1具有较好的结合活性,分子构象结合稳定.结论 HPLC-MS/MS可快速、准确检测出冠心Ⅱ号方5种质控成分.联合网络药理学研究对鉴定出的5种成分进行靶点与通路分析,冠心Ⅱ号方5种质控成分可通过与CHRM1靶蛋白结合,调节神经活性配体受体相互作用、钙信号通路、胆碱能突触、肌动蛋白细胞骨架调节信号通路来抑制心梗后的氧化应激、炎症损伤和细胞凋亡,发挥保护心肌细胞的作用.本研究为进一步阐述冠心Ⅱ号方在急性心肌梗死中的作用机制提供了新的思路和方向.但是,冠心Ⅱ号方是否通过上述4条通路发挥作用及通路间的主要作用靶点和通路间相互情况仍需要进一步的实验证明.

目的 对经典名方进行二次开发,比较观察冠心Ⅱ号精制方/纯化方对垂体后叶素(pit)致实验性急性心肌缺血模型大鼠的药理效应和作用机制.方法 现代工艺提取冠心Ⅱ号方及高效液相色谱仪绘制指纹色谱图.SPF级,Wist-ar大鼠,♀♂各半,随机分为5组,即模型组(等体积纯净水)组;阳性药组(尼可地尔片,2.7 mg·kg-1)、复方川丹颗粒组(3.19 g·kg-1)、冠心Ⅱ号精制方组(1.39 g·kg-1)、冠心Ⅱ号纯化方组(0.27 g·kg-1),3组中药提取物均相当于生药4.60 g·kg-1,灌胃给药7 d,舌下静脉丛注射pit造模.另设生理盐水组(等体积纯净水),注射等体积生理盐水.免疫竞争法检测肌酸激酶同工酶(CK-MB),ELISA法检测心肌肌钙蛋白T(cTnT)、内皮素-1(ET-1)、一氧化氮(NO)含量;采用分光光度仪-比色法测定超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、总抗氧化物(T-AOC)水平;采用比色法检测Na+,K+-ATP,Ca2+,Mg2+-ATP酶活性.结果 与模型组比较,10 min时的尼可地尔组、冠心Ⅱ号纯化组具有明显抑制心电图J点偏移和升高的作用(P<0.05);尼可地尔组、川丹颗粒组、冠心Ⅱ精制组和冠心Ⅱ纯化组明显抑制cTnT、ET含量的升高(P<0.05,P<0.05),减少CK-MB的漏出;明显提高NO、CAT和SOD的含量(P<0.05,P<0.05);同时升高Ca2+,Mg2+-ATP的活性(P<0.05,P<0.05).结论 冠心Ⅱ精制方和冠心Ⅱ纯化方对pit所致的心肌缺血具有保护作用,其机制涉及抗氧化应激、抑制钙超载、平衡血管稳态等方面.

目的 对冠心Ⅱ号进行提取工艺改进并观察其对急性心肌梗死(AMI)大鼠心脏功能的影响.方法 将冠心Ⅱ号提取工艺进行改进和优化得到精制过滤液和纯化洗脱液,并采用高效液相色谱仪进行主要成分分析.采用左冠状动脉前降支下结扎法制备AMI模型,造模成功的50只大鼠按随机数字表法分为模型组、尼可地尔片组(2.7 mg/kg体重)、复方川丹颗粒组(川丹颗粒,4.609生药/kg体重)、冠心Ⅱ号精制组(4.609生药/kg体重)、冠心Ⅱ号纯化组(4.609生药/kg体重)组,每组10只.另设10只穿线不结扎为假手术组.术后第2天开始灌胃给药,连续4周,假手术组、模型组灌胃等容积纯净水.采用高频超声心动图检测各项心脏形态学和功能指标.ELSIA法检测心肌钙蛋白T(cTnT)、内皮素-1(ET-1)、降钙素基因相关肽(CGRP)、肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)、血栓素B2(TXB2)和6-酮-前列腺素F1α(6-Keto-PGF1α)水平.TTC法染色测量心肌梗死面积,HE染色观察心肌病理形态和炎症细胞浸润状态.结果 丹酚酸B和芍药苷外标含量分别为川丹颗粒0.767％、0.418％,冠心Ⅱ号精制组4.247％、1.546％,冠心Ⅱ号纯化组32.758％、12.150％.与假手术组比较,模型组ET-1、TXB2升高(P＜0.05,P＜0.01),心脏超声学检测指标改善(P＜0.05,P＜0.01).与模型组比较,冠心Ⅱ号方两组和尼可地尔片组心脏超声学检测指标改善(P＜0.05,P＜0.01),大鼠心重指数、梗死面积比值、cTnT、ET-1和TXB2水平亦降低(P＜0.05,P＜0.01);川丹颗粒组部分心脏超声学检测指标改善(P＜0.05,P＜0.01),大鼠心重指数、cTnT、ET-1和TXB2降低(P＜0.05,P＜0.01);各给药组大鼠心肌缺血区的心肌细胞炎症浸润和细胞形态不同程度改善.结论 冠心Ⅱ号提取工艺改进的主要有效成分丹酚酸B和芍药苷含量有较大提高,可提高AMI后大鼠心脏的射血分数、抑制心室重构及改善心功能,部分指标优于川丹颗粒.

目的:在前期冠心Ⅱ号具有抗抑郁作用的研究基础上,采用高效液相色谱(HPLC)技术,通过分析冠心Ⅱ号主要活性成分在大鼠体内血清及脑组织的含量测定,揭示冠心Ⅱ号抗抑部作用的物质基础.方法:SD大鼠灌胃冠心Ⅱ号(2.5 g/kg),30 min后处死取血清及脑组织,采用HPLC检测血清及脑组织中羟基红花黄色素A、阿魏酸、丹酚酸B的含量,并计算各单体成分的血脑屏障(BBB)透过率.色谱柱:Agilent Zorbax SB-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相:乙腈(A)-0.1％磷酸(B);柱温:35℃;流速:1.0 mL/min.结果:血清中羟基红花黄色素A、阿魏酸、丹酚酸B的线性回归方程分别为Y=3.9765X+0.4310(r=0.9999),Y=70.262X+69.1410(r=0.9999),Y=34.729X-2.4044(r=0.9996).脑组织中羟基红花黄色素A、阿魏酸、丹酚酸B的线性回归方程分别为Y=4.5869X-0.0963(r=0.9998),Y=70.859X+100.0400(r=0.9981),Y=42.176X+18.2420(r=0.9995).3种活性单体成分在血清及脑组织质量浓度比较,差异无统计学意义(P＞0.05).羟基红花黄色素A、阿魏酸、丹酚酸B在大鼠正常状态的BBB透过率分别为1.22％、1.27％及0.87％,三者均能透过BBB.结论:冠心Ⅱ号灌胃大鼠后血清及脑组织中均能检测到羟基红花黄色素A、阿魏酸、丹酚酸B这3种活性单体成分,这三者可能是冠心Ⅱ号抗抑郁作用的潜在物质基础,并且均能透过BBB.