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羟基红花黄色素A对人肾小管上皮细胞冷缺氧/复氧凋亡的影响
编辑人员丨4天前
目的:探讨羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A,HSYA)预处理组对人肾小管上皮细胞(HK2细胞)冷缺氧/复氧(冷H/R)损伤导致的细胞凋亡的影响。方法:HK2细胞株消化传代后采用计算机随机方法分为sham组(对照组)、冷缺氧/复氧组(冷H/R组,细胞冷缺氧4 h,复氧4 h)、HSYA预处理组(HSYA各亚组,缺氧前0.5 h给予不同剂量的HSYA,余同冷H/R组)。采用CCK-8法测细胞存活率;采用细胞爬片免疫组化法和免疫印迹法检测各组HK-2细胞的Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达情况。结果:(1)与冷H/R组相比,HSYA不同剂量可不同程度提高细胞存活率,但仅HSYA25 μmol/L组效果最显著(74.000±5.500与59.000±3.800, P<0.05)。(2)免疫细胞化学半定量评分:与冷H/R组相比,HSYA25 μmol/L组HK2细胞中Bax、Caspase-3的表达明显降低[0(0,1)与8(6,8), Z=2.041, P<0.05和3.400±0.548与7.800±1.095, t=11.000, P<0.01];Bcl-2蛋白的表达明显升高(6.800±1.095与1.400±0.548, t=10.590、 P<0.01);Bcl-2/Bax比值明显升高。(3)免疫印迹法检测蛋白:与冷H/R组相比,HSYA25 μmol/L组HK2细胞中Bax、Cleaved-Caspase-3和Pro-Caspase-3蛋白水平明显减少(0.707± 0.012与0.968±0.117,0.480±0.009与0.735±0.005,0.992±0.008与1.197±0.005, P均<0.01);Bcl-2蛋白表达水平显著增加,Bcl-2/Bax比值明显增高(0.410±0.009与0.273±0.008,0.582±0.016与0.282±0.080, P均<0.01)。实验结果与免疫细胞化学结果相一致。 结论:HSYA可有效减少冷缺氧/复氧后HK2细胞的损伤。
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编辑人员丨4天前
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正交试验联合人工神经网络优选活血散瘀泡腾片提取工艺
编辑人员丨4天前
目的:优选活血散瘀泡腾片的提取工艺。方法:以芍药苷与羟基红花黄色素A含量、干膏收率为评价指标,采用层次分析法、多指标综合评分法结合正交试验、Back Propagation(BP)人工神经网络优选加水量、提取时间、提取次数等工艺参数。结果:芍药苷和羟基红花黄色素A分别在0.079 5~1.590 4 μg、0.038 5~1.539 2 μg范围内线性关系良好,平均回收率分别为98.18%、96.22%, RSD分别为0.77%、1.31%。确定活血散瘀泡腾片最佳提取工艺为9倍量水,加热回流提取3次,每次1 h。 结论:正交试验联合BP人工神经网络优化方法实用高效,优选的提取工艺科学合理,稳定可行。
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编辑人员丨4天前
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羟基红花黄色素A联合透明质酸酶治疗透明质酸动脉栓塞的实验研究
编辑人员丨4天前
目的:探索羟基红花黄色素A(HSYA)联合透明质酸酶(HAase)治疗透明质酸(HA)动脉栓塞的效果。方法:32只雄性白色家兔采用随机数字表法分为4组,每组8只,其中A、B、C组为试验组,D组为对照组。建立HA动脉栓塞模型:于兔耳背侧面以中央动脉为轴,距耳根部4.0 cm,蒂宽1.0 cm,切开大小为2.0 cm × 5.0 cm的矩形复合组织瓣(深度达耳腹侧软骨膜),原位连续缝合,自近端向远端分3等分(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ区);距组织瓣近端1 cm与中央动脉交点为进针点,注入HA 50 μl。在栓塞60 min后,对各组进行治疗。A组:于大腿隐静脉缓慢注入HSYA溶液20 ml(HSYA按10 mg/kg计算用量);B组:于耳进针点注入HAase溶液0.5 ml(400 U/ml);C组:于耳进针点注入HAase溶液0.5 ml,大腿隐静脉缓慢注入HSYA溶液20 ml,药物剂量同A、B组;D组大腿隐静脉、耳进针点及A、B组除给药途径的另一注射部位给予等量生理盐水。腿部注药每日1次,共14 d。于术后即刻和第1、7、14天观察组织瓣情况,并拍摄兔耳背侧照和逆光照,计算术后第14天组织瓣成活面积百分比。术后第14天,对兔耳组织瓣Ⅱ区取材,做HE和Masson染色,并检测超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。符合正态分布计量数据以 ± s表示,多组间比较采用单因素方差分析,采用LSD检验分析两组间差异, P < 0.05认为差异有统计学意义。 结果:术后即刻各组组织瓣均呈苍白色。术后第1天,各组远端出现暗淡的缺血区。术后第7天,各组缺血区不同程度坏死、发黑,非坏死区肿胀明显。术后第14天,各组缺血区进一步坏死、发黑、卷曲、边界清;C组组织瓣缺血坏死情况最轻,D组最重,A、B组介于其间,A、C组非坏死区基本消肿。HE染色示:D组血管内形成大量血栓,大量炎性细胞浸润;B组次之;A、C组血栓少见。Masson染色示:C组胶原纤维排列规则;D组大量胶原纤维崩解断裂;A、B组介于其间。A、B、C、D各组组织瓣成活面积百分比分别为(69.87±5.04)%、(85.03±6.58)%、(93.93±4.25)%、(49.22±9.64)%,组间两两比较差异均有统计学意义( P均< 0.01)。A、B、C、D各组SOD活性分别为(49.83±8.08)、(36.65±5.49)、(55.61±7.93)、(22.45±5.47)U/mg prot,除A组与C组差异无统计学意义外,其余组间两两比较差异均有统计学意义( P均< 0.01)。A、B、C、D各组MDA含量分别为(0.77±0.17)、(1.03±0.16)、(0.68±0.12)、(0.41±0.09)nmol/mg prot,除A组与C组差异无统计学意义外,其余组间两两比较差异均有统计学意义( P均< 0.01)。 结论:动物实验条件下,与单独应用HAase相比,HSYA联合HAase能明显增强HA动脉栓塞的治疗效果,增加组织瓣成活面积比例。
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编辑人员丨4天前
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HPLC波长切换法同时测定通络治痹方中6种成分含量
编辑人员丨4天前
目的:建立HPLC波长切换法同时测定通络治痹方中绿原酸、羟基红花黄色素A、阿魏酸、山柰酚3-O-芸香糖苷、蛇床子素、二氢欧山芹醇当归酸酯6种有效成分含量。方法:色谱柱为XBridge C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈(A)-0.1%磷酸水(B),梯度洗脱,流速1 ml/min,柱温30 ℃,检测波长330 nm(0~14 min检测绿原酸,15~80 min检测阿魏酸、山柰酚3-O-芸香糖苷、蛇床子素、二氢欧山芹醇当归酸酯)、403 nm(14~15 min检测羟基红花黄色素A)。结果:绿原酸、羟基红黄花色素A、阿魏酸、山柰酚3-O-芸香糖苷、蛇床子素、二氢欧山芹醇当归酸酯分别在0.029 7~1.485 0、0.030 0~1.500 0、0.009 9~0.495 0、0.017 5~0.875 0、0.028 4~1.420 0、0.013 7~0.685 0 μg内具有良好线性关系( R2≥0.999 8),精密度、稳定性(24 h)、重复性 RSD均低于2%。平均加样回收率在95%~105%, RSD均在0.32%~1.67%。10批通络治痹方供试样品中,上述6个成分含量测定结果依次为0.221 60、0.314 30、0.085 10、0.032 95、0.043 87、0.026 21 mg/g。 结论:建立的HPLC波长切换法快速、简便而准确,可同时测定通络治痹方中上述6种成分含量,为通络治痹方质量控制及新剂型研究提供参考。
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编辑人员丨4天前
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HPLC-DAD-ELSD法测定补阳还五汤中8个活性成分含量
编辑人员丨4天前
目的:建立高效液相色谱-二极管阵列检测器-蒸发光散射检测器(HPLC-DAD-ELSD)法同时测定补阳还五汤中羟基红花黄色素A、芍药苷、毛蕊异黄酮苷、阿魏酸、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花黄素和黄芪甲苷8个活性成分含量的方法。方法:采用Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以乙腈-0.1%甲酸为流动相,梯度洗脱,流速1.0 ml/min,柱温30 ℃,检测波长230 nm(芍药苷)、254 nm(毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花黄素)、322 nm(阿魏酸)和403 nm(羟基红花黄色素A),蒸发光散射检测器漂移管温度60 ℃,载气流速1.6 L/min。结果:羟基红花黄色素A、芍药苷、毛蕊异黄酮苷、阿魏酸、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花黄素和黄芪甲苷分离度良好,线性关系符合要求( r=0.994 0~0.999 9),平均回收率为97.8%~101.4%, RSD为1.28%~3.70%。 结论:该方法简便、稳定、重复性良好,可用于补阳还五汤的质量控制。
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编辑人员丨4天前
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羟基红花黄色素A对慢性束缚应激模型小鼠抑郁样行为及海马GABAAR表达的影响
编辑人员丨4天前
目的:探讨羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A,HSYA)对慢性束缚应激模型小鼠抑郁样行为及海马γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)A型受体(type A GABA receptor,GABAAR)表达的影响。方法:将健康雄性SPF级C57BL/6C小鼠按照随机数字表法分为对照组、HSYA组、模型组、模型+HSYA组、模型+氟西汀组,每组12只。采用慢性束缚应激方法建立抑郁小鼠模型,HSYA组和模型+HSYA组小鼠腹腔注射给予HSYA(20 mg/kg),模型+氟西汀组小鼠腹腔注射氟西汀(10 mg/kg),对照组和模型组小鼠给予等体积0.9%氯化钠溶液,1次/d,连续给药14 d。采用强迫游泳实验和悬尾实验评价动物的抑郁样行为,Western blot检测小鼠海马组织内GABAAR不同亚型的蛋白表达水平。采用SPSS 19.0和GraphPad Prism 8.0软件分析数据和制图,多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用Tukey-HSD检验。结果:(1)在行为学实验中,5组小鼠在强迫游泳实验中的漂浮不动时间和悬尾实验中的悬尾不动时间均差异有统计学意义( F=21.59,20.81,均 P<0.05)。模型组小鼠漂浮不动时间[(143.91±9.97)s]和悬尾不动时间[(107.00±6.54)s]均高于对照组[(52.92±6.70)s,(43.50±5.96)s,均 P<0.05]。模型+HSYA组小鼠的游泳漂浮不动时间[(26.17±7.69)s]和悬尾不动时间[(20.17±7.89)s]与模型+氟西汀组[ (61.60±16.22)s, (34.14±10.74)s]相比均差异无统计学意义(均 P>0.05),但两组的游泳漂浮时间和悬尾不动时间均低于模型组(均 P<0.05)。(2)Western blot结果显示,4组小鼠海马组织内GABAAR亚型GABAARβ1和GABAARβ2的蛋白表达水平均差异有统计学意义( F=12.21,11.40,均 P<0.05)。模型组小鼠海马组织内GABAARβ1(45.60±10.76)和GABAARβ2(46.27±4.82)的蛋白表达水平均低于对照组[GABAARβ1(100.00±3.44),GABAARβ2(100.00±3.26),均 P<0.05]。与模型组相比,模型+HSYA组GABAARβ1(79.91±5.00)和GABAARβ2(79.08±5.53)蛋白表达水平均较高(均 P<0.05)。此外,4组小鼠海马组织内GABAARα1和GABAARγ1蛋白表达均差异无统计学意义( F=0.23,0.10,均 P>0.05)。 结论:HSYA能有效缓解抑郁模型小鼠的抑郁样行为,这可能与其上调海马组织GABAARβ1和GABAARβ2的表达有关。
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编辑人员丨4天前
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羟基红花黄色素A对耳鸣大鼠下丘γ-氨基丁酸和谷氨酸的影响
编辑人员丨4天前
目的:观察羟基红花黄色素A对耳鸣大鼠下丘神经递质γ-氨基丁酸(GABA)和谷氨酸(Glu)水平的影响。方法:采用水杨酸钠诱导联合饮水抑制法建立大鼠耳鸣模型,大鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、卡马西平组(5 mg/kg)、羟基红花黄色素A组(20 mg/kg)。腹腔注射给药15 d后,记录各组条件反射消退时间,检测不同声音频率(4、12、20、28 kHz)下大鼠听性脑干反应(ABR)阈值,采用液质联用法检测大鼠下丘GABA、Glu含量。结果:与模型组比较,羟基红花黄色素A组条件反射消退时间[(3.55±0.69)d比(1.83±0.58)d]延长( P<0.01);在4、12、20、28 kHz声音频率下,羟基红花黄色素A组ABR阈值降低( P<0.01);羟基红花黄色素A组大鼠下丘GABA水平[(2.25±0.26)μmol/g比(1.96±0.19)μmol/g]升高( P<0.05),Glu水平[(2.95±0.34)μmol/g比(3.71±0.39)μmol/g]降低( P<0.01)。 结论:羟基红花黄色素A可改善水杨酸钠所致大鼠耳鸣症状,可能与恢复听觉中枢兴奋性和抑制性递质的平衡有关。
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编辑人员丨4天前
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羟基红花黄色素A对小鼠重症急性胰腺炎相关肺损伤的保护作用研究
编辑人员丨4天前
目的:本文研究羟基红花黄色素A(Hydroxysafflor yellow A,HSYA)对重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)相关肺损伤的保护作用及其机制。方法:50只小鼠随机数字法分成5组(每组10只):假手术组,SAP组和不同剂量(20,40和80 mg/kg)HSYA预处理组。在SAP诱导前24 h,采用HSYA预处理小鼠,并在造模72 h后分离胰腺和肺组织用于组织病理学检查,并收集支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid, BALF)用于生化分析。结果:与对照组相比,SAP组血清淀粉酶活性、肺损伤病理评分和BALF蛋白浓度均显著增高[(2120.44 ± 354.5)U/L vs. (226.72 ± 20.84)U/L;(6.91±0.28) vs. (0.53±0.18);(2563.25±348.22) μg/mL vs. (345.62±56.35) μg/mL,均 P<0.05 ];炎性因子tumor necrosis factor (TNF)-α和interleukin (IL)-6水平和髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)活性升高[(120.5±14.25) pg/mL vs. (31.5±4.82) pg/mL; (214.72±10.62) pg/mL vs. (39.26±5.66) pg/mL; (4.52±0.34) Units/mg vs. (1.03±0.17) Units/mg]。与SAP组相比,HSYA预处理显著减轻SAP相关胰腺和肺组织损伤以及BALF中炎性因子TNF-α、IL-6和MPO活性。此外,HSYA促进抗氧化蛋白血红素氧合酶1(heme oxygenase-1,HO-1)表达,并阻断NF-κB信号通路激活。 结论:HSYA可以发挥抗炎和抗氧化活性从而抑制SAP相关肺损伤,表明HSYA可能是SAP诱导肺损伤的潜在治疗药物。
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编辑人员丨4天前
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伤科活血水煎液多组分薄层色谱法鉴别及含量测定
编辑人员丨4天前
目的:建立伤科活血水煎液中阿魏酸、藁本内酯、羟基红花黄色素A和芍药苷4个药效成分薄层色谱法(TLC)鉴别和含量测定的方法,用于其质量评价。方法:采用TLC定性鉴别伤科活血水煎液中的阿魏酸、藁本内酯、羟基红花黄色素A和芍药苷,采用HPLC法测定其含量。色谱柱为Waters Symmetry ShieldTM RP18(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相为乙腈-0.15%磷酸水溶液,梯度洗脱;流速1.0 ml/min;柱温30 ℃;检测波长320 nm(33~50 min检测阿魏酸,55~70 min检测藁本内酯)、403 nm(7~31 min检测羟基红花黄色素A)、230 nm(7~31 min检测芍药苷)。结果:TLC各斑点清晰;阿魏酸在3.05~48.74 μg、藁本内酯在3.50~26.24 μg、羟基红花黄色素A在21.34~213.44 μg、芍药苷在24.22~193.76 μg范围内线性关系良好,方法稳定性、重复性及回收率良好。结论:建立了同时测定伤科活血水煎液中4个药效成分的TLC法和HPLC法,适用于伤科活血水煎液的质量评价。
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编辑人员丨4天前
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血必净注射液及其组分羟基红花黄色素A对脓毒症大鼠凝血功能和生存率影响的比较研究
编辑人员丨4天前
目的:探讨血必净注射液(血必净)及其组分羟基红花黄色素A对脓毒症大鼠凝血功能和生存率的影响。方法:①凝血功能评估实验:将144只雄性SD大鼠按随机数字表法分为假伤组、盲肠结扎穿孔术(CLP)致脓毒症模型组(CLP组)、CLP+血必净组及CLP+羟基红花黄色素A组,每组36只。采用CLP制备脓毒症大鼠模型;假伤组大鼠仅开腹暴露盲肠后还纳腹腔,其余步骤同CLP组;CLP+血必净组及CLP+羟基红花黄色素A组大鼠术后经尾静脉注射血必净(4 mL/kg、每日2次)或羟基红花黄色素A溶液(0.378 g/L,每次298 μg、每日2次)。分别于术后6、12、24 h采用全自动凝血分析仪检测外周血凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原(Fib)和D-二聚体水平;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测外周血组织因子(TF)、组织因子途径抑制物(TFPI)及可溶性血栓调节蛋白(sTM)水平。②生存分析:另取120只大鼠按随机数字表法分组(组别及处理方法同凝血功能评估实验),每组30只。绘制Kaplan-Meier生存曲线,观察并记录各组大鼠术后7 d累积生存率。结果:①凝血功能评估实验结果:与假伤组比较,CLP组大鼠早期即出现明显的凝血功能异常,表现为CLP术后6 h PT即明显延长(s:8.9±0.2比8.4±0.4, P<0.01),Fib、D-二聚体、TFPI及sTM水平即明显升高〔Fib(g/L):2.8±0.3比2.3±0.1,D-二聚体(ng/L):1.8±0.2比1.5±0.1,TFPI(ng/L):131.1±10.9比102.8±10.5,sTM(μg/L):27.2±1.2比19.8±2.9,均 P<0.01〕;术后12 h凝血功能异常情况愈加严重,并随时间延长进一步恶化。血必净及羟基红花黄色素A在术后6 h即能显著改善脓毒症大鼠凝血功能,表现为PT较CLP组明显缩短(s:8.3±0.2、8.3±0.1比8.9±0.2,均 P<0.01),Fib、D-二聚体、TFPI及sTM水平较CLP组明显降低〔Fib(g/L):2.3±0.1、2.3±0.2比2.8±0.3,D-二聚体(ng/L):1.5±0.1、1.5±0.2比1.8±0.2,TFPI(ng/L):109.5±10.2、91.5±5.0比131.1±10.9,sTM(μg/L):22.3±1.5、21.1±1.8比27.2±1.2,均 P<0.01〕;但两个干预组间凝血功能指标比较差异均无统计学意义。②生存分析结果:假伤组大鼠术后7 d均存活;而CLP组大鼠术后7 d累积生存率仅36.67%(11/30)。与CLP组比较,CLP+血必净组及CLP+羟基红花黄色素A组大鼠累积生存率均明显升高〔66.67%(20/30)、66.67%(20/30)比36.67%(11/30),均 P<0.05〕,且CLP+血必净组与CLP+羟基红花黄色素A组间比较差异无统计学意义。 结论:血必净及其组分羟基红花黄色素A均能有效改善脓毒症大鼠凝血功能障碍,提高生存率,且二者的效应无明显差异。
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编辑人员丨4天前
