目的:采用1-溴丙烷(1-bromopropane，1-BP)诱导大鼠认知功能障碍，探讨神经炎性反应在1-BP致中枢神经毒性中的作用。方法:60只清洁级雄性Wistar大鼠按照随机数字表法分为对照组(Control组)、1-BP组、吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(pyrrolidine dithiocarbamate，PDTC)组(PDTC组)和PDTC+1-BP组，每组15只。1-BP组和1-BP+PDTC组大鼠灌胃800 mg/kg的1-BP，Control组和PDTC组大鼠给予等体积玉米油，1次/d，连续灌胃12 d；PDTC组和PDTC+1-BP组在灌胃30 min后腹腔注射100 mg/kg的PDTC，Control组和1-BP组注射等体积生理盐水，1次/d，连续干预12 d。实验第7~12天每组随机取10只大鼠采用Morris水迷宫检测大鼠神经行为学指标，定位航行实验检测大鼠的学习记忆能力，空间探索实验评价大鼠对空间位置的记忆能力。行为学实验结束后，每组随机选取10只大鼠处死，分离大脑前额叶皮质，采用Western blot检测NF-κB的激活情况，qRT-PCR检测TNF-α及IL-1β mRNA水平；每组剩余5只大鼠经体内灌注固定后，取大脑制作冷冻切片，采用免疫组化染色和尼氏染色观察胶质细胞激活及神经元损伤情况。采用SPSS 20.0对实验数据进行统计学处理，游泳总距离和逃避潜伏期数据采用重复测量方差分析，穿越平台次数及其他数据采用单因素方差分析，进一步两两比较采用Turkey’s检验。结果:Morris水迷宫结果显示，各组大鼠游泳总距离的组别和训练时间交互作用显著( F＝3.762， P<0.05)。简单效应分析显示，1-BP组大鼠第1~4天的游泳总距离均长于Control组(均 P<0.05)，而PDTC+1-BP组大鼠第1~4天的游泳总距离均短于1-BP组(均 P<0.05)。各组大鼠逃避潜伏期的组别和训练时间交互作用显著( F＝6.541， P<0.01)。简单效应分析显示，与正常Control组相比，1-BP组大鼠的逃避潜伏期在第1~4天均长于Control组(均 P<0.05)，而PDTC+1-BP组的逃避潜伏期在第1~4天均短于1-BP组(均 P<0.05)。空间探索实验结果显示，四组大鼠的穿越平台次数差异有统计学意义( F＝75.333， P<0.01)。1-BP组大鼠穿越平台次数[(1.08±0.29)次]低于Control组[(3.35±0.05)次]( P<0.01)。PDTC+1-BP组大鼠的穿越平台次数[(1.95±0.26)次]则高于1-BP组( P<0.01)。四组大鼠脑组织NF-κB在细胞质和细胞核中的表达水平均差异有统计学意义( F＝20.865，23.877，均 P<0.01)。1-BP组大鼠细胞质与细胞核中NF-κB表达水平均高于Control组[细胞质：(177.3±32.1)%，(100.0±8.4)%， P<0.01；细胞核：(173.2±27.1)%，(100.0±8.4)%, P<0.01]。而1-BP+PDTC组细胞质与细胞核中的NF-κB表达水平则均低于1-BP组[细胞质：(148.7±22.0)%，(177.3±32.1)%, P<0.01；细胞核：(149.7±18.8)%，(173.2±27.1)%, P<0.01]。qRT-PCR结果显示，四组大鼠前额叶皮质TNF-α及IL-1β的mRNA水平均差异有统计学意义( F＝17.464，17.382，均 P<0.01)。1-BP组大鼠TNF-α及IL-1β mRNA水平均高于Control组(均 P<0.05)，PDTC+1-BP组TNF-α及IL-1β mRNA水平均低于1-BP组(均 P<0.05)。免疫组化结果显示，与Control组相比，1-BP组大鼠小胶质细胞和星形胶质细胞数量增加[小胶质细胞：(158.30±9.68)个，(110.20±16.30)个， P<0.05；星形胶质细胞：(122.76±4.35)，(80.24±6.96)， P<0.05]，形态上也表现为激活状态，神经元尼氏体着色浅、数量减少；PDTC+1-BP组小胶质细胞和星形胶质细胞数量均低于1-BP组[小胶质细胞：(131.70±14.67)个，(158.30±9.68)个， P<0.05；星形胶质细胞：(101.54±4.55)个，(122.76±4.35)个， P<0.05]，神经元尼氏体着色明显加深。 结论:NF-κB信号通路可能是介导1-BP中枢神经毒性的关键机制，PDTC干预明显减轻1-BP染毒大鼠神经炎性反应及改善行为学障碍。

目的:探讨运动训练、低氧暴露和不同低氧训练模式对小鼠骨骼肌线粒体自噬及血管生长信号的影响.方法:40只C57BL/6J雄性小鼠随机分5组:对照组(C组)、低氧暴露组(H组)、运动训练组(E组)、高住低练组(LHTL组)及低住高练组(LLTH组),8只/组.H组每天进行8小时低氧暴露(14.8%～12.5%氧浓度);E组每天常氧下进行一次跑台训练;LHTL组结合H组和E组的干预;LLTH组每天进行一次低氧运动;干预6周,5天/周.干预结束后取骨骼肌,冷冻或组织学固定,Western blot测定腓肠肌蛋白,免疫组化评估股四头肌血管内皮生长因子(VEGF)和血小板内皮细胞黏附分子(CD31)表达,透射电镜观察腓肠肌线粒体形态.结果:(1)自噬信号方面,相比C组,LHTL组自噬标记物微管相关蛋白轻链-3Ⅱ/Ⅰ比值(LC3Ⅱ/LC3Ⅰ)显著提高(P<0.01),E组和LHTL组Unc51样自噬激活激酶1磷酸化水平(p-Ulk1)提高(P<0.05).(2)线粒体自噬信号方面,相比C组,LHTL、LLTH组帕金蛋白(Parkin)和H、LHTL、LLTH组PTEN诱导激酶1(Pink1)蛋白表达均显著提高(P<0.05);E、LHTL及LLTH组BCL2/腺病毒E1B19kda相互作用蛋白3样(Nix)表达显著提高(P<0.05).其中LHTL组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Pink1蛋白表达均显著高于E组(P<0.05).(3)血管信号方面,相比C组,H、E、LHTL、LLTH组骨骼肌VEGF和LHTL、LLTH组CD31表达均显著提高(P<0.05).电镜观察发现E、LHTL组骨骼肌线粒体体积变大,各组肌原纤维形态正常.结论:低氧训练,尤其高住低练模式明显增强小鼠骨骼肌线粒体自噬信号,并提高血管生长水平,在提升骨骼肌线粒体自噬方面,低氧训练有好于运动训练或低氧暴露的趋势.

医学院校解剖学实验课所用的尸体主要来自遗体捐献,医学院校对捐献的遗体需要进行防腐固定,并保存2—3年后才能供解剖学实验教学使用.常规的尸体保存方法有尸池浸泡和新鲜冷冻尸体保存.笔者通过总结与分析尸体保存经验,发现现阶段尸体保存方法在科研与教学等方面均存在若干不足之处.在进行相关调研探索和查阅文献后,笔者与实验室解剖技术教师研制了一种新型尸体储存袋,以弥补现阶段尸体保存技术方法的不足之处.该尸体储存袋已获得实用新型专利权.

甲状腺疾病属于常见病、多发病,我国甲状腺疾病总体患病率高达50％[1].术中快速冷冻切片技术对于明确甲状腺结节性质、选择合理地手术方式具有重要作用,高质量的冷冻切片是保证病理医生诊断准确性的关键[2].本研究选取病理科常用的5种固定液,比较其对甲状腺冷冻切片固定效果,筛选出适用于甲状腺冷冻切片的理想固定液.

国家癌症中心发布的最新数据显示,乳腺癌的发病率在女性癌症患者中占据首位,死亡率也较高[1] . 淋巴结组织结构致密,细胞丰富,被膜为致密的结缔组织,周围被质地较软的脂肪组织包裹,冷冻制片难度较大[2] . 冷冻切片因受取材、染色等因素的影响,诊断结果存在一定的误诊率. 提高乳腺癌术中前哨淋巴结冷冻制片质量,涉及取材、切片、固定、染色等各个环节,本文旨在通过优化技术提高乳腺前哨淋巴结冷冻制片质量.

在日常病理技术工作中,技术员经常遇到骨肿瘤组织的制片. 如果带有骨组织的话,因其含大量钙盐,硬度高,直接切片难度较大,致使无法连续切出完整组织,严重影响判断.而冷冻切片则是借助低温环境在短时间内使组织快速冷却,达到一定固定硬度连续切片的方法. 该过程操作快,时间短,染色简便,很好的保存了组织内可溶性物质的完整性,尽可能减少了组织内部成分不丢失,具有保护组织内蛋白质以及酶的活性. 在实践中,本科室运用超声波快速组织处理仪,对骨肿瘤特别是含有骨组织的标本进行辅助脱钙,有效地保证骨组织冷冻制片,切片及染色效果良好,现介绍如下.

目的 优化小鼠肺组织冰冻切片制作方法,提高肺组织冰冻切片质量,有利于提高免疫荧光染色的特异性,获得更准确可靠的实验结果.方法 使用C57BL/6小鼠,分别采用传统冷冻后固定法、冷冻前固定法、改良灌注冷冻前固定法3种方法制作冰冻切片,经免疫荧光染色后使用激光扫描共聚焦荧光显微镜观察肺组织染色情况.使用荧光显微镜对肺组织切片进行全片扫描,计算单位面积内完整气道数量.结果 传统冷冻后固定法制作的小鼠肺组织冰冻切片,肺泡结构破坏,气道壁断裂严重,存在非特异性染色;冷冻前固定法制作的小鼠肺组织切片,肺泡和气道结构相对完整,但肺泡塌陷,部分气道结构破坏;改良灌注冷冻前固定法制作的小鼠肺组织切片,肺泡和气道结构形态均完整、清晰,多重免疫荧光染色定位准确.改良灌注冷冻前固定法制作的小鼠肺组织冰冻切片单位面积内完整气道(直径≥100 μm)数量高于冷冻前固定法((0.66±0.15)/mm2 vs(0.33±0.14)/mm2,P＜0.05),也显著高于传统冷冻后固定法((0.66±0.15)/mm2 vs(0.02±0.04)/mm2,P＜0.01).结论 使用改良灌注冷冻前固定法制作冰冻切片,利于保持小鼠肺组织形态完整,利于获得高质量的多重免疫荧光染色结果.

背景:聚乳酸具有良好的生物相容性和生物降解性,成为一种新型的骨科固定材料,然而该材料缺乏细胞识别信号,不利于细胞黏附和成骨分化,限制了其在生物材料中的应用.目的:3D打印聚乳酸-纳米羟基磷灰石/壳聚糖支架,评估其药物缓释及生物性能.方法:采用熔融沉积技术打印孔隙交互的多孔聚乳酸支架(记为PLA支架),将该支架浸泡于多巴胺溶液中制备聚乳酸-多巴胺支架(记为PLA-DA支架);将纳米羟基磷灰石投入壳聚糖溶液中,然后将PLA-DA支架浸没其中,制备聚乳酸-纳米羟基磷灰石/壳聚糖支架(记为PLA-nHA/CS支架),表征3组支架的微观形貌、孔隙率、水接触角与压缩强度.采用冷冻干燥法制备负载药物多西环素的PLA-nHA/CS支架(记为PLA-nHA/CS-DOX支架),表征其药物释放.将PLA、PLA-DA、PLA-nHA/CS、PLA-nHA/CS-DOX支架分别与MC3T3-E1细胞共培养,检测细胞增殖与成骨分化能力;将不同浓度的金黄色葡萄球菌悬液分别与4组支架共培养,采用抑菌圈实验检测支架的抗菌性能.结果与结论:①扫描电镜下可见PLA、PLA-DA支架表面致密光滑,PLA-nHA/CS支架表面可见纳米羟基磷灰石颗粒;PLA、PLA-DA、PLA-nHA/CS支架的孔隙率逐渐降低,压缩强度逐渐升高,PLA-nHA/CS支架的弹性模量满足松质骨要求;PLA-DA、PLA-nHA/CS支架的水接触角小于PLA支架;PLA-nHA/CS支架体外可持续释放药物达8 d.②CCK-8检测显示,4组支架均未显著影响MC3T3-E1细胞的增殖;PLA-DA组、PLA-nHA/CS组、PLA-nHA/CS-DOX组细胞碱性磷酸酶活性均高于PLA组;茜素红染色显示,与PLA组相比,PLA-nHA/CS组、PLA-nHA/CS-DOX组细胞表现出较高的矿化水平.③抑菌圈实验显示PLA、PLA-DA支架无抗菌性能,PLA-nHA/CS支架具有一定的抗菌性能,PLA-nHA/CS-DOX支架具有超强的抗菌性能.④结果表明,PLA-nHA/CS-DOX支架具有良好的药物缓释性能、细胞相容性、促成骨性能及抗菌性能.

目的:探讨不同的固定与透膜方法对免疫荧光检测小鼠肝脏冷冻切片中胰岛素的影响,为研究胰岛素在肝脏中的代谢及胰岛素与其他分子的相互作用提供技术支持.方法:采用切片前固定或切片后固定,制作小鼠肝脏组织冷冻切片.通过间接免疫荧光技术检测5种固定与透膜方案对小鼠肝脏组织冷冻切片中胰岛素荧光染色的影响.结果:(1)方案1采用4%多聚甲醛固定联合0.5%Triton X-100透膜检测,肝血窦和肝索结构清晰,胰岛素荧光信号主要分布于细胞质膜和细胞质;(2)方案2采用4%多聚甲醛固定联合0.5%saponin透膜检测,肝血窦和肝索结构清晰,切片整体的荧光信号非常微弱,且荧光信号主要分布于细胞质膜附近;(3)方案3采用丙酮一步固定与透膜检测,肝血窦不清晰,部分肝细胞出现肿胀,胰岛素荧光信号主要分布于细胞质膜附近;(4)方案4采用甲醇一步固定与透膜检测,肝血窦不清晰,细胞间界限模糊,胰岛素荧光信号出现明显的核易位;(5)方案5采用4%多聚甲醛(含5%冰醋酸)一步固定与透膜检测,肝血窦和肝索结构清晰,胰岛素荧光信号主要分布于细胞质膜和细胞质.结论:方案1和5适于肝脏冷冻切片中胰岛素的检测.

为适应冷冻切片的快速,制片过程要遵照快速冷冻、快速切片、快速固定的“三快原则”.其中,固定这一环节尤为重要,它是组织保持正常形态的关键.丙酮、95％乙醇都是在日常工作中常用的冷冻固定液,但是丙酮的慢性毒害作用以及乙醇浓度不易保持的缺点始终在冷冻制片固定领域表现不佳,环保型固定液的出现,有效地弥补了这两个缺点,但是其对于HE染色质量的影响未知,笔者就这一问题做了相应的研究.