患儿女，11岁，因双小腿及双足红肿疼痛3个月、溃疡1周，于2021年2月26日至中南大学湘雅医院就诊。患儿2020年12月赤脚玩雪后出现小腿远端及双足烧灼样疼痛，伴皮肤红肿、皮温升高，阵发性发作，夜间明显，浸泡冷水后疼痛缓解；2021年2月20日起双小腿远端及双足逐渐出现深在性溃疡（图1A）。实验室检查：血常规白细胞计数11.3 × 10 9/L（参考值4 × 10 9 ~ 10 × 10 9/L，下同），中性粒细胞计数7.3 × 10 9/L（1.8 × 10 9 ~ 6.3 × 10 9/L）；红细胞沉降率46.0 mm/1 h（< 20 mm/1 h）；C反应蛋白14 mg/L（0.8 ~ 8 mg/L）。尿粪便常规、凝血常规及相关项目、肌钙蛋白、糖化血红蛋白等检测均正常。足背创口处样本直接涂片镜检：少量革兰阴性杆菌，PAS染色阴性；分泌物培养：吉格氏不动杆菌、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌阳性。二代基因测序：患儿存在SCN9A基因c.2567G>A杂合突变，导致对应甘氨酸变为天冬氨酸（p.G856D），见图2，患儿父母及弟弟未发现基因突变。

目的 探讨腹部推拿治疗慢性疲劳综合征(CFS)的作用机制.方法 采用随机数字表法将30 只清洁级雌性SD大鼠分为正常对照组、模型对照组及腹部推拿组,每组各10 只,模型对照组及腹部推拿组采用冷水游泳联合慢性束缚法建立CFS模型,腹部推拿组大鼠以津沽脏腑推拿核心手法层按、团摩为主要干预手法,层按"关元"8 min、团摩"中脘"12 min,每天治疗1 次,连续干预14 d,正常对照组和模型对照组大鼠在腹部推拿组大鼠推拿期间仅束缚于实验台上.干预结束后测定各组大鼠下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴主要脏器指数、海马细胞凋亡情况,采用海马组织尼氏染色及海马神经元透射电镜观察分析各组大鼠海马细胞形态学.结果 模型对照组与正常对照组比较,各脏器指数上调(P<0.01);腹部推拿组与模型对照组比较,各脏器指数下调(P<0.01),与正常对照组比较上调但差异无统计学意义.模型对照组与正常对照组比较,细胞核明显固缩、核膜结构破裂、边缘不规则;腹部推拿组与模型对照组比较,大部分细胞形态无异常,有少量核膜结构不清晰.其他2 组与正常对照组比较,海马神经元细胞损伤明显;腹部推拿组与模型对照组比较,海马神经元细胞状态良好.模型对照组神经元细胞凋亡程度明显高于正常对照组(P<0.01);腹部推拿组与模型对照组比较,神经元细胞凋亡程度减弱(P<0.01),与正常对照组比较稍高但差异无统计学意义.结论 冷水游泳联合慢性束缚法能够模拟大鼠CFS的发生,腹部推拿能够降低CFS大鼠HPA轴中的关键脏器下丘脑、垂体、肾上腺的脏器指数,能够减轻海马组织的损伤、抑制海马细胞凋亡、增加海马细胞的活性,有助于维持海马神经元的正常生理功能.

国家癌症中心发布的最新数据显示,乳腺癌的发病率在女性癌症患者中占据首位,死亡率也较高[1] . 淋巴结组织结构致密,细胞丰富,被膜为致密的结缔组织,周围被质地较软的脂肪组织包裹,冷冻制片难度较大[2] . 冷冻切片因受取材、染色等因素的影响,诊断结果存在一定的误诊率. 提高乳腺癌术中前哨淋巴结冷冻制片质量,涉及取材、切片、固定、染色等各个环节,本文旨在通过优化技术提高乳腺前哨淋巴结冷冻制片质量.

目的:建立稳定、客观的中医寒证和热证的动物模型.方法:将72只Wistar大鼠(雌雄各半),随机分为正常对照组、寒证模型组和热证模型组.寒证模型组予冰水(0℃)灌胃和冷水(10℃)泡浴,热证模型组予乙醇溶液(0.1 mg/ml～0.3 mg/ml)和辣椒素(0.2 mg/ml～0.9 mg/ml)溶液灌胃,正常对照组予生理盐水灌胃.每组均予10 ml/kg灌胃,每日1次,连续5周.每日测定大鼠体征评分(R)、饮水量及摄食量,每周检测体重,取材前1h测量大鼠肛温.造模结束后,测定大鼠大肠组织Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶、琥珀酸脱氢酶(SDH)和乳酸脱氢酶(LDH)活性.HE染色,光镜下观察各组大鼠大肠组织学形态改变,并对病理组织学结果进行评分.结果:与正常对照组比较,寒证模型组6＜R≤3时,评分显著高于正常对照组,饮水量和肛温明显降低,摄食量和体重增加.热证模型组R≥6时,评分显著高于正常对照组,饮水量和肛温上升,摄食量和体重下降.与正常对照组比较,热证模型组Ca2+-Mg2+-ATP酶、SDH酶和LDH酶活性明显升高;寒证模型组Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶、SDH酶和LDH酶活性降低不明显.与热证模型组比较,寒证模型组Na+-K+-ATP酶、Ca2-Mg2+-ATP酶、SDH酶和LDH酶活性显著降低(P＜0.05或P＜0.01).病理组织学检查表明,寒证模型、热证模型组大肠粘膜杯状细胞排列紊乱,炎性细胞浸润.病理评分结果表明,寒证模型、热证模型组病理损伤明显高于正常对照组(P ＜0.05或P＜0.01).结论:寒证模型通过冰水灌胃和冷水泡浴的方法建立,热证模型通过乙醇溶液和辣椒素溶液灌胃建立,模型成功模拟寒证、热证的临床症状及病理组织学变化.本实验结果为寒证、热证模型的病理生理及药理研究提供了更为准确、客观、有效的动物模型评价方法.

目的 探讨白僵蚕水提物对硫酸镉(CdSO4)致胰岛β细胞NIT-1细胞毒性的影响.方法 采用冷水浸泡法提取白僵蚕的水溶性成分.分别用(0、0.4、0.8、1.6、3.2和6.4 mg/mL)白僵蚕水提物染毒细胞24h;用4μmol/L CdSO4分别与(0.4和0.8 mg/mL)白僵蚕水提物混合后共处理24h;以及用(0.4和0.8 mg/mL)白僵蚕水提物预处理2h,再以4 μmol/L CdSO4分别染毒24h.采用CCK8、Hoechst33258染色以及荧光探针等方法分别检测NIT-1细胞存活率、细胞凋亡及活性氧ROS的水平.结果 (1)与对照组比较,细胞存活率随白僵蚕水提物染毒浓度的增加呈现出先升高后下降的趋势(P＜0.05);(2)与单独处理组相比,4 μmol/L CdSO4与(0.4和0.8 mg/mL)白僵蚕水提物共处理组细胞存活率均降低(P＜0.05),且预处理组细胞存活率相比白僵蚕单独处理组也降低(P＜0.05);(3)联合处理组细胞变圆、细胞核呈致密浓染,细胞凋亡率均高于白僵蚕和CdSO4单染组(P＜0.05);同时,联合处理组ROS荧光强度也升高,分别为白僵蚕和CdSO4单染组的1.18和1.05倍(P＜0.05).结论 白僵蚕水提物在低浓度下可促进NIT-1细胞的增殖,高浓度则降低细胞的存活率;低浓度的白僵蚕水提物无法拮抗CdSO4诱导的细胞死亡,反而增强了细胞毒性,其机制可能与凋亡和ROS水平增加有关.

目的:构建符合寒湿凝滞型原发性痛经(PD)病理生理特点及中医证候特征的小鼠模型,观察葛根汤的治疗作用并探索其治疗机制.方法:8～12周龄昆明种雌性未孕小鼠随机分为空白对照组、模型组、阳性对照组和葛根汤组,制备小鼠行经样模型后,除空白对照组外,其余各组在造模第1～12天每日定时将小鼠置于束缚笼后放置(8±0.5)℃冷水水浴浸泡1 h,每日1次,制备水浸束缚模型.从造模第1天开始,阳性对照组给予布洛芬(0.12 g·kg-1·d-1)灌胃,葛根汤组给予葛根汤(14 g·kg-1·d-1)灌胃,空白对照组和模型组给予等容积生理盐水灌胃,均每日1次,共12 d.实验结束后将动物麻醉,腹主动脉取血,再分离子宫,HE染色后进行组织学观察.ELISA法检测血清和子宫组织中前列腺素F2α(PGF2α)、缩宫素(OT)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及血管升压素(AVP)的含量.结果:与空白对照组比较,模型组小鼠子宫组织血管较少,间质致密,炎性细胞增生、浸润.与模型组比较,阳性对照组小鼠子宫组织血管较丰富,间质疏松,炎性细胞浸润减少;葛根汤组血管少,间质紧密,炎性细胞浸润相对较少,成纤维细胞增生减少.与空白对照组比较,模型组小鼠血清和子宫组织PGF2α、OT、TNF-α和AVP水平明显升高(P<0.05,P<0.01).与模型组比较,阳性对照组小鼠血清及子宫组织PGF2α、OT、TNF-α和AVP水平均明显降低(P<0.05,P<0.01);葛根汤组小鼠血清及子宫组织PGF2α、TNF-α和AVP水平明显降低(P<0.05,P<0.01),血清OT水平明显降低(P<0.01).葛根汤组小鼠血清PGF2α、OT及TNF-α水平,子宫组织OT水平明显高于阳性对照组(P<0.05,P<0.01).结论:小鼠经子宫内膜行经样模型造模复合水浸束缚寒冷刺激后符合寒湿凝滞型PD特征的病理生理变化.葛根汤可以显著降低模型小鼠PGF2α水平,改善组织病理学变化,可能与降低OT、TNF-α及AVP有关,其作用机制值得进一步深入研究.

目的:探求机体在寒、热不同内环境压力下大肠癌发生的相关性.方法:将70只(雌雄各半)Wistar大鼠随机分为正常组10只,寒模组30只,热模组30只.寒模组予冰水(0C)灌胃和冷水(10C)泡浴制作寒证模型,热模组予乙醇(30％)和辣椒素(0.9 g·L-1)溶液制作热证模型,正常组给予生理盐水灌胃,10 mL·kg1·d-1,持续5周.寒模组、热模组于第6周制作大肠癌模型,均予DMH溶液颈后皮下注射,25 mg·kg-1,每周1次,连续12次.造癌期间热模组仅予30％乙醇溶液,寒模组维持造模,10 mL·kg-1·d-1,持续38周.观察各组大鼠一般状态,测定摄食量、体质量变化情况.于第27,29,32,35,38周分批取材,将肠组织进行苏木精-伊红(HE)染色,钠、钾-三磷酸腺苷酶(Na+K+-ATP),钙、镁-三磷酸腺苷酶(Ca2+Mg2+-ATP)活性、乳酸脱氢酶(LDH)活性以及琥珀酸脱氢酶(SDH)活性检测.结果:寒模组大鼠出现便血、腹水等症状明显早于热模组.与正常组比较,寒模组、热模组摄食量、体质量降低.与正常组比较,寒模组第32,35周大肠长度较短(P＜0.05),热模组第27,29,38周Na+K+-ATP,Ca2+Mg2+-ATP活性显著升高(P＜0.05,P＜0.01);寒模组第29,35周SDH酶活性降低(P＜0.05,P＜0.01);热模组第38周SDH酶活性显著升高(P＜0.01);寒模组第27周LDH酶活性显著降低(P＜0.01);热模组第29,32周LDH活性显著升高(P＜0.05,P＜0.01).与热模组比较,寒模组大肠质地表现出较大的脆性,纤维化加重,促纤维增生性特征表现明显;肿瘤发生率较高,肿瘤分化程度严重;寒模组第27,29,38周Na+K+-ATP,Ca2+Mg2+-ATP酶活性显著降低(P＜0.01);第29,38周SDH酶活性显著降低(P＜0.01),第32周LDH活性降低(P＜0.05).结论:大肠癌处于寒冷环境时,促进肿瘤发生,处于热环境时在后期亦促进肿瘤发生.

背景:髌腱退行性病变是常见的运动损伤,长期跑步和跳跃运动是导致损伤的重要因素.冷水浸没是一种常见的处理运动后炎症反应的方法,可以减慢局部血流速度,减慢局部代谢反应,从而减轻炎症反应.目的:观察冷水浸没干预对大强度跳跃运动后髌腱中炎症和重塑修复的影响.方法:选择30只雌性成年兔,体质量3.0 kg,其中安静对照组6只;其余24只兔右腿定为运动组,左腿定为运动+冷水浸没组,并在冷水浸没后0,6,24,48 h每个时间点挑出6只兔进行实验.兔需要一次性完成150次跳跃,每次80-120 N,跳跃10次间隔2 min,跳跃50次间隔10 min,随后立即在4℃冷水中进行15 min的冷水浸没干预,并按照分组在冷水浸没后0,6,24,48 h对肌腱和股直肌进行取材.采用相对定量PCR测定白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α、环氧化酶2、基质金属蛋白酶1 mRNA在肌腱组织中的表达,以免疫组化染色测定肌腱中Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白、转化生长因子β蛋白的表达水平,采用苏木精-伊红染色观察肌腱中胶原纤维的变化.结果 与结论:①白细胞介素1β的mRNA表达水平在0-24 h出现显著升高,运动+冷水浸没和运动组之间没有区别;②肿瘤坏死因子αmRNA表达水平显著升高,0 h运动组的mRNA表达水平高于运动+冷水浸没组(P<0.05);③环氧化酶2 mRNA表达水平在0-24 h显著升高,运动组在0-6 h的表达水平高于运动+冷水浸没组(P<0.05);④基质金属蛋白酶1 mRNA表达水平显著升高,0 h运动组的mRNA表达水平高于运动+冷水浸没组(P<0.05);⑤ Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白、转化生长因子β在6-24 h表达显著升高,运动组与运动+冷水浸没组之间差异无显著性意义;⑥苏木精-伊红染色结果显示,运动后0-24 h肌腱胶原纤维排列出现紊乱,胶原纤维排列在运动后48 h基本恢复到运动前状态;运动组和运动+冷水浸没组在组织形态上无明显差异;⑦提示冷水浸没可以抑制运动后早期的炎症反应,并不会影响肌腱的重塑作用.

高粱籽粒有粳(非糯)、糯之分,我国传统名酒如茅台、五粮液等,均以糯高粱为主要原料,快速鉴别高粱的粳糯对种质鉴定、糯高粱育种和原料采购均具有重要意义.现有高粱粳糯的鉴定方法主要有染色法和蒸煮法等,但均存在鉴定效率不高的问题,影响糯高粱育种进程.本研究在前人基础上,经过反复试验,总结出如下4种适合不同情形的高粱粳糯快速鉴别方法,即刀切法、籽粒捣碎开水糊化法、冷水捣碎染色法和田间花粉染色法.综合利用这4种方法,可使鉴定效率大大提高;同时,还讨论了 4种鉴定方法在育种中的应用前景,探讨了4种鉴定方法的适用性和鉴定效率.

目的:观察黄精水提物和黄精酿造酒对肺气虚模型大鼠的改善作用.方法:采用香烟烟熏加冷水浸泡制备肺气虚大鼠模型,灌胃给予黄精水提物和黄精酿造酒各0.025、0.5、1 g生药/kg,连续给药4w.末次给药后,测定大鼠尾部微循环、抓力、粪便含水率;取血,测定血清中白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、C-反应蛋白(CRP)含量,测定全血中红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)含量;取肺组织计算肺湿干比,HE染色观察肺组织病变情况;采用免疫组化检测肺组织中胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、胱氨酸/谷氨酸反向转运体(xCT)表达.结果:与正常对照组相比,模型对照组(酒、水)大鼠血清IL-6、CRP含量升高,抓力降低,肺湿干比增大(P＜0.05或P＜0.01);肺泡腔体积减小,肺泡壁增厚,炎性细胞浸润明显;肺组织GPX4和xCT表达减少(P＜0.05或P＜0.01).与相应的模型对照组相比,黄精酿造酒和黄精水提物各组均能降低血清IL-6、TNF-α、CRP含量,减少肺湿干比、粪便含水率,增加尾部微循环血流量和抓力,改善肺脏病变,增强肺组织GPX4和xCT阳性表达(P＜0.05或P＜0.01).此外,黄精水提物还能升高全血RBC、HGB含量(P＜0.05或P＜0.01).结论:黄精水提物和黄精酿造酒对肺气虚模型大鼠均具有改善作用,且黄精水提物作用优于酿造酒.