目的:探讨骨髓间充质干细胞（MSCs）减轻单侧输尿管梗阻（UUO）模型肾脏损伤的效果及相关的机制。方法:通过体外培养的方法制备MSCs，并将MSCs通过尾静脉注射的方法注入到UUO模型鼠体内，在造模的第14天检测不同组肾脏病理的改变、管周毛细血管、细胞凋亡及β-catenin表达情况来观察MSCs是否可以减轻肾脏损伤并探讨相关机制。结果:将培养的MSCs通过尾静脉注射的方法注入到UUO模型BALB/C小鼠体内，发现在MSCs组肾脏病理纤维化的程度较UUO组明显减轻（HE：1.60 ± 0.35比3.34 ± 0.23；MASSON：21.32 ± 7.54比51.08 ± 4.45），同时MSCs注入可以进一步减少管周毛细血管的丢失（13.56 ± 4.65比60.16 ± 10.24）、抑制细胞的凋亡（14.32 ± 3.54比28.16 ± 6.21）及β-catenin表达（29.33 ± 6.45比39.51 ± 8.42）。结论:MSCs治疗对慢性肾脏纤维化起到保护作用，作用机制与减少管周毛细血管丢失、抑制细胞凋亡及β-catenin的表达有关。

目的:探讨不同浓度的甲基丙烯酸酯（GelMA）水凝胶支架的性能，以及对大鼠髓核干细胞（NPSCs）体外增殖、分化及细胞外基质相关蛋白表达的影响。方法:（1）配置浓度为5%、10%、15% GelMA水凝胶溶液，经紫外光照射固化、冷冻干燥、喷金处理，制备相应浓度的GelMA水凝胶支架。用扫描电镜观察支架并测量孔径，使用科学表面分析仪测量支架静态水接触角，使用机械测试仪测量支架压缩模量，使用精密天平测量在37 ℃恒温箱中放置0、2、4、6、8、10、12 h时支架的含水量。（2）取6周龄雄性清洁级SD大鼠8只，体质量为80~100 g，切开椎间盘取髓核组织，分离培养NPSCs。取第3代NPSCs分别进行成骨、成软骨及成脂分化培养，分别用茜素红、阿利新蓝及油红O对三系细胞进行染色，观察NPSCs的三系分化潜能。（3）取第3代NPSCs分为无支架的对照组和5%、10%、15% GelMA水凝胶支架组，对照组加入培养基培养3 d，不同浓度GelMA水凝胶支架组紫外光照射固化后接种NPSCs，加入培养基培养7 d。各组细胞采用免疫荧光染色，观察细胞形态的变化。（4）取第3代NPSCs分别接种于紫外光照射固化后的5%、10%、15% GelMA凝胶支架中，采用细胞计数（CCK）-8试剂盒检测细胞增殖能力，采用活细胞/死细胞双染试剂盒检测细胞活力，采用免疫荧光染色检测Agg和Col Ⅱ蛋白的表达情况。结果:（1）5%、10%、15%GelMA水凝胶支架的孔径分别为（94.00±1.00）、（77.33±5.69）、（52.33±2.31）μm，水接触角分别为28.00°±2.65°、39.00°±2.65°、46.00°±1.00°，压缩模量分别为（45.77±8.66）、（64.63±3.06）、（86.07±10.73）kPa。不同浓度GelMA水凝胶支架随浓度的增高，支架的孔径减小，水接触角、压缩模量增大，差异均有统计学意义（ F=102.40、49.40、21.51， P值均<0.05）。不同浓度GelMA水凝胶支架的含水量均随时间的增加而下降；而同一时间不同浓度GelMA水凝胶支架的含水量随浓度的增高而减少，3者间含水量比较差异均有统计学意义（ P值均<0.05）。（2）NPSCs三系分化结果显示，培养的NPSCs成功分化为成骨细胞、成软骨细胞、成脂细胞，有多向分化的潜能，具备干细胞的特性。（3）水凝胶支架上NPSCs随着GelMA浓度的增加，细胞形态由正常的梭形逐渐变椭圆，细胞突伸展逐渐减弱，细胞质和细胞核比例逐渐减小，细胞聚集的集落逐渐变小。（4）NPSCs增殖实验显示：培养第1天时，不同浓度的GelMA水凝胶支架上NPSCs的光密度（OD）值差异无统计学意义（ F=1.63， P=0.272）；培养第4、7天时，随GelMA水凝胶支架浓度的增高，NPSCs的OD值均呈下降趋势，差异均有统计学意义（ F=61.48、203.20， P值均<0.001）。NPSCs活力实验显示：培养第4天时，不同浓度的GelMA水凝胶支架上NPSCs活细胞占比差异无统计学意义（ F=0.15， P=0.860）；培养第7天时，随GelMA水凝胶支架浓度的增高，NPSCs活细胞占比呈下降趋势，差异有统计学意义（ F=68.83， P<0.001）。（5）5%、10%、15%GelMA水凝胶支架中Agg蛋白的免疫荧光值分别为16.79±1.29、13.35±0.70、10.475±0.54，Col Ⅱ蛋白的免疫荧光值分别为17.17±1.49、13.32±1.65、9.53±1.01。随着GelMA水凝胶浓度的增高，Agg、ColⅡ蛋白的表达均呈下降趋势，差异均有统计学意义（ F=22.10、36.64， P值均<0.001）。 结论:5%GelMA水凝胶支架具有较好的物理特性，适合NPSCs的生长、存活，能较好地促进细胞外基质相关蛋白的表达。

目的:铁蓄积与绝经后骨质疏松症发生相关，髋部骨质疏松骨折存在骨髓造血细胞自噬异常；本研究希望了解铁蓄积导致骨量下降与造血细胞自噬功能之间相关性，探索骨质疏松症新的危险因素。方法:使用雄性小鼠腹腔注射枸橼酸铁铵构建铁蓄积小鼠模型，ELISA检测血清铁蛋白和骨生成指标I型前胶原氨基末端肽(P1NP)，micro-CT检测股骨骨密度，通过流式细胞仪分析小鼠股骨和胫骨骨髓造血干祖细胞比例和细胞凋亡，流式成像检测骨髓造血干祖细胞自噬溶酶体形成；使用造血细胞条件性敲除Atg7基因小鼠Atg7 flox/flox; Vav-Cre(本文以Atg7 -/-表示)对Atg7 -/-小鼠股骨进行micro-CT扫描、股骨和胫骨骨髓造血干祖细胞进行转录组测序。 结果:两组比较后铁蓄积组显示：血清铁蛋白升高、血清骨生成指标P1NP表达减低、股骨骨密度下降( P<0.05)，骨髓造血干祖细胞比例异常升高( P<0.05)且伴随细胞凋亡比例增加( P<0.05)，骨髓造血干祖细胞自噬溶酶体形成受抑制；在Atg7 -/-小鼠中，骨髓转录组测序结果提示：铁代谢活动增强，铁载体相关基因Lcn2、膜铁转运相关基因Tfr2，Slc40a1(Fpn1)、Steap3、线粒体亚铁血红素生成通路中酶的调控基因Cpox的mRNA表达均升高，Atg7 -/-小鼠骨量下降( P<0.05)。 结论:铁蓄积导致骨量下降可能与骨髓造血细胞自噬功能抑制相关；骨髓造血细胞自噬异常与骨量下降存在相关性。

目的:研究不同剂量电离辐射对小鼠造血干/祖细胞(hematopoietic stem and progenitor cells, HSPCs)内线粒体功能的影响。方法:将48只C57BL/6小鼠按随机数表法分为对照组(0 Gy组)、全身 60Co单次照射1.0 Gy组和4.5 Gy组，每组16只，照射后12、24 h检测HSPCs线粒体活性氧(ROS)水平、膜电位、线粒体数量及线粒体压力等。c-Kit +细胞体外接受 60Co单次15 Gy照射，24 h后检测线粒体功能。 结果:建立小鼠造血系统辐射损伤模型，发现小鼠受不同剂量γ射线照射后24 h内外周血白细胞( t＝12.41、18.31、16.48、14.16、19.08、20.25， P<0.05)、红细胞( t＝4.81、6.62， P<0.05)及血小板( t＝4.33、6.68， P<0.05)均明显减少，骨髓细胞集落形成能力下降( t＝16.27、55.66、17.06、43.75， P<0.05)，HSPCs数量降低( t＝5.16、11.55， P<0.05)，且呈现时间和剂量相关效应；1 Gy照射后，HSPCs中ROS水平差异无统计学意义( P>0.05)，线粒体膜电位降低( t＝8.82、9.24， P<0.05)、线粒体数量减少，且在照射后24 h，HSPCs线粒体功能、线粒体基础代谢指数增强( t＝ 7.36、3.68、4.58、3.15、3.15， P<0.05)。4.5 Gy照射后可引起HSPCs中ROS上升( t＝4.63、4.12， P<0.05)，线粒体数量降低，线粒体膜电位降低( t＝12.29、10.46， P<0.05)，最大呼吸能力和呼吸储备能力降低( t＝ 7.81、5.78、6.70、5.83， P<0.05)，12 h基础呼吸和氧化磷酸化ATP产能低( t＝8.48、3.80， P<0.05)，24 h质子泄漏高( t＝6.57， P<0.05)，耦合效率低( t＝11.43， P<0.05)。c-Kit +细胞经15 Gy照射后24 h，ROS水平显著上升( t＝11.30， P<0.05)，线粒体膜电位降低( t＝34.92， P<0.05)，最大呼吸和呼吸储备能力提高( t＝4.25、3.44， P<0.05)。 结论:建立了HSPCs中系统评估线粒体功能方法，明确了电离辐射对HSPCs线粒体功能的影响，为深入揭示电离辐射致HSPCs线粒体损伤机制奠定基础。

骨髓增生异常综合征(MDS)是一组异质性的克隆性髓样干细胞疾病，以全血细胞减少、向急性髓细胞白血病(AML)转化风险高为特点。目前，去甲基化药物(HMA)已广泛用于MDS治疗，在临床试验和实际应用中均展现良好疗效，但是HMA耐药现象普遍存在，并且MDS患者发生HMA耐药预后较差。笔者通过对HMA作用机制，以及影响HMA的药物代谢因素、免疫检查点通路(ICP)表达上调、白血病干/祖细胞(LSPC)无法被完全消除等HMA耐药机制的最新研究进展进行阐述，旨在探究MDS患者发生HMA耐药的可能机制及其解决方法。

目的:探究不同来源的供体造血干细胞（hematopoietic stem cells，HSCs）体内移植后生成血小板（PLT）的差异因素，进而为解决临床上HSCs移植后PLT重建不良的问题提供新思路。方法:通过Ficoll分离技术分别从孕14.5 d（E14.5）胎肝（FL）和8周龄小鼠骨髓（BM）中分离HSCs及其下游髓系和淋巴系细胞，即单个核细胞（MNCs）总和，移植入清髓辐照后的受体小鼠胫骨骨髓腔内，构建造血重建FL-MNCs和BM-MNCs小鼠移植治疗模型。定期检测受体小鼠外周血血常规指标。通过流式细胞方法检测供体细胞在受体内的嵌合率及PLT形成上游细胞。进一步利用磁珠分选FL-MNCs和BM-MNCs供体细胞中CD41 +巨核细胞，并诱导PLT生成。另外，通过定量RT-PCR检测两种来源的CD41 +巨核细胞的PLT生成相关基因的表达情况。 结果:FL-MNCs移植组和BM-MNCs移植组的血常规参数包括白细胞（WBC）、红细胞（RBC）、PLT均在移植后第4周恢复正常水平，受体的血细胞基本由供体细胞替代。FL-MNCs移植组比BM-MNCs移植组受体小鼠的PLT水平上升更快，移植后第4周FL-MNCs组和BM-MNCs组的PLT水平分别为（1.45±0.37）×10 12/L和（1.22±0.24）×10 12/L， P<0.05。同时，FL-MNCs中含有更高比例的Lin -Sca-1 +c-Kit +造血干细胞（FL-MNCs为7.60%±1.40%，BM-MNCs为1.10%±0.46%， P<0.01）、Lin -Sca-1 -c-Kit +CD41 +CD150 +巨核祖细胞（FL-MNCs为3.05%±0.22%，BM-MNCs为0.15%±0.02%， P<0.01），以及CD41 +CD42b +成熟巨核细胞（FL-MNCs为1.60%±0.06%，BM-MNCs为0.87%±0.11%， P<0.01）。体外功能性研究发现胎肝来源的FL-MNCs-CD41 +巨核细胞在体外诱导后可更快地生成前血小板样细胞，第3天即有前血小板样细胞形成，第5天有明显PLT形成，而骨髓来源的BM-MNCs-CD41 +巨核细胞第5天仍没有前血小板样细胞形成。FL-MNCs-CD41 +能表达更高水平的PLT生成相关基因Mpl（3.25倍）、Fog1（3倍）和Gata1（1.5倍）（ P<0.05）。 结论:FL-MNCs具有更好的受体血小板植入效果以及更快的体外PLT分化速率，这可能与FL-MNCs细胞组成中较高比例的巨核细胞数量及其Mpl、Fog1和Gata1等相关基因的表达水平有关。这些供体细胞特征的因素分析研究有望为临床治疗造血干细胞移植后PLT重建不良提供供体细胞参考依据。

肝硬化是各种病因所致肝细胞广泛变性坏死,肝纤组织增生,从而形成假小叶、结节,进而导致肝脏血供破坏,最终进展为慢性进行性肝病终末期[1].调查发现,全球每年有4％～12％患者进展为失代偿期肝硬化,当同时出现任何两个并发症时,患者5年内死亡率可升高至88％,其发病率逐年增加,已成为全球关注的公共健康问题[2].祖国医学将肝硬化归属于"积聚""臌胀"等范畴,而传统医学理论中又有"肝肾同源"之说.本文以"补肾生肝"立法,通过探讨济生肾气汤调控骨髓间充质干细胞(BMSCs)治疗肝硬化的内在作用机制,为中西医结合治疗肝硬化提供细胞及分子水平的理论依据,以彰显中医药治疗重大疑难疾病的特色优势.

"骨极"理论来源于中医学"五劳六极七伤"学说,是祖国医学对虚劳后期病机和症状的高度概括,病机重点在"虚劳感邪,邪久不解,内客肾脏,发为骨极",临床表现为"手足烦疼,不可以立,不欲行动".骨质疏松症是一种典型的骨代谢性疾病,其发病与骨重塑过程被破坏密切相关,而骨形成和骨吸收间的动态平衡是维持正常骨重塑功能的基础."骨极"理论描述的病机和症状与骨质疏松症高度相似,是阐释骨质疏松症发病机理的重要切入点.细胞自噬是细胞分化和增殖的重要过程.越来越多的证据表明,自噬对成骨细胞、破骨细胞及骨髓间充质干细胞都具有重要的调节作用.自噬水平异常导致的骨稳态失衡是骨质疏松症发病的关键因素.基于论证,笔者提出了一种新兴的"骨极-细胞自噬-骨质疏松症"学说,以期从"骨极"理论切入,探讨自噬与骨质疏松症的关系,为骨质疏松症的预防和治疗以及进一步的研究提供新的理论参考依据.

绝经后骨质疏松(postmenopausal osteoporosis,PMOP)是亟需解决的公共健康问题.患者雌激素减少,雌激素受体(estrogen receptor α,ERα)表达水平下降,成骨细胞功能下降,破骨细胞活性增强,骨代谢偶联失衡.ERα在PMOP的发生发展中具有重要作用,笔者从PubMed、Web of Science和中国知网检索近10 年(2013-2023 年)骨质疏松研究领域的文献,总结归纳ERα在骨髓间充质干细胞、成骨细胞祖细胞、成骨细胞前体细胞、成熟成骨细胞、破骨细胞和骨细胞中的作用,并以能显著改善PMOP的黄酮类成分淫羊藿苷为例阐述基于ERα的抗PMOP相关机制.

目的 探究动态对比增强磁共振成像(dynamic contrast enhanced magnetic resonance imaging,DCE-MRI)微血管渗透性参数和脂肪酸代谢组学评价糖尿病(diabetes mellitus,DM)重症肢体缺血(critical limb ischemia,CLI)兔股骨上段骨髓内皮祖细胞(bone marrow endothelial progenitor cells,BMEPCs)功能.材料与方法 36只雄性新西兰大白兔中随机选取18只兔静脉注射四氧嘧啶构建DM模型兔,其中造模成功的DM兔12只,6只DM造模失败兔处以安乐死.12只DM兔和12只非DM兔行右侧股动脉结扎术分别作为DM合并CLI(DM+CLI)组和单纯CLI组,术后两组各存活10只.6只非DM兔手术暴露右侧股动脉不结扎作为假手术对照(Control)组(n=6),全部存活.各组在术后第0、4周行右侧股骨上段DCE-MRI检查,于术后第4周检测外周血内皮祖细胞和右侧股骨上段BMEPCs数量、BMEPCs迁移和血管生成功能以及骨髓液相色谱-质谱脂肪酸代谢组学,并计算骨髓微血管密度(microvessel density,MVD).结果 与CLI组和Control组相比较,DM+CLI组术后第4周股骨上段骨髓Ktrans、Kep、Ve值增加(P<0.05),骨髓MVD减少,骨髓棕榈油酸、单不饱和脂肪酸/多不饱和脂肪酸比值以及硬脂酰辅酶A去饱和酶1活性指数减少(P<0.05),延长酶活性指数增加(P<0.05).DM+CLI组BMEPCs动员、迁移和血管生成能力受损(P<0.05).术后第4周右侧股骨上段骨髓Ktrans、Kep、Ve值、骨髓脂肪酸合成代谢相关指标均与BMEPCs迁移和血管生成功能存在相关性(P<0.05),对DM+CLI组和CLI组相关参数进行相关性分析,BMEPCs动员能力与Ktrans、Kep、Ve值呈负相关(P<0.05).结论 DCE-MRI联合脂肪酸代谢组学评价DM+CLI兔骨髓BMEPCs功能是可行的,可以为调脂改善BMEPCs功能和预防截肢的病理生理机制提供定量影像学证据.