目的 探究畅舟通便方对功能性便秘(functional constipation,FC)合并抑郁大鼠的干预机制.方法 采用盐酸小檗碱法联合慢性不可预知温和刺激建立功能性便秘合并抑郁样行为大鼠模型,随机分为空白组、模型组、乳果糖组及畅舟通便方高、中、低剂量组,干预 5 周.分别于干预前、干预后计算粪便含水量;干预结束后计算小肠推进率;分别于干预前、干预后采用强迫游泳实验、糖水偏好实验评估大鼠的抑郁样行为水平;HE染色观察结肠黏膜形态;尼氏染色观察海马CA1、DG区锥体细胞形态和数量;Western Blot法检测各组大鼠结肠组织的TRP离子通道香草香素 4 型(TRPV4)及海马脑源性神经营养因子(BDNF)、酪氨酸激酶受体(TrkB)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)、环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)蛋白相对表达量.结果 与空白组比较,模型组大鼠的粪便含水率明显减少(P＜0.001),小肠推进率明显降低(P＜0.01),糖水偏好指数明显下降(P＜0.001),海马CA1 区、DG区的锥体细胞数量明显减少(P＜0.001),结肠TRPV4 以及海马BDNF、TrkB、MAPK、CREB蛋白含量均明显下降(均P＜0.001).与模型组比较,畅舟通便方高、中、低剂量组及乳果糖组大鼠的粪便含水率均明显增高(P＜0.001,P＜0.01);畅舟通便方高、低剂量组及乳果糖组的小肠推进率明显增高(P＜0.01,P＜0.05);畅舟通便方高、中、低剂量组及乳果糖组的糖水偏好指数明显升高(P＜0.01,P＜0.05);结肠病理无异常;畅舟通便方高、中、低剂量组及乳果糖组的海马CA1、DG区锥体细胞数目明显增多(P＜0.01,P＜0.001);畅舟通便方高、中、低剂量组及乳果糖组的结肠TRPV4 含量明显增加(P＜0.001),海马BDNF、TrkB、MAPK、CREB蛋白含量均明显增加(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001).结论 畅舟通便方干预后可明显提高功能性便秘合并抑郁模型大鼠结肠的TRPV4 含量,增加粪便含水量,促进肠蠕动,可改善便秘;同时TRPV4 可激活BDNF/TrkB/MAPK通路,引发下游CREB的增高,从而改善神经可塑性,减轻部分抑郁样行为.

目的:研究兔眼部局部应用小檗碱溶液的安全性及其对兔眼角膜上皮修复的影响。方法:实验研究。日本大耳白兔92只，随机数字表法分为一般情况组（32只兔，64只眼）和角膜损伤组（60只兔，60只眼）。一般情况组再用随机数字表法分为4个组，每组8只兔（16只眼），根据给予去离子水或0.5、1.0、1.5 mg/ml小檗碱溶液，分为一般情况对照组及一般情况A、B、C组；双眼给药，每只眼先单次给药，观察72 h后再连续4周多次给药。角膜损伤组兔右眼制作角膜上皮损伤模型后，根据给予去离子水或0.5、1.0、1.5 mg/ml小檗碱溶液，分为角膜损伤对照组及角膜损伤A、B、C组，每组15只兔（15只眼），连续给药1周。一般情况组兔进行行为学观察，并应用Draize眼刺激性评分系统，对兔角膜、结膜、虹膜受累的面积、程度和反应进行评分，测量不同时间眼压，视网膜电图（ERG）检测b波振幅。角膜损伤组兔于角膜缺损后1、2、3、4、5、6、7 d观察角膜上皮缺损修复情况。所有兔停药后进行角膜组织病理学观察。兔泪液pH值比较采用配对 t检验，Draize眼刺激性评分采用秩和检验，眼压、视网膜电图b波振幅及角膜上皮损伤面积和修复时间的多组比较采用方差分析及SNK- q检验。 结果:单次给药和多次给药后一般情况组兔均无明显异常行为。一般情况对照及A、B、C组在多次给药1、2、4周时Draize眼刺激评分差异均无统计学意义，其中一般情况C组的Draize眼刺激评分分别为7（0，12）、6（0，10）、6（0，16）分（χ 2=1.640，0.265，1.963，1.381； P>0.05）。一般情况对照及A、B、C组在多次给药前后不同时间的眼压差异均无统计学意义（ F=0.065，0.292，0.015，0.041； P>0.05）。在多次给药前及给药后2、4周一般情况对照组的b波振幅分别为（127.75±17.12）、（129.18±15.83）、（128.81±13.58）μV，一般情况A组为（130.68±18.75）、（131.38±16.96）、（130.62±12.18）μV，一般情况B组为（128.00±16.74）、（128.44±16.64）、（129.06±16.16）μV，一般情况C组为（131.81±19.37）、（132.13±18.36）、（129.94±12.60）μV，各组在给药前后不同时间b波振幅差异均无统计学意义（ F=0.037，0.011，0.017，0.702； P>0.05）。一般情况对照组与一般情况A、B、C组角膜组织病理学检查结果无明显差异。角膜损伤各组在不同时间的角膜上皮缺损面积有统计学意义（ F=5.316，25.864，127.613； P<0.05），角膜损伤对照组与角膜损伤A、B、C组之间两两比较，角膜损伤C组的角膜上皮缺损面积明显大于其他3个组，差异具有统计学意义（ q=5.153，10.313，6.976； P<0.05）。角膜损伤对照及A、B、C组的修复愈合时间为（83.0±1.85）、（82.9±2.07）、（83.7±2.09）和（101.6±2.20）h，角膜损伤C组角膜上皮缺损修复时间长，差异有统计学意义（ F=301.437， P=0.000），角膜损伤对照组及角膜损伤A、B组之间比较，角膜上皮缺损修复时间差异无统计学意义（ F=0.813， P=0.450）；修复结束后，角膜损伤组之间角膜组织的病理学检查结果无明显差异。 结论:兔眼局部应用小檗碱溶液较安全，兔眼眼表未见明显的毒性反应，对视网膜未见明显影响。1.5 mg/ml浓度小檗碱溶液可延迟兔眼角膜上皮缺损修复，但对修复后的角膜组织结构的完整性无影响。 （中华眼科杂志，2020，56：131-137）

目的:观察黄连素合用环孢素A抗同种异体小鼠皮肤移植排斥反应的影响，探讨其作用机制。方法:以BALB/c小鼠为供体，以C57BL/6小鼠为受体，采用背-背皮肤移植手术法制备模型。将受体小鼠按随机数字表法分为模型组、黄连素组、环孢素A组、联合组，每组20只；另取20只健康C57BL/6小鼠作为假手术组。造模后黄连素组小鼠腹腔注射黄连素100 mg/kg，环孢素A组小鼠腹腔注射环孢素A注射液10 mg/kg，联合组腹腔注射黄连素100 mg/kg及环孢素A注射液5 mg/kg，假手术组和模型组小鼠腹腔注射等体积0.5%羧甲基纤维素钠。1次/d，连续10 d。记录受体小鼠移植皮片的存活时间；采用ELISA法检测血浆Th1类细胞因子[IL-2、γ-干扰素(interferon-γ, IFN-γ)]和Th2类细胞因子(IL-4、IL-10)水平；采用流式细胞术检测脾脏T淋巴细胞亚群CD4 ＋CD25 ＋比例。 结果:与模型组比较，各给药组受体小鼠移植皮片的存活时间延长( P<0.01)；联合组移植皮片存活时间较黄连素组或环孢素A组延长( P<0.01)。与模型组比较，联合组血浆IL-2[(11.55±3.14)pg/ml比(19.85±2.42)pg/ml]、IFN-γ[(26.41± 6.20)pg/ml比(57.23±10.15)pg/ml]水平降低，IL-4[(192.45±70.12)pg/ml比(61.09±21.61)pg/ml]、IL-10[(106.79±27.83)pg/ml比(40.08± 11.23)pg/ml]水平升高( P<0.05)，脾脏CD4 ＋CD25 ＋调节性T细胞比例[(7.65±2.42)%比(3.69±0.83)%]升高( P<0.01)。 结论:黄连素合用环孢素A通过促使Thl向Th2细胞的偏移、诱导免疫耐受、刺激CD4 ＋CD25 ＋调节性T细胞的表达等途径，抑制同种异体小鼠的皮肤移植排斥反应。

目的 为复方藤芷膏开发新剂型,并考察其透皮主要成分.方法 以凝胶贴膏剂基质的感官评价、初黏力、持黏力为综合指标,以NP-700、甘羟铝、EDTA-2Na、甘油、PVPK-90、酒石酸、纯化水的使用量作为课题的主要考察因素.依次采用单因素设计实验法和正交设计实验法在不同材料用量配比下优选凝胶贴膏剂的最佳基质配方.基于超高效液相色谱-电喷雾离子源-四极杆飞行时间质谱联用技术(UPLC-ESI-QTOF-MS/MS),采用垂直Franz扩散池法进行透皮实验,检测复方藤芷凝胶贴膏剂的透皮主要成分并确定.结果 复方藤芷凝胶贴膏剂的最佳配方为NP-700 4.0 g,甘羟铝 0.5 g,EDTA-2Na 0.2 g,二氧化钛 2.0 g,甘油 40 g,PVPK-90 5.0 g,酒石酸 0.7 g,纯化水50 g,载药含量10%.透皮结果初步鉴定出3个化合物,包括大黄素、盐酸小檗碱及欧前胡素.结论 研究所得复方藤芷凝胶贴膏剂膏体均匀,表面光滑,易于涂布.成型后具有优良的初始黏力和保持黏力,易剥离,无残留,保湿性好,对皮肤无刺激性和致敏性.透皮成分的确定为寻找其药效物质基础及进一步建立全面的质量控制方法提供了依据.

目的 研究达立通颗粒主要活性成分在正常和功能性消化不良(FD)模型大鼠胃肠道组织中的分布差异.方法 采用夹尾刺激结合不规律饮食双因素干预方法建立FD模型.12只大鼠(对照、模型各6只)用于FD模型验证,进行胃、小肠排空实验,HE染色后进行胃肠组织病理学观察;36只大鼠(对照、模型各18只)用于胃肠道组织差异分布研究,禁食不禁水18 h,按22.4 g·kg-1剂量(8倍临床等效剂量)ig给予达立通颗粒1次,于给药后1、3、6h收集各组大鼠的胃、十二指肠、空肠、回肠和结肠.应用超高效液相色谱-串联四级杆/线性离子阱质谱(UPLC-QTRAP-MS/MS)法检测各组织牡荆素-4"-O-葡糖苷、原阿片碱、黄连碱、小檗碱、甜橙黄酮、川陈皮素、桔皮素、去甲基川陈皮素、木香烃内酯、去氢木香内酯、原儿茶酸、伞形花内酯、木犀草苷、橙皮苷、木犀草素、柚皮素、橙皮素、白杨素含量,采用ACQUITY HPLCTM HSS T3(50 mm×2.1 mm,1.8 μm)色谱柱,柱温为40 ℃,0.1％甲酸水-乙腈为流动相,梯度洗脱,体积流量为0.3 mL·min-1,进样量为2μL.结果 与对照组比较,模型组大鼠体质量显著降低(P＜0.001),胃、小肠排空率显著降低(P＜0.001),十二指肠肠黏膜的紧密连接被破坏,但未出现胃肠组织的器质性病变,符合FD的病理特征.建立的UPLC-QTRAP-MS/MS方法中,各化合物线性关系良好,R2R≥0.990 0.对建立的检测方法进行专属性、精密度与准确度、提取回收率、稳定性和基质效应等方面的考察,均符合要求.各成分在对照和模型组大鼠胃肠道组织中浓度差异明显,且在各组织中达到最高浓度的时间点差异较大,模型组出现达峰时间延后的现象;与对照组比较,模型组大鼠胃组织中化合物的暴露水平降低,可能与FD引起胃肠道蠕动减慢有关.橙皮苷、橙皮素、柚皮素、原儿茶酸、去氢木香内酯、川陈皮素、去甲基川陈皮素、小檗碱和桔皮素在胃、十二指肠、空肠、回肠和结肠中暴露水平较高,且在对照组和模型组中各时间点下的浓度差异较显著.结论 经方法学验证,所建立的UPLC-QTRAP-MS/MS法灵敏、专属性强、准确性高,适用于大鼠胃肠道组织中达立通颗粒主要活性成分的胃肠组织分布研究.达立通颗粒主要活性成分在正常和FD模型大鼠胃肠组织分布具有显著性差异.

目的 基于白细胞介素6(IL-6)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路探讨微小RNA-34a-5p(miR-34a-5p)过表达对溃疡性结肠炎(UC)的影响及小檗碱(BBR)的干预作用.方法 体外传代培养人结肠癌HT-29细胞.取传3代、对数生长期、生长状态良好的HT-29细胞,随机分为空白对照组、NC mimics组、miR-34a-5p mimics组,NC mimics组和miR-34a-5p mimics组分别转染NC mimics、miR-34a-5p mimics,空白对照组不予转染.转染6 h更换新鲜培养基继续培养48 h,收集细胞,采用RT-qPCR法验证转染效率.收集三组转染后细胞,采用CCK-8法检测细胞活力;分离三组培养上清液,采用ELISA法检测IL-6、IL-1β、TNF-α含量;收集三组转染后细胞,分别采用RT-qPCR法、Western blotting法检测IL-6、STAT3 mRNA和蛋白表达.取HT-29细胞,加入LPS 刺激48 h,建立UC细胞模型.取UC细胞,分别加入0、2.5、5、10、20、40、80、160、320 μg/mL BBR干预24 h,采用CCK-8法检测细胞活力.随机将UC细胞分为模型组和BBR组,BBR组予BBR干预24 h,模型组不予BBR干预.分离两组培养上清液,采用ELISA法检测IL-6、IL-1β、TNF-α含量;取两组干预24 h细胞,采用RT-qPCR法检测miR-34a-5p以及IL-6、STAT3 mRNA表达.结果 miR-34a-5p mimics组miR-34a-5p相对表达量高于NC mimics组和空白对照组(P均<0.05),NC mimics组与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).miR-34a-5p mimics组细胞活力低于NC mimics组和空白对照组(P均<0.05),NC mimics组与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).miR-34a-5p mimics组培养上清液IL-6、IL-1β、TNF-α含量均低于NC mimics组和空白对照组(P均<0.05),NC mimics组与空白对照组比较差异均无统计学意义(P均>0.05).miR-34a-5p mimics组IL-6、STAT3 mRNA以及IL-6蛋白相对表达量均低于NC mimics组和空白对照组(P均<0.05),NC mimics组与空白对照组比较差异均无统计学意义(P均>0.05).40、80、160、320 μg/mL BBR干预24 h UC细胞活力均高于0、2.5、5、10、20 μg/mL BBR干预24 h UC细胞(P均<0.05),故选择20 μg/mL BBR进行后续实验.BBR组培养上清液IL-6、IL-1β、TNF-α含量均低于模型组(P均<0.05);BBR组miR-34a-5p相对表达量高于模型组,IL-6、STAT3 mRNA相对表达量均低于模型组(P均<0.05).结论 miR-34a-5p过表达能够通过抑制IL-6/STAT3信号通路减轻UC炎症反应;BBR则能通过上调miR-34a-5p表达和抑制IL-6/STAT3信号通路,减轻UC炎症反应,阻延UC癌变.

目的 采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱(ultra performance liquid chromatography tandem quadrupole time of flight mass spectrometry,UPLC-Q-TOF-MS/MS)对藏药宽筋藤Tinospora sinensis藤茎中生物碱类成分进行分析和鉴定.方法 采用色谱柱Waters ACQUITYUPLCC18色谱柱(100mm×2.1 mm,1.7 μm),以流动相乙腈-0.1％甲酸水溶液进行梯度洗脱.使用电喷雾离子源(ESI),正离子模式下采集数据;通过测定宽筋藤生物碱对脂多糖诱导小鼠巨噬RAW264.7细胞释放一氧化氮的抑制能力,评价其抗炎活性.结果 通过二级高分辨质谱分析结合对照品数据及相关文献,共鉴定出73个生物碱,包括12个原小檗碱型生物碱、23个四氢原小檗碱型生物碱、20个苄基异喹啉类生物碱、9个阿朴啡类生物碱、9个其他类生物碱.抗炎活性检测表明,宽筋藤生物碱对脂多糖刺激的RAW264.7细胞的一氧化氮具有较强的抑制作用.结论 对藏药宽筋藤生物碱类成分进行较为全面系统地解析,为药效物质基础研究及开发应用奠定基础.

目的 利用网络药理学方法研究黄芩治疗白癜风的作用靶点和机制.方法 使用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)筛选得到黄芩中的活性成分及其作用靶点,通过SwissTargetPrediction数据库检索补充各个活性成分的作用靶点;通过OMIM、GeneCards数据库获取白癜风的相关靶点,与活性成分作用靶点取交集;将黄芩活性成分和白癜风的交集靶点导入String数据库构建靶点间的蛋白相互作用(PPI)网络;利用Cytoscape 3.9.1 软件,构建"黄芩-活性成分-白癜风靶点"网络并筛选核心靶点;使用 Metascape 数据库对潜在作用靶点进行基因本体论(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析;使用AutoDockTools 1.5.7 软件进行分子对接验证并使用PyMol软件对结果进行可视化处理.结果 共筛选得到黄芩素、汉黄芩素、刺槐素、木蝴蝶素 a、表小檗碱、去甲汉黄芩素、5,7,4′-三羟基-8-甲氧基黄酮等 36 个活性成分,作用于 3868 个潜在靶点,白癜风相关靶点 1349 个,黄芩-白癜风的交集靶点 113 个;PPI网络分析得到肿瘤蛋白P53(TP53)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶 1(AKT1)、信号转导和转录激活因子 3(STAT3)、肿瘤坏死因子(TNF)、丝裂原活化蛋白激酶 1(MAPK1)、白细胞介素-6(IL-6)、胱天蛋白酶 3(CASP3)、雌激素受体(ESR1)共 8 个核心作用靶点;GO 和 KEGG 富集分析显示,黄芩治疗白癜风主要涉及胰腺癌、内分泌抵抗、神经营养素信号通路、细胞凋亡、乙型肝炎、细胞衰老等信号通路.分子对接结果显示黄芩素、汉黄芩素、刺槐素、木蝴蝶素a、表小檗碱、去甲汉黄芩素、5,7,4′-三羟基-8-甲氧基黄酮 7 个核心成分与核心靶点具有较好的结合能.结论 黄芩可能通过调控内分泌、神经、细胞衰老和凋亡以及炎症等方面发挥治疗白癜风的作用,为后续研究黄芩治疗白癜风提供参考.

目的 探究小檗碱对结核分枝杆菌抗原持续刺激致T细胞耗竭的影响.方法 应用结核抗原持续刺激小鼠模拟临床结核分枝杆菌慢性感染病理过程:卡介苗感染C57BL/6小鼠1周后,使用结核抗原ESAT6-CFP10(EC)和Mtb10.4-HspX(MH)持续刺激4次,每次间隔1周,建立T细胞耗竭模型.利用该模型进行干预治疗:结核抗原刺激期间每天给予不同剂量小檗碱灌胃治疗,末次抗原刺激后1周,流式细胞术检测抗原特异性T细胞分泌γ干扰素的水平和脾脏CD4+和CD8+T淋巴细胞表面抑制性受体PD-1的表达;ELISA检测血清中γ干扰素的水平;生化试剂盒检测脾脏淋巴细胞糖酵解代谢产物丙酮酸和乳酸的浓度;小檗碱体外作用于Jurkat T细胞后检测丙酮酸和乳酸的浓度.结果 结核抗原持续刺激致抗原特异性T细胞分泌γ干扰素的水平降低(P＜0.05),CD4+和CD8+T细胞表达PD-1增多(P＜0.05),提示发生T细胞耗竭.不同剂量的小檗碱治疗后,减弱了T细胞的持续活化,血清γ干扰素水平降低(P＜0.01),CD4+和CD8+T细胞PD-1表达减少(P＜0.05).体外实验表明小檗碱抑制Jurkat T细胞的糖酵解(P＜0.01).结论 结核抗原持续刺激诱导T细胞耗竭,而小檗碱治疗可抑制T细胞的糖酵解,调节T细胞活化,预防T细胞耗竭.

目的 观察高糖对体外培养小鼠足细胞活力、凋亡的影响以及小檗碱的保护效果.方法 通过温度条件培养方法诱导永生代小鼠足细胞株分化成熟,分为正常糖对照组(NG,5mmol/L)、甘露醇高渗对照组(MA,30 mmol/L)、高糖模型组(HG,30 mmol/L)、高糖(30 mmol/L)+小檗碱治疗组(BBR,1.25 μmol/L),干预24 h、48 h、72 h后收集细胞,采用MTT法检测足细胞活力,用流式细胞仪分析细胞凋亡率,并用Q-PCR法检测podocin和nephrin的mRNA表达水平.结果 NG对照组和MA对照组之间的细胞活力、凋亡率和凋亡相关分子的mRNA表达水平差异无统计学意义(P＞0.05);与NG对照组比较,HG模型组足细胞活力和足细胞凋亡率差异有统计学意义(P＜0.01),对podocin和nephrin的mRNA表达有明显的抑制作用(P＜0.01),并且这种高糖刺激作用可随着作用时间的延长而增强;与HG模型组比较,BBR治疗组足细胞活力和凋亡率差异有统计学意义(P＜0.01),podocin和nephrin的mRNA表达水平明显增加(P＜0.01).结论 高糖环境可诱导小鼠足细胞凋亡,且这种诱导凋亡作用与高渗环境无关;小檗碱对高糖诱导的足细胞凋亡有保护作用.