目的 研究刺老苞根皮水提物对成骨细胞TGF-β/BMPs信号通路的影响.方法 建立大鼠骨折模型,随机分为模型组,刺老苞根皮水提物低、中、高剂量(3.6、1.8、0.9 g/kg)组,ig给药7d后腹主动脉取血,分离血清;培养大鼠原代成骨细胞,经碱性磷酸酶染色、茜素红染色鉴定合格后,分别以对应组别的动物血清连续培养48 h,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blotting技术分别检测各组细胞中骨形态发生蛋白质-2(BMP-2)、转化生长因子-β(TGF-β)、Smad家族相关蛋白1、2(Smad-1、Smad-2)mRNA和蛋白表达.结果 与模型组比较,刺老苞根皮水提物不同浓度的含药血清组BMP-2、TGF-β、Smad-1 mRNA表达均显著升高(P＜0.05、0.01),中、高剂量含药血清组Smad-2 mRNA表达显著升高(P＜0.05);低、中、高剂量含药血清组的BMP-2、TGF-β、Smad-l、Smad-2蛋白表达均显著升高(P＜0.05).结论 刺老苞根皮水提物通过上调TGF-β/BMPs信号传导通路中的BMP-2、TGF-β、Smad-1、Smad-2表达,促进成骨细胞增殖.

目的 应用骨力学和Micro-CT技术,探讨刺老苞根皮对3月龄大鼠胫骨骨折显微结构和骨力学的影响.方法 60只SPF级3月龄SD雌性大鼠,在胫骨上打孔造模后,随机分为正常模型组、刺老苞根皮低剂量组[0.9 g/(kg·d)]、刺老苞根皮中剂量组[1.8 g/(kg·d)]、刺老苞根皮高剂量组[3.6 g/(kg·d)],每天一次,连续给药4 w.分别在给药14、21、28 d后,取右侧胫骨进行骨力学检测,取左侧胫骨进行Micro-CT扫描及三维重建.结果 与模型组相比,从14 d到28 d,刺老苞根皮中剂量组、刺老苞根皮高剂量组骨的结构力学参数(弹性挠度、弹性载荷、最大挠度、最大载荷)和生物力学参数(最大应力、最大应变、弹性应力、弹性应变)明显提高(P＜0.05);BV/TV、Tb.Th、Tb.V在21、28 d时刺老苞根皮中剂量组、刺老苞根皮高剂量组明显升高(P＜0.05或P＜0.01);Tb.Sp、SMI在21、28 d时,刺老苞根皮中剂量组、刺老苞根皮高剂量组明显低于模型组,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论 刺老苞根皮可通过改善骨折部位骨微小结构,提高骨密度,促进骨组织结构完整性,从而提升骨的抗冲击和变形能力,使其韧性和可塑性增强,骨组织强度增加,提高胫骨骨力学性能,促进大鼠骨折修复.

目的 研究龙牙楤木皂苷Ⅳ (Tarasaponin Ⅳ)对原代成骨细胞的分化及矿化的影响.方法 通过消化SD乳鼠颅盖骨,获得原代前成骨细胞,体外诱导培养并鉴定;采用MTT比色法检测Tarasaponin Ⅳ(10、20、30、40、50、60、70、80、90、100 μg/mL)作用于前成骨细胞的适宜质量浓度范围;用低、中、高浓度(0.5、5、50 μg/mL) Tarasaponin Ⅳ对成骨细胞进行干预,培养4d后,试剂盒法进行细胞上清中碱性磷酸酶(ALP)活性测定;培养14d后,按茜素红S染色试剂说明对细胞进行钙化结节染色.结果 与对照组比较,Tarasaponin Ⅳ各浓度组均能明显提高前成骨细胞活性(P＜0.05、0.01),0～60 μtg/mL内细胞生存率呈递增趋势.与对照组比较,Tarasaponin Ⅳ低、中、高浓度组细胞上清ALP活性均显著下降(P＜0.01),中、高浓度组细胞矿化结节数目显著增多(P＜0.01),且均呈剂量相关性.结论 TarasaponinⅣ可以促进前成骨细胞生长,增强成骨细胞矿化过程.

目的 文章对刺老苞根皮进行化学成分及其对原代破骨细胞影响研究.方法 采用大孔吸附树脂、硅胶柱、ODS-C18以及制备型HPLC等方法进行分离纯化,结合理化性质和波谱数据鉴定化合物结构.体外培养原代破骨细胞,采用抗酒石酸酸性磷酸酶阳性染色及骨吸收甲苯胺蓝染色进行鉴定.CCK-8细胞毒性检测法、TRAP阳性细胞数实验及Real-timePCR(RT-PCR)与Western blot法测定骨保护素(osteoprotegerin,OPG)及核因子-κB受体活化因子配体(recep-tor activator of nuclear factor kappaB ligand,RANKL)的表达情况检测化合物对破骨细胞的影响.结果 成功从刺老苞根皮70％乙醇提取物中分离鉴定了 4个化合物,分别是:屏边三七皂苷R2、楤木皂苷C、楤木皂苷A、竹节人参皂苷Ⅳa.在0～50 μg·mL-1浓度范围可排除化合物对破骨细胞抑制的假阳性结果.与对照组相比,4个化合物低、中、高浓度(0.5μg·mL-1、5 μg·mL-1、50 μg·mL-1)组OPG mRNA与蛋白表达有所升高,RANKL mRNA与蛋白表达有所降低,破骨细胞数目均有所减少,数据有统计学差异意义(P＜0.05或P＜0.01).结论 从刺老苞根皮中分离得到的4个单体化合物对原代破骨细胞有一定的抑制活性,为刺老苞根皮治疗骨质疏松症的物质基础研究提供依据.