类风湿关节炎(RA)是一种以滑膜炎、软骨与骨破坏为主要病理表现的自身免疫性疾病,致残率较高.RA免疫及炎症反应与骨细胞代谢互为影响,其核心环节为破坏机体核因子κB受体活化因子配体/核因子κB受体活化因子/骨保护素(RANKL/RANK/OPG)信号通路的平衡,导致成骨细胞减少,以及破骨细胞凋亡减退及异常活化.西药目前以抑制炎症反应及相关细胞因子分泌,减缓疾病进展,但长期使用其不良反应难以忽视.中医药在防治骨破坏中研究逐步深入,但在基础及临床研究方面仍存在一定局限性.

目的:观察早期减重支持训练对卒中后骨质疏松症患者骨保护素(OPG)和核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)的影响。方法:将脑卒中后骨质疏松症患者60例随机分成治疗组和对照组，每组患者30例，对照组采用药物(密钙息、阿法骨化醇、福善美)联合常规康复训练进行治疗，治疗组在药物治疗方案的基础上增加早期减重支持训练。于治疗前、治疗3个月后、治疗6个月后和出院1年后(随访时)检测2组患者的腰椎BMD和骨转化调节指标(包括OPG、RANKL、RANKL/OPG)。结果:2组患者骨密度(BMD)、OPG、RANKL、RANKL/OPG在治疗后均有一定程度的改善，对照组在治疗6个月后，其OPG和RANKL分别为(11.9±9.7)pmol/L和(290.7±87.0 )pmol/L，与组内治疗前比较，差异均有统计学意义( P<0.05)，对照组患者的OPG、RANKL和RANKL/OPG与组内治疗前比较，差异均有统计学意义( P<0.05)。治疗3、6个月后和出院1年后，治疗组患者的BMD、OPG、RANKL、RANKL/OPG均显著改善，且均显著优于组内治疗前和对照组相同时间点，差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:早期应用减重支持训练可显著下调脑卒中后骨质疏松症患者OPG、RANKL的表达，提高RANKL/OPG比率，改善BMD及其骨质疏松状态。

目的:探究骨髓间充质干细胞（bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMSC）移植对去卵巢骨质疏松大鼠骨代谢的影响及其作用机制。方法:将7周龄40只清洁级SD雌性大鼠按随机数字表法分为4组：假手术组、模型组、移植组、阳性对照组，除假手术组外其余组均进行双侧卵巢切除术构建骨质疏松大鼠模型。模型构建2个月后，移植组大鼠尾静脉注射80 μl/kg含有BMSC的PBS溶液，假手术组和模型组尾静脉注射等量的PBS溶液，阳性对照组大鼠每天灌胃给与仙灵骨葆0.5 g/100 g。治疗14 d后收集各组大鼠血清和股骨。苏木精-伊红染色（HE）观察股骨组织病理学变化；Micro-CT法测量骨密度（bone mineral density，BMD）与骨参数；酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒检测骨钙素、骨保护素、碱性磷酸酶、胰岛素样生长因子1表达水平；分光光度计法测定血清钙、磷、镁水平；蛋白免疫印迹（Western blot）检测各组大鼠股骨中核因子κ b配体受体激活剂（receptor activator of nuclear factor κb ligand，RANKL）、骨保护素（osteoprotegerin，OPG）、肿瘤坏死因子受体相关蛋白6（tumor necrosis factor receptor-associated protein 6，TRAF6）和核因子kappa B亚基1（nuclear factor kappa B subunit 1，NF-kB1）蛋白水平表达。结果:与假手术组比较，模型组大鼠BMD降低（0.28±0.01）g/cm 3，骨体积分数（bone volume fraction，BV/TV）降低（19.73±2.02）%，骨小梁厚度（trabecular thickness,Tb.Th）降低（0.082±0.008）mm，骨小梁数量（trabecular number,Tb.N）降低（1.60±0.17）mm -1，骨小梁分离度（trabecular separation/spacing, Tb.Sp）升高（0.273±0.024）mm，骨保护素降低（489.49±55.29）ng/L，碱性磷酸酶降低（229.13±15.05）U/L，胰岛素样生长因子1降低（236.64±14.32）μg/L，骨钙素升高（1.866±0.109）μg/L，钙水平升高（11.98±1.09）mg/dl，磷水平升高（6.85±0.68）mg/dl，镁水平降低（0.62±0.04）mg/dl，RANKL相对表达水平升高（1.05±0.09），OPG相对表达水平降低（0.58±0.08），RANKL相对表达水平升高（0.74±0.10），NF-kB1相对表达水平升高（1.01±0.11）（ P<0.05）；移植组大鼠BMD降低（0.38±0.04）g/cm 3，BV/TV降低（26.73±2.74）%，Tb.Th降低（0.094±0.006）mm，Tb.N降低（2.67±0.09）mm -1，Tb.Sp升高（0.241±0.026）mm，骨保护素基本不变（720.09±67.41）ng/L，碱性磷酸酶基本不变（269.48±14.15）U/L，胰岛素样生长因子1降低（335.95±24.13）μg/L，骨钙素升高（1.392±0.153）μg/L，钙水平升高（7.12±0.53）mg/dl，磷水平升高（4.54±0.32）mg/dl，镁水平基本不变（0.87±0.08）mg/dl，RANKL相对表达水平升高（0.59±0.05），OPG相对表达水平降低（0.97±0.10），RANKL相对表达水平升高（0.45±0.06），NF-kB1相对表达水平升高（0.72±0.06）（ P<0.05）；阳性对照组大鼠BMD降低（0.36±0.05）g/cm 3，BV/TV基本不变（28.72±3.20）%，Tb.Th基本不变（0.096±0.011）mm，Tb.N基本不变（2.85±0.24）mm -1，Tb.Sp基本不变（0.241±0.027）mm，骨保护素降低（716.78±36.90）ng/L，碱性磷酸酶基本不变（270.65±18.59）U/L，胰岛素样生长因子1降低（336.94±17.50）μg/L，骨钙素升高（1.377±0.101）μg/L，钙水平升高（7.13±0.80）mg/dl，磷水平升高（4.58±0.71）mg/dl，镁水平基本不变（0.89±0.04）mg/dl，RANKL相对表达水平升高（0.55±0.08），OPG相对表达水平降低（0.98±0.13），RANKL相对表达水平基本不变（0.40±0.05），NF-kB1相对表达水平升高（0.65±0.09）（ P<0.05）。 结论:BMSC移植可通过调控骨代谢、血清钙、磷、镁水平改善去卵巢大鼠骨质疏松症，这可能与RANKL/OPG/TRAF6通路有关。

目的:探讨冬凌草甲素(ORI)对卵巢切除(OVX)大鼠骨质疏松模型骨组织病理学改变、骨微结构影响及其作用机制。方法:选取由徐州医科大学动物实验室提供的8周龄雌性SD大鼠30只，参照随机化数字表分假手术(Sham)组、卵巢切除＋溶剂(Veh)(OVX＋Veh)组、卵巢切除＋冬凌草甲素(OVX＋ORI)组。OVX＋ORI组予0.1%冬凌草甲素2 mg/kg腹腔注射，OVX＋Veh组予相同体积的灭菌注射用水，均为每周2次，持续12周。获取各组大鼠血浆、骨组织标本。骨组织染色切片观察病理改变。微型计算机断层扫描成像行骨微结构扫描和骨密度测定。聚合酶链反应法检测骨组织中骨保护素-核因子-κB受体活化因子-核因子-κB受体活化因子配体(OPG-RANKL-RANK)信号通路和Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-Catenin)信号通路相关蛋白信使RNA相对水平。蛋白质印迹法检测获得信号通路相关蛋白表达情况。酶联免疫吸附试验方法检测血浆中骨代谢指标。两组间均数比较采用独立样本 t检验。 结果:与OVX＋Veh组比较，OVX＋ORI组骨小梁断裂明显减少，完整性改善。RANKL表达量、骨硬化蛋白表达量、Ⅰ型胶原C端交联肽水平、抗酒石酸酸性磷酸酶水平OVX＋Veh组高于OVX＋ORI组[1.62±0.04比1.02±0.06， t＝26.766， P<0.01；1.60±0.04比1.08±0.04， t＝29.898， P<0.01；(61.68±6.88) ng/ml比(28.97±4.07) ng/ml， t＝12.937， P<0.01；(759.44±32.47) pg/ml比(435.71±31.43) pg/ml， t＝22.654， P<0.01]。骨密度、OPG表达量、wnt3a表达量、β-Catenin表达量、低密度脂蛋白受体相关蛋白5表达量、碱性磷酸酶水平、Ⅰ型原胶原N端前肽水平OVX＋Veh组低于OVX＋ORI组[(96.75±8.44) mg/cm 3比(195.84±13.16) mg/cm 3， t＝－20.036， P<0.01；0.56±0.04比1.00±0.05， t＝－21.267， P<0.01；0.31±0.01比0.93±0.04， t＝－52.286， P<0.01；0.31±0.01比1.02±0.07， t＝－30.535， P<0.01；0.32±0.03比1.00±0.03)， t＝－50.398， P<0.01；(15.71±3.44) ng/ml比(53.21±6.99) ng/ml， t＝－15.229， P<0.01；(23.83±3.54) ng/ml比(63.95±4.17) ng/ml， t＝－23.217， P<0.01]。 结论:冬凌草甲素可能通过抑制OPG-RANKL-RANK信号通路，同时上调Wnt/β-Catenin信号通路，改善雌激素缺乏大鼠骨量丢失，减少骨微结构破坏。

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一组以持续性气流受限和进行性发展为特征的慢性气道阻塞性疾病。COPD患者常合并一种或多种肺外合并症，骨质疏松是COPD最重要的系统性合并症之一。骨保护素/核因子-κB受体活化因子的配体/核因子-κB受体活化因子(OPG/RANKL/RANK)系统在控制和调节骨形成和骨破坏方面发挥重要作用，是骨质疏松发病机制中的关键通路。C反应蛋白(CRP)是机体受到微生物入侵或组织损伤等炎症性刺激时肝细胞合成的急性期蛋白。CRP是COPD的确定性炎症标志物。CRP在体内存在2种构象：循环天然五聚体CRP(nCRP)和单体CRP(mCRP)，不同构象CRP的结构和功能有所不同。本文综述了mCRP通过RANKL调节破骨细胞分化的相关机制研究，以期为将来通过免疫分子途径干预或治疗COPD的合并症骨质疏松提供科学依据。

目的:通过建立特发性甲状旁腺功能减退症（idiopathic hypoparathyroidism，IHP）动物模型，探究生长发育期甲状旁腺功能减退对牙萌出及牙釉质发育的影响，以及IHP影响牙萌出的作用机制。方法:选择出生后第7天（postnatal 7，P7；P14、P25、P38含义以此类推）的SD大鼠共48只，采用随机数字表法分为IHP组和假手术组，每组24只，用纳米碳负显影技术对IHP组大鼠行双侧甲状旁腺切除术（parathyroidectomy，PTX），对假手术组大鼠应用同样技术但不行PTX，术后检测大鼠血清钙、磷、甲状旁腺激素（parathyroid hormone，PTH）浓度，建立IHP模型。P14、P25及P38时分别处死大鼠并收集下颌骨样本，每组每个时点6只，通过显微CT分析下颌第三磨牙根方牙槽骨的骨微结构参数、下颌第三磨牙萌出高度及牙釉质体积。制备组织学石蜡切片，通过免疫组织化学染色检测大鼠第三磨牙周围牙槽骨中成骨标志物Runt相关转录因子2（runt‐related transcription factor 2，RUNX2）、成骨细胞特异性转录因子（osterix，OSX）的分布及表达，抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate-resistant acid phosphatase，TRAP）染色检测破骨细胞数量。分离下颌第三磨牙，显微硬度仪检测牙釉质硬度，扫描电镜观察牙釉质显微结构。另收集P14大鼠下颌骨，每组6只，体外分离培养牙囊细胞进行细胞集落形成实验。诱导牙囊细胞成骨向分化后用碱性磷酸酶染色和茜素红染色检测矿化程度。提取下颌骨组织及牙囊细胞mRNA，实时荧光定量PCR检测与成骨、破骨细胞分化和功能有关的基因及甲状旁腺激素受体-1（parathyroid hormone receptor 1，PTH1R）基因的表达。结果:通过双侧PTX成功建立大鼠IHP模型，术后IHP组大鼠血清钙及PTH浓度显著降低、血清磷浓度显著升高（ P<0.01）。IHP组下颌第三磨牙牙釉质体积［（4.58±0.24）mm 3］较假手术组［（5.22±0.46）mm 3］显著减小（ P<0.05），牙釉质表面釉柱结构排列紊乱，显微硬度［（167.76±21.86）MPa］较假手术组［（223.92±10.94）MPa］显著降低（ P<0.01）。IHP组下颌第三磨牙萌出高度显著低于假手术组（ P<0.05），根方牙槽骨骨体积分数、骨小梁数量均较假手术组显著减小（ P<0.05），根方牙槽骨中RUNX2、OSX蛋白表达均较假手术组显著降低（ P<0.05），冠方牙槽骨破骨细胞数量［（3.86±1.07）个］显著低于假手术组［（6.43±1.27）个］（ P<0.01）。IHP组牙囊细胞增殖活性较假手术组显著降低（ P<0.01）。诱导成骨分化后，IHP组牙囊细胞矿化能力较假手术组减弱。与假手术组相比，IHP组下颌骨组织中RUNX2、OSX等成骨相关基因表达水平均显著降低（ P<0.05），核因子κB活化因子配体/骨保护素比值亦显著降低（ P<0.01），PTH1R的基因表达显著降低（ P<0.05）。同时，IHP组牙囊细胞中RUNX2、OSX等成骨相关基因表达、核因子κB活化因子配体/骨保护素比值及PTH1R的基因表达也较假手术组显著降低（ P<0.01）。 结论:IHP可能通过抑制PTH/PTH1R信号通路，进而抑制牙囊细胞的增殖及成骨向分化、影响破骨细胞分化及功能，从而使牙萌出过程中牙胚周围牙槽骨的骨改建受阻，最终导致牙齿迟萌。

目的:探讨Toll样受体4(TLR4)特异性抑制剂瑞沙托维(TAK242)对假体周围骨溶解的疗效机制。方法:将12只健康成年雄性无特定病原体(SPF)级SD大鼠采用简单随机分组法分成3组，空白组，模型组，TAK242实验组，每组4只。空白组不放置聚乙烯颗粒(PE)，模型组，实验组均放置聚乙烯颗粒。空白组、模型组术后7 d给予生理盐水腹腔注射。实验组手术7 d开始腹腔注射TAK242(药物浓度为2.5 mg/ml)，剂量5 mg/kg，两天1次，共2个月。随后处死动物提取血清，用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组骨保护蛋白(OPG)，核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)，并分析OPG/RANKL趋势。用Micro-CT分析假体周围骨质情况，并用苏木精-伊红(HE)染色法和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色，分析破骨细胞数量。多样本均数的两两比较采用单因素方差分析。结果:ELISA示，TAK242组OPG、OPG/RANKL高于模型组[(557.26±32.74) pg/ml、(19.87±1.58)%比(421.95±14.06) pg/ml、(13.18±0.68)%， F＝43.27， P<0.01、 F＝45.36， P<0.01]。TAK242组RANKL低于模型组[(28.10±1.16) pg/ml比(32.08±1.67) pg/ml， F＝11.45， P<0.05]。Micro-CT示，TAK242组BMD、BV/TV、Tb.N高于模型组[(20.71±2.22) g/cm 2、(7.69±0.85)%、(0.78±0.09) 1/mm比(13.73±0.54) g/cm 2，(5.02±0.18)%、(0.53±0.07) 1/mm， F＝37.14， P<0.01、 F＝37.84， P<0.01、 F＝17.94， P<0.01]。TAK242组Tb.Pf低于模型组[(13.63±1.66) 1/mm比(17.07±1.53) 1/mm， F＝9.29， P<0.05]。TAK242实验组HE染色较模型组比，骨小梁数量、厚度增高，磨损颗粒诱导的骨质吸收区域变小，炎性浸润较对照组减少。TAK242实验组TRAP染色较模型组比少量破骨细胞浸润，炎性细胞浸润少。 结论:TLR4特异性抑制剂TAK242有效抑制假体周围骨溶解。

RA是累及全身多系统的慢性自身免疫病，关节病变的主要病理特征为滑膜炎症及软骨和骨的进行性破坏。组蛋白乙酰化修饰是可逆的表观遗传调控方式，研究表明组蛋白去乙酰化酶（HDAC）失衡参与了RA骨破坏病理过程，HDAC可影响破骨前体细胞分化，调控核因子NF-κB、NF-κB受体活化因子/NF-κB受体活化因子配体/骨保护素（RANK/RANKL/OPG）、NFATc1相关信号通路及多种炎性细胞因子的分泌，干扰破骨细胞分化、成熟和凋亡，促进RA骨破坏的发生和发展。

目的:探究氟暴露与低营养对大鼠成骨、破骨分化的联合作用及作用方式。方法:将SD大鼠按2 × 2析因实验设计采用随机数字表法分为单独正常营养处理组、单独低营养处理组、单独氟暴露组、氟与低营养联合作用组，每组8只，雌雄各半。实验5个月后，免疫组织化学法检测股骨碱性磷酸酶（ALP）、Runt相关转录因子2（Runx2）、骨保护素（OPG）、核因子κB受体激活因子配体（RANKL）表达水平；2 × 2析因设计方差分析判断氟暴露与低营养因素对成骨、破骨分化的交互作用。结果:骨组织免疫组织化学法检测结果显示，组间成骨分化标志物ALP和Runx2表达水平比较，差异均有统计学意义（ F = 25.98、17.77， P均< 0.001）。与单独正常营养处理组（0.005 2 ± 0.002 7、0.003 1 ± 0.001 4）相比，单独氟暴露组ALP和Runx2表达水平均较高（0.019 5 ± 0.005 0、0.014 4 ± 0.004 4， P均< 0.05）；单独低营养处理组（0.002 6 ± 0.001 8、0.004 4 ± 0.003 2）和氟与低营养联合作用组（0.003 6 ± 0.000 7、0.002 9 ± 0.000 8）比较，差异均无统计学意义（ P均> 0.05）；而氟与低营养联合作用组均低于单独氟暴露组（ P均< 0.05）。组间破骨分化标志物RANKL表达水平和RANKL/OPG比值比较，差异均有统计学意义（ F = 10.50、31.05， P均< 0.001）。其中，与单独正常营养处理组相比，单独氟暴露组RANKL/OPG比值较低（0.115 3 ± 0.039 5比1.426 3 ± 0.777 2），氟与低营养联合作用组RANKL表达水平和RANKL/OPG比值均较高（0.019 5 ± 0.007 7比0.004 4 ± 0.002 5、7.258 7 ± 3.674 3比1.426 3 ± 0.777 2），差异均有统计学意义（ P均< 0.05），而单独低营养处理组RANKL表达水平和RANKL/OPG比值（0.004 0 ± 0.001 9、2.022 3 ± 0.753 7）差异均无统计学意义（ P均> 0.05）；氟与低营养联合作用组RANKL表达水平及RANKL/OPG比值均高于单独低营养处理组和单独氟暴露组（ P均< 0.05）。2 × 2析因设计方差分析结果显示，氟暴露与低营养因素对ALP、Runx2、RANKL表达水平和RANKL/OPG比值均有交互作用（ F = 4.38、19.39、22.12、108.00， P均< 0.05），且对ALP、Runx2表达水平为拮抗作用，对RANKL表达水平和RANKL/OPG比值为协同作用。 结论:在大鼠骨组织中，单独氟暴露促进成骨分化，抑制以成骨功能活跃为主的破骨分化，氟与低营养联合对成骨、破骨分化的交互作用表现为拮抗成骨分化和协同促进破骨分化；正常营养条件是成骨分化的物质基础，低营养是破骨分化增强的诱因。

目的:探讨骨保护素(OPG)/细胞核因子-κB受体活化因子(RANK)/细胞核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)信号通路介导的自噬及微小RNA(miRNA，miR)-217的靶向调控在骨巨细胞瘤(GCT)中作用。方法:在建立肿瘤异种移植模型和体外培养GCT0404细胞的基础上，分为空白对照组，神经钙黏蛋白(N-cadherin)组(miR-217类似物组)，转染miR-217组。评估各组骨巨细胞瘤的活性、增殖及迁移水平；检测miR-217、OPG、RANK、RANKL、自噬相关蛋白5(ATG5)、自噬相关蛋白7(ATG7)、Beclin-1和微管相关蛋白轻链3(LC3)在骨巨细胞瘤细胞中的mRNA和蛋白表达变化；多组间均数比较采用单因素方差分析(ANOVA)，组间比较采用多重极差最小显著性差异(LSD)。结果:(1)miR-217在肿瘤异种移植模型和体外培养GCT0404细胞的调控都显著抑制GCT细胞的增殖和肿瘤细胞的发生[对照组吸光度( A)值为0.620±0.019，inhibitor NC组为0.640±0.019，miR-217 inhibitor组为0.950±0.030，inhibitorNC组和对照组比较，差异无统计学意义( P>0.05)，而miR-217 inhibitor组与inhibitor NC组比较，差异有统计学意义( F＝128.600， P<0.01)]。(2)miR-217抑制GCT细胞的碱性磷酸酶(ALP)活性，并抑制OPG/RANKL/RANK信号通路相关因子及自噬相关蛋白表达(OCN 1.41±0.06，OPG 1.41±0.04，RANKL 0.54±0.01，ATG 50.65±0.12，ATG 70.67±0.03，Beclin-1 0.56±0.10，LC3 0.83±0.04， F＝265.100， P<0.01)。 结论:miR-217可能通过抑制OPG/RANKL/RANK信号通路相关因子表达来抑制GCT自噬，从而抑制GCT的发生。