目的:采用假病毒对三种新型冠状病毒（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2）核酸血液筛查试剂的检测性能进行比较和分析，为SARS-CoV-2核酸血液筛查的试剂选择提供依据。方法:使用慢病毒包装系统构建包含SARS-CoV-2基因组片段的假病毒。使用A、B、C三个单位的SARS-CoV-2核酸血液筛查系统进行RNA提取和扩增，根据各试剂检测结果计算其检测限（limit of detection, LoD）、特异度和精密度。结果:A、B、C三个单位N区段的单检LoD分别为3.46、8.73、23.87 copies/mL，混检LoD分别为13.65、78.92、159.14 copies/mL。ORF1ab区段的单检LoD分别为6.32、12.22、24.05 copies/mL，混检LoD分别为26.94、67.97、94.80 copies/mL。各试剂检测SARS-CoV-2阴性血浆的特异度均为100%，检测2LoD和较高浓度假病毒的批内和批间变异系数均小于5%。结论:A公司的SARS-CoV-2核酸血筛系统灵敏度最高。三种试剂均有良好的特异度和精密度。

目的:制备1株靶向甲型流感病毒N1亚型神经氨酸酶(neuraminidase，NA)的功能性抗体FNA1，并对其进行鉴定。方法:依据单链抗体(single-chain antibody fragment，scFv)序列信息，合成FNA1重链以及轻链可变区序列，连入抗体哺乳细胞表达载体pFRT-IgG1κ，构建重组表达质粒pFRT-IgG1κ-FNA1。利用瞬时高效表达系统ExpiCHO以及亲和纯化技术获取抗体蛋白FNA1。ELISA检测FNA1与甲型流感病毒N1亚型NA抗原的结合，流式细胞术分析FNA1与细胞膜表面表达N1亚型NA抗原的结合。通过抗体抑制NA蛋白活性试验检测抗体FNA1的体外功能活性。结果:蛋白质电泳结果显示制备获取了高纯度FNA1。FNA1特异性识别结合N1亚型的NA抗原，且呈浓度依赖效应。FNA1能通过结合细胞膜表面表达的N1亚型NA蛋白，有效阻断细胞膜表面的NA活性，从而抑制包装的假病毒从细胞表面释放，继而抑制进一步的靶细胞感染。结论:获得1株具有体外功能活性的靶向甲型流感病毒N1亚型NA蛋白的抗体FNA1。

目的:探讨RFID技术追溯系统对消毒供应中心器械消毒灭菌效果及医院感染风险的影响。方法:2020年1~7月利用RFID技术对泰州市第四人民医院消毒供应中心器械实现可视化及追溯管理，比较实施前(2019年7~12月)及实施后(2020年1~7月)消毒供应中心器械管理中存在的问题及医院感染情况。结果:与实施前比较，实施后手术室器械在清洗、消毒、包装、物品验收、器械去向等方面合格率明显提高，差异均有统计学意义(均 P<0.05)，而器械损坏率、器械遗失率低于实施前，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。实施后患者医院感染发生率低于实施前，差异有统计学意义( P<0.05)，而实施后B－D试验合格率、生物监测合格率高于实施前，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。实施后各科室对器械回收效率、器械清洗灭菌质量、器械包装完整性、器械发生准确率、与科室沟通等方面满意率显著高于实施前，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:应用RFID技术对医疗器械实施追溯管理能有效提高器械消毒灭菌效果，有效预防医院感染风险，确保患者生命安全。

目的:分析甲苯二异氰酸酯（TDI）职业暴露工人肺功能的改变与血清促炎细胞因子的相关性，探索TDI呼吸系统毒作用的效应评价指标。方法:于2014年10月，以中国西部地区某TDI生产厂中从事TDI合成工序、提纯工序、包装工序及上述生产过程的巡检工序的61名男性作业工人为TDI暴露组，主要经吸入蒸汽和气溶胶暴露；以该工厂中不接触TDI及其他已知致敏性化学物的62名男性企业管理人员作为对照组，与暴露组工人年龄匹配。问卷调查获得性别、工龄、年龄、职业史、暴露工龄等信息，检测工人肺功能指标[第一秒用力呼吸容积（FEV 1）、用力肺活量（FVC）、FEV 1/FVC]及血清中细胞因子[白细胞介素（IL）-8、肿瘤坏死因子（TNF）-α等]水平；收集周末班后尿，测定尿液中TDI的代谢物甲苯二胺（TDA）浓度作为内暴露指标。采用Spearman秩相关分析细胞因子与肺功能指标的相关性；采用多重线性回归分析肺功能指标、细胞因子随TDI暴露浓度和时间变化的趋势。 结果:暴露组和对照组工人年龄 M（ P5~ P95）分别为36.5（24.0~51.0）和38.0（24.0~50.0）岁，暴露组工龄 M（ P5~ P95）为6.94（0.97~26.33）年，尿液TDA浓度 M（ P5 ~ P95）为15.56（2.28~112.16）ng/ml。与对照组比较，暴露组肺功能3项指标FVC、FEV 1、FEV 1/FVC以及血清中IL-8和TNF-α水平均明显降低（ P值均<0.05）。随着暴露浓度的增加和暴露时间的延长，血清TNF-α水平及FVC、FEV 1均呈降低的趋势，且呈剂量-效应和时间-效应关系（ P趋势值均< 0.05）。血清IL-8、TNF-α均与FVC、FEV 1、FEV 1/FVC呈正相关（ P值均<0.05）。 结论:TDI暴露工人血清炎性因子IL-8和 TNF-α水平与肺功能指标有关联，可作为TDI致呼吸系统毒作用的早期效应评价指标。

检验样本的转运和保存是检验全程管理的重要阶段，由于其过程复杂、影响因素多、操作难以规范，因此也是实验室管理的难点和痛点。为规范临床检验样本的转运和保存，符合样本质量控制和实验室生物安全要求，保证检验结果的准确性，制定该专家共识。共识从转运人员资质和培训、样本包装和时限、样本交接和验收、自动化物流系统、意外时应急处理、样本保存和应用等方面的具体要求进行阐述，并跟踪和监测整个运输过程，以进一步提高管理质量和效率。

目的:选取人慢性髓系白血病(CML)细胞K562为实验对象，利用慢病毒介导的CRISPR/Cas9基因编辑技术构建稳定敲除舌癌耐药相关蛋白1(TCRP1)基因的CML细胞系K562/TCRP1-KO，通过细胞增殖、细胞凋亡、药物敏感性等功能试验比较K562/TCRP1-KO与对照细胞(K562/cas9-CTL)的表型差异，初步探讨TCRP1基因参与CML发病的可能机制。方法:在特定位点设计针对TCRP1的小向导RNA(sgRNA)，寡核苷酸片段退火后与线性化的Cas9表达载体重组，慢病毒包装系统转染293T细胞，收集纯化病毒感染K562细胞，嘌呤霉素加压筛选阳性多克隆，有限稀释法进一步筛选出单克隆K562/TCRP1-KO，Sanger测序和Western blot检测成功敲除的稳定细胞株，同时构建转染lentiCRISPR载体的K562细胞作为对照细胞株(K562/cas9-CTL)，采用细胞计数法、CCK8法及伊马替尼(IM)梯度稀释法、流式细胞术分别对K562/TCRP1-KO和K562/cas9-CTL进行细胞增殖、药物敏感性及细胞凋亡分析。结果:成功构建了用于TCRP1敲除的sgRNA-Cas9重组质粒载体，转染293T细胞后，利用有限稀释法成功筛选到TCRP1敲除的单克隆细胞株。与K562/cas9-CTL细胞相比，K562/TCRP1-KO细胞的增殖能力显著减弱，IM药物敏感性显著增强，细胞凋亡进程显著加快(均 P<0.05)。 结论:利用CRISPR/Cas9成功构建了TCRP1敲除的CML细胞株，TCRP1可能作为癌症相关基因影响CML细胞的增殖、IM耐药能力及凋亡进程。

遗传性视网膜变性(IRD)发病机制复杂多样，常常导致不可逆盲，目前尚缺乏有效的治疗方法。近年来，针对IRD的基因治疗显示出广阔的应用前景，而如何将基因药物递送至靶细胞并安全、高效地表达成为目前研究发展的关键点。病毒载体系统转染效率较高，但具有潜在的免疫反应和生物安全等问题，其临床应用的局限性使非病毒载体系统的开发应运而生。DNA纳米复合体是新型非病毒载体的研究热点之一，这种聚合物/DNA复合物纳米粒子由多肽、脂质、多糖等物质压缩和包裹DNA而成，在IRD的应用上取得了较大的进展。此外，非病毒载体在成本、制备难易度、包装容量及安全性上均显示出其优势，为视网膜色素变性、Stargardt病、先天性视网膜劈裂、Leber先天性黑矇等IRD的基因治疗提供了新的研究思路。本文对近年来非病毒载体系统在转染效率、靶向性和安全性等方面的进展及其在IRD基因治疗中的应用进行综述。

目的:构建表达HPV16 E7基因的重组腺病毒质粒。方法:设计携带酶切位点和无酶切位点的两对引物以扩增ccdBKan目的片段。分别将ccdBKan与质粒pBR322-Ad4-eGFP共转至电转感受态GB08red-gyr462构建两种表达ccdBKan基因的重组Ad4质粒。利用ccdB正反筛选系统与ExoCET/Red重组结合将HPV16E7基因插入Ad4的E1A区，构建表达HPV16 E7基因的重组腺病毒质粒pBR322-Ad4-E1Amut-C16E7P，经酶切、测序验证。提取质粒pBR322-Ad4-EIAmut-C16E7P释放基因组，转染293T细胞以包装和扩增病毒，用病毒感染293T细胞，检测HPV16 E7基因在细胞内的转录水平和蛋白表达。重组病毒经肌肉接种BALB/C裸鼠，收集小鼠血清用于病毒中和实验。结果:成功构建表达HPV16 E7基因的重组腺病毒质粒，并在293T细胞中成功包装出重组病毒。qRT-PCR和Western blotting验证了重组病毒HPV16 E7基因的成功表达，病毒中和实验结果提示经重组病毒免疫后的小鼠血清能够中和Ad4-HPV16E7。结论:成功构建了表达HPV16 E7基因的重组腺病毒株，为进一步研究HPV16 E7在癌症发病机制中的作用以及HPV感染相关癌症的治疗方法提供新的思路和依据，并且可能为HPV治疗性疫苗的研究探索提供了一种潜在策略。

目的:探讨基于信息共享平台建立追溯系统在供应室管理中的应用价值。方法:自2019年6月山东省眼科医院供应室在信息共享平台的支持下建立追溯系统。我院供应室于2019年1—5月（追溯系统建立前）回收眼科显微器械16 583件，于2019年6—10月（追溯系统建立后）回收眼科显微器械18 371件。比较追溯系统建立前后器械回收、清洗、包装质量及信息记录效率、器械发放情况、科室满意度。结果:追溯系统建立后，器械回收合格率为97.52%（17 915/18 371），清洗合格率为99.68% （18 312/18 371），包装合格率为99.91%（18 355/18 371），器械正确发放率为99.98%（18 367/18 371），高于建立前的96.20%（15 953/16 583）、99.52%（16 504/16 583）、99.80%（16 550/16 583）、99.76%（16 544/16 583）， 差异均有统计学意义（χ 2值分别为50.209、5.341、7.797、32.306； P<0.05）。追溯系统建立后，供应中心库存正确率为100.00%（18 371/18 371），高于建立前的99.25%（16 459/16 583），差异有统计学意义 （ P<0.01）。追溯系统建立后，50包器械回收分类时间及包装时间为（3.93±0.68）、（10.29±1.73）min，短于建立前的（9.58±2.36）、（14.13±3.57）min，差异有统计学意义（ t值分别为16.267、6.845； P<0.01）。追溯系统建立后的器械包装过期率为0.67%（123/18 371），低于建立前的2.09%（348/16 583），差异有统计学意义（χ 2=133.885， P<0.01）。追溯系统建立后，科室医护人员的器械发放、器械使用得分及总分分别为 （48.41±1.16）、（47.86±2.87）、（96.27±3.94）分，高于建立前的（47.66±1.54）、（45.72±3.69）、（93.38±4.78）分，差异均有统计学意义（ t值分别为6.738、7.929、8.081； P<0.01）。 结论:医院供应室在信息共享平台建立追溯系统后能够持续控制供应室内器械质量，进行精细化、信息化管理，提高器械质量与器械运转效率，减少工作差错，值得临床推广。

目的:研制新型冠状病毒S蛋白Del143~145突变位点假病毒核糖核酸标准物质，满足公共卫生检测领域对标准物质的需求。方法:以新冠病毒原始株序列为参考，引入Omicron变异株特征性S蛋白Del 143~145，使用三质粒慢病毒包装系统制备假病毒。对产物进行均匀性、长期稳定性和短期稳定性评价，多家实验室联合定值。结果:制备的假病毒标准物质均匀性良好，可在-40 ℃下长期保存6个月以上，在常温条件下稳定12 h以上。多家实验室联合确定标准物质量值为（1.37±0.24）×10 4 copies/μL。 结论:研究制备的标准物质均匀稳定，适用于相关实验室的量值传递；质量检定、质量控制等多个领域。