目的 通过体外实验探讨鹰嘴豆素A(BCA)对骨关节炎的作用机制.方法 提取大鼠原代软骨细胞进行培养,随后将其分为对照组(不加诱导剂及干扰剂)、模型组[10 ng/mL白细胞介素-1β(IL-1β)诱导]和BCA组(10 ng/mL IL-1β诱导+0、3、6、12、24、48 μmol/L BCA干预).采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法进行细胞活性评估,衰老β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色观察细胞衰老情况,酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞内炎症因子和氧化应激指标,蛋白免疫印迹法检测相关蛋白水平,运用分子对接技术验证BCA与Nrf2之间的亲和力.结果 MTT法筛选BCA浓度后,选择6、12、24 μmol/L BCA进行后续实验.与对照组相比,模型组软骨细胞活性及过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性明显减弱(P＜0.05),SA-β-gal阳性细胞数显著增加,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、丙二醛(MDA)表达水平明显升高(P＜0.05),细胞内Ⅱ型胶原蛋白(COL2A1)、蛋白多糖(ACAN)表达水平明显降低(P＜0.05).与模型组相比,BCA组上述情况均出现明显逆转(P＜0.05).此外,BCA可以显著减弱核因子κB抑制因子α(IKB-α)的降解和NF-κBp65的核转位,并促进Nrf2在细胞核中的表达和人血红素氧化酶1(HO-1)在全细胞中的表达(P＜0.05).分子对接研究结果则进一步证实BCA与Nrf2具有极高的亲和力.结论 BCA可通过调控Nrf2/NF-KB信号通路体外抑制骨关节炎软骨细胞氧化应激及炎症反应,缓解关节损伤.

目的:探讨玉米须多糖(SMPS)对D-半乳糖(D-gal)致衰老小鼠肾脏线粒体ATP合成的影响，并阐明其可能的作用机制。方法:采用颈背部皮下注射D-gal溶液的方法建立衰老小鼠模型。将48只SPF级雄性小鼠随机分为正常对照组(Control组)、D-gal模型组(D-gal组)、玉米须多糖低剂量组(30 mg/kg，SMPS-L组)、玉米须多糖高剂量组(60 mg/kg，SMPS-H组)，每组12只。干预42 d后全麻下眼球取血，检测血清中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛；取肾脏组织，荧光素酶法检测各组小鼠肾组织中ATP的含量；实时荧光定量PCR法检测各组小鼠肾组织中线粒体氧化呼吸链中复合体Ⅱ的琥珀酸脱氢酶(SDH)、复合体Ⅲ的细胞色素C还原酶(Cycs)、复合体Ⅳ(COXⅣ)及ATP合酶中的ATP5b mRNA表达水平；Western blot法检测各组小鼠肾组织中线粒体融合蛋白2(MFN2)、动力相关蛋白1(DRP1)和线粒体自噬相关蛋白(P62)的表达水平。结果:与Control组比较，D-gal组小鼠肾组织中ATP含量(178±4)×10 －4 μmol下降( P<0.01)，SDH、Cycs、COXⅣ mRNA表达水平无明显改变，ATP5b mRNA表达水平(0.67±0.01)下调( P<0.01)，MFN2蛋白表达水平(0.29±0.02)降低( P<0.01)，DRP1和P62蛋白表达水平(0.31±0.02、0.21±0.01)上升( P<0.01)；与D-gal组比较，SMPS干预组小鼠肾组织中ATP含量(193±1)10 －4μmol升高( P<0.01)，ATP5b mRNA表达和MFN2蛋白表达(0.87±0.05、0.71±0.08)上升(均 P<0.01)，DRP1和P62蛋白表达(0.20±0.01、0.10±0.01)下调(均 P<0.01)。 结论:SMPS可通过增加抗氧化酶的活性及上调ATP5b mRNA和MFN2蛋白的表达，下调DRP1和P62蛋白表达，改善衰老小鼠肾脏线粒体动态平衡紊乱，促进D-gal致衰老小鼠肾组织线粒体ATP的生成。

目的:探讨高压氧疗法(HBOT)对D-半乳糖(D-gal)诱导的衰老小鼠心肌纤维化及氧化应激的保护作用及其机制。方法:3月龄雄性昆明小鼠27只随机分为对照组、D-gal组和D-gal+HBOT组，对照组皮下注射灭菌生理盐水(5 ml·kg －1·d －1)8周；其余2组皮下注射D-gal(200 mg·kg －1·d －1)8周；D-gal+HBOT组在第7~8周进行HBOT。实验结束后取小鼠心脏组织通过苏木精-伊红(HE)染色观察病理学改变，马松染色和天狼星红染色观察纤维化改变；氧化应激试剂盒检测小鼠血清中过氧化氢酶(CAT)和总超氧化物歧化酶(T-SOD)的活性以及丙二醛(MDA)的含量；蛋白免疫印迹(western blot)法检测小鼠心脏组织中衰老相关蛋白p53和p16，心脏功能相关蛋白心房钠尿肽(ANP)和脑钠肽(BNP)以及氧化应激相关蛋白超氧化物歧化酶1(SOD1)、超氧化物歧化酶2(SOD2)和过氧化氢酶(CAT)蛋白表达水平。 结果:心脏形态学染色结果显示，与对照组比较，D-gal组小鼠表现出老化的特征，纤维化面积增加，HBOT干预后老化及纤维化较D-gal组明显改善。氧化应激试剂盒结果显示，与对照组比较，D-gal组小鼠血清中CAT和T-SOD活性明显降低、MDA含量明显增加，经HBOT处理后，D-gal+HBOT组血清中CAT和T-SOD活性较D-半乳糖组增加，MDA含量则降低( F＝126.85、32.89、157.50，均 P<0.05)。此外，与对照组比较，D-gal组心脏组织中p53、p16、ANP和BNP表达明显增加，CAT、SOD1和SOD2表达明显降低，HBOT干预后较D-gal组p53、p16、ANP和BNP表达降低，CAT、SOD1和SOD2表达增加( F＝36.37、14.81、23.28、58.41、12.79、80.08、6.63，均 P<0.05)。 结论:HBOT减轻了衰老模型小鼠的心脏损伤，可能与减弱心肌纤维化、诱导抗氧化酶表达、减少氧化应激有关。

探讨IgA肾病（IgA nephropathy，IgAN）患者血清及尿液半乳糖缺陷IgA1（galactose-deficient IgA1，Gd-IgA1）水平与临床病理及肠黏膜屏障损伤指标的相关关系。酶联免疫吸附测定法检测血尿Gd-IgA1、炎性因子及肠黏膜屏障损伤指标水平。IgAN组45例，健康对照组25例。结果显示IgAN组患者血清炎性因子肿瘤坏死因子α和白细胞介素6及血尿Gd-IgA1水平高于健康对照组人群（均 P<0.05）；Spearman秩相关分析结果显示尿Gd-IgA1水平与血肌酐、24 h尿蛋白量及肾脏损伤程度呈正相关（均 P<0.05）；IgAN组患者肠道黏膜屏障损伤指标细胞黏附分子1、 D-乳酸、脂多糖、二胺氧化酶水平高于健康对照组人群（均 P<0.05），且与尿Gd-IgA1水平呈正相关（均 P<0.05）。本研究结果提示尿Gd-IgA1水平与IgAN严重程度及肠道黏膜屏障损伤指标相关。

目的 探讨黄嘌呤氧化酶(XO)抑制剂(别嘌醇与非布司他)对家兔快速心房起搏(RAP)房颤模型心房电重构的影响.方法 24只健康雄性新西兰白兔,随机分为4组,假手术组(S组)、快速心房起搏组(P组)、快速心房起搏-别嘌醇干预组(ALL组)及快速心房起搏-非布司他干预组(FP组).使用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清中超敏C反应蛋白(hs-CRP)、生长分化因子-15(GDF-15)、半乳糖凝集素-3的活性及左心房组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、XO、黄嘌呤脱氢酶(XDH)的活性.在起搏之前及4周的RAP之后分别进行电生理检查,测定基础起搏周长为200ms时的心房有效不应期(AERP 200)和房颤诱发率.实时荧光定量聚合酶链式反应及蛋白质印记法检测钙离子电压门控通道亚基α 1 C(Cav1.2)、钾离子电压门控通道亚族D3(Kv4.3)的信使RNA(mRNA)和蛋白表达.采用SPSS 26.0统计软件进行数据分析.根据数据类型分别采用单因素方差分析或x2检验进行组间比较.结果 与S组相比,P组SOD活性明显降低,XO、XDH、hs-CRP、GDF-15及半乳糖凝集素-3水平显著升高,差异均有统计学意义(P＜0.01).应用XO抑制剂后,SOD活性回升明显,XO、hs-CRP、GDF-15及半乳糖凝集素-3活性均显著降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).FP组SOD显著高于ALL组,XDH、hs-CRP、GDF-15及半乳糖凝集素-3活性显著低于ALL组,差异均有统计学意义(P＜0.05);但FP组与ALL组XO水平比较,差异无统计学意义(P＞0.05).此外,FP组XDH水平明显低于P组,差异有统计学意义(P＜0.01),但ALL组XDH水平与P组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).RAP后P组的AERP200明显低于S组(P＜0.01),然而FP组的AERP200显著高于P组和ALL组(P＜0.05).除S组外,P组、ALL组和FP组在RAP后的房颤诱发率均显著高于起搏之前基线状态下的房颤诱发率(P＜0.05);应用XO抑制剂干预后,房颤诱发率有一定程度的降低,在FP组尤为明显.RAP可导致左心房组织中Cav1.2和Kv4.3mRNA及蛋白表达水平下调,但是应用XO抑制剂干预可部分抑制这些改变,在FP组尤为明显.结论 XO抑制剂(尤其是非布司他)可能通过减轻炎症反应和氧化应激损伤,抑制左心房组织中Cav1.2、Kv4.3表达水平的下调,进而延长AERP,降低房颤诱发率,改善心房电重构.

目的 探究二氢青蒿素对衰老细胞的作用及其机制.方法 利用双氧水诱导小鼠成纤维细胞(NIH3T3)构建应激早衰模型(SIPS),通过衰老特异性标记物SA-β-半乳糖苷酶染色、蛋白质印迹技术进行SIPS鉴定;细胞实验分为对照组(磷酸盐缓冲液+二甲基亚砜)、模型组(双氧水+二甲基亚砜)、药物组(双氧水+二氢青蒿素),采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)法、乳酸脱氢酶法、SA-β-半乳糖苷酶染色、细胞内铁含量测定、蛋白质印迹技术、荧光探针染色及流式细胞术检测二氢青蒿素对衰老细胞的影响.结果 CCK-8结果显示,二氢青蒿素作用模型组24 h的半数抑制浓度(IC50)为(8.26±0.66)μmol/L;与对照组相比,模型组存活率降低,且呈剂量依耐性;蛋白质印迹结果显示,与模型组相比,药物组铁蛋白重链(FTH)及谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)蛋白表达水平降低(P＜0.05),细胞内铁、活性氧(ROS)含量增加(P＜0.05).结论 二氢青蒿素可特异性诱导衰老细胞死亡,其机制与铁死亡有关.

半乳糖氧化酶是一种重要的生物催化剂,具有催化效率高和绿色环保的特点,在生物传感器、食品、医疗和化工等领域得到广泛应用.然而,天然的半乳糖氧化酶存在稳定性差、催化效率低、回收成本高等缺陷,限制了其在食品安全和生物医学等领域的应用.随着基因工程和蛋白质工程的发展,人们可以对半乳糖氧化酶进行有目的的改造,以提高酶的性能或者获得新功能的重组酶.因此,追求具有重要催化能力和强大功能的半乳糖氧化酶成为该领域的研究热点.本文综述了半乳糖氧化酶的分子结构、催化机理等基本信息,并分析总结了半乳糖氧化酶进行生物学改造的相关案例,旨在为半乳糖氧化酶相关研究者提供新的思路和方法.

目的:基于 NADPH氧化酶 4(Nox4)/蛋白激酶 Cα(PKCα)/半乳糖凝集素 3(Gal-3)通路探讨柴胡皂苷 D对心肌梗死大鼠心肌纤维化的影响.方法:将 SD大鼠随机分为假手术组、模型组、柴胡皂苷 D 组(50 mg/kg)、Apocynin组(10 mg/kg)、柴胡皂苷 D+ Apocynin组(柴胡皂苷D 50 mg/kg+Apocynin 10 mg/kg),每组 12只.除假手术组外,其余各组制备心肌梗死模型.经药物处理后,采用超声测量各组大鼠心室功能指标左室收缩末期内径(LVESD)、左室舒张末期内径(LVEDD)、左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS);苏木精-伊红(HE)染色检测各组大鼠心肌组织形态;Masson染色检测各组大鼠心肌组织纤维化改变,并计算心肌组织胶原容积积分(CVF);酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组大鼠血清白细胞介素(IL)-1β、IL-6、转化生长因子(TGF)-β1 水平;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测各组大鼠心肌组织 Nox4/PKCα/Gal-3通路相关蛋白表达含量.结果:相较于假手术组,模型组大鼠心肌组织有严重的病理损伤,胶原增生明显,心肌 CVF、LVEDD、LVESD及血清 IL-1β、IL-6、TGF-β1 水平升高,心肌组织 Nox4、PKCα及Gal-3蛋白表达升高(P<0.05),LVEF及 LVFS降低(P<0.05).相较于模型组,各药物组大鼠心肌组织病理损伤减轻,胶原增生减少,CVF、LVEDD、LVESD及血清 IL-1β、IL-6、TGF-β1 水平降低,心肌组织 Nox4、PKCα及 Gal-3 蛋白表达降低(P<0.05),LVEF 及LVFS升高(P<0.05).相较于柴胡皂苷 D组、Apocynin组,柴胡皂苷 D+Apocynin组大鼠心肌组织病理损伤进一步减轻,且胶原增生进一步减少,CVF、LVEDD、LVESDE及血清 IL-1β、IL-6、TGF-β1 水平降低,心肌组织 Nox4、PKCα及 Gal-3蛋白表达降低(P<0.05),LVEF及 LVFS升高(P<0.05).结论:柴胡皂苷 D可抑制 Nox4/PKCα/Gal-3通路激活,减轻心肌梗死大鼠心肌组织炎症损伤,缓解心肌纤维化,改善心功能.

目的 优选黄精酒蒸工艺及其抗衰老作用的研究.方法 以黄精多糖、5-羟甲基糠醛、醇浸出物为评价指标,润制、蒸制、焖制的时间为影响因素,采用单因素实验正交试验优选酒蒸工艺;建立小鼠衰老模型,测定小鼠的体重、肝脾指数、血清及脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)的活性水平,评价炮制后黄精体内抗氧化能力的变化.结果 优选的黄精炮制工艺为:取生黄精100 g,加黄酒20 g,润制1 h,蒸制7 h,焖制3 h,于60～80 ℃干燥;酒黄精在升高脾脏指数、SOD和GSH-Px的活性,降低肝脏指数和MDA的活性,改善D-半乳糖诱导衰老小鼠的体重减轻和生理状态等方面优于生黄精.结论 优选的黄精酒蒸工艺稳定、可行,酒黄精较生黄精在抗氧化、抗衰老方面作用更佳.

目的 探讨绞股蓝皂甙(GPM)改善痴呆小鼠学习记忆能力的作用及机制.方法 使用D-半乳糖联合亚硝酸钠、三氯化铝复制老年性痴呆(SDAT)小鼠模型,随机分为6组:对照组、模型组、GPM 50、150、250 mg/kg组、多奈哌齐组(阳性对照);连续给药3个月,采用水迷宫检测各组小鼠学习记忆能力、试剂盒法检测小鼠脑组织中抗氧化指标及β-淀粉样前体蛋白(APP)含量.结果 与对照组比较,模型组小鼠潜伏期及首次穿越平台时间[分别为(18.76±2.32)、(15.27±1.42)s]延长,在原平台活动时间[(6.08 ±1.17)s]缩短;与模型组比较,GPM250 mg/kg组小鼠潜伏期、首次穿越原平台时间[分别为(7.58±1.93)、(8.17 ±0.68)s]明显缩短,在原平台活动时间[(12.55 ±2.07)s]延长.与对照组比较,模型组小鼠脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)活力[分别为(200.91 ±28.28)、(3.89 ±0.71) U/mg]明显下降,丙二醛(MDA)水平[(6.51 ±0.63) nmol/mg]上升;与模型组比较,GPM 250 mg/kg组小鼠脑组织中SOD、GSH-Px活力[分别为(305.97±98.65)、(11.62 ±2.52)U/mg]明显上升,MDA水平[(2.29±0.95) nmol/mg]下降,差异有统计学意义(P＜0.01).与对照组比较,模型组小鼠脑组织中sAPPα表达[(1.869 ±0.12) ng/g]下降,Aβ42表达[(6.668±0.647) μg/g]升高;与模型组比较,GPM 250 mg/kg组小鼠脑组织中sAPPα[(2.097 ±0.11)ng/g]升高,Aβ42[(5.812±0.632) μg/g]下降,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 绞股蓝皂甙具有改善痴呆小鼠的认知能力作用,其机制可能与其减轻脑组织抗氧化损伤、减少Aβ表达有关.