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β-葡聚糖联合激发型抗CD40单克隆抗体对树突状细胞免疫功能影响的体外研究
编辑人员丨5天前
目的:探讨β-葡聚糖联合激发型抗CD40单克隆抗体(5C11)对树突状细胞(DCs)的作用及分子机制。方法:采用密度梯度离心法从健康人新鲜的浓缩白细胞中分离出单个核细胞,使用GM-CSF和IL-4细胞因子法诱导培养未成熟DCs,经不同刺激方式(5C11、β-葡聚糖、5C11+β-葡聚糖)激发后,流式细胞术检测不同组DCs表面共刺激分子CD40、CD80、CD83、CD86和MHCⅡ类分子HLA-DR的表达,ELISA法检测IL-12、IL-6、TNF-α、IL-10等相关细胞因子的表达,Western blot检测MAPK信号通路中相关蛋白质的磷酸化水平。结果:β-葡聚糖能够显著诱导CD40在DCs表面的表达( P<0.05),联合5C11后,其他表面分子CD80、CD83、CD86的表达进一步显著上调,尤其对DCs成熟的重要标志分子CD83的上调表现出强烈的协同效应( P<0.01);ELISA检测结果显示β-葡聚糖联合5C11可以诱导DCs大量分泌IL-12、IL-6、TNF-α等促炎因子,对发挥DCs功能的关键因子IL-12的分泌表现出协同效应( P<0.01);Western blot结果显示p38 MAPK、p44/42 MAPK的磷酸化水平显著上升,且磷酸化时间提前,维持时间也延长( P<0.01)。 结论:β-葡聚糖联合5C11可协同促进DCs的成熟并提高DCs的免疫功能,为肿瘤DCs疫苗的制备方案提供了新思路。
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编辑人员丨5天前
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甲胎蛋白高表达和低表达肝细胞肝癌的基因表达谱差异分析
编辑人员丨5天前
目的:探讨甲胎蛋白(AFP)高表达和低表达肝细胞肝癌(HCC)中的差异表达基因表达谱,为HCC的分子机制研究及预后判断提供理论依据。方法:从肿瘤基因图谱计划(TCGA)公共数据库获得368例包含完整临床信息的HCC转录组数据,根据组织AFP mRNA表达四分位数将样本分为AFP高表达组和AFP低表达组,每组各92例。应用R软件中的DEseq2包进行差异表达基因分析,应用ClusterProfiler包对差异表达基因进行基因本体论(GO)功能分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析,应用String数据库和Cytoscape软件构建蛋白相互作用网络,筛选关键基因。采用单样本基因集富集分析方法,通过R软件GSVA包对特征基因进行富集评分,根据得分定义特征基因集表达情况。利用RNAseq数据和实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)进行独立数据集验证和组织验证。结果:TCGA数据分析显示,AFP高表达与HCC低分化、患者人种有关(均 P<0.05)。生物信息学分析共获得1 382个差异表达基因,其中931个基因在AFP高表达组织中表达上调,451个基因表达下调。GO功能分析显示,AFP高表达组织中高表达的基因主要与附属肢体发育、肢体发育、骨架系统发育等过程有关,而低表达基因则与异源物代谢、类固醇代谢、细胞对异生物刺激反应等代谢相关过程有关。KEGG通路分析显示,AFP高表达组织中高表达的基因主要参与原发性免疫缺陷、神经活性配体-受体相互作用、细胞因子-细胞因子受体相互作用通路,而低表达基因主要与视黄醇代谢、化学致癌作用、类固醇激素的生物合成等通路相关。鉴定出1个预后相关特征基因集,该基因集包括AURKB、TTK、CENPA、UBE2C、HJURP、KIF15,其高表达与HCC患者的无复发生存和总生存有关,且特征基因集富集分数与AFP表达呈正相关( r=0.475, P<0.001)。RNAseq数据验证结果与TCGA数据分析结果基本一致。RT-qPCR检测结果显示,特征基因集中AURKB、KIF15和UBE2C在AFP高表达HCC组织中显著高表达,其表达虽然与HCC患者的无病生存、总生存无关,但AFP低表达组患者的无病生存曲线和总生存曲线均在AFP高表达组患者之上。 结论:AFP高表达和AFP低表达HCC在基因表达谱上存在较大差异。筛选出的特征基因集可能协同AFP共同促进HCC的发生发展,其对解释不同水平AFP HCC的作用机制有一定作用,并为HCC的预后判断提供了新的思路和依据。
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编辑人员丨5天前
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协同刺激分子B7-H3在膀胱癌中的研究进展
编辑人员丨5天前
B7-H3是免疫调节蛋白B7家族重要成员之一,研究发现其在多种肿瘤组织中异常表达,并且在肿瘤发生发展、免疫逃逸等多个过程中发挥作用,与多种肿瘤不良预后相关。本文就B7-H3的生理功能和在膀胱癌中的表达及意义、作用与机制以及在膀胱癌治疗中的应用等方面的最新研究进展进行综述。
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编辑人员丨5天前
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诱导性协同共刺激分子及程序性细胞死亡受体1在大疱性类天疱疮皮损中的表达及意义
编辑人员丨5天前
目的:通过检测滤泡辅助性T细胞(Tfh)相关分子诱导性共刺激分子(ICOS)及程序性细胞死亡受体1(PD-1)在大疱性类天疱疮(BP)患者皮损中的表达,探讨Tfh在BP发病机制中的作用。方法:收集大连市皮肤病医院2014—2017年间确诊的BP患者石蜡组织标本21份,其中女7例,男14例,平均年龄72.57岁。应用免疫组化SP法检测BP皮损中ICOS与PD-1的表达,以10例正常皮肤组织作为对照组。结果:ICOS、PD-1在BP皮损中均主要表达于表皮基底层、棘细胞层、颗粒层、角质层,以棘细胞层表达最为显著,细胞质、细胞核均见表达,偶见细胞膜表达,真皮层炎症细胞中亦有表达;正常皮肤组织中ICOS、PD-1表达少见。BP组ICOS表达率为85.71%(18/21),PD-1表达率为47.62%(10/21),均高于正常对照组(均为0),差异有统计学意义( P值分别<0.001、<0.05)。 结论:Tfh细胞相关分子ICOS、PD-1在BP发病机制中可能发挥重要作用。
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编辑人员丨5天前
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雄激素受体变异体7在去势抵抗性前列腺癌中的功能和调节机制
编辑人员丨5天前
雄激素受体(AR)在去势抵抗性前列腺癌(CRPC)的发生过程中具有关键的调控作用,其中以雄激素受体变异体7(AR-V7)为代表的组成型活性变异体水平在CRPC进展过程中不断升高,可以作为判断CRPC患者疾病进展和预后的分子标志物,是克服去势抵抗、提高患者生存质量和生存期的重要靶标。研究结果表明,AR-V7的生成与AR基因结构重排、基因扩增和AR基因转录本选择性剪接有关,且受转化生长因子-β(TGF-β)等多个信号通路分子的协同调节;AR-V7改变了AR蛋白的转运与核定位机制,并进一步影响下游靶基因的转录表达。AR-V7拮抗AR活性而阻断AR和雄激素驱动的分化过程,阻遏抑癌基因的表达,刺激肿瘤细胞增殖,从而促进前列腺癌进展。相关靶向研究目前主要集中在AR-V7蛋白降解、mRNA表达抑制和N端结构域靶向干预等3个方面。随着研究的深入开展,AR-V7在前列腺癌进展中的分子机制将逐步阐明,将对CRPC的预防和治疗起到更大的推动作用。
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编辑人员丨5天前
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应重视间充质干细胞在免疫性皮肤病治疗中的应用
编辑人员丨5天前
间充质干细胞(MSC)是一组具有自我增殖和分化为间充质细胞谱系能力的异质的多能非造血干细胞,近年来研究表明,由于MSC具有低免疫原性,即不表达主要组织相容性复合体(MHC)-Ⅱ类分子以及一些其他协同刺激因子,具有抗炎及免疫调节的能力,这种独特的生物学特性为其在皮肤科临床治疗方面的应用提供许多可能性。
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编辑人员丨5天前
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Tim-1在免疫应答及肿瘤中的研究进展
编辑人员丨5天前
人T细胞免疫球蛋白与黏蛋白结构域(T cell immunoglobulin and mucin domain,Tim)-1是T细胞免疫球蛋白黏蛋白结构域相关分子家族的重要成员,与天然配体Tim-4协同表现出强烈的免疫共刺激作用。协同刺激分子主要存在于抗原递呈细胞表面,能与淋巴细胞表面的协同刺激分子受体结合,产生协同刺激信号进而调节免疫细胞的活化。Tim-1能提供免疫细胞所需的活化第二信号,还能提供下调细胞免疫应答的负性第二信号,维持免疫细胞的抑制状态,促进肿瘤免疫逃逸的发生。同时在肿瘤细胞中的过度表达与肿瘤进展密切相关,在靶向治疗和免疫治疗中有潜在临床价值。现就Tim-1介导的免疫应答及其在肿瘤微环境中的作用机制进行综述。
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编辑人员丨5天前
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ICOS和PD-1协同刺激信号在四氯化碳致小鼠肝纤维化中的动态变化
编辑人员丨5天前
目的:探讨可诱导共刺激分子(inducible costimulatory molecular, ICOS)和程序性死亡受体1(programmed cell death protein 1,PD-1)蛋白在四氯化碳致小鼠肝纤维化中的动态变化。方法:将80只雄性BALB/c小鼠按随机数字表法分为正常对照组和肝纤维化模型组,每组40只。流式细胞仪分析测定不同阶段滤泡辅助性T细胞(follicular helper cells,Tfh)群ICOS及PD-1的动态表达趋势及特征;酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测小鼠不同周期脾淋巴细胞培养上清中的相关细胞因子白细胞介素(interleukin,IL)-21,IL-33,转化生长因子-β1(transforming growth factor-β,TGF-β1)的分泌水平及小鼠血清中Ⅲ型前胶原肽(procollagen type Ⅲ,PCⅢ)的含量;分析PD-1 +CD4 +CXCR5 +T细胞、ICOS +CD4 +CXCR5 +T细胞与肝纤维化标志物PCⅢ的相关性。 结果:与正常对照组相比,纤维化模型组中CXCR5 +CD4 +T细胞表面PD-1的表达比例均明显升高,并在13 W达到峰值,组间差异有统计学意义{(2.77±0.92)%比[8 W:(6.53±2.12)%,13 W:(27.47±5.15)%,20 W:(19.20±6.64)%], t值分别为4.60、13.35、6.93, P值均<0.05};CXCR5 +CD4 +T细胞表面ICOS的表达比例亦逐渐升高,13 W达到峰值,组间差异有统计学意义{(1.13±0.44)%比[(8 W:(13.28±3.85)%,13 W:(33.62±6.28)%,20 W:(21.50±5.83)%], t值分别为8.87、14.60、9.85 , P值均<0.05 }。随着病程进展,肝纤维化小鼠组CD4 +CXCR5 +T细胞群IL-33,IL-21,TGF-β1的表达从8 W开始上调,13 W达到峰值,20 W仍维持较高水平,且均显著高于对照组,组间差异具有统计学意义(IL-33: t值分别为5.85、18.47和10.54,IL-21: t值分别为10.03、13.34和13.60,TGF-β1: t值分别为9.23、19.69和15.40, P值均<0.05)。PD-1 +CD4 +CXCR5 +T、ICOS +CD4 +CXCR5 +T细胞表达水平与PCⅢ的水平成正相关( r值分别为0.6278和0.6036, P值均<0.05)。 结论:肝纤维化慢性期ICOS +和PD-1 +的循环Tfh细胞可能促进肝纤维化发病,IL-21和IL-33作为主要的细胞因子参与炎症进展。
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编辑人员丨5天前
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四跨膜蛋白CO-029过表达与胆管癌上皮-间质转变及转移的关系
编辑人员丨5天前
目的:探讨四跨膜蛋白CO-029表达与胆管癌上皮-间质转变(EMT)及肿瘤转移的关系和作用机理。方法:利用已构建的vshRNA-CO-029 (LV/GFP/CO-029)慢病毒质粒转染并筛选沉默CO-029基因表达的稳转胆管癌细胞株HCCC-9810-vshRNA-CO-029作为沉默组,以模拟质粒转染的HCCC-9810细胞作为模拟组,以未转染细胞作为对照组。分别以细胞划痕、Transwell和裸鼠体内种植实验检测三组细胞的迁移和侵袭转移能力变化。应用免疫共沉淀和肿瘤坏死因子(TNF)-α刺激实验检测CO-029对EMT相关基因表达的影响。结果:沉默组细胞划痕愈合率低于模拟组细胞[(27.11±4.58)%比(92.84±6.24)%],沉默组细胞穿过Matrigel胶的数量为(57.15±6.10)个,低于模拟组(108.20±9.21)个及对照组(112.00±10.45)个,差异均具有统计学意义(均 P<0.01)。裸鼠肝脏移植沉默组细胞的肝脏瘤体积为(2.17±0.54)cm 3,而移植模拟组细胞的肝脏瘤体积为(0.74±0.15)cm 3,差异有统计学意义( P<0.05)。模拟组肺转移的发生率和肺转移瘤灶数目分别为100%(6/6)、(214.17 ± 35.64)个,沉默组分别为16.7% (1/6)、(41.56±14.15)个,差异均具有统计学意义(均 P<0.05)。免疫共沉淀显示CO-029可与TNF-αR1形成复合物,TNF-α可诱导模拟组细胞的E-钙黏蛋白表达下调,波形蛋白和N-钙黏蛋白表达上调,而沉默组细胞中则无明显变化。 结论:CO-029表达与胆管癌侵袭转移能力正相关,并可能与TNF-α协同诱导胆管癌细胞发生EMT,是胆管癌复发转移及预后干预的潜在靶点和分子靶向治疗指标。
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编辑人员丨5天前
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富氢盐水对抑郁症大鼠的改善作用及其分子机制研究
编辑人员丨5天前
目的:探讨富氢盐水对抑郁症模型大鼠的改善作用及其可能的分子机制。方法:实验分为2个阶段:第一阶段将35只健康成年雄性SD大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、高剂量组、中剂量组、低剂量组,每组7只。对照组、模型组每天灌胃8 mL/kg生理盐水,高、中、低剂量组每天灌胃含氢浓度分别为2.0 ppm、1.0 ppm、0.5 ppm富氢盐水(8 mL/kg),同时予除对照组外其余组慢性不可预知温和刺激(CUMS)干预4周。第二阶段将30只健康成年雄性SD大鼠按随机数字表法分为氢水组、氢水+氟西汀组、核因子E2相关因子2(Nrf2)抑制组,每组10只。3组均每天灌胃最佳含氢浓度(0.8 ppm)富氢盐水(8 mL/kg),其中氢水+氟西汀组再添加氟西汀(5 mg/kg)灌胃,Nrf2抑制组添加全反式维甲酸(10 mg/kg)灌胃,同时均予CUMS干预4周。干预过程中于每周末固定时间对大鼠称重,4周后应用旷场实验检测大鼠的活动总路程及平均速度。旷场实验结束后采集大鼠眼眶静脉血,应用ELISA法检测大鼠血清超氧化物酶歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量。随后取海马CA3区标本,应用Western blotting实验检测脑组织中脑源性神经营养因子(BDNF)、血红素氧合酶-1(HO-1)、Nrf2及磷酸化Nrf2(p-Nrf2)蛋白表达。结果:(1)第一阶段:干预第3、4周时,与模型组比较,高、中、低剂量组大鼠的体质量均明显增加,差异均有统计学意义( P<0.05)。与模型组比较,中、低剂量组大鼠的活动总路程及平均速度明显增加,血清SOD含量明显增加、MDA含量明显减少,海马CA3区BDNF、HO-1表达明显增加,p-Nrf2表达明显减少,差异均有统计学意义( P<0.05)。(2)第二阶段:干预第3、4周时,与Nrf2抑制组比较,氢水组、氢水+氟西汀组大鼠的体质量明显增加,差异均有统计学意义( P<0.05)。与Nrf2抑制组比较,氢水组、氢水+氟西汀组大鼠的活动总路程及平均速度明显增加,血清SOD含量明显增加、MDA含量明显减少,海马CA3区BNDF、HO-1表达明显增加,氢水+氟西汀组大鼠海马CA3区Nrf2、p-Nrf2表达明显增加,差异均有统计学意义( P<0.05);与氢水组比较,氢水+氟西汀组大鼠海马CA3区BNDF、HO-1、p-Nrf2表达明显增加,差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:富氢盐水可使抑郁症模型大鼠血清SOD含量增加、MDA含量减少以及海马BDNF、HO-1表达增加,从而改善其抑郁样症状;富氢盐水与氟西汀联用对抗抑郁的协同作用机制涉及Nrf2通路的抗氧化效应。
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编辑人员丨5天前
